全 文 ：　 2012年 1月 内 蒙 古 科 技 与 经 济 Januar y 2012
　第 2期 总第 252期 Inner Mongo lia Science Techno log y & Economy No. 2 Total No. 252
HPLC法测定蒙成药四味土木香散中异土木香内酯的含量

周雪梅 ,青　松
(内蒙古食品药品检验所 ,内蒙古 呼和浩特　 010000)
　　摘　要:目的:建立四味土木香散中异土木香内酯的含量测定方法。方法: 采用高效液相色谱法 ,用
Kromasi l C18色谱柱 ( 250mm× 4. 6mm, 5μm) ,以乙腈 - 0. 04%磷酸溶液 ( 50∶ 50)为流动相 ,流速为 1
mL /min,检测波长为 210nm。结果: 异土木香内酯的线性范围为 0. 15365μg～ 0. 9219μg ( r= 0. 99998) ,平
均回收率为 100. 76%。 结论:该方法灵敏、准确、重复性好。
关键词:四味土木香散 ;异土木香内酯 ;高效液相色谱法
　　中图分类号: R927. 2　　文献标识码: A　　文章编号: 1007— 6921( 2012) 02— 0114— 02
　　四味土木香散是由土木香、苦参、珍珠杆、山萘
等组成的蒙药复方制剂 ,具有清瘟解表等功效。主治
瘟病初期 ,发冷发热 ,头痛咳嗽 ,咽喉肿痛 ,胸胁胀
痛。本实验对处方中主要药之一土木香进行了含量
测定实验研究。
笔者参照文献〔1〕 ,对处方中主要药味土木香中
所含异土木香内酯和土木香内酯进行了含量测定方
法研究 ,经方法学考察和六批样品的测定结果表明 ,
在阴性对照试验中在与土木香内酯对照品相应的位
置上有干扰 ,所以确定异土木香内酯为测定成分。该
方法准确、灵敏、简便。 可作为四味土木香散内在质
量控制方法 ,为该质量标准的建立提供真实可靠的
实验依据。
1　仪器与试剂试药
1. 1　仪器
SHIM ADZU LC - 20A, LC - 20AT 型泵 ,
CBM- 20A型控制器 , SPD- M 20A型二极管阵列
检测器。
1. 2　试剂与试药
异土木内酯、土木内酯对照品:中国药品生物制
品检定所提供 (批号: 0761 - 200002、 110760 -
200507) ;甲醇、乙腈为色谱纯 ,其他试剂为分析纯 ,
水为高纯水。 供试品四味土木香散 (批号: 060302、
060303、 071206、 060228、 040312、 070916)由内蒙古
库伦蒙药厂 ,乌兰浩特中蒙制药有限公司提供 ;土木
香等蒙药药材由库伦蒙药厂提供 ,经内蒙古药检所
蒙药室康双龙主任药师鉴定。
2　实验方法与结果
2. 1　色谱条件
色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶 ,本实
验采用 Phenomenex luna C18柱 ( 250mm× 4. 6mm;
4μm ); SHIMADZU C18柱 ( 250mm× 4. 6mm;
5μm );流动相: 为乙腈 - 0. 04%的磷酸溶液 ( 50∶
50) ;柱温: 30℃ ; 检测波长: 210nm; 理论板数按异
土木香内酯峰计应不低于 4 000。
2. 2　对照品溶液的制备
取异土木香内酯对照品适量 ,加甲醇制成每
1mL含 60μg的溶液 , 即得。
2. 3　供试品溶液的制备
取本品约 0. 3g ,精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精
密加入甲醇 25mL,密塞 ,称定重量 ,放置过夜 ,超声
处理 30min,放冷 ,再称定重量 ,用甲醇补足减失的
重量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 , 即得。
2. 4　阴性对照试验
取按处方比例并以相同工艺制备的缺土木香的
阴性对照 ,按 2. 3供试品溶液制备法制得阴性对照
溶液。在上述色谱条件下 ,分别精密吸取阴性对照溶
液、对照品溶液、供试品溶液各 10μL,分别注入液相
色谱仪 ,测得结果为:阴性对照色谱图中在与异土木
香内酯对照品以及供试品色谱相对应的保留时间处
无色谱峰出现 ,说明处方中其他组分对异土木香内
酯的测定不产生干扰。
2. 5　线性关系考察
精密称取异土木香内酯对照品 3. 073mg ,置
100mL量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,按
确定的色谱条件分别精密吸取 5μL、 10μL、 15μL、
20μL、 25μL、 30μL,注入高效液相色谱仪 ,记录峰面
积 ,以峰面积对注入量进行回归分析 ,结果异土木香
内酯在 0. 15365μg～ 0. 9219μg范围内呈良好的线性
关系。
回 归 方 程 为: Y = 3. 75687e - 007X -
0. 0110287
相关系数 R= 0. 99998
2. 6　稳定性试验
精密吸取同一份供试品溶液 10μL,分别于 0h、
2h、 4h、 8h、 24h、进样测定 ,结果异土木香内酯面积
积分值在 24小时内基本稳定不变。
2. 7　重复性试验
取模拟样品 6份 ,各取 0. 3g ,精密称定 ,分别按
2. 3方法制备供试品溶液 ,并按确定的色谱条件操
作 , 测 得 每 份 供 试 品 含 量 , 求 得 平 均 含 量
5. 433mg /g , RSD为 0. 67% ,表明重现性良好。
2. 8　加样回收试验
表 1　 异土木香内酯加样回收试验结果
序号 样品量
(g)
供试品含
有量 ( mg)
对照品加
入量 ( mg)
测得含
量 ( mg)
回收率
(% )
平均回收
率 (% ) RSD(% )
1 0. 1573 0. 8546 0. 8096 1. 6736 101. 16
100. 76 0. 55
2 0. 1572 0. 8540 0. 8096 1. 6727 101. 12
3 0. 1563 0. 8491 0. 8096 1. 6675 101. 08
4 0. 1573 0. 8546 0. 8096 1. 6639 99. 96
5 0. 1549 0. 8415 0. 8096 1. 6601 101. 11
6 0. 1585 0. 8611 0. 8096 1. 6718 100. 13
　　取供试品 (批号 060302含量: 5. 43mg /g ) 6份 ,
各约 0. 15g ,精密称定 ,分别置 100mL锥形瓶中 ,依
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收稿日期: 2011- 11- 25
　周雪梅 ,等 · HPLC法测定蒙成药四味土木香散中异土木香内酯的含量 2012年第 2期
次精密加入甲醇 24mL;称取异土木香内酯对照品
8. 15mg,置 10mL量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀。
精密量取 1mL对照品溶液 ,置同一锥形瓶中 ,摇匀 ,
分别按上述供试液制备方法和色谱条件测定每份含
量 ,计算回收率 ,结果见表 1。
2. 9　样品含量测定
取 6批供试品约 0. 3g ,各 2份 ,精密称定 ,按 2. 3
方法制备供试品溶液 ,并按确定的色谱条件操作并
测定含量 ,六批样品的测定结果见表 2。
表 2　 样品中异土木香内酯含量测定结果
批号 取样量
( g )
测得峰
面积值
含量
( mg /g )
平均含
( mg /g )
060228
0. 3008
0. 3003
1567602
1565361
4. 894
4. 895
4. 89
0403112
0. 3002
0. 3005
1487046
1578359
4. 652
4. 932
4. 79
071206
0. 3003
0. 3003
1400148
1407496
4. 378
4. 401
4. 38
060303
0. 3007
0. 3005
1386413
1375759
4. 330
4. 229
4. 31
070916
0. 3005
0. 3010
1531722
1544908
4. 787
4. 820
4. 80
0712061240
0. 3076
0. 3078
358575
334423
4. 336
4. 029
4. 18
3　讨论
根据文献 [1 ]流动相为乙腈 -水 ( 50∶ 50)进行
条件摸索 ,结果拖尾现象严重 ,所以参照文献 [2 ]报
导 ,流动相为乙腈 - 0. 04%的磷酸溶液 ( 50∶ 50) ,样
品分离效果较好 ,无拖尾现象 ,且阴性对照无干扰。
结果:选用流动相为乙腈- 0. 04%的磷酸溶液 ( 50∶
50)。
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