全 文 ：通讯作者:邹昱蕾 Tel:18908712515 E-mail:zylei1103@ sina． com
HPLC法测定地胆草中 4，5-二咖啡酰奎宁酸的含量
邹昱蕾1 耿家玲2 (1． 昆明市中医医院制剂科 昆明 650011;2．云南省食品药品检验所)
摘 要 目的:建立高效液相色谱法测定地胆草中 4，5-二咖啡酰奎宁酸含量的方法。方法:色谱柱为 Agilent SB C18柱( 250
mm ×4． 6 mm，5 μm) ，流动相为乙腈-0． 1%磷酸溶液( 17∶ 83) ;流速为1． 0 ml·min －1 ;检测波长为 327 nm;柱温为 30℃，进样
量 10 μl。结果:4，5-二咖啡酰奎宁酸在0． 023 5 ～ 2． 352 0 μg范围内线性关系良好( r = 0． 999 9) ，平均加样回收率为98． 75%，
ＲSD为1． 24% ( n = 6) 。结论:所用方法简便、快速、准确，可作为测定地胆草中 4，5-二咖啡酰奎宁酸含量的方法。
关键词 地胆草; 4，5-二咖啡酰奎宁酸;高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ927． 2 文献标识码:B 文章编号:1008-049X(2014)02-0312-03
Determination of 4，5-Dicaffeoyquinic Acid in Elehantopus Scaber Linn by HPLC
Zou Yulei1，Geng Jialing2(1． Kunming Hospital of Traditional Chinese Medicine，Kunming 650011，China;2． Yunnan Institute for Food
and Drug Control)
ABSTＲACT Objective:To establish an HPLC method for the determination of 4，5-dicaffeoyquinic acid in Elehantopus scaber Linn．
Methods:The separation was carried out on an Agilent SB C18 column(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)． The mobile phase was acetoni-
trile-0． 1% phosphoric acid (17∶ 83)and the flow rate was 1． 0 ml·min －1 ． The detection wavelength was set at 327nm，the column
temperature was 30℃ and the injection volume was 10 μl． Ｒesults:The calibration curve showed a good linearity over the range of
0． 023 5-2． 352 0 μg(r = 0． 999 9)． The average recovery was 98． 75% with ＲSD of 1． 24%(n = 6)． Conclusion:The method is
simple，rapid and accurate，and can be used as a quantitative analysis method for Elehantopus scaber Linn．
KEY WOＲDS Elehantopus scaber Linn;4，5-Dicaffeoyquinic acid;HPLC
地胆草为菊科植物地胆草 Elehantopus scaber Linn 的全
草，多为民族用药。有疏风清热、化痰止咳、解毒利湿、消积
等功效，用于风热感冒、咽喉肿痛、咳嗽、水肿、黄疸、小儿疳
积等症［1］，收载于《中国药典》1977 年版一部和《云南省药材
标准》2005 年版第 6 册，中成药尿清舒颗粒、复方感冒安片、
扑感片、妇炎净胶囊、止血灵片等都含有地胆草。据报道地
胆草中含有抗糖尿病活性成分 3，5-二咖啡酰奎宁酸和 4，5
二咖啡酰奎宁酸［2］，而含量测定方面未见相关文献，本文建
立了 HPLC法测定 4，5 二咖啡酰奎宁酸含量的方法，为有效
控制地胆草质量，完善质量标准提供依据。
1 仪器与试药
岛津-20A型高效液相色谱仪;4，5 二咖啡酰奎宁酸对照
品由中国食品药品检定研究院提供，批号:111894-201102，
含量:94． 1%，供含量测定用。地胆草药材经中国科学院昆
明植物研究所鉴定为菊科植物地胆草(Elehantopus scaber
Linn)。流动相中乙腈为色谱纯，水为超纯水，磷酸为分析
纯。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件
色谱柱为 Agilent SB C18(250 mm × 4． 6 mm，5 μm);以
乙腈-0． 1%磷酸(17∶ 83)为流动相，流速1． 0 ml·min －1;检
测波长 327 nm;柱温 30℃;进样量各 10 μl。HPLC图见图 1。
2． 2 对照品溶液的制备
取 4，5-二咖啡酰奎宁酸对照品13． 36 mg，精密称定，置
A．对照品 B．地胆草样品 1． 4，5 二咖啡酰奎宁酸
图 1 HPLC色谱图
50 ml棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，再取 1 ml 至
10 ml 棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得每 1 ml 含
0． 025 14 mg的 4，5-二咖啡酰奎宁酸对照品溶液。
2． 3 供试品溶液
取地胆草药材粉末(过三号筛)0． 25 g，精密称定，置 25
213
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ml棕色量瓶中，加 72%甲醇约 20 ml，避光浸渍 48 h 后加
72%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2． 4 线性关系的考察
取 4，5-二咖啡酰奎宁酸对照品12． 50 mg，置 50 ml 棕色
量瓶，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀 ，即得235． 2 μg·
ml －1的对照品溶液。以此对照品溶液依次用甲醇稀释成
117． 60，23． 52，11． 76，2． 35 μg·ml －1的对照品溶液。分别
取上述溶液各 10 μl，照“2． 1”项下的方法操作。以进样量为
横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明 4，5-二
咖啡酰奎宁酸在0． 023 5 ～ 2． 352 0 μg范围内线性关系良好，
回归方程为 Y = 4 × 106X － 5． 66 × 104，r = 0． 999 9。
2． 5 精密度试验
取浓度为25． 14 μg·ml －1的对照品溶液，按上述色谱
条件，连续进样 6 次，测定 4，5-二咖啡酰奎宁酸的峰面积，
ＲSD为0． 48%(n = 6)。
2． 6 重复性试验
称取同一样品(地胆草样品 8 号)共 6 份，照“2． 3”项下
的方法操作，结果 4，5-二咖啡酰奎宁酸的平均含量为
2． 308 7 mg·g －1，ＲSD为0． 54%(n = 6)。
2． 7 稳定性试验
取浓度为25． 14 μg·ml －1的 4，5-二咖啡酰奎宁酸对照
品溶液及样品(地胆草样品 8 号)，照“2． 3”项下的方法操
作，室温下放置。对照品于 0，1，2． 5，8，19，22 h进样，样品于
0，4，8，16，19，22，48 h 进样，结果表明 4，5-二咖啡酰奎宁酸
对照品溶液在 22 h 内稳定 ＲSD 为1． 84%(n = 6)。样品中
4，5-二咖啡酰奎宁酸溶液在 48 h内稳定，ＲSD为0． 14%(n =
6)。
2． 8 加样回收率试验
精密称取 6 份已知含量(地胆草样品 8 号，4，5-二咖啡
酰奎宁酸的平均含量为 2． 308 7 mg· g －1)的药材粉末
0． 125 g，分置 6 个 25 ml棕色量瓶中。照“2． 3供试品溶液的
制备”项下的方法操作，加入 4，5-二咖啡酰奎宁酸对照品溶
液各 1 ml(每 1 ml含 4，5-二咖啡酰奎宁酸0． 294 5 mg)，按上
述色谱条件测定，计算回收率。结果平均回收率为98． 75%，
ＲSD为1． 24%(n = 6)。
2． 9 供试品溶液制备方法考察
2． 9． 1 不同提取方法考察 取地胆草样品 8 号，提取溶剂
用 50%甲醇［3，4］，提取方法如下，其余方法照“2． 3”项下的方
法操作，结果见表 1。虽然加热回流提取率高，但多批次重
复操作，样品的相对标准偏差较大，而避光处理则对 4，5-二
咖啡酰奎宁酸的稳定性影响较小，最终选择避光浸渍 48 h。
表 1 不同提取方法测定结果(n =6)
提取方法 4，5-二咖啡酰奎宁酸(mg·g － 1) ＲSD(%)
超声处理 30min 2． 02 2． 51
加热回流 1h 2． 83 2． 30
避光浸渍 48h 1． 62 0． 47
2． 9． 2 不同浓度溶剂的比较 地胆草样品 8 号，提取溶剂
浓度如下，其余方法照“2． 3”项下的方法操作，结果见表 2。
70% ～ 75%甲醇提取率最高，甲醇浓度稍低于 70%和稍高
于 75%提取率降低较大，最终选择 72%甲醇为提取溶剂。
表 2 不同浓度溶剂的比较测定结果(n =2)
甲醇浓度
(%)
4，5-二咖啡酰
奎宁酸(mg﹒ g － 1)
甲醇浓度
(%)
4，5-二咖啡酰
奎宁酸(mg﹒ g － 1)
50 1． 62 70 2． 28
60 2． 04 75 2． 31
65 2． 16 80 2． 01
2． 9． 3 提取溶剂量的比较 地胆草样品 8 号，提取溶剂体
积如下，其余方法照“2． 3”项下的方法操作，结果见表 3。用
25 ml量瓶和 50 ml量瓶提取率差别不大，最终选择用 25 ml
量瓶。
表 3 相同溶剂不同提取体积的测定结果(n =2)
量瓶(ml) 4，5-二咖啡酰奎宁酸(mg﹒ g － 1)
25 2． 31
50 2． 29
2． 9． 4 避光浸渍时间的比较 地胆草样品 8 号，避光浸渍
时间如下，其余方法照“2． 3”项下的方法操作，结果见表 4。
避光浸渍 24 h提取率低，避光浸渍 48 h和避光浸渍 72 h差
别不大，最终选择避光浸渍 48 h。
表 4 冷浸时间的比较(n =2)
避光浸渍时间(h) 4，5-二咖啡酰奎宁酸(mg·g － 1)
24 2． 19
48 2． 31
72 2． 33
2． 10 样品测定
取地胆草药材，照“2． 3供试品溶液的制备”项下的方法
操作，结果见表 5。
表 5 不同地胆草样品的含量测定结果
(%，n =2，按干燥品计)
序号 来源
4，5-二咖啡酰
奎宁酸(%)
地胆草样品 1 云南英贸红河制药有限公司 0． 105 2
地胆草样品 2 云南菊花村药材市场 0． 268 1
地胆草样品 3 广东康美药业股份有限公司(批号 110408321) 0． 320 8
地胆草样品 4 广东康美药业股份有限公司(批号 110508991) 0． 308 1
地胆草样品 5 云南文山 0． 323 9
地胆草样品 6 云南版纳 0． 340 9
地胆草样品 7 广东康美药业股份有限公司(批号 110602571) 0． 250 1
地胆草样品 8 广东康美药业股份有限公司(批号 110412461) 0． 230 9
3 讨论
3． 1 据报道地胆草中含有 3，5-二咖啡酰奎宁酸和 4，5-二咖
啡酰奎宁酸。但因中国食品药品检定研究院无 3，5-二咖啡
酰奎宁酸对照品，本试验只测定了地胆草中 4，5-二咖啡酰奎
宁酸的含量。
3． 2 咖啡酰奎宁酸是由咖啡酸和奎宁酸缩合而成的一类有
机酸化合物，菊科中多常见，为同分异构体，不稳定，相互间
会转化。本试验考查了超声提取、回流提取、浸渍提取 3 种
方法，结果发现:超声处理和加热回流对 4，5-二咖啡酰奎宁
酸的稳定性有影响，同一样品多批次经超声处理和加热回流
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中国药师 2014 年第 17 卷第 2 期 China Pharmacist 2014，Vol． 17 No． 2
后，样品的相对标准偏差较大，而浸渍处理则对 4，5-二咖啡
酰奎宁酸的稳定性影响较小。采用不同浓度的甲醇浸渍处
理，结果 70% ～75%甲醇提取率最高，甲醇浓度稍低于 70%
和稍高于 75%提取率降低较大，试验中多批次测定也发现
了这一问题，是因为在配制甲醇溶液时使用的量筒不精密所
导致，因此，选择 70% ～75%甲醇的中间浓度 72%为提取溶
剂的浓度。用 72%甲醇 25 ml和 50 ml提取率差别不大，浸
渍 24 h提取率低，浸渍 48 h和浸渍 72 h差别不大。
3． 3 从表 5 可以看出，不同产地的地胆草 4，5-二咖啡酰奎
宁酸含量差异较大。
3． 4 流动相考察了乙腈-0． 1%磷酸［3］、乙腈-0． 1%三氟乙
酸［5］、甲醇-0． 1%磷酸［6］等，结果表明，本试验的流动相系统
峰形更对称、配制简单。曾选用 Agilent SB C18、岛津 ODS
C18、依利特 ODS2 C18、汉邦 Kromasil C18等不同品牌、型号色
谱柱进行测试，结果均能获得较好的分离。
3． 5 用紫外二极管阵列检测器在 200 ～ 500 nm范围内分别
扫描 4，5-二咖啡酰奎宁酸对照品、供试品中 4，5-二咖啡酰奎
宁酸的紫外吸收，两溶液中 4，5 二咖啡酰奎宁酸的最大吸收
均在 327 nm附近，与文献［5］报道相一致。在三维图谱中，样
品峰的纯度角度小于其纯度域值，证明无其他杂质的干扰。
参 考 文 献
1 云南省食品药品监督管理局．云南省中药材标准［S］．第 6 册．昆
明:云南科技出版社，2005． 49
2 朝晖，陈文，毕培曦．地胆草属药用植物的研究概述［J］． 国外医
学中医中药分册，1998，20(2):11-14
3 何兵，田吉，刘艳，等． HPLC 法测定葱木花中 3，5-二咖啡酰奎宁
酸［J］．华西药学杂志，2010，25(3):365-366
4 王荣梅，徐丽华，林永强． HPLC法同时测定银黄含片中 6 个咖啡
酰奎宁酸类成分的含量［J］．药物分析杂志，2012，32(1):57-60
5 中国药典［S］． 2010 年版．一部． 706
6 冯育林，张武岗，孙丽仁，等． HPLC 法测定杏香兔儿风中绿原酸、
3，5-二咖啡酰奎宁酸和木犀草素［J］． 中草药，2012，43(3):513-
514
(2013-07-03 收稿 2013-09-22 修回)
通讯作者:贾正平 Tel:(0937)8994651 E-mail:JZP2013@ 163． com
HPLC法测定安神益智胶囊中丹酚酸 B的含量
马慧萍 李兰茹 董志臣 何蕾 贾正平 (兰州军区兰州总医院药材科，全军高原环境损伤防治重点实验室 兰
州 730050)
摘 要 目的:建立高效液相色谱法测定安神益智胶囊中丹酚酸 B的含量。方法:色谱柱为 Hypersil ODS2 C18柱( 150 mm ×
4． 6 mm，5 μm) ，流动相为甲醇∶水∶甲酸( 40∶ 60∶ 1) ，检测波长: 286 nm;流速: 1． 0 ml·min －1 ;进样量: 10 μl。结果:丹酚酸 B
在7． 75 ～ 77． 51 μg·ml －1的浓度范围内线性关系良好，r = 0． 999 6，平均回收率为98． 17%，ＲSD为1． 79% ( n = 6) 。结论:本法
简便、准确，灵敏度高，重复性好，可作为控制安神益智胶囊质量的方法。
关键词 高效液相色谱法;安神益智胶囊;丹酚酸 B;含量测定
中图分类号:Ｒ927． 2 文献标识码:B 文章编号:1008-049X(2014)02-0314-03
Determination of Salvianolic Acid B in Ansheng Yizhi Capsules by HPLC
Ma Huiping，Li Lanru，Dong Zhicheng，He Lei，Jia Zhengping (Department of Pharmacy，Lanzhou General Hospital，Lanzhou Mili-
tary Command;PLA Key Laboratory of Prevention and Cure for Plateau Environment Damage，Lanzhou 730050，China)
ABSTＲACT Objective:To establish an HPLC method for the content determination of salvianolic acid B in Ansheng Yizhi cap-
sules． Methods:A Hypersil ODS2 C18 column(150 mm ×4． 6 mm，5 μm)was used and methanol-water-formic acid (40∶ 60∶ 1)was
used as the mobile phase． The detection wavelength was at 286 nm． The flow rate was 1． 0 ml·min －1 and the sample size was 10 μl．
Ｒesults:The calibration curve of salvianolic acid B was linear within the range 7． 75-77． 51 μg·ml －1(r = 0． 999 6)． The average re-
covery was 98． 17%(ＲSD = 1． 79%，n = 6)． Conclusion:The method is simple，accurate and repeatable，which can be used in the
quality control of Ansheng Yizhi capsules．
KEY WOＲDS HPLC;Ansheng Yizhi capsules;Salvianolic acid B;Determination
安神益智胶囊是我院新研制的纯中药医院制剂，系由丹
参、酸枣仁、石菖蒲、远志、龙骨、夜交藤、知母、合欢皮、龟板、
柏子仁共十味药材经提取加工而成。具有养血补肝、宁心安
神、凉血清心、镇静安神、解郁除烦的作用，主要用于失眠，头
昏健忘，心烦不安，心神不宁，耳鸣目花等症。为了有效地控
制该制剂的质量，保证临床用药安全有效，本试验选择处方
中的君药丹参作为研究对象，采用高效液相色谱法对其中水
溶性活性成分丹酚酸 B进行含量测定［1，2］，现报道如下。
1 材料
Waters 600-996 型高效液相色谱仪，包括 Waters 600
Controller，Waters 600 Pump，Waters 996;SK3300LH型超声清
洗机(上海科导超声仪器有限公司，160 W，59 kHz 或 40
kHz);AE200 电子天平(上海梅特勒-托利多公司);丹酚酸 B
对照品(中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号:
11562-201009)，安神益智胶囊(兰州军区兰州总院生产，规
格:0． 5 g /粒，批号:20110501、20110502、20110503);甲醇为
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