全 文 ：四味藏木香软胶囊中土木香内酯在人源Ｃａｃｏ－２
细胞单层模型中的吸收研究
安　涛，何　贺，郭海慧，王洪星
（青海大学 医学院，青海 西宁８１０００１）
摘　要：目的：研究四味藏木香软胶囊中土木香内酯（Ｃ１５Ｈ２０Ｏ２）在人肠的吸收机制。方法：采用人源结
肠腺癌细胞系Ｃａｃｏ－２细胞单层模型研究土木香内酯（Ｃ１５Ｈ２０Ｏ２）由绒毛面（ＡＰ侧）到基底面（ＢＬ侧）、由
ＢＬ侧到ＡＰ侧两个方向的转运过程。应用高效液相色谱法进行定量分析，计算表观渗透系数。结果：
土木香内酯（Ｃ１５Ｈ２０Ｏ２）由ＡＰ侧到ＢＬ侧的表观渗透系数（Ｐ）为（１．０３７±０．１５１）×１０－５ｃｍ·ｓ－１；由ＢＬ
侧到ＡＰ侧的Ｐ为（１．４６±０．１０１）×１０－５ｃｍ·ｓ－１。结论：土木香内酯（Ｃ１５Ｈ２０Ｏ２）ＰａｐｐＡ－Ｂ／ＰａｐｐＢ－Ａ为
０．６７，可以通过小肠上皮细胞被动吸收进入体内，属于良好吸收的药物。
关键词：四味藏木香软胶囊；Ｃａｃｏ－２细胞单层模型；土木香内酯：ＨＰＬＣ
中图分类号：Ｒ２８５　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１２）０８－００１９－０２
收稿日期：２０１２－０５－１７
基金项目：国家大学生创新性实验计划项目（１０１０７４３１９）
作者简介：安涛（１９８８－），男，青海大学医学院学生，研究方向为药物制剂。
　　四味藏木香软胶囊由藏木香、悬钩木、宽筋藤、干姜四
味药组成，主要功能是治培根型木布病和促使瘟病初期的
疫热成型、虚热症、血痛病及涎痰病，呼吸不畅，食欲不振，
两肋刺疼，混合传染病。研究表明，土木香内酯（Ｃ１５Ｈ２０Ｏ２）
是藏木香的主要活性成分之一。Ｃａｃｏ－２细胞系源于人的结
肠癌，其体外作用过程与药物在小肠的吸收具有相关性，因
此，广泛应用于揭示小肠上皮吸收的限速因素，评价药物的
吸收性。本实验试图通过对四味藏木香软胶囊中药物有效
成分经肠吸收动力学方法研究，以弥补市场上只有此药汤
散剂的不足，进一步提高藏药的疗效，扩大使用范围，减少
使用剂量，方便给药，为改进传统藏药剂型提供一定依据。
图１　土木香内酯的化学结构式
１　材料与方法
１．１　实验材料
细胞株Ｃａｃｏ－２（ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ－３７）购自美国 ＡＴＣＣ，土
木香内酯（１１０７６０－２０１００４）对照品购自中国药品生物制品检
定所。甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯，北京化工厂）、缓冲溶
液（Ｈａｎｋ＇ｓ　ｂａｌａｎｃｅｄ　ｓａｌｔ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ＨＢＳＳ），实验用二重水。
四味藏木香软胶囊（由青海大学医学院中藏药研究中心制
作，批号批号２０１１１２）；ＤＭＥＭ培养基（ＤμＬｂｅｃｃｏ＇ｓ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ
Ｅａｇｅｌ　ｍｅｄｉｕｍ，Ｈｙｃｌｏｎｅ公司）；胎牛血清（ｆｅｔａｌ　ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒ－
ｕｍ，ＦＢＳ，ｅｑｕｉｔｅｃｈ－Ｂｉｏ　Ｉｎｃ．公司）；胰蛋白酶（Ｔｒｙｐｓｉｎ）购自
北京华美生物工程公司；非必需氨基酸（ｎｏｎｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ａｍｉｎｏ
ａｃｉｄｓ，ＮＥＡＡ）购 自 美 国 Ｈｙ－ｃｌｏｎｅ 公 司；萘 洛 尔
（ｐｒｏｐｒｎａｏｌｏ１）、阿替洛尔（ａｔｅｎｏｌｏ１）。
１．２　主要仪器
高效液相色谱仪（日本岛津），ＬＣ－１０ＡＴ泵，ＺＡ－１００进
样器，Ｎ２０００工作站，ＳＰＤ－１０Ａ检测器，ＳＹ１２００Ｔ超声波清
洗器，ＺＦ－１型三用紫外分析仪；电子分析天平（ＦＡ１００４，上
海良平仪器仪表有限公司）；ＺＳ－Ｈ型恒温水浴振荡器（哈尔
滨市东联电子技术开发有限公司）；ＴＧＬ－１６Ｃ型高速台式离
心机（上海安亭科学仪器厂）。
１．３　实验方法
１．３．１　细胞培养条件
Ｃａｃｏ－２按“Ｃａｃｏ－２细胞模型和标准操作规程”，采用内
含１０％胎牛血清、１％非必需氨基酸和青霉素－链霉素双抗
液的高糖ＤＭＥＭ培养基。将Ｃａｃｏ－２细胞接种３７℃含５％
ＣＯ（相对湿度９０％）培养皿中培养，每天换液，约５ｄ后按１
∶５比例传代。将细胞按一定密度接种在 Ｍｉｌｉｃｅｌ膜上，种
植密度为１×１０５个／ｃｍ２，种植后每天换一次液，培养至２１
～２３ｄ，体外培养至融合经检测合格后，即可用于药物的吸
收、转运和代谢试验。本实验选择４３～４４代，电阻＞２５Ω／
ｃｍ２的Ｃａｃｏ－２细胞单层。
—９１—
１．３．２　摄取、转运与外流实验
将土木香内酯溶于甲醇中制成储备液，实验前以 ＨＢＳＳ
缓冲液稀释至所设计的剂量浓度，分别在细胞两侧加入受
试化合物和 ＨＢＳＳ溶液（ＡＰ侧４００μＬ，ＢＬ侧１２００μＬ）。ＡＰ
侧给药为摄取和转运实验；ＢＬ侧给药为外流实验。用药后
于恒温摇床（３７℃ ，５０ｒ·ｍｉｎ－１）上温育。土木香内酯的给药
量为４０μｍｏｌ，温育９０ｍｉｎ，分别收集ＡＰ侧或ＢＬ侧的溶液，
单孔取点，每点平行３个孔。当 ＡＰ侧给药时，给药端 ＡＰ
侧取样３００μＬ，接受端ＢＬ侧取样１　１００μＬ；当ＢＬ侧给药
时，给药端ＢＬ侧取样４００μＬ，接受端ＡＰ侧取样３５０μＬ。所
取样品经冷冻干燥后分别加入不同体积的甲醇，给药端均
加入３００μＬ，接受端均加入１００μＬ ，漩涡混匀后超声溶解
５０ｍｉｎ。离心２０ｍｉｎ，取上清液，用 ＨＰＬＣ测定。
１．３．３　ＨＰＬＣ色谱条件
色谱条件：高相液相色谱仪：色谱柱：Ｃ１８柱，４．６ｍ×
１５０ｍｍ，５μｍ；测定波长：２２０ｎｍ；柱温：２０℃ ；流动相：乙腈
∶水＝５５％∶４５％；流动相流速：１ｍＬ／ｍｉｎ。进样量１０μＬ。
１．３．４　表观渗透系数的计算
土木香内酯在Ｃａｃｏ－２细胞单层模型中的值按下式计
算：Ｐａｐｐ＝ （ｄＱ／ｄｔ）／ＳＣ。ｄＱ／ｄｔ为接收池药物出现的速率，
Ｓ为膜面积，Ｃ为药物的初始浓度。Ｐ值越大，通透率越高。
用ｔ检验对两组数据进行比较处理。
２　结果
２．１　土木香内酯分析方法建立
精密称取土木香内酯２５．００ｍｇ，置２５ｍＬ容量瓶中，以
甲醇稀释至刻度，配成１．００ｍｇ·ｍＬ－１的储备液。精密吸取
储备液３０μＬ加最后一次洗细胞的ＨＢＳＳ稀释到３ｍＬ，再从
中依次取１　０００、６００、５００、４００、３００、２００、１００μＬ，分别用 ＨＢ－
ＳＳ稀释至１ｍＬ，冷冻干燥，加入甲醇溶解并定容为１ｍＬ；各
浓度点取２０μＬ，进样分析。得到土木香内酯在浓度范围０．
１～１．０ｍｇ·ｍＬ－１内峰面积（Ｙ）与浓度（Ｘ）的线性回归方程
为Ｙ＝９．１２×１０７Ｘ＋２．２×１０６，相关系数ｒ＝０．９９８８。
图２　土木香内酯对照品和转运药物的ＨＰＬＣ色谱
２．２　回收率实验
ＡＰ侧给药，土木香内酯的给药浓度为４０μｍｏｌ·Ｌ
－１。温
育９０ｍｉｎ后，取ＡＰ侧或ＢＬ和ＢＬ侧或ＡＰ侧液，按“１．２．２”
项方法处理，按项“１．２．３”进行测定，按“１．２．４”项方法计算，
得土木香内酯的平均回收率为９５．８０％，ＲＳＤ＝１．０３％。
２．３　摄取转运实验结果
ＡＰ侧或ＢＬ侧给药，土木香内酯的给药浓度皆４０μｍｏｌ
·Ｌ－１。培育９０ｍｉｎ后，分别取 ＡＰ侧或ＢＬ侧和ＢＬ侧或
ＡＰ侧液，按“２．１”项方法处理，进行测定，按“２．２”项方法计
算，土木香内酯 ＡＰ侧到ＢＬ侧和从ＢＬ侧到ＡＰ侧的Ｐ值，
结果见表１。同理在模型中用普萘洛尔（ｐｒｏｐｒｎａｏｌｏ１）、阿替
洛尔（ａｔｅｎｏｌｏ１）做比较。
表１　土木香内酯在Ｃａｃｏ－２细胞单层模型中的Ｐａｐｐ值
受测药物 ＡＰ－ＢＬ　ＰａｐｐＡ－Ｂ ＢＬ－ＡＰ　ＰａｐｐＢ－Ａ ＰａｐｐＡ－Ｂ／ＰａｐｐＢ－Ａ
土木香内酯 （１．０３７±０．１５１） （１．４６±０．１０１） ０．７１
注：表观渗透系数（×１０－５　ｃｍ·ｓ－１）。
—０２—
漆姑草提取物体外抗肿瘤活性的初步筛选研究
张素英，周万镜
（遵义师范学院 化学系，贵州 遵义５６３００２）
摘　要：目的：对漆姑草提取物的体外抗肿瘤活性进行初步筛选研究。方法：首先选用３个人癌细胞株
（人白血病Ｋ５６２细胞株、人宫颈癌 Ｈｅｌａ细胞株、人乳腺癌 ＭＣＦ－７细胞株），采用 ＭＴＴ法和ＳＲＢ法对漆
姑草５个不同溶剂萃取部位进行抗肿瘤活性筛选，并对溶剂极性较大部位中的皂苷和多糖进行针对人
白血病Ｋ５６２和 ＨＬ－６０两种细胞株的筛选研究。结果：漆姑草皂苷对人白血病细胞株Ｋ５６２和 ＨＬ－６０均显
示有一定的抑制作用，多糖对人白血病Ｋ５６２细胞可能有弱的抑制作用。结论：漆姑草皂苷是漆姑草体外
抗白血病细胞的活性部位。
关键词：漆姑草；癌细胞株；体外抗肿瘤活性；ＭＴＴ法；ＳＲＢ法
中图分类号：Ｒ２８５．５　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１２）０８－００００－００
收稿日期：２０１２－０５－１６
基金项目：遵义市科技局科研基金资助项目［遵社科合社字２００７（１９）号］
作者简介：张素英 （１９７７－），女，硕士，遵义师范学院讲师，研究方向为有机化学及天然产物化学。
　　漆姑草（Ｓａｇｉｎａ　ｊａｐｏｎｉｃａ（Ｓｗ．）Ｏｈｗｉ），又名瓜槌草、珍
珠草、星宿草等，为石竹科漆姑草属植物［１］。漆姑草全草入
药，具有提脓、拔毒、散结消肿、解毒止痒、抗癌之功效，民间
常用于白血病、漆疮、秃疮、痈肿、淋巴结结核、龋齿痛、跌打
内伤、蛇咬伤等疾病的治疗［２］。据黄厚聘等［３］报道，漆姑草
所含黄酮甙对小鼠宫颈癌Ｕ１４有明显的体内抗癌作用，

并
３　讨论
土木香内酯是四味藏木香软胶囊的主要有效成分之
一，具有多种药理活性。本研究通过Ｃａｃｏ－２细胞模型，研究
土木香内酯跨膜转运的机制从而探讨土木香内酯小肠吸收
转运的机制，初步阐明土木香内酯在小肠中吸收的机制和
药物吸收的难易程度。建立土木香内酯在Ｃａｃｏ－２细胞单层
模型中的 ＨＰＬＣ检测方法，土木香内酯的峰面积与质量浓
度线性关系良好，线性范围为０．１～１．０ｍｇ·ｍＬ－１。应用该
方法分别测定了ＡＰ侧给药转运９０ｍｉｎ，时间点ＡＰ侧和ＢＬ
侧液中原形土木香内酯的总残存量，回收率（ＡＰ侧和ＢＬ侧
的总和）为９５．８０％，说明它们在Ｃａｃｏ－２细胞内基本无蓄积
或仅有少量蓄积，对实验结果分析不会产生影响。
根据文献报道，在Ｃａｃｏ－２细胞单层模型中，一般来说人
体吸收完全的药物Ｐａｐｐ值大于１０－５ｃｍ·ｓ－１，而吸收差的药物
Ｐａｐｐ值小于１０－５ｃｍ·ｓ－１，在此模型中我们将转运良好的阳性
药物普萘洛尔和难吸收的药物阿替洛尔的Ｐａｐｐ值进行测定，
得到普萘洛尔的Ｐａｐｐ值为（２．３２±０．１１）×１０－５ｃｍ·ｓ－１；阿替
洛尔的Ｐａｐｐ值为（２．０４±）×１０－５ｃｍ·ｓ－１与文献报道的数据
接近，而从表１我们可知土木香内酯的表观渗透系数在吸
收良好的药物的范围内，从肠腔侧进入体循环（内流）与从
体循 环 进 入 肠 腔 侧 （外 流）的 数 据 相 差 不 大，并 且
ＰａｐｐＡ－Ｂ／ＰａｐｐＢ－Ａ为０．６７，在０．５～２．０之间，所以双向转运差异
不大，初步说明土木香内酯在小肠上属于被动转运，受生物
大分子的影响较小。因此，这些结果对四味藏木香软胶囊
的口服提供了一定的实验和理论基础。
近年来，土木香内酯被发现具有止痛作用，土木香根的
甲醇提取物对人胃腺癌细胞（Ｍｋ－１）、人子宫癌细胞（ＨｅＬａ）
和鼠黑素瘤细胞（Ｂ１６Ｆ１０）具有抗增殖作用，此次在Ｃａｃｏ－２
细胞单层模型中的研究将对今后土木香内酯在这些疑难杂
症的研究方面提供一定的参考依据。
参考文献：
［１］　童丽，热增才旦，李文渊．ＧＣ法测定四味藏木香颗粒中土木
香内酯的含量［Ｊ］．南京中医药大学学报，２００８，２４（４）：２６３－
２６５．
［２］　许延文．痹清胶囊抗痛风作用的实验研究［Ｄ］．哈尔滨：黑龙
江中医药大学，２００５：２６．
［３］　ＴＯＮＧＬＩ，ＲＥＺＥＮＧＣＡＩＤＡＮ，ＬＩＷＥＮＹＵＡＮ．Ａ　ｒａｐｉｄ　ｉｄｅｎｔｉ－
ｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒａｄｉｘ　ｉｎμＬａｅ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ａｃｔｉｖｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ　ａｌａｎｔｏｌａｃ－
ｔｏｎｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｔｉｂｅｔａｎ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｍａｎｕｘｉｔａｎｇ［Ｊ］．ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ
Ｔｒｅｎｄｓ，２００８，２（２）：６４－６７．
［４］　赵中华，王秀兰，王玉莹，等．四味土木香散的镇痛抗炎作用
［Ｊ］．中国民族医药杂志，１９９６，５（增刊）：１０５－１０７．
［５］　ＴＥＲＫＥＬＴＡＵＢ　Ｒ，ＢＡＩＲＤ　Ｓ，ＳＥＡＲＳ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｍｕｒｉｎｅ
ｈｏｍｏｌｏｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－８ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｃｘｃｒ－．２ｉｓｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｆｏｒ
ｔｈｅ　ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ　ｏｆ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｉｃ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ　ｉｎ　ａｉｒ　ｐｏｕｃｈ　ｍｏｄ－
ｅｌ　ｏｆ　ａｃｕｔｅ　ｕｒａｔｅ　ｃｒｙｓｔａｌ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｇｏｕｔｙ　ｓｙｎｏｖｉｔｉｓ［Ｊ］．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ
Ｒｈｅｕｍ，１９９８，４１（５）：９００．
（责任编辑：姜付平）
—１２—