全 文 ：第 31 卷第 6 期 河 北 医 科 大 学 学 报
20 10 年 6 月 J O UR N A L OF H E B E I M E D IC A L UN IV E RS IT Y
V
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.
3 1
J un e
N 0
.
6
20 10
·
6 2 1
·
· 论 著 ·
土木香根中 3 种倍半菇内醋化合物抑制人肺肿瘤
细胞增殖活性及其构效关系的研究
李 勇’ ,2 , 丛 斌 ` ’ , 赵 陆 , , 董 玫 , , 义志华4 , 史清文 , `
( 1
. 河北医科大学基础医学院法医学系 , 河北省法医学重点实验室 , 河北 石家庄 05 0 0 17 ; 2 河北医科大学第四医院
胸外五科 , 河北 石家庄 05 0 11 ; 3 . 北京军区 6 601 0 部队卫生队 ,河北 石家庄 05 0 61 ; 4 . 石药集团维生药业有限
公司质量部 ,河北 石家庄 05 0 35 ; 5 . 河北医科大学药学院天然药物研究与开发研究室 , 河北 石家庄 05 0 17)
【摘要】 目的 通过检测土木香根中提取的 3 种倍半菇内酷化合物 uE aP olt i de ( 化合物 l ) 、 l , 5 一 D iac e oxt y -
3
,
4 一 e p o翔 一 9 ( 10 ) 一 罗mr a e ar n e 一 12 , 8。 一 o li d e (化合物 2 ) 和 1 , 5 一 D i a e e t ox y l 一 11 , 13 一 d ih yd or 罗 n 一 3 , 9 -
ge mr ac ar id en
一
12
,
s a 一 iol de (化合物 3) 抑制人肺肿瘤细胞增殖活性的影响 ,探讨这 3 种倍半赫化合物的体外抑制
人肺肿瘤细胞增殖作用以及化合物结构与活性之间的构效关系 。 方法 应用噬哇蓝法测定 3 种倍半砧内醋化合物
对体外培养人肺肿瘤细胞增殖的影响 。 结果 化合物 l( 泽兰内醋 )对人非小细胞肺肿瘤细胞 ( 5A 49 和 QG 一 56 )的
增殖抑侧作用强于顺铂 ,对人小细胞肺肿瘤细胞 ( P C 一 6 和 QG 一 90) 的增殖抑制作用与顺铂相同 ;化合物 2 和 3 对
各种实验用肿瘤细胞的增殖不显示抑制活性 。 结论 推测 A 一 环上的 6 位游离经基是该类倍半菇内醋的体外抑制
肿瘤细胞增殖作用所必需的活性基团 。
t关键词 ] 土木香 ;倍半菇类 ;细胞系 ,肿瘤 d o i : 10 . 396 9 / j . i s s n . l姗 一犯05 . 2 0 10 . 肠一0 1【中图分类号】 7R 3 一 3 4 ; 7R 3 4 . 2 【文献标识码】 A [文章编号 ] 100 , 一32 05 ( 20 10 ) 06习 62一很
了N VI T R O A N T I 一 H UM A N I , U N G T UM O R A C ` l ’ I V I T Y S T U D I E S O F
T H R E E SE S QU I T E R P E N O l) S F R ( )M I N U L A H E L E N FUM
H 物 n g ` ,2 , e o NG B i n ` ’ , z毗。 玩 , , D o NG M e i ` , X IA 黝 一 h u 犷 , S IH Qi嗯 一 we n , `
( 1
.
D叩 a r t m e n t of F o r e n s i e Me d i e i n e
, t h e S e h o o l of B
a s i e Me d i
e a l S e ie n e e s
,
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e d i e a l nU i
o e sr i t歹 , Sh ij ia 认 u a ng
0 50() 17
,
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th e F夕i h hT o ar e ie S u渭召yr , th e oF u 材h OH胡 i t a l of eH b e i Me id e a l nU i , e o i才) ,
Sh ij i二h u a n g 050 0 1 1 , C h in a : 3 . D叩 a r tm e n t of eH a l th eT a m , NG . 6 6O 10 of B e ij 咭 M i l it a 叮 C o m m a u d ,
Sh ij i
a z
h
u a n g 0 5叩6 1 , C h in a ;4 . D叩 a r `m e n t of Qu a l i`了 , C s CP 俄 i s h e鳍 p h a r m . oC . tL d . , Sh lj’i o h u a n g
0 500 35
,
Ch i
n a : 5
.
D甲 a r t m e n t of Me d io i n a l aN t u r a l P r o d u e t C h e m i s t叮
, t h e S
e h o o l of p h
a r m a c e u t ie a l
S
e ie n e e s
,
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e b e i M e d i e a l U n i : e sr i t了 , Sh ij i o h u a咭 050 0 1 7 , C h i n a )
A B S T R A C T : O bj
e e it v e T o s t u d y t h e a n t i 一 h u m a n lu n g tu m o r e fe e t o f t her e s e s q u i t e印 e n e
l a e t o n e s E u p a t o l id e ( l )
,
l
,
5 一 D i a e e t o x y 一 3 , 4 一 e p o x y 一 9 ( 10 ) 一 g e r m a e ar n e 一 12
,
8 一 o l id e ( 2 )
a n d l
,
5 一 D i a e e t o抑 l 一 1 1 , 13 一 d ih y d r o g e n 一 3 , 9 一 g e mr a e r a d i e n 一 1 2 , 8 一 o lid e ( 3 ) i s o l a t e d fr o m t h e
or o t s o f In u l a h e l e n i u m
.
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e ht o d s U s i n g MT
a s s a y t o e v a l u a te th e a n ti t u m o r a e t i v i ti e s o f t h r e e
s e s q u i t e甲 e n e l a e t o n e s o n h u m a n l u n g tu m o r e e l l l i n e s o f A 5 4 9 , QG 一 5 6 , P C 一 6 a n d QG 一 90 , a n d to
e x p l o r e t h e er l a t i o n s h i p b e tw e e n s t ur e tu r e a n d a e t i v i t i e s
.
R e s ul t
s T h e i n h i b it o r y e fe
e t o f E u p a t o li d e o n
n o n 一 s m a l l e e l l l u n g t u m o r e e l l l i n e s ( A 5 4 9 a n d QG 一 5 6 ) w a s s r r o n g e r t h a n t h a t o f e i s p la t i n
,
w h i le t h e
[收稿日期 ] 2 0 10习 4一 8 ; [修回日期 ] 2 0 10一 5习7
〔基金项目 ] 河北省自然科学基金 ( 08 B0 3 2 ) ;河北省留学回国
人员科技活动项目 ( 2 0 06 一 02 ) ;河北省卫生厅医学科学研究重点课
题计划 ( 2X() 9 0 15 1 )
[作者简介 ] 李勇 ( 197 6 一 ) , 男 , 河北曲周人 , 河北 医科大学第
四医院主治医师 , 医学博士研究生 , 从事肺癌的基础与临床研究
* 通讯作者
·6 2 2
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河 北 医 科 大学 学 报 第 3 1卷 拿 6期
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et o nsm all e el l l u ngt umo e e rl l l ine s( PC
一 6 n adQ G一 9 0) ws at he s am e e s a ispl at in
.
C o m Po u nd Z
n ado em po u nd3 e sh ib it ed no inh ib it o巧 aet iv iy t o nt he p ro l fe irt a io no f n ay hum n au Ingt umo e e rl l l ine .
C o nel u s io n Spe eul at et h at6一 hy d roxy g ro u p in r ing A15 e e s s nt ial o f rt he ant i一 go rwt he at iv ity in
e s s qu it e p ro e n id
.
KEY WOD R S
:
IN U L AE E L HN WM:
e s s qu it e rPe ne s ;e ell i Ine
,
t u m o r
土木香 ( I n u l 。 h e l e n i u苗 )系菊科旋覆花属植物 ,
为多年生草本 ,其根具有健胃 、 利尿 、 祛痰和驱虫等
功效川 。 药理活性研究发现土木香内醋类成分有
抗炎和抗真菌作用和抗结核分支杆菌等作用 ,并具
有抗肿瘤细胞增殖等多样的生物活性 「’ , , 〕 。 本文对
从土木香的根中纯化的 3 种倍半菇内醋化合物进行
了体外抑制人肺肿瘤细胞增殖活性实验 ,探讨这 3
种倍半菇内醋化合物结构与活性之间的关系 。
材 料 与 方 法
1
.
1 实验药物 : 3 种倍半菇类化合物 , 泽 兰 内醋
( E
u p a t o l id e
,
1 )
,
1
,
5 一 D i a e e t o x y 一 3 , 4 一 e p o翔 一 9
( 10 )
一 g e r m a e r a e n 一 12 , s a 一 o lid e ( 2 ) 和 l , 5 -
D i a e e t o x y l 一 1 1 , 1 3 一 d ih y d or g n e 一 3 , 9 一 g e r m a e r a d i e n
一 12 , 8。 一 iol de ( 3) 从土木香的根中分离得到 , 均
为白色针晶 ,经一维和二维核磁共振光谱和质谱确
定它们的结构 (图 1 ) , 经 HP L C 和 ’ H 一 N M R 检查 ,
纯度在 9 % 以上 。
,
.
2 药品与试剂 : 噬哩蓝 ( iS g m a , M 一 21 28 ) ; R PM I
16 4 0 培养基 ( G IB C O ) ;顺铂 ( S ig m a , 0 3 4 k 3 6 9 3 ) 。
1
.
3 细胞系与培养条件 : 人非小细胞肺肿瘤细胞
株 ( A 54 9 、 R E R F 一 LC 一 j k 和 QG 一 5 6 )以及人小细
胞肺肿瘤细胞株 ( PC 一 6 和 QG 一 90) 由 日本千叶大
学医学部第二生物化学教室提供 。 各细胞株接种于
直径为 10 0 m m 的培养皿中 ,加人含 10 % 胎牛血清
的 RP M I 16 4 0 培养基 , 37 ℃ 和 5% C O : 培养箱中培
养 。
图 1 实验用 3 种倍半菇内酷化合物的结构
1
. 泽兰内酷 ; 2 . 1 , 5 一 二酞基本 3 , 4 一 环氧 , 9 一 吉玛烯 一 12 , s a 一 内酷 ; 3 . 1 , 5 一 二乙酞基 一 3 , 9 一 吉玛二烯 一 12 , s a 一 内醋
F i , er 1 Ch e m i e a l s tur e t u er s o f th r e e s e s q u i t e rP e n o i d s of r e x p e ir m e n t
1
.
E u pat o l i e d ; 2
.
1
,
5 一 Di a e e t ox y 一 3 , 4 一 e P o xy 一 9 ( 10 ) 一 罗rm a e r a e n 一 12 , s a 一 o l id e ;
3
.
1
,
5 一 D i a e e t o x y l 一 1 1 , 1 3 一 dih y d or g n e 一 3 , 9 一 罗rm a e r a d i e n 一 12 , s a 一 o li de
1
.
4 实验方法 : 参照文献叫 中的方法 。 细胞接种
于 % 孔板 , 每孔含 1 x l了 个细胞 ,分别加人溶剂对
照 (终浓度 0 . 1% D M S O ) 、 阳性对照顺铂 、紫杉醇和
化合物 l 一 5 ,终浓度为 1 0 0 、 10 、 l 林m o F L , 每组设 3
复孔 ,置于饱和湿度 、 37 ℃ 和 5% C O Z 培养箱中培养
4 8 h
。 于培养结束前 4 h , 各培养孔加人 s m岁m L 嚷
哩蓝 。 实验终止测定各孔吸光度 ( o p t i e a l d e n s i t y ,
O D )值 , 测定波长 入 二 5 70 n m , 参考波长 入 = 630
n m
,并计算细胞增殖抑制率 , 细胞增殖抑制率 ( % )
=
( 1
一 给药组 O D 值 / 对照组 O D 值 ) x l OO% 。
1
.
5 统计学方法 : 应用 SA S 6 . 2 统计软件进行处
理 , 计量资料以 无 士 、 表示 , 多组间数据比较用单因
素方差分析 。 组间两两 比较采用 q 检验 。 尸 < 0 . 05
为差异有统计学意义 。
2 结 果
2
.
, 化合物 1 一 3对体外培养的人非小细胞肺肿瘤
细胞 A 549 增殖的抑制作用 : 阳性对照顺铂和紫杉
醇对人非小细胞肺肿瘤细胞 ( A549 )的增殖显示较
强的抑制活性 , 通过肿瘤细胞增殖抑制率对顺铂和
紫杉醇浓度的对数回归方程 y 二 一 10 . 2 72 1n( x ) +
7 7
.
4 9 9 和 y = 一 1 1 . 5 0 9 In ( x ) + 7 4 . 5 9 8得出 , JJ匝铂
和紫杉醇对 A 549 细胞增殖的半数抑制浓度 ( I C S。 )
分别为 1 8 . 4 8 和 24 . 5 4 林m o F L ; 而用 10 0 林m o F L 的
河 北 医 科 大 学 学 报 第 31 卷 第 6期 6 2 3
卜m lo儿 。 泽兰内醋除对 P C 一 6 的增殖显示 中等的
抑制活性 ,对 R E R F 一 L C 一 jk 、 QG 一 56 和 QG 一 90 细
胞的增殖均有较强的抑制活性 ,其 I C S。分别为7 . 23 、
4
.
2 9
、
3
.
7 0 林m o l / L 。
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.碱》 ~ 〔 ’ is p l . it n
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. 刁卜. 〔勺m po u耐 2
~ 谧 r 〔 ’ o m即u n ` 13
` .福,从
ǎJ已1.卜;ó二S
化合物 1( 泽兰内醋 )处理 A549 细胞后 ,其肿瘤细胞
的生存率为7 . 37 % , 通过肿瘤细胞增殖抑制率对化
合物 l 的对数回归方程 y = 一 14 . 2 5 3 I n ( x ) +
7 3
.
7 4得到化合物 l 对 A 5 4 9 的 I C S。仅为 5 . 2 9 林m o F
L
,低于阳性对照顺铂和紫杉醇 , 并且与空 白对照组
相比差异有统计学意义 ( 尸 < 0 . 0 1 ) ,提示泽兰 内醋
有较强的抑制人肺肿瘤细胞增殖的作用 。 与泽兰内
酷结构相似的化合物 2 和 3 即使用 10 0 卜m o F L 处
理 4 种人肺肿瘤细胞 ,对其增殖均显示较弱的抑制
活性 ,其 IC S。均 > 1 00 m o F L 。 见图 2 。
2
.
2 泽兰内酷对其他 4 种人肺肿瘤细胞增殖抑制
活性的影响 : 实验结果如图 3 所示 , 阳性对照顺铂
和紫杉醇对人非小细胞肺肿瘤细胞 ( R ER F 一 Lc -
j k 和 QG 一 5 6) 的增殖显示较弱的抑制活性 (图 3 A
和 3 B ) , 对人小细胞肺肿瘤细胞 ( P C 一 6 和 QG -
90 ) 的增殖显示较强的抑制活性 (图 3 C 和 3 D ) ,顺
铂对 p C 一 6 和 QG 一 9 0 的 IC S。仅为 34 . 6 2 、 3 8 . 9 5
卜m o l / L ; 紫杉醇对这 2种细胞 的 IC S。为 4 . 5 3 、 0 . 3 2
A只e n亡` ( , o ,一c e n t r a 亡亡o n ( e /卜mo l
·
L
一 , )
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3种倍半菇内醋化合物对人肺肿瘤细胞增殖的影响
* 尸 < 0 . 05 # P < 0
.
01 与对照组 比较 ( q 检验 )
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e t o f t h er e
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* P < 0
.
0 5 # P < 0
,
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冉 g e成、 C o n e e成 r at 映 n (C l林 m o l · L一` )⑥ A g e n t , C .毗n t m旋o n ( c l卜 m o l L一 ” ⑥
图 3
( A
.
泽兰内醋对其他 4 种人肺肿瘤细胞增殖活性的影响
R E R F 一 L C 一 jk ; B
. 一 5 6 ; C
.
P C 一 6 ; D
.
* 尸 ( 0 . 0 5
QG
# 尸 < 0 . 0 1 与对照组 比较 (
QG 一 9 0 )
检验 )
F ig u er 3 T h e e fe
e t o f E u p a t o l id e o n t h e p or l i fe ar t i o n fO o th e
r
h u m a n l u n g t u m o r (
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( A
.
R ER F 一 L C 一 i k ; B
.
QG
一 5 6 : C p C 一 6 ; D
.
QG
一 90 )
* P < 0
.
0 5 # P < 0
.
0 1哪 e o n t r o l gr o u P b y 叮 t e s t
3 讨 论
近年来肺癌的发生率和病死率逐渐升高 , 并且
发病年龄逐渐年轻化 ,对肺癌的治疗仍以手术为主 ,
结合放化疗综合治疗 ,化疗在肺癌尤其是小 细胞肺
癌和晚期肺癌患者中占据重要地位 。 目前临床上肺
癌化疗仍以铂类 、紫杉烷类 、 长春新碱类为主 ,但是
因其不良反应较大 , 限制了其广泛应用 ;寻找高效低
·62 4
· 李 勇等 土木香根中 3种倍半菇内醋化合物抑制人肺肿瘤细胞增殖活性及其构效关系的研究
毒的新的抗癌成分一直是药物学家和肿瘤专家不懈
的努力[ 5, 6 〕。
我们以前的系列研究发现 , 土木香 中提取的多
种倍半菇类化合物都对恶性肿瘤细胞显示了较强的
抗增殖活性 7[, 8 ]。 本次实验中 , 以土木香根中提取
的 3 种倍半砧内醋化合物对 5 种人肺肿瘤细胞增殖
抑制活性进行研究 。
本实验研究结果显示 ,化合物 l( 泽 兰内酷 )对
人肺肿瘤细胞的增殖均有明显的抑制作用 , 尤其是
用泽兰内醋处理人非小 细胞肺肿瘤细胞 ( A549 和
R E R F 一 LC 一 jk) 2 种细胞后 , 显示强 于顺铂和紫杉
醇的增殖抑制活性 ,并且呈现较好的剂量依赖关系 ;
同样从土木香根中提取得到的化合物 2 和 3 中 , 即
使用 10 林m o F L 处理 5 种人肺肿瘤细胞 ,对其增殖
均显示较弱的抑制活性 。 从结构上分析 A 一 环上的
6 位游离经基是该类倍半菇内醋的体外抑制肿瘤细
胞增殖作用所必需的活性基团 。
通过对土木香中提取的 3 种倍半菇内醋化合物
对人肺肿瘤细胞的增殖抑制活性的筛选研究 , 探讨
化合物构 一 效关系 , 并在下一步对土木香提取的泽
兰内醋的抑制人肺肿瘤细胞增殖机制进行深人研
究 ,这对发现肺癌治疗新药物 ,并在指导药物的开发
设计方面具有重要意义 。
【参考文献 1
中国科学院 . 中国植物志「M 〕. 北京 : 科学出版社 , 19 79 . 76
卷 , 24 8 一 2 5 4 .
O S H E A S
,
L U CE Y B
,
C《)T f ER L In ` i t or a e t i v i t y o f In u la
h e l e n i u m a g a i n s t e l i n i e
a
l
s t a Ph y l
o e o e e u s au re u s s tar i n s i n e lu d i n g
M R S A 仁J」. B r J B i o m e d S e i , 2 C9 9 , 66 ( l ) : 1 86 一 189 .
T E P K E EV A 11
,
A U S H EV V N
,
Z B O R O V S K AY A I B
, e t al
.
C y t o s t a t i e a e t iv i ty
o
f p
e P ti d e e x t ar e t s of m e d i e i n a l Plan t s o n
t r a n s of rm
e d A5 4 9
,
H 1 2 99
,
an d H
e
La C e ll s 「J ] . B u l E x p B i o l
M e d
,
20 0 9
,
14 7 ( l )
:
4 8 一 5 1
.
司徒镇强 . 细胞培养 「M 〕. 西安 : 世界图书出版西安公司 ,
2 0 0 4
.
2 5 0 一 2 5 2
.
C O R D A L Iz A M
.
N a t u r滋 p or d u e t s as le ad s t o a n it e a n e e r d ru g s
[ J 〕. C l i n i e a l a n d rr a n s lat i o n al o n e o lo盯 , 2X() 7 , 9 ( 12 ) : 7 6 7 -
7 7 6
.
H I D E J I I T O K AW A
,
S U S A N L
.
M O R RI S 一 N AI , SC H K E , e t al
.
p l a n t 一 d e ir v e d n at u r al por d u e t re s e ar e h a im e d a t n e w d ru g
d i s e o v e叮 [ J ]
.
J o u rn a l 成 N at u ar l M e d i e i n e s , 2 0 5 , 6 2 ( 2 ) : 2 6 3
一 2 80
.
司亚茹 ,李珊珊 ,姜霞 ,等 . 3 种倍半菇化合物抑制妇科肿瘤细
胞增殖活性及其作用机制探讨「J」. 癌变 · 畸变 · 突变 , 2 0 10 ,
2 2 ( 1 )
:
2 8 一 3 1
.
李勇 ,李铁库 , 温士旺 ,等 . 土木香中纯化的 5 种倍半菇化合物
抑制肿瘤增殖活性的研究 「J] . 中国药理学通报 , 2 0 or , 26
( ] ) : 11 2 一 1 15
.
,J .r .J1.,``r
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飞一Jǐ es
4
亡、ùr.esL`l
· 病例报告 ·
原发食管恶性黑色素瘤 1 例
艾 宁 ,李智岗 ,李顺宗 ,赵俊京 , 杨 光
(河北医科大学第四医院放射科 ,河北 石家庄 05 001 1)
[关键词 1 食管肿瘤 ;黑色素瘤 ;诊断 d o i : 10 . 39 69 j/ . i s s n . 1 0 0 7 一3 2 0 5 . 2 0 1 0 . 06刁0 2
【中图分类号】 7R 35 . 1 【文献标识码】 c
患者 , 女性 , 64 岁 , 主 因轻度吞咽不适 2 月人
院 。 查体未发现全身体表皮肤黑色素瘤 ,全身浅表
淋巴结未触及肿大 。 腹软 ,肝脾未及 , x 线胸片无异
常发现 。 内镜检查发现食管距门齿 23 一 26 c m 后壁
可见息肉样隆起 , 近半周 ,粗蒂 ,质软 , 活检易出血 ,
2 0 一 3 0 C m 处前壁及左后壁 可见密布蓝色素沉着
[收稿日期 ] 加 10一3一 5 ; 〔修回日期 ] 2 0 10一4一 7
汇作者简介〕艾宁 ( 19 80 一 ) , 男 , 河北枣强人 , 河北 医科大学第
四医院主治医师 ,医学硕士 , 从事医学影像学肿瘤介入治疗研究 。
[文章编号 ] 100 7 一咒05 ( 20 10 ) 06习 624 习2
(图 1 , 2 ) 。 X 线钡餐造影显示 ,食管中段薪膜破坏
中断 , 管腔膨隆扩大 , 可见长椭圆形腔内型的充盈缺
损 (图 3 ) , 内见分叶 ,管壁僵硬 ,钡剂通过有绕流现
象 (图 4 ) ,通过稍受阻 ,病变长度约 3 . 9 c m , 考虑食
管中段恶性肿瘤 。 活检病理学结果为食管恶性黑色
素瘤 。 光学显微镜下见到瘤细胞内有黑色素颗粒 ,
并经特殊染色证实为黑色素 。 肿瘤来自邻近鳞状上
皮 ,其附近正常豁膜鳞状上皮基底层出现含有黑色
素颗粒的细胞 。
( 下转第 6 3 0 页 )