全 文 ：基金项目：新疆维吾尔自治区十二五重大专项（２０１１３０１０５－２）
作者简介：夏提古丽·塔西买买提（１９９０－），女（维吾尔族），在读硕士，研究方向：新疆特色中药资源的开发与利用。
通信作者：热娜·卡斯木，女（维吾尔族），博士，教授，博士生导师，研究方向：新疆特色中药资源的开发与利用研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｒｅｎａｋａｓｉｍｕ＠ｖｉｐ．
ｓｉｎａ．ｃｏｍ。
·维医维药·
欧矢车菊根不同极性萃取部位体外抗氧化活性
及其总黄酮的微乳薄层研究
夏提古丽·塔西买买提，胡曙晨，热娜·卡斯木
（新疆医科大学药学院，乌鲁木齐　８３００１１）
摘要：目的　研究欧矢车菊 （Ｃｅｎｔａｕｒｅａ　Ｂｅｈｅｎ　Ｌ．）根不同极性萃取物的体外抗氧化活性，并通过紫外分光光
度法测量其中总黄酮含量，建立了欧矢车菊根总黄酮的最佳微乳薄层条件。方法　采用１，１－二苯代苦味酰基
（ＤＰＰＨ）自由基清除法、清除超氧阴离子（Ｏ－２·）自由基法、ＡＢＴＳ自由基清除法和铁离子还原能力测定法，测定欧
矢车菊根不同极性萃取物的体外抗氧化活性，并与阳性对照进行比较与评价。同时采用紫外分光光度法，以芦丁
为对照品，测定有效部位的总黄酮含量；以十二烷基硫酸钠（ＳＤＳ）、正丁醇、正庚烷，水微乳液等作为展开剂，通过聚
酰胺薄层层析，定性分析欧矢车菊根药材中总黄酮类成分，应用均匀设计，以色谱分离函数ＣＯＦ为统计指标，考察
了微乳配比因素对分离效果的影响。结果　不同极性萃取部位对ＤＰＰＨ和ＡＢＴＳ自由基均有清除能力并呈明显
的量效关系，其中乙酸乙酯部位的清除能力最强，接近于对照品维生素Ｃ；欧矢车菊根不同极性部位都对超氧阴离
子（Ｏ－２·）具有较弱的除能力；以上不同极性萃取部位均有Ｆｅ３＋还原能力，除乙酸乙酯部位，其余４个部位的还原能
力没有太大差异，当浓度达１ｍｇ／ｍＬ时，乙酸乙酯萃取部位的还原能力接近于同浓度下维生素Ｃ的还原能力。结
论　欧矢车菊根药材不同极性萃取部位均具有一定的抗氧化活性，其中乙酸乙酯部位抗氧化能力最显著，而且乙
酸乙酯部位中总黄酮含量为最高。筛选出十二烷基硫酸钠（ＳＤＳ）：正丁醇＝３３：５７，含水量７５％（Ｏ／Ｗ型）微乳液为
适宜的展开剂。本研究为欧矢车菊根有效成分的深入研究提供理论依据。
关键词：欧矢车菊根；抗氧化活性；自由基；微乳薄层层析
中图分类号：Ｒ９１４　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９－５５５１（２０１６）０３－０２７７－０６
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００９－５５５１．２０１６．０３．００５
Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｏｌａｒ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍＣｅｎｔａｕｒｅａ　Ｂｅｈｅｎ　Ｌ．
ａｎｄ　ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ　ｔｈｉｎ－ｌａｙｅｒ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｏｆ　ｉｔｓ　ｇｅｎｅｒａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
Ｘｉａｔｉｇｕｌｉ　Ｔａｘｉｍａｉｍａｉｔｉ，ＨＵ　Ｓｈｕｃｈｅｎ，Ｒｅｎａ　Ｋａｓｉｍｕ
（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ　８３００１１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔａｒｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉ－ｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｏｌａｒ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍ
Ｃｅｎｔａｕｒｅａ　Ｂｅｈｅｎ　Ｌ．，ａｎｄ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｉｔｓ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ａｎｄ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ｉｔｓ　ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ
ｍｅｔｈｏｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　１，１－ｄｉｐｈｅｎｙｌ－２－ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ（ＤＰＰＨ）ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ，ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｒａｄｉ－
ｃａｌ－ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ，ＡＢＴＳ　ｐｌｕｓ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｎｄ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ａｎｄ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ａｎｔｉ－ｏｘｉ－
ｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｏｌａｒ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍＣｅｎｔａｕｒｅａ　Ｂｅｈｅｎ　Ｌ．ｂｙ　ｃｏｍｐａｒｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　Ｖｉｔａ－
ｍｉｎ　Ｃ（ＶＣ）．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｕｌｔｒａ－Ｖｉｓｉｂｌｅ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ，
ｕｓｉｎｇ　ｒｕｔｉｎ　ａｓ　ａ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅ；ｕｓｅ　ｌａｕｒｙｌ　ｓｏｄｉｕｍ　ｓｕｌｆａｔｅ（ＳＤＳ），ｎ－ｂｕｔｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ，ｎ－ｈｅｐｔａｎｅ，ａｎｄ　ｗａ－
　第３９卷　第３期 新 疆 医 科 大 学 学 报 Ｖｏｌ．３９　Ｎｏ．３
　２０１６年３月 Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍａｒ．２０１６
ｔｅｒ　ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ　ａｓ　ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ　ａｇｅｎｔ，ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｅ　ｐｏｌｙａｍｉｄｅ　ｔｈｉｎ　ｌａｙｅｒ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅｌｙ　ｄｅ－
ｔｅｃｔｅｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＣｅｎｔａｕｒｅａ　Ｂｅｈｅｎ　Ｌ．，ａｎｄ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｕｎｉｆｏｒｍ　ｄｅｓｉｇｎ，ｍａｄｅ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｓｅｐｅｒａｔｉｏｎ　ＣＯＦ　ａｓ　ａ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｉｎｄｉｃａｔｏｒ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｍｉｃｏｅｍｕｌｓｉｏｎ　ｒａｔｉｏ
ｏｎ　ｔｈｅ　ｓｅｐｅｒａｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｏｌａｒ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍＣｅｎｔａｕｒｅａ　Ｂｅｈｅｎ　Ｌ．ｈａｄ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
ｏｎ　ＤＰＰＨ　ａｎｄ　ＡＢＴＳ　ｐｌｕｓ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｗｉｔｈ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｄｏｓｅ－ｅｆｆｅｃｔ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ，ｉｎ　ｗｈｉｃｈ　ｔｈｅ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｅｘ－
ｔｒａｃｔ　ｈａｄ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｅｆｆｅｃｔ，ｃｌｏｓｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＶＣ；ｔｈｅ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ
ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｐａｒｔｓ　ｆｏｒ　ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｗｅｒｅ　ｎｅａｒｌｙ　ｓａｍｅ　ｔｏ　ｅａｃｈ　ｏｔｈｅｒ　ａｎｄ　ｗｅａｋｅｒ　ｔｈａｎ　ＶＣ；ｅｖｅｒｙ
ｐａｒｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　Ｆｅ３＋ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ　ａｃｔｉｖｉｔｙ，ｉｎ　ｗｈｉｃｈ　ｔｈｅ　ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｏｔｈｅｒ　ｐａｒｔｓ　ｗｅｒｅ　ｎｏｔ　ｍｕｃｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｂｅｓｉｄｅ　ｔｈｅ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｐａｒｔ，ｉｅ，ｔｈｅ　ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　１ｍｇ／ｍＬｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｐａｒｔ　ｗａｓ　ｃｌｏｓｅｄ　ｔｏ　ｔｈａｔ　ｏｆ
ＶＣ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍＣｅｎｔａｕｒｅａ　Ｂｅｈｅｎ　Ｌ．ｐｏｓｓｅｓｓｅｄ　ｃｅｒｔａｉｎ　ａｎｔｉ－ｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ，
ａｍｏｎｇ　ｗｈｉｃｈ　ｔｈｅ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｐａｒｔ　ｐｏｓｓｅｓｓｅｄ　ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｒａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｃｏｎ－
ｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｐａｒｔ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ．Ａｆｔｅｒ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，ｌａｕｒｙｌ　ｓｏｄｉｕｍ　ｓｕｌｆａｔｅ（ＳＤＳ）：ｎ－ｂｕｔｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ＝３３：５７，
７５％ｗａｔｅｒ　ｃｏｎｔｅｎｔ（Ｏ／Ｗ　ｔｙｐｅ）ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｔｈｅ　ｓｕｉｔａｂｌｅｒ　ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ　ｓｏｌｖｅｎｔ．ｗｈｉｃｈ　ｗｉｌ　ｂｅ　ｂｅｎｅｆｉｔ
ｆｏｒ　ｄｅｅｐ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ａｃｔｉｖｅ　ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ　ｆｒｏｍＣｅｎｔａｕｒｅａ　Ｂｅｈｅｎ　Ｌ．．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃｅｎｔａｕｒｅａ　Ｂｅｈｅｎ　Ｌ．；ａｎｔｉ－ｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ；ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ；ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ　ｔｈｉｎ－ｌａｙｅｒ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
　　欧矢车菊根是菊科矢车菊属 （Ｃｅｎｔａｕｒｅａ）植物
欧矢车菊（Ｃｅｎｔａｕｒｅａ　ｂｅｈｅｎ　Ｌ．）的干燥根和根茎。
欧矢车菊为多年生草本植物，维吾尔医常用其干燥
根及根茎作为药材。维吾尔语名阿克拜赫曼，《中华
本草》、《拜地依药书》、《药物之园》载：“本品名为‘拜
赫曼’植物的干燥木质根的碎块，该根又分红白２
种，即红者称‘拜赫曼苏肉赫’，白者称‘拜赫曼赛
菲德’”［１－３］。在《维吾尔医常用生药》［４］中记载：
“欧矢车菊根对心脏衰弱有较好的疗效，并粉末里
加盐和蜂蜜后涂在脸上，可以美容。使用其煮的
水洗头发，可以让头发变得更滋润”。欧矢车菊主
要分布于高加索东部和南部、土库曼斯坦山区、亚
美尼亚、库尔德斯坦及西亚各地。据研究报道，矢
车菊属植物有较好的抗氧化活性［５］，现代药理研
究表明，黄酮类成分具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抗
菌等功效［６－１１］。矢车菊属类药材含有多种的黄酮
类化合物［１２－１３］，但目前为止未见对欧矢车菊根药
材中黄酮类成分研究，对其药材抗氧化活性的报
道尚无。本试验采用紫外分光光度法［１４－１９］测定欧
矢车菊根不同萃取部位中总黄酮的含量和抗氧化
活性，为欧矢车菊有效部位的研究与深度开发提
供科学依据。
１　仪器与试药
１．１　仪器　ＵＶ－２５５０型紫外可见分光光度计（日
本Ｓｈｉｍａｄｚｕ公司）；ＡＢ１３５－Ｓ型分析天平（美国
Ｍｅｔｔｌｅｒ　Ｔｏｌｄｏ公司）；ＫＱ－２５０ＤＥ型超声波清洗器
（上海科导）；ＴＤＬ－５Ａ型离心机（上海菲恰尔分析仪
器有限公司）；ＨＨ－Ｓ４型恒温水浴锅（金坛市医疗仪
器厂）；Ｌｉｎｏｍａｔ　５卡玛型半自动点样机（瑞士卡玛
公司）；Ｌｉｎｏｍａｔ　５卡玛型半自动扫描机（瑞士卡玛
公司）；微量进样针（上海安亭微量进样器厂）；聚酰
胺薄层板（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂）。
１．２　试药　欧矢车菊根 （Ｃｅｎｔａｕｒｅａ　Ｂｅｈｅｎ　Ｌ．）由
新疆安萨尔维吾尔药业有限公司提供，原产地为巴
基斯坦。１，１－二苯代苦味酰基（美国Ｓｉｇｍａ公司，批
号：Ｓ４３６５４－３５７），邻苯三酚（天津永晟精细化工有限
公司，批号：２０１２０５１７），Ｔｒｉｓ－ＨＣＩ（美国 Ｓｉｇｍａ公
司），磷酸二氢钠（天津市化学试剂六厂分厂，批号：
２０１２１１０２），磷酸氢二钠（天津市福晨化学试剂厂，批
号：２００６０３１４），铁氰化钾（天津市天达净化材料精细
化工厂，批号：２０１３０９０６），三氯乙酸（天津永晟精细
化工有限公司，批号：２０１４０１０１），三氯化铁（天津市
化学试剂三厂，批号：２０１１１００８），十二烷基硫酸钠
（天津市盛奥化学试剂有限公司，批号：２０１１０２０２）
正丁醇（天津市富宇精细化工有限公司，批号：
２０１３０５１３），正庚烷（天津市富宇精细化工有限公司，
批号：２０１１０４０８），甲醇、９５％乙醇为分析纯，水为蒸
馏水。
２　方法与结果
２．１　欧矢车菊根浸膏以及不同萃取部位的制备　
取欧矢车菊根药材１．５ｋｇ，分别加５、４、４、４倍量的
９５％乙醇加热回流提取４次，每次３、２、２、２ｈ，合并
提取液，浓缩至无乙醇味，浸膏在蒸馏水中溶解，依
次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别
将各溶剂萃取液浓缩，蒸干，备用。
２．２　抗氧化试验
２．２．１　供试液制备　分别精密量取适量水、正丁
醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、石油醚部位浸膏，用甲醇溶
８７２ 新 疆 医 科 大 学 学 报 第３９卷　
解并定容至系列浓度（０．１～０．５ｍｇ／ｍＬ）。
２．２．２　阳性对照溶液的制备　精密称取维生素Ｃ
对照品２５ｍｇ于２５ｍＬ容量瓶中，加蒸馏水溶解并
定容。用水稀释成浓度分别为０．１、０．２、０．３、０．４、
０．５ｍｇ／ｍＬ，备用。
２．２．３　欧矢车菊根不同极性萃取部位对ＤＰＰＨ的
清除作用　精密量取０．０４ｍｍｏｌ／Ｌ的ＤＰＰＨ溶液
４ｍＬ和２ｍＬ样品溶液混合，在３０℃水浴中３０ｍｉｎ
反应后在５１６ｎｍ波长处测吸光度（Ｃ）；４ｍＬＤＰＰＨ
与２ｍＬ试样溶剂混合后的吸光度（Ａ）；２ｍＬ样品
与４ｍＬ甲醇混合液的吸光度（Ｂ）。结果表明欧矢
车菊根不同萃取部位对ＤＰＰＨ 自由基均有清除能
力，并呈明显的量效关系。随着浓度的增加，各萃取
部位清除ＤＰＰＨ的能力也不断增强，其中乙酸乙酯
部位表现了较强的自由基清除能力，并在试验浓度
范围内，与Ｖｃ的清除能力相近，抗氧化活性能力依
次为：Ｖｃ＞乙酸乙酯部位＞正丁醇部位＞氯仿部位
＞水部位＞石油醚部位，见图１。
图１　欧矢车菊根各萃取部位对ＤＰＰＨ自由基的清除能力
２．２．４　欧矢车菊根不同极性萃取部位对ＡＢＴＳ自
由基的清除作用　精密量取７ｍｍｏｌ／Ｌ的ＡＢＴＳ溶
液和２．４５ｍｍｏｌ／Ｌ的过硫酸钾溶液混合放置１６ｈ
产生ＡＢＴＳ自由基，在测定前用７５％乙醇稀释，使
它在７３４ｎｍ处吸光度为（０．７００±０．０２０）。分别取
不同浓度的不同极性萃取部位样品溶液，用７５％乙
醇稀释至１００ｍＬ（相当于原组分０．３１５ｍｇ／ｍＬ），
加ＡＢＴＳ浓液３ｍＬ，混匀，避光静止１０ｍｉｎ，立即
在７３４ｎｍ处测吸光度并计算其清除率。结果显示
欧矢车菊根各部位均对 ＡＢＴＳ自由基具有一定的
清除作用，其ＩＣ５０分别为：Ｖｃ（１．６μｇ／ｍＬ）；水部位
（０．２１ｍｇ／ｍＬ）；正丁醇部位（０．０１ｍｇ／ｍＬ）；乙酸乙
酯部位（０．００４ｍｇ／ｍＬ）；石油醚部位（０．０４ｍｇ／ｍＬ）。
按ＩＣ５０值，清除ＡＢＴＳ自由其的能力强弱依次为：
Ｖｃ＞乙酸乙酯部位＞正丁醇部位＞水部位＞石油
醚部位，见图２。
２．２．５　欧矢车菊根不同极性萃取部位对超氧阴离
子（Ｏ－２·）自由基的清除作用 　取９ｍＬ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ
（０．０５ｍｏＬ／Ｌ，ｐＨ＝８．２９）与１ｍＬ样品溶液混合，
在２５℃水浴恒温１５ｍｉｎ。取混合液３ｍＬ于具塞试
管中，加入４５ｍｍｏＬ／Ｌ的邻苯三酚０．１ｍＬ，摇匀，
在第４分钟加入１０ｍｏＬ／Ｌ盐酸１滴终止反应，在
３２５ｎｍ处测定样品吸光值（Ａ１）。同时分别测定不
加邻苯三酚的样品溶液和Ｔｒｉｓ－ＨＣＩ缓冲液的吸光
值（Ａ２）和以１ｍＬ溶剂代替样品溶液的 Ｔｒｉｓ－ＨＣＩ
缓冲液和邻苯三酚混合液的吸光值（Ａ０），每组重复
３次，测定各提取部位对（Ｏ－２·）自由基的清除作用，
欧矢车菊根各萃取对超氧阴离子自由基的清除能力
比较弱。当浓度达到１ｍｇ／ｍＬ时，清除超氧阴离子
自由基能力强度依次为：Ｖｃ＞乙酸乙酯部位＞石油
醚部位＞水部位＞正丁醇部位＞氯仿部位，见图３。
图２　欧矢车菊根各萃取部位对ＡＢＴＳ自由基的清除能力
图３　欧矢车菊根各萃取部位清除超氧阴离子自由基
（Ｏ－２·）的能力
２．２．６　欧矢车菊根不同萃取部位对铁离子的还原
能力　精密量取不同极性萃取部位样品溶液２．５
ｍＬ于２０ｍＬ具塞试管中，依次加入２．５ｍＬ磷酸
缓冲液（０．２ｍｏＬ／Ｌ，ｐＨ＝６．６），２．５ｍＬ铁氰化钾
（１％，ｗ／ｖ），混匀，于５０℃水浴中２０ｍｉｎ，加入２．５
ｍＬ三氯乙酸（１０％，ｗ／ｖ），混匀，以３　０００ｒ／ｍｉｎ离
心１０ｍｉｎ，取上清液２．５ｍＬ，加入２．５ｍＬ蒸馏水
和０．１％的三氯化铁溶液０．５ｍＬ，混匀，以试剂空
白做参比，在７００ｎｍ处测定吸光值。通过对吸光
度与浓度的曲线作线性回归，计算吸光度为０．５时
的样品溶液的浓度ＩＣ５０，欧矢车菊根药材不同萃取
部位对铁离子均有还原能力，但均弱于Ｖｃ，除中乙
酸乙酯部位的还原能力较强外，剩下部位的还原能
９７２　第３期 夏提古丽·塔西买买提，等：欧矢车菊根不同极性萃取部位体外抗氧化活性及其总黄酮的微乳薄层研究
力无明显差别，见图４。
２．３　欧矢车菊根药材不同极性萃取部位中总黄酮
含量测定
２．３．１　对照溶液的制备　精密称取芦丁对照品
５．０４ｍｇ，置２５ｍＬ容量瓶中，加适量９５％乙醇，超
声溶解并稀释至刻度，作为对照溶液。
图４　欧矢车菊根各萃取部位还原Ｆｅ２＋铁离子的能力
２．３．２　供试品溶液的制备　精密称取水部位、正丁
醇部位、乙酸乙酯部位、氯仿部位、石油醚部位分别
为４．７３、５．１０、４．９０、４．８２、４．７０ｍｇ，置２５ｍＬ容量
瓶中，加适量９５％乙醇，超声溶解并稀释至刻度，作
为供试液。
２．３．３　标准曲线的制备　精密吸取对照溶液０．１、
０．２、０．５、０．８、１．０、１．２、１．５ｍＬ，分别置于７支１０
ｍＬ的容量瓶中，并以９５％乙醇稀释至刻度。在
２６０ｎｍ波长处以１ｍＬ９５％乙醇用蒸馏水稀释至１０
ｍＬ的空白试剂作参比测定吸光度。以吸光度 （Ａ）
为纵坐标，芦丁浓度（Ｃ）为横坐标，进行线性回归，
得回归方程为Ａ ＝０．０２９　１Ｃ－０．０１６　２（ｒ２ ＝０．９９９
０），芦丁浓度在２．０２～３０．３０ｍｇ／ｍＬ与吸光度线性
关系良好。
２．３．４　样品中总黄酮含量测定　精密吸取“２．３．２”
项下各溶液１．０ｍＬ于１０ｍＬ容量瓶中，加蒸馏水
稀释至刻度，摇匀，于２６０ｎｍ波长处测定吸光度，
计算总黄酮含量，见表１。
２．４　欧矢车菊根黄酮类成分微乳薄层研究
２．４．１　样品处理方法　取粉碎的欧矢车菊根药材
约４ｇ，加１０ｍＬ甲醇，置于具塞三角瓶，超声提取
３０ｍｉｎ，过滤，滤液备用。
２．４．２　微乳液展开剂的配制　在保证十二烷基硫
酸钠（ＳＤＳ）－正丁醇－正庚烷－水为质量比的条件下，
改变含水量，配制系列微乳液。分别按上述质量比
称取ＳＤＳ、正丁醇、正庚烷，水搅拌溶解，混匀，放置
２４ｈ。将微乳液与有机溶剂按一定的比例混合，振
摇２～３ｍｉｎ至溶液澄清透明备用，各种微乳液的成
分配比及结构见均匀设计。
表１　欧矢车菊根药材各部位总黄酮含量（％，ｎ＝３）
各部位 总黄酮含量 ＲＳＤ
水部位 ５．５８　 ０．４２
正丁醇部位 ９．３９　 ３．６８
乙酸乙酯部位 ３０．６２　 １．０８
氯仿部位 ２０．３２　 ０．２４
石油醚部位 ９．９６　 ０．６３
２．４．３　点样及展开条件　用微量进样针吸取供试
品溶液，用点样机在聚酰胺薄膜上点样，条带宽度为
５ｍｍ，点样量３μＬ，聚酰胺薄层板放入有１５ｍＬ展
开剂的展开缸里，展开方向为单向上行法，展开前饱
和１０ｍｉｎ，自展开剂上至斑点处时开始计时，待展开
达８ｃｍ左右展开结束，环境温度２５℃。
２．４．４　显色剂　于室温下展开，取出晾干，均匀喷洒
１％乙醇胺二苯硼酸酯甲醇溶液，然后均匀喷洒５％聚
乙二醇乙醇溶液，晾干，置３６６ｎｍ紫外灯下检视。
２．４．５　目标函数的建立　根据本实验的所要到达
的分离效果，建立薄层分离目标函数，其中 Ａｉ，Ｂ，Ｃ
分别为各项的权重系数；Ｎ为每次实验分离出的斑
点数，ｋ＝Ｎ－１为相邻斑点对数，Ｎ１为第一次实验
分离出的斑点数；Ｒｓｉ，ｉ＋１为分离度，Ｒｓｉ，ｉ＋１＝
１．１７７（Ｌｉ＋１－Ｌｉ）／（Ｗ１／２ｉ＋１＋Ｗ１／２ｉ），Ｌｉ和Ｌｉ
＋１为第ｉ个和第ｉ＋１个斑点移动距离；Ｗ１／２为半
峰宽；Ｒｓｉ，ｉ＋１ｄ＝１．１７７，为理想分离度；０．２≤Ｒｆ≤
０．８时，Ｄｊ（Ｒｆ）＝０；Ｒｆ＞０．８时，Ｄｊ（Ｒｆ）＝（０．８－
Ｒｆ）／０．８；Ｒｆ＜０．２时，Ｄｊ（Ｒｆ）＝（Ｒｆ－０．２）／０．２；Ｄｊ
（Ｒｆ）为自定义函数。它的物理意义是：相邻斑点的
分离度越大，则ＣＯＦ值越小；距最佳范围最近或落
在最佳范围内的斑点越多，则ＣＯＦ值越小；斑点总
数越多，则ＣＯＦ值越小。此改良式考虑了色谱峰的
分离度、Ｒｆ值范围以及斑点数３方面因素，能全面
评价所得色谱图的质量，并且具有较好的灵活性，因
而以ＣＯＦ作为寻优的目标函数是非常合适的。
　　　　ＣＯＦ＝（－１） Ａｉ∑
ｋ
ｉ＝１
１ｎ（Ｒｓｉ，ｉ＋１／Ｒｓｉ，ｉ＋１［ ］）＋Ｂ∑ｎｊ＝１Ｄｊ（Ｒｆ）＋Ｃ［（Ｎ－Ｎ１）／Ｎ１｛ ｝］
２．４．６　单因素考察
２．４．６．１　十二烷基硫酸钠与正丁醇比例对展开的
影响　考察ＳＤＳ－正丁醇－正庚烷比例：２０：７０：１０、
２５：７５：１０、３０：６０：１０、３５：６５：１０、４０：５０：１０、４５：５５：
１０。结果 ＳＤＳ－正丁醇的比例在 ３０：６０～４０：５０
之间。
０８２ 新 疆 医 科 大 学 学 报 第３９卷　
２．４．６．２　甲酸加入与否对展开效果的影响　加入甲
酸后，展开时间缩短。斑点分离度改善，Ｒｆ范围增
加，斑点面积增大，亮度降低。甲酸的加入弱化了
ＳＤＳ－正丁醇比例对于展开效果的影响，斑点数下降。
２．４．６．３　含水量对展开效果的影响　考察含水量：
５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％，随着含水
量的增加，斑点的扩散程度增加，比移值范围加宽。
结果含水量在６０％～７５％较为合适。
２．４．６．４　正庚烷比例对展开效果的影响　考察正
庚烷比例：７．５％、１０％、１２．５％、１５％对于展开效果
的影响，结果显示正庚烷比例在７．５％～１５％对展
开效果没有明显影响，故采用最常用的１０％。
２．４．６．５　改性剂类型对展开效果的影响　考察甲
酸、乙酸、乙醇、冰醋酸、丙酮对于展开效果的影响，
结果甲酸和乙酸效果相当，乙醇和丙酮效果不好，最
终不加改性剂。
通过单因素考察，确定微乳薄层的展开剂为十
二烷基硫酸钠－正丁醇的比例在３０∶６０～４０∶５０之
间，含水量６０％～７５％，不加改性剂。
２．４．７　均匀设计１　以十二烷基硫酸钠（ＳＤＳ）、正
丁醇、正庚烷，水微乳液等作为展开剂，考察了微乳
配比因素对分离效果的影响，不同展开剂配比及薄
层展开效果见表２、图６。经过统计软件ＤＰＳ７．５０
进行二次多项式回归计算，计算结果Ｐ＝０．００８　６，
最佳组合Ｘ１ ＝０．４４８　５，Ｘ２ ＝０．７５。
表２　均匀设计１以及在不同配比下的展开剂ＣＯＦ值
微乳序号
Ｘ１：十二烷基硫酸钠：
正丁醇（质量比）
Ｘ２：水／％ ＳＤＳ／ｇ 正丁醇／ｍＬ 正庚烷／ｍＬ 水／ｍＬ　 ＣＯＦ
１　 ２５：６５　 ６５　 ６．２５　 ２０．００　 ３．６５　 ４６．４０ －２０．２４
２　 ２８：６２　 ５５　 ７．００　 １９．１０　 ３．６５　 ３０．６０ －１２３．８２
３　 ３１：５９　 ７５　 ７．７５　 １８．２０　 ３．６５　 ７５．００　 ６０．９６
４　 ３４：５６　 ５０　 ８．５０　 １７．３０　 ３．６５　 ２５．００ －２２９．１７
５　 ３７：５３　 ７０　 ９．２５　 １６．４０　 ３．６５　 ５８．３０ －６２．１０
６　 ４０：５０　 ６０　 １０．００　 １５．４０　 ３．６５　 ３７．５０ －２４８．８５
均匀设计１－１ 　 均匀设计１－２ 　 均匀设计１－３ 　 均匀设计１－４ 　 均匀设计１－５ 　 均匀设计１－６
图６　均匀设计１在３６６ｎｍ处的展开薄层图
２．４．８　均匀设计２　由于均匀设计１中，含水量
７５％时，十二烷基硫酸钠∶正丁醇的比例对展开剂
影响较大，缩小范围在进行一次均匀设计和计算。
均匀设计２详细结果见表３，样品在不同展开剂中
展开的结果在３６６ｎｍ处观察到的现象，见图７。经
过统计软件ＤＰＳ７．５０进行二次多项式回归计算，计
算结果Ｐ＝０．０４１　１，最佳组合：Ｘ１＝０．５７８　４，Ｘ２＝
０．７４５　９。由图７可见，欧矢车菊根药材中的黄酮类
成分能被微乳薄层完全分离，最佳展开条件为：十二
烷基硫酸钠∶正丁醇∶正庚烷＝３３∶５７∶１０（质量
比），含水量７５％的微乳液展开剂。
表３　均匀设计２以及在不同配比下的展开剂ＣＯＦ值
微乳号 Ｘ１：十二烷基硫酸钠∶正丁醇（质量比） Ｘ２：水／％ ＣＯＦ
１　 ２５：６５　 ７６ －１０６．６３
２　 ２７：６３　 ７２ －８４．６３
３　 ２９：６１　 ８０ －２６８．５４
４　 ３１：５９　 ７０ －１３０．００
５　 ３３：５７　 ７８ －１１．９２
６　 ３５：５５　 ７４　 ９０．２８
１８２　第３期 夏提古丽·塔西买买提，等：欧矢车菊根不同极性萃取部位体外抗氧化活性及其总黄酮的微乳薄层研究
均匀设计２－１ 　 均匀设计２－２ 　 均匀设计２－３ 　 均匀设计２－４ 　 均匀设计２－５ 　 均匀设计２－６
图７　均匀设计２在３６６ｎｍ处的薄层展开图
３　讨论
本研究采用 ＤＰＰＨ 法、ＡＢＴＳ自由基清除法、
超氧阴离子法和还原能力法对欧矢车菊根不同极性
萃取部位的抗氧化活性进行综合性评价。结果在４
个不同抗氧化活性评价模型中，欧矢车菊根不同极
性萃取部位都呈现出不同程度的活性，其中对ＤＰ－
ＰＨ的清除作用最强。在欧矢车菊根不同极性萃取
部位中，乙酸乙酯萃取部位呈现出较强的抗氧化活
性，其余部位的活性差异不大。乙酸乙酯萃取物在
较高浓度时，对ＤＰＰＨ 自由基和 ＡＢＴＳ自由基的
清除能力以及对铁离子还原能力较强，可接近于对
照品Ｖｃ对ＤＰＰＨ的清除能力和还原能力。因此，
欧矢车菊根的抗氧化有效部位大多集中在乙酸乙酯
萃取部位中，通过测定各萃取部位总黄酮含量，抗氧
化有效成分大多是易溶于乙酸乙酯的中等级性黄酮
类化合物。对黄酮类化合物进行微乳薄层研究，与
常用薄层方法比较，微乳薄层操作简便，分离效率
高，荧光强度增大，色谱斑点集中，检出灵敏度高的
特点，为分离欧矢车菊根抗氧化有效成分研究奠定
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［２０１５－１２－６］
（本文编辑　施洋）
２８２ 新 疆 医 科 大 学 学 报 第３９卷