全 文 ：高效液相色谱法测定田基黄中异巴西红厚
壳素的含量
熊丽　梁健　陈晓辉　马爱玲　沈振铎　毕开顺
【摘要】　目的　建立田基黄中异巴西红厚壳素的含量测定方法 。方法　采用高效液相色谱法 , Hy-
persilC18(250mm×4.6 mm, 5μm)柱 ,流动相为乙腈 -0.04%磷酸水(47∶53 , v/v),流速:1.0 ml/min,检
测波长:254 nm,柱温:30℃。结果　异巴西红厚壳素线性范围 1.68 ～ 56 mg/L, r=0.999 7(n=6);平均
回收率为 101.5%(RSD=2.5%, n=9)。结论　该方法简便 、快速 、精密度好 ,可为田基黄的质量控制提
供依据 。
【关键词】　田基黄;异巴西红厚壳素;高效液相色谱法
HPLCdeterminationofisojacareubininHypericumjaponicum　XIONGLi, LIANGJian, CHENXiao-hui,
etal.SchoolofPharmacy, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016 , China
【Abstract】　Objective　ToestablishamethodforthedeterminationofisojacareubininHypericumja-
ponicum.Methods　TheseparationwasperformedonanHypersilC18 column(250 mm×4.6mm, 5 μm)with
themobilephaseconsistingofacetonitrile-0.04%aqueousphosphonicacid(47∶53 , v/v)attheflowrateof1.0
ml/min.Thedetectionwavelengthwassetat254nmandthecolumntemperaturewassetat30℃.Results　The
calibrationcurvewaslinearovertherangeof1.68 ～ 56 mg/L(r=0.999 7).Theaveragerecoverieswere
101.5%(RSD=2.5%, n=9).Conclusion　Themethodissimple, accurateandreproducible, andsuitablefor
thequalitycontrolofHypericumjaponicum.
【Keywords】　Hypericumjaponicum;Isojacareubin;HPLC
　　田基黄原名地耳草 ,始载于《生草药性备要》、《植物名实
图考》 ,系藤黄科金丝桃属植物地耳草(Hypericumjaponicum
Thumb.)的干燥全草。味甘 、微苦 、性凉 , 归肝 、胆 、大肠经 , 具
有清热利湿 、散瘀止痛 、消肿解毒的功效 [ 1] 。有研究表明 , 田
基黄对喉癌 Hep-2和宫颈癌 Hela细胞株有生长抑制作用 [ 2] 。
笔者从田基黄药材中提取出单体化合物异巴西红厚壳素 , 采
用体外细胞毒试验(MTT)法考察了异巴西红厚壳素对不同
肿瘤细胞的体外抑制作用 ,结果表明 , 异巴西红厚壳素对多种
肿瘤细胞生长繁殖均有抑制作用 ,并且呈现良好的量效关系 ,
是田基黄抗肿瘤作用的活性成分。本研究参考相关文献 , 并
经试验摸索 , 建立了高效液相色谱法测定田基黄中异巴西红
厚壳素的含量 , 该方法简便 、快速 、分离效果好。
1　仪器与试药
1.1　仪器　LC-10AD高效液相色谱仪(日本岛津公司),
SPD-10A紫外检测器(日本岛津公司), N2000色谱工作站
(浙江大学);超声清洗器(浙江石浦海天电子仪器厂);
AB135-S型天平(瑞士 METILERTOLEDO)。
1.2　试药　16份不同购买地的田基黄药材经沈阳药科大学
孙启时教授鉴定为田基黄正品。样品经粉碎 ,过 20目筛 , 置
广口瓶中密闭保存。对照品异巴西红厚壳素自制 , 经核磁共
振(1H-NMR, 13C-NMR)以及质谱(MS)等技术分析鉴定 , 并
参照文献 [ 3]确定其为异巴西红厚壳素 , 峰面积归一化法计算
纯度 >98.5%, 符合定量要求。 甲醇(色谱纯), 乙腈(色谱
纯), 无水乙醇(分析纯),磷酸(色谱纯), 水(二次重蒸水 , 自
制)。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱:HypersilC18(250 mm×4.6 mm, 5
μm);流动相:乙腈-0.04%磷酸水(47∶53, v/v);流速:1.0
ml/min;检测波长:254 nm;柱温:30℃;进样量:20μl。在上述
色谱条件下样品中异巴西红厚壳素与其他组分分离较好 , 结
果见图 1。
A.异巴西红厚壳素对照品　　　　　　　　　B.田基黄供试品溶液;1-异巴西红厚壳素
图 1　高效液相色谱图
2.2　对照品储备液制备　精密称取减压干燥至恒重的对照
　　作者单位:110016 辽宁省沈阳药科大学药学院
品异巴西红厚壳素适量于 25 ml量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至
刻度 , 制成异巴西红厚壳素浓度为 0.350 mg/min储备液。
2.3　供试品溶液制备　取田基黄细粉约 1.0 g,精密称定 , 精
·8· 中国实用医药 2008年 7月第 3卷第 19期　ChinaPracMed, Jul2008, Vol.3, No.19DOI :10.14163/j.cnki.11-5547/r.2008.19.021
密加 80%乙醇 40ml于具塞锥形瓶中 ,称重 , 超声提取 2次 ,
每次 30min,放冷 , 再称重 , 用 80%乙醇补足损失的重量 , 摇
匀 , 经 0.45 μm微孔滤膜过滤 , 取续滤液 ,即得。
2.4　线性关系考察　分别精密量取对照品储备液 0.12、
0.25、0.5、 1.0、2.0、4.0 ml置 25 ml量瓶中 ,加入甲醇至刻度 ,
摇匀。分别精密吸取上述溶液各 20 μl进样分析 , 以对照品
峰面积(Y)为纵坐标 ,浓度(X, mg/L)为横坐标 ,绘制标准曲
线并进行回归计算。结果表明 ,异巴西红厚壳素浓度在 1.68
～ 56 mg/l范围内与峰面积线性关系良好 , 回归方程为 Y=
5.13×104 X-2.18×104 , r=0.999 7(n=6)。
表 1　不同购买地的田基黄药材中异巴西红厚壳素的含量
编号 购买地 异巴西红厚壳素(mg/g)
1 浙江杭州 0.324
2 重庆 0.144
3 河南开封 0.133
4 江西南昌 0.255
5 福建福州 0.137
6 湖北孝感 0.418
7 广西玉林 0.321
8 浙江宁波 0.449
9 湖南岳阳 0.147
10 广西南宁 0.351
11 江苏南通 0.494
12 广西芩西 0.090
13 四川成都 0.226
14 江西九江 0.136
15 江西洛安 0.188
16 安徽芜湖 0.231
2.5　精密度试验　精密吸取上述对照品溶液 20 μl, 在上述
色谱条件下连续重复进样 6次 ,异巴西红厚壳素峰面积 RSD
为 1.8%。
2.6　重复性试验　精密称取同一批样品(安徽芜湖样品),
共 6份 , 按 “供试品溶液制备 ”项下方法操作 ,在上述色谱条
件下进样 , 异巴西红厚壳素含量 RSD为 2.1%。
2.7　稳定性试验　精密吸取同一供试品溶液(安徽芜湖样
品)各 20 μl, 分别在 0、 2、 4、 8、 12、24 h进样分析 ,异巴西红厚
壳素峰面积 RSD为 2.5%。表明样品在 24h内稳定性良好。
2.8　回收率试验　精密称取已知含量的田基黄药材(安徽
芜湖样品)9份 , 每份 0.5 g,每 3份为一组 , 每组分别精密加
入异巴西红厚壳素对照品溶液(浓度为 0.350 mg/ml)0.2、
0.4、0.6 ml于具塞锥形瓶中 , 常压下挥干溶剂 , 按 “供试品溶
液制备”项下操作制成所需溶液 , 在上述色谱条件下进样分
析 , 计算平均回收率为 101.5%, RSD为 2.5%。
2.9　样品测定　取收集的不同购买地的田基黄药材粉末各
约 1.0g,精密称定 , 按 “供试品溶液制备”项下方法操作 , 在
上述色谱条件下进行 HPLC分析 ,结果见表 1。在所收集的
16个不同购买地的药材中 , 异巴西红厚壳素的含量存在较大
的差异 , 其中以江苏南通购买的药材中含量最高。
3　讨论
3.1　色谱条件的选择　取对照品适量并溶于甲醇 , 用岛津
UV-265FW型分光光度仪绘制紫外吸收光谱 , 发现在 254 nm
处有最强吸收 , 故选择 254 nm作为检测波长。分别比较了甲
醇-水 、甲醇-水-磷酸 、乙睛-水 、乙睛-水-磷酸系统 ,结果表明采
用乙睛-水-磷酸这一流动相系统所得色谱峰峰形好 , 柱效高 ,
可达到理想的分离度。
3.2　样品提取条件的选择　以 80%乙醇为提取溶剂 , 分别
考察了超声法与加热回流法 , 比较其含量 ,结果超声和加热回
流法对异巴西红厚壳素的提取效率相差不大 , 为简便操作故
选择超声法。采用超声法 , 分别考察了 40%、 60%、 80%、
95%乙醇和 40%、60%、80%、 95%甲醇为提取溶剂时异巴西
红厚壳素的提取效率 , 发现以 80%乙醇为提取溶剂时异巴西
红厚壳素的提取效率较高 , 且提取物中干扰峰较少 , 色谱分离
效果较好 , 故采用 80%乙醇为提取溶剂。
参　考　文　献
[ 1] 　《中华草本》编委会.中华草本.上海科学技术出版社 , 1999:
598-601.
[ 2] 　黎七雄 , 孙忠义 ,陈金和.田基黄对人喉癌 Hep-2和人宫颈癌
Hela细胞株生长的抑制作用.华西药学杂志 , 1993, 8(2):
93-94.
[ 3] 　WuQing-li, WangSheng-ping, DuLi-jun, etal.XanthonesfromHy-
pericumJaponicumandHHenry.Phytochemistry, 1998, 49(5):
1395-1402.
·临床案例·
胎儿口腔肿瘤 1例
王晓红　牛绍鹏　吴兴业
　　孕妇 , 女 , 21岁 ,家住吉林省通化县西江 , 于孕 4个月时
在当地曾做 B超检查 ,当地医生未提出异常 , 该孕妇于 2007
年 11月 30日来我院进行常规孕检 ,彩超室医生为该孕妇进
行了仔细检查 , 诊断为胎儿口腔肿瘤 , 我院妇产科医生于 12
月 6日为其成功引产 , 产后证实胎儿为口腔肿瘤 , 病理诊断为
神经纤维瘤。
神经纤维瘤在口腔颌面部肿瘤中并不常见 ,据不完全统
计 , 神经纤维瘤约占口腔颌面部肿瘤的 1.36%, 胎儿口腔神
　　作者单位:134001 吉林省通化市中心医院
经纤维瘤更是极为罕见的胎儿先天性疾病 。
·9·中国实用医药 2008年 7月第 3卷第 19期　ChinaPracMed, Jul2008, Vol.3, No.19