全 文 ：　 药物分析与检验
作者简介:唐丹 ,女 ,硕士研究生　　E-m ail:t_dan. sh@ 163. com　　*通讯作者:田景奎 ,男 ,教授　　Fax:(0571)88208446
分光光度法测定田基黄中总黄酮的含量
唐丹 ,张琳 ,田景奎*(浙江大学药学院现代中药研究所 ,杭州 310058)
摘要:目的　建立紫外分光光度法测定田基黄药材中总黄酮含量的方法。方法　利用黄酮类化合物母核上的酚羟基能与铝
离子络合而显色 , 采用分光光度法 , 以槲皮苷为对照品 ,以 10%三氯化铝醇溶液为显色剂 , 在波长 273 nm处对样品中的总黄
酮进行含量测定。结果　总黄酮在 3. 20～ 16. 0 μg m L - 1范围内线性良好(r=0. 999 9);该法的平均加样回收率为 98. 25%,
RSD为 2. 21%(n =9);且该法稳定性较好 , 24. 0 h内吸光度基本无变化 , RSD为 0. 40%(n =6)。结论　该方法稳定 、简便 、快
速 , 适用于田基黄药材中总黄酮的含量测定。
关键词:田基黄;分光光度法;总黄酮;含量测定
中图分类号:R917. 102　　　文献标识码:B　　　文章编号:1007-7693(2007)07-0620-03
Determ ination of Total F lavone in Hyper icum Japon icum by Spectrophotometry
TANG D an, ZHANG Lin, TIAN Jing-kui* (In stitute of Modern Ch inese Trad itiona lM edicine of Pharm acy College, Zhejiang
Un iversity, Hangzhou 310058, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　A m ethod for determ ination o f to ta l flavone in Hypericum japonicum w as se t up. METHODS　U sing
the characteristic that the pheno lic hydroxy l g roup of the paren t nuc leus of flavono ids com pound can ea sily comp lexed w ith A l3+. Refe r-
ence substancew as Que rcitrin, 10% A lC l3 w as chrom ogen ic agent and the de tec tion w ave length w as a t 273 nm. RESULTS　The line-
a r rangeW as between 3. 20 ～ 16. 00 μg mL - 1(r=0. 999 9) and the ave rage recove ry was 98. 25% w ith co rresponding RSD of
2. 21%(n =9). CONCLUSION　Th ism e thod is convenient, simp le, rapid and is su itab le for determ ina tion of to ta l flavone in Hyperi-
cum japon icum.
KEY WORDS:H ype ricum japon icum;spec tropho tom etry;tota l flavone;de term ination
　　田基黄 , 又名地耳草;系藤黄科金丝桃属植物地耳草
(H ype ricum japonicum Thumb. )的干燥全草 [ 1] 。田基黄的主
要有效成分为总黄酮类 [ 1-3] , 现代药理研究表明总黄酮类化
合物是田基黄发挥药效的主要物质基础 [ 1-3] 。目前有文献报
道以芦丁为对照品 , 以亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠为显色剂
测定田基黄中总黄酮的含量 , 因芦丁不是田基黄中的成分 ,
所以测定结果不理想 。
笔者用田基黄总黄酮中的主要化学成分槲皮苷为对照
品 , 利用黄酮类化合物母核上的酚羟基能与铝离子络合显色
的特性 , 建立了一种适用于测定田基黄中总黄酮含量的分析
方法。
1　仪器 、样品与试剂
752 -PC全波长扫描紫外-可见分光光度仪 (上海光谱
仪器有限公司), KQ 3200型超声波清洗器(昆山市超声仪器
有限公司);Sartorious CP225D型电子天平 (北京赛多利斯仪
器系统有限公司)。 SB -2000旋转蒸发仪(日本东京理化)。
槲皮苷对照品(中国药品生物制品检定所 , 批号:111538
- 200302);本实验所用田基黄药材购自浙江杭州中药饮片 ,
由浙江大学药学院中药研究所田景奎副教授鉴定;石油醚 、
甲醇 、三氯化铝等试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　对照品储备液的制备
槲皮苷对照品于 75℃减压干燥箱中干燥 6. 0 h, 精密称
取 10. 01 m g,置 50 mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇
匀 , 即得 ,冰箱内保存 , 备用。
2. 2　样品溶液的制备
田基黄药材粉碎 ,过三号筛 , 取约 1 g,精密称定 , 置索氏
提取器中 , 加适量石油醚(60 ～ 90℃)提取至无色 ,弃去醚液 ,
药渣挥去石油醚 , 加适量甲醇继续提取至无色 , 转移至 100
mL量瓶中 ,甲醇定容至刻度 ,摇匀;即得。
2. 3　显色溶液的制备
精密吸取 0. 5 m L对照品储备液或样品溶液于 10 m L量
瓶中 , 准确加入 10%三氯化铝醇溶液 1. 0 mL, 摇匀 , 用甲醇
定容至刻度 , 摇匀 ,即得对照品或样品的显色溶液。
2. 4　检测波长的选择及显色剂用量的确定
分别取适量样品溶液和槲皮苷对照品溶液于 10 mL量
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DOI牶牨牥牣牨牫牱牬牳牤j牣cnki牣issn牨牥牥牱牠牱牰牴牫牣牪牥牥牱牣s牨牣牥牥牬
瓶中 , 加甲醇溶解并定容 , 以甲醇溶液为空白 , 在 200 ～ 600
nm波长范围内扫描 , 扫描结果表明两者在不加显色剂的情
况下 , 最大吸收波长相差较远 ,分别为 282 nm和 257 nm。吸
收光谱见图 1。
图 1　样品溶液和槲皮苷对照品溶液显色前紫外吸收光谱图
1.样品溶液;2.对照品溶液
F ig 1　UV abso rption spectra of samp le and re fe rence substance
befo re c lo ra tion
1. the solu tion of sam p le;2. the so lut ion of reference subs tan ce
　　分别取适量样品溶液和槲皮苷对照品溶液于 10 mL量
瓶中 , 按 “ 2. 3”项下方法显色 ,在 200 ～ 600 nm波长范围内扫
描 , 表明对照品溶液与样品溶液显色后的最大吸收波长分别
在 273 nm和 276 nm, 较为接近。故选择测定的波长为 273
nm。吸收光谱见图 2。
图 2　样品溶液和槲皮苷对照品溶液显色后紫外吸收光谱图
1.对照品显色溶液;2.样品显色溶液
F ig 2　UV abso rption spectra of samp le and re fe rence substance
afte r co lo ra tion
1. the ch rom ogen ic solu tion of reference substance;2. the ch rom ogenic so-
lu tion of sam ple
　　精密吸取槲皮苷对照品溶液 0. 5 mL(n=4)和样品溶液
0. 5 m L(n =4), 分别置 10 mL量瓶中 , 各准确加入 10%三氯
化铝醇溶液 0. 5, 1. 0, 1. 5, 2. 0 mL显色 , 甲醇稀释定容 , 摇
匀;以同法制得的 4份空白为参比 , 在 273 nm处测定吸光
度 , 结果表明:10%三氯化铝醇溶液的用量在 0. 5 ～ 2. 0 mL
范围内不影响测定结果;故确定显色剂的用量为 1. 0 m L。
2. 5　标准曲线的绘制
精密吸取对照品储备液 0. 4, 0. 8, 1. 2, 1. 6, 2. 0 mL于 25
mL量瓶中 ,按 “ 2. 3”项下方法显色 , 于 273 nm 处测定吸光
度 , 以吸光度值 A为纵坐标 , 浓度 C(μg m L- 1)为横坐标进
行线性回归 , 得方程为:A =0. 05456C +0. 01700, r=0. 999 9。
线性范围为 3. 20 ～ 16. 00μg mL - 1。
2. 6　样品的测定
精密吸取待做含量测定的样品溶液 0. 5 mL于 10 m L量
瓶中 , 按 “ 2. 3”项下方法显色 ,在 273 nm处测定吸光度 , 计算
总黄酮含量。
2. 7　精密度实验
重复精密吸取同一份样品溶液共 6份 , 按 “ 2. 6”项下样
品测定方法测定吸光度 , 计算总黄酮含量 , 以总黄酮含量计
算 RSD,结果见表 1。
表 1　精密度实验结果(n=6)
Tab 1　The re su lt o f precision test(n =6)
样品 吸光度 总黄酮含量 /μg mL - 1 RSD /%
1 0. 534 9. 48
2 0. 542 9. 62
3 0. 546 9. 69
4 0. 537 9. 53
0. 85
5 0. 540 9. 58
6 0. 535 9. 49
2. 8　稳定性实验
精密吸取 1. 0 mL样品溶液于 25 m L量瓶中 , 按 “ 2. 6”项
下样品测定方法显色 , 分别于 0, 5, 10, 20, 30, 60, 90, 120 m in
在 273 nm处测定吸光度 ,结果显示样品在 2. 0 h内稳定;以
吸光度计算 RSD,结果见表 2。
表 2　稳定性实验结果(n=8)
Tab 2　The re su lt o f stability test(n =8)
时间 /m in 吸光度 RSD /%
0 0. 455
5 0. 456
10 0. 451
20 0. 454
30 0. 451
0. 40
60 0. 454
90 0. 454
120 0. 455
2. 9　重复性实验
取同一批田基黄药材粉末 5份 , 分别按 “ 2. 2”项下样品
溶液制备方法制备样品溶液 ,再按 “ 2. 6”项下样品测定方法
测定吸光度 , 计算总黄酮含量 , 结果分别为 2. 75%, 2. 74%,
2. 70%, 2. 71%和 2. 72%, RSD=0. 76%。
2. 10　加样回收率实验
精密称取已知总黄酮含量的干燥样品 10. 01 m g于 25
mL量瓶中 ,用甲醇溶解定容至刻度。分别将对照品按与样
品(以总黄酮计)5∶4, 1∶1, 4∶5的比例加入到已量取好的样品
溶液中 , 每组 3份;按 “ 2. 6”项下样品测定方法测定吸光度 ,
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计算平均回收率为 98. 25%, RSD为 2. 21%。
3　讨论与小结
3. 1　显色剂的确定
黄酮类化合物分子中的 3-羟基 、5-羟基或邻二酚羟基易
与金属盐试剂反应 , 生成有色的金属络合物 , 通过比色法可
测定总黄酮的含量。 本实验选择比较了 4种中草药中总黄
酮类化合物含量测定常用的显色剂 [ 5]:亚硝酸钠-硝酸铝-氢
氧化钠 、10%硝酸铝 、三氯化铝 -醋酸钾和 10%三氯化铝 ,结
果表明以 10%三氯化铝作为显色剂时光谱最大吸收波长重
叠较好 , 且显色后样品稳定。
3. 2　对照品的确定
以田基黄黄酮类主要化学成分槲皮苷为对照品 ,以 10%
三氯化铝作为显色剂测定田基黄总黄酮含量的方法比较合
理 , 所测的结果能够近似代表田基黄中总黄酮的含量。
参考文献
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10.
收稿日期:2006-05-30
基金项目:江苏省卫生厅科研项目(K200412)
作者简介:刘娅灵 ,女 ,副研究员　　Tel:(0510)85508875　　E-m ail:liuyaling158@ sina. com
高效液相色谱法测定碘昔兰注射液的含量
刘娅灵 ,邹霈 ,罗世能 ,谢敏浩 ,何拥军 ,吴军 ,王洪勇(江苏省原子医学研究所 ,江苏 无锡 214063)
摘要:目的　建立用 H PLC法测定碘昔兰注射液含量的方法。方法　采用 In te rsilNH2柱(250 mm ×4. 6 mm, 5 μm), 以乙腈∶水
(87∶13)为流动相 ,流速为 1. 0 mL m in- 1 , 检测波长为 245 nm , 柱温为 30℃。结果　碘昔兰对照品在 0. 12 ～ 30 μg范围内线
性关系良好 , 回归方程为 A=35. 911C+0. 7928, R2 =0. 999 9。平均回收率为 100. 6%, RSD为 0. 60%。 结论　本方法简便快
捷 、结果准确 ,可用于碘昔兰注射液的含量测定。
关键词:碘昔兰;高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:R917. 101　　　文献标识码:B　　　文章编号:1007-7693(2007)07-0622-02
HPLC Determ ination of Ioxilan Injection
LIU Ya-ling, ZOU Pei, LUO Sh i-neng, X IEM in-hao, HE Yong-jun, WU Jun, WANG Hong-yong (J iangsu Institute
of NuclearMedicine, Wuxi 214063, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To establish aHPLCm ethod for dete rm ina tion of Iox ilan in jec tion. METHODS　Chroma tog raph ic con-
ditions:co lum n:Intersil NH
2
(250 mm ×4. 6 mm , 5 μm), mobile phase:ace ton itrile∶w a te r(87∶13) w ith a flow ra te o f 1. 0 mL
m in- 1 , de tector:UV detecto r a t 245 nm, temperature:30℃. RESULTS　The linear range w as 0. 12 ～ 30 μg, the regression equa tion
w as A=35. 911C+0. 7928, R2 =0. 9999, them ean recove ry wa s 100. 6% and RSD is 0. 60%. CONCLUSION　TheH PLC me thod
is simp le, sensitive and reproducible fo r determ ina tion o f Iox ilan injection.
KEY WORDS:Iox ilan injection;HPLC;determ ination
　　碘昔兰 [ 1] ( Iox ilan)化学名为 N-(2-羟乙基)-N-(2, 3-二
羟丙基)-5-[ N-(2, 3-二羟丙基)-乙酰胺基 ] -2, 4, 6-三碘-1, 3-
苯二甲酰胺 , 是由美国 Cooking造影剂公司和日本中外制药
公司研制开发的非离子型 X线造影剂 , 1995年在美国上市 ,
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