全 文 ：收稿日期:2011-06-28; 修订日期:2011-11-07
基金项目:国家重点基础研究发展计划项目(No． 2006CB504100)
作者简介:毛 羽(1982-) ，男(汉族) ，重庆人，现为沈阳药科大学硕士研
究生，学士学位，主要从事医学检验研究工作．
* 通讯作者简介:王乃利(1950-) ，男(汉族) ，辽宁沈阳人，现任沈阳药科
大学中药学院教授，学士学位，主要从事天然药物化学研究工作．
田基黄主要成分抗缺氧活性的研究
毛 羽1，2，王 冲2，杜奕欣3，王乃利1*
(1．沈阳药科大学 中药学院，辽宁 沈阳 110016;2．广东省深圳市南山区妇幼保健院 518052;
3．广东省深圳市中医院 518020)
摘要:目的 研究田基黄主要成分的抗缺氧活性。方法 采用 PC12 细胞缺氧保护作用实验和 DPPH法进行抗缺氧活性研
究。结果 田基黄中部分黄酮类化合物和酚酸类化合物具有较强的抗缺氧活性。结论 田基黄中具有抗缺氧活性的化学
成分均为分子量较小，酚羟基较多的化合物。
关键词:田基黄; 抗缺氧
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 05． 027
中图分类号:R284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2012)05-1111-02
The Anti － hypoxic Activity of Hypericum japonicum Thunb．
MAO Yu1，2，WANG Chong2，DU Yi-xin3，WANG Nai-li1*
(1． School of Traditional Chinese Materia Medica，Shenyang Pharmacological University，Shenyang 110016，Chi-
na;2． Shenzhen Nanshan Mathernity＆Child Healthcare Hospital，Shenzhen 518052，China;3． Shenzhen Tradi-
tional Chinese Medicine Hospital，Shenzhen 518020，China)
Abstract:Objective To study the anti － hypoxic components of the Herba Hyperici Japonici (the whole plant of Hypericum ja-
ponicum Thunb．)．Methods The anti － hypoxia of pc12 cells and DPHH were adopted to study anti － hypoxic activity． Results -
Flavanones and phenolic acids in Herba Hyperici japonici had strong anti － hypoxic activity． Conclusion The anti － hypoxic com-
ponents of Herba Hypericijaponici have small molecular weight and more phenolic hydroxyl．
Key words:Herba Hypericci Japonici; Anti － hypoxia; Activity
田基黄为藤黄科金丝桃属植物地耳草 Hypericum japonicum
Thunb． ex Murray 的全草［1］。它是一种常用传统中草药，味苦、
甘，性凉，具有清热利湿，消肿解毒等功效，治疗传染性肝炎［2］、
泻痢、小儿惊风、疳积、肠痈、蛇咬伤等。据报道，田基黄全草含内
酯、香豆素、酚类、蒽醌、黄酮类、维生素 A 样物质及维生素 B1、
B2、间环己三醇衍生物、色原酮苷衍生物、双苯吡酮类等成分。目
前没有对其主要化学成分的抗氧化活性的研究。本研究对田基
黄进行了提取分离并对其主要化学成分进行抗氧化研究。
1 材料
1． 1 细胞 PC12 细胞。缺氧培养 PC12 细胞株可导致细胞大量
死亡，主要表现为凋亡［3，4］。根据细胞凋亡的数目可以检测药物
抗缺氧能力的强弱。
1． 2 药物及试剂 DPPH·。DPPH 自由基用无水乙醇配成 2 ×
10 －4mol·L －1的溶液，置于 4℃避光保存。各单体化合物和阳性
对照品均用无水乙醇配成 1 mg /ml的原液，测试前用无水乙醇稀
释成所需浓度。维生素 C，石家庄医药集团，生产批号:
20090306，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。田基黄的主要化
学成分主要经过本实验室提取并经过四谱鉴定(红外光谱、紫外
光谱、质谱和核磁共振波谱) ，主要有:化合物 1 为豆甾醇;化合物
2 为胡萝卜苷 (Daucosterin) ;化合物 3 为 bijaponicaxanthone;化合
物 4 为槲皮素 － 7 － O － α － L －鼠李糖苷;化合物 5 为槲皮素 － 3
－ O － α － L －鼠李糖苷(槲皮苷) ;化合物 6 为槲皮素 － 3 － O － β
－ D －葡萄糖苷;化合物 7 为原儿茶酸;化合物 8 为没食子酸;化
合物 9 为槲皮素;化合物 10 为 3 － O －甲基槲皮素;化合物 11 为
5，7，4＇－三羟基 － 3＇－甲氧基黄酮;化合物 12 为对羟基苯甲酸;
化合物 13 为二氢山柰酚;化合物 14 为二氢槲皮素;化合物 15 为
5，7，3＇，4＇－四羟基二氢黄酮;化合物 16 为反式对羟基桂皮酸;化
合物 17 为 5，4 ＇ － 二羟基 － 7 － 甲氧基二氢黄酮;化合物 18 为
(2E)－ 3，5，3＇，4＇－四羟基 － 7 －甲氧基二氢黄酮;化合物 19 为绿
原酸;化合物 20 为 4 － O －葡萄糖香豆酸。
2 方法
2． 1 抗缺氧活性———PC12 细胞缺氧保护作用 取培养 8 天的各
组 PC12 细胞，按实验分为对照组(H2O、MeOH、DMSO)和药物各
组(药物浓度分别为 100，50，25 μg /ml)。在缺氧处理前 24 h 分
别加入不同药物。然后将细胞移置恒温(36 ℃)密闭缺氧容器
内，连续充以含 90% N2 和 10% CO2 的无氧气体，在缺氧条件下
继续培养 12 h后取出，并用 4%台盼蓝染色，在倒置相差显微镜
(400 ×)下每皿按 Z字顺序计数相邻视野中蓝染(死神经元)和
未蓝染(存活神经元)的细胞数，计算神经元细胞存活百分率。
实验重复 2 次。
本实验分两组进行，对一般的化合物进行进行实验一组实
验，改组以 DMSO等溶剂作阴性对照;对新分的化合物和已知具
有抗缺氧的化合物，进行实验二组实验，以黄芩苷作阳性对照，将
各单体化合物的细胞存活率减去阳性对照的细胞存活率，然后将
其结果与阳性对照的细胞存活率的相除，从而得到相对存活率。
2． 2 抗氧化活性———DPPH 法 参照文献实验方法［5］并加以改
进，将不同浓度的供试品溶液 100 μl和 2 × 10 －4 M DPPH·溶液
100 μl加入 96 孔板的各孔中，同时以不加 DPPH·(以 100 μl无
水乙醇代替 DPPH·)的供试品溶液各浓度作为对照以消除供试
品本身颜色对测试结果的干扰，并设 DPPH·阴性对照(以 100
μl无水乙醇代替供试品) ，每组平行设 4 个复孔。将 96 孔板放
入酶标仪中，振荡 1 min，并于室温、避光条件下保存，30 min后测
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL ． 23 NO． 5 时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 5 期
定其在 517 nm处的吸光度 OD 值，按下式计算供试品的自由基
清除率。
自由基清除率 ={［ODDPPH·control －(ODsample － ODsample control) ］/
ODDPPH·control}× 100%
其中:ODDPPH·control为 DPPH·阴性对照组 OD值的平均值;
ODsample为样品组 OD值的平均值;
ODsample control为样品乙醇对照品 OD值的平均值;
OD为吸光值。
2． 3 统计学处理 实验数据以 珋x ± s 表示，采用 SPSS 统计软件进
行统计学处理。
3 结果
3． 1 抗缺氧活性实验结果 先后以 25，50，100 μg /ml 浓度的实
验一组和 50，100，200 μg /ml浓度的实验二组对单体化合物进行
了活性测试。结果见表 1 ～ 2。
表 1 PC12 细胞在抗缺氧活性实验中的存活率(珋x ± s)
单体化合物 溶剂
细胞存活率(%)
100 μg·ml － 1 50 μg·ml － 1 25 μg·ml － 1
Control(negative) H2O 13． 06 ± 4． 69 12． 01 ± 6． 23 14． 06 ± 4． 48
CH3OH 14． 63 ± 5． 96 11． 77 ± 5． 77 12． 87 ± 4． 36
DMSO 11． 77 ± 4． 01 13． 28 ± 4． 79 12． 01 ± 6． 31
1 DMSO 14． 16 ± 4． 01 27． 1 ± 4． 72 14． 11 ± 4． 38
2 DMSO 37． 3 ± 2． 98＊＊ 29． 0 ± 6． 80 24． 7 ± 3． 34＊＊
3 DMSO 21． 4 ± 3． 17＊＊ 22． 7 ± 2． 75＊＊ 34． 0 ± 5． 25
4 CH3OH 30． 3 ± 4． 30＊＊ 39． 9 ± 6． 42＊＊ 36． 9 ± 4． 89*
5 CH3OH 24． 3 ± 4． 22＊＊ 42． 9 ± 7． 87＊＊ 37． 3 ± 6． 90*
9 CH3OH 27． 2 ± 5． 79＊＊ 41． 9 ± 5． 82＊＊ 40． 7 ± 7． 51＊＊
与对照组比较，* P ＜0． 05，具有差异;与对照组比较，＊＊P ＜0． 01，有显著差异
表 2 PC12 细胞在抗缺氧活性实验中的相对存活率(珋x ± s)
单体化合物
相对存活率(%)
100 μg·ml －1 50 μg·ml －1 25 μg·ml －1
6 0． 026 9 0． 012 1 0． 036 0
7 1． 749 7＊＊ 1． 804 3＊＊ 1． 152 4＊＊
8 0． 415 7* 0． 764 4＊＊ 1． 218 3＊＊
10 1． 006 8＊＊ 1． 085 4＊＊ 1． 051 4＊＊
11 0． 939 4＊＊ 1． 073 1＊＊ 1． 395 6＊＊
12 － 0． 048 7 0． 164 0 0． 320 4
13 0． 577 3* 0． 895 0＊＊ 0． 595 5*
14 0． 682 2* 0． 209 1 0． 137 1
15 0． 028 6 0． 005 3 － 0． 001 1
16 － 0． 079 5 0． 080 1 0． 231 6
17 0． 232 1 0． 298 5 0． 456 4
18 0． 539 8 0． 374 2 0． 617 8
19 0． 176 2 0． 266 3 0． 538 5
20 0． 285 5 0． 334 5 0． 324 6
与对照组比较，* P ＜ 0． 05，具有差异;与对照组比较，＊＊P ＜ 0． 01，有
显著差异
在试验一组中，以 DMSO 等溶剂作阴性对照，发现化合物均
有一定抗缺氧活性，其中化合物 4，5，9 相对较强。
在实验二组中，以黄芩苷作阳性对照，将各单体化合物的细
胞存活率减去阳性对照的细胞存活率，然后将其结果与阳性对照
的细胞存活率的相除，从而得到相对存活率，发现化合物 7，8，
10，11 的抗缺氧活性很强，强于阳性对照品。
3． 2 抗氧化活性结果 单体化合物在 40 μg /ml和 10 μg /ml浓度
下清除 DPPH自由基的能力进行了测试，同时使用 Vc (浓度为
10 μg /ml)作为阳性对照组，规定自由基清除率高于 50%的认为
具有活性。结果见表 3。
表 3 田基黄中各单位化合物的 DPPH自由基清除率
单体化合物
自由基清除率(%)
40 μg·ml － 1 10 μg·ml － 1
单体化合物
自由基清除率(%)
40 μg·ml － 1 10 μg·ml － 1
1 － 4． 91 － 14． 65 12 89． 55 32． 71
2 80． 04 23． 51 13 90． 07 85． 66
3 81． 05 24． 30 14 84． 13 81． 92
4 82． 34 26． 31 15 7． 57 － 13． 99
5 77． 64 23． 58 16 12． 34 6． 89
6 76． 21 18． 96 17 11． 59 5． 87
7 95． 85 81． 27 18 6． 79 － 15． 78
8 85． 46 27． 41 19 95． 07 93． 25
9 96． 73 95． 52 20 76． 69 18． 67
10 79． 12 21． 33
11 89． 52 30． 14 Vc － 95． 40
从表中可知:化合物 7，8，9，13，14，19 具有较好的抗缺氧活
性。化合物 7 为原儿茶酸，化合物 8 为没食子酸，化合物 9 为槲
皮素，化合物 13 为二氢山柰酚，化合物 14 为二氢槲皮素，化合物
19 为绿原酸。
4 讨论
采用 PC12 细胞缺氧损伤作用的体外活性测试方法对田基
黄分离得到的部分单体进行抗缺氧活性测试。研究发现，化合物
4，5，7，8，9，10，11 显示了较好的活性，其中化合物 4，5，9，10 和
11 为黄酮类化合物;化合物 7 和 8 为酚酸类化合物。
采用 DPPH法对田基黄分离得到的部分单体化合物进行
DPPH自由基清除能力的考察。结果显示，化合物 7，9，13，14，19
显示出和 VC 基本相当的活性，其中化合物 7 和 19 为酚酸类化
合物;化合物 9 为黄酮类化合物;化合物 13 和 14 为二氢黄酮类
化合物。
结合两个实验结果来看，田基黄中具有抗缺氧活性的化学成
分均为分子量较小，酚羟基较多的化合物。
参考文献:
［1］ 江苏新医学院．中药大辞典，第 1 版［M］．上海:上海科学技术出版
社，2001:813．
［2］ 上海市长征制药厂．田基黄治疗肝炎报导［J］．中草药通讯，1972，
5:36．
［3］ 王 岩，周莉玲，李 锐，等．显齿蛇葡萄化学成分的研究［J］．中药
材，2002，25(4) :254．
［4］ 张成刚，李伯刚，顾 健，等．马蹄荷化学成分研究［J］．天然产物研
究与开发，2003，15 (4) :308．
［5］ 孙庆雷，王 晓，刘建华，等．黄酮类化合物抗氧化反应性的构效关
系［J］．食品科学，2005，26(4) :69．
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