全 文 ：［收稿日期］ 20140915(018)
［基金项目］ 国家科技支撑计划项目(2012BAI27B07) ;西南民族大学研究生学位点建设项目(2015XWD-S0703)
［第一作者］ 赵小燕，在读硕士，从事少数民族药物研究，Tel:13684060253，E-mail:718389925@ qq． com
［通讯作者］ * 刘圆，博士，教授，从事少数民族药物的研究和教学，Tel:028-85528812，E-mail:499769896@ qq． com
坚杆火绒草中总酚酸的提取及含量测定
赵小燕1，李波1，杨正明1，滕云1，刘圆2*
(1. 西南民族大学 化学与环境保护工程学院，成都 610041;
2. 西南民族大学 民族医药研究院，成都 610041)
［摘要］ 目的:考察不同采收期坚杆火绒草不同部位中总酚酸含量的差异，验证“坚杆火绒草的采收时间为花期，使用部
位为叶子和花”的合理性。方法:以绿原酸为对照品，以福林酚为显色剂，检测波长 765 nm，采用紫外-可见分光光度法测定总
酚酸含量。结果:绿原酸吸光度与质量浓度在 0 ～ 20 mg·L －1线性良好(Ｒ2 = 0. 999 7) ，平均加样回收率 95. 8% (ＲSD 1. 0%)。
坚杆火绒草花期的叶中总酚酸提取量高达 190. 606 mg·g －1;花期总酚酸含量明显高于果期，同一植株叶子和花中总酚酸含量
明显高于其他部位。结论:总酚酸可作为坚杆火绒草最佳采收期及药用部位的评价指标，为该药材的质量控制提供参考。
［关键词］ 坚杆火绒草;总酚酸;Folin-酚显色法;绿原酸
［中图分类号］ Ｒ283. 6;Ｒ284. 1;Ｒ284. 2;Ｒ282. 4 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2015)09-0019-03
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2015090019
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /11． 3495． Ｒ． 20150317． 1045． 006． html
［网络出版时间］ 2015-03-17 10:45
Extraction and Determination of Total Phenolic Acids in Leontopodium franchetii at Different Harvest Time
ZHAO Xiao-yan1，LI Bo1，YANG Zheng-ming1，TENG Yun1，LIU Yuan2* (1. School of Chemistry and
Environmental Protection Engineering，Southwest University for Nationalities，Chengdu 610041，China;2. Ethnic
Medicine Institute，Southwest University for Nationalities，Chengdu 610041，China)
［Abstract］ Objective:To verify that acquisition time of Leontopodium franchetii was florescence and
application parts were leaf and flower by investigating content differences of total phenolic acids in L． franchetii at
different harvesting time． Method:UV-Vis spectrophotometry was adopted to determine the content of total
phenolic acids with chlorogenic acid as standard，Folin-phenol as chromogenic agent and detection wavelength at
765 nm． Ｒesult:Linearity range of chlorogenic acid was 0-20 mg·L －1 (Ｒ2 = 0. 999 7) ，average recovery was
95. 8% with ＲSD of 1. 0% ． The content of total phenolic acids from leaves of L． franchetii was up to 190. 606 mg·
g －1 in florescence． It showed that the content of total phenolic acids at florescence was significantly higher than
other periods in L． franchetii，it in leaves and flowers were significantly higher than other plant parts． Conclusion:
Total phenolic acids can be used as an evaluation index to confirm optimum acquisition time and effective parts of
L． franchetii． It provides scientific basis for rational utilization and quality control of L． franchetii．
［Key words］ Leontopodium franchetii;Folin-phenol chromogenic assay;chlorogenic acid
坚杆火绒草别名莪药、山毛香，藏药名扎托巴、
扎果［1-2］。《藏药晶镜本草》记载:“扎托巴生长于
3 000 ～ 5 000 米的高山草甸，具有治疗吉祥天母瘟，
止血，解矿石合毒，肉瘤等功效，多用于灸疗”［3］。
藏族药草灸疗法以其疗效显著、成本低廉、操作简便
等优势而被沿用至今。坚杆火绒草作为藏医临床施
灸的原材料，每年 7 ～ 8 月份花开旺盛，此时灸草的
叶和花朵生长茂盛，无籽且叶不宜断残，是采集灸草
的最佳时节［4］。国内外关于火绒草属植物的化学
成分研究报道较多［5］，主要成分为有机酸［6-7］、黄酮
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类［8-9］、挥发油［10］、倍半萜类［11］、甾体类［12］等，但尚
无坚杆火绒草化学成分研究的报道。前期通过化学
成分预试验已确定坚杆火绒草中总酚酸含量较高，
酚酸类化合物是许多中草药的有效成分，具有清除
自由基、抗菌、抗炎、抗氧化和调节心血管疾病的作
用［13-15］。本实验拟采用紫外分光光度法测定不同
采收期坚杆火绒草的不同植物部位中总酚酸含量，
通过单因素试验优选该药材中总酚酸的提取条件，
以验证采收时间和使用部位的合理性。
1 材料
AE240S 型电子分析天平［梅特勒-托利多仪器
(上海)有限公司］，TU-1950 型紫外-可见分光光度
计(北京普析通用仪器有限责任公司)。坚杆火绒
草于 2013 年 7 月 2 日和 9 月 24 日采自西南民族大
学青藏高原研究基地红原草地，经西南民族大学民
族医药研究院刘圆教授鉴定为坚杆火绒草
Leontopodium franchetii的全草，用水洗净晒干，于 60
℃烘干，粉碎，过 4 号筛，得坚杆火绒草粗粉。福林
酚试剂(美国 Biosharp 公司) ，绿原酸对照品(中国
食品药品检定研究院，批号 110753-200413) ，水为
自制超纯水，试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品
5. 0 mg，置 50 mL棕色量瓶中，加无水乙醇适量使溶
解，放冷，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。
2. 2 供试品溶液制备方法考察
2. 2. 1 提取溶剂 精密称取坚杆火绒草粗粉 1 g，
共 8 份，分别以水及 10%，20%，30%，40%，50%，
70%，95%的乙醇溶液为溶剂，料液比 1∶ 75，水浴加
热回流提取 3 次，每次 1 h，滤过，分别合并滤液，加
相应溶剂定容于 250 mL，计算总酚酸提取得率依次
为 60. 959，62. 114，62. 791，63. 624，62. 647，60. 426，
54. 831，46. 217 mg·g －1，故选择 30%乙醇。
2. 2. 2 料液比 精密称取坚杆火绒草粗粉 1 g，共
5 份，分别按料液比 1∶ 25，1∶ 50，1∶ 75，1∶ 100，1∶ 125
加 30%乙醇回流提取 1 h，重复提取 3 次，滤过，分
别合并滤液，加 30%乙醇定容至 250 mL，结果总酚
酸提取得率依次为 33. 273，52. 469，63. 624，63. 878，
63. 232 mg·g －1，故确定料液比 1∶ 75。
2. 2. 3 提取方式 精密称取坚杆火绒草粗粉 1 g，
共 5 份，以 30%乙醇为提取溶剂，料液比 1∶ 75，分别
采用不同方式提取 3 次(45 ℃热浸提取 1 h，35 ℃
超声提取 1 h，60 ℃超声提取 1 h，水浴加热回流提
取 1 h，35 ℃超声辅助提取 0. 5 h后再水浴加热回流
提取 1 h) ，滤过，分别合并滤液，加 30%乙醇定容于
250 mL 量瓶中，结果总酚酸提取得率依次为
35. 783，55. 627，53. 339，63. 624，58. 265 mg·g －1，故
确定总酚酸提取方式为水浴加热回流法。
2. 2. 4 提取次数 精密称取坚杆火绒草粗粉 1 g，
共 5 份，以 30%乙醇为提取溶剂，料液比 1∶ 75，水浴
加热回流提取 1 h，分别重复提取 1，2，3，4，5 次，滤
过，分别合并滤液，加 30%乙醇定容至 250 mL，计算
总酚酸提取得率依次为 25. 921，55. 566，63. 624，
64. 368，64. 826 mg·g －1，故确定提取数 3 次。
2. 3 检测波长的选择［16］ 准确吸取绿原酸对照品
溶液和供试品溶液适量，分别置于 10 mL比色管中，
加水至 5 mL，加入福林酚试剂 0. 5 mL，摇匀，放置 1
min;加入 20%碳酸钠溶液 1. 5 mL，加水稀释至刻
度，充分摇匀后于 75 ℃水浴中放置 10 min，速冷至
室温，以提取溶剂为空白参比，在 300 ～ 900 nm 扫
描，记录紫外吸收光谱，结果 2 种溶液显色后均在
765 nm处有最大吸收峰，故确定检测波长 765 nm。
2. 4 标准曲线的绘制 精密吸取 2. 1 项下对照品
溶液 0，0. 2，0. 4，0. 8，1. 2，1. 6，2. 0 mL，分别置于 10
mL比色管中，按 2. 3 项下方法进行显色，由于绿原
酸长时间高温光照易分解，故全程操作均应尽量低
温避光完成［17］。于 765 nm处测定吸光度(A) ，以 A
为纵坐标，质量浓度(C)为横坐标，得回归方程 A =
0. 057 5C + 0. 044 3(Ｒ2 = 0. 999 7) ，线性范围 0 ～ 20
mg·L －1。
2. 5 方法学考察
2. 5. 1 精密度试验 精密量取 2. 1 项下对照品溶
液 1 mL，共 6 份，按 2. 4 项下方法于 765 nm处测定
A，计算 ＲSD 0. 9%，表明仪器精密度良好。
2. 5. 2 稳定性试验 取同批坚杆火绒草粗粉，按
2. 2 项下方法制备供试品溶液，按 2. 4 项下方法处
理，分别于显色后 15，30，60，90，120 min 于 765 nm
处测定 A，计算 ＲSD 1. 2%，表明供试品溶液在
120 min内稳定性良好。
2. 5. 3 重复性试验 称取坚杆火绒草粗粉 6 份，按
2. 2 项下方法制备供试品溶液，按 2. 4 项下方法测
定 A，计算 ＲSD 1. 1%，表明本方法重复性较好。
2. 5. 4 回收率试验 精密称取已知含量的坚杆火
绒草粗粉约 10 mg，共 6 份，各加入绿原酸对照品
0. 5 mg，按 2. 2 项下方法制备供试品溶液，以福林酚
试剂显色后测定 A，计算平均加样回收率 95. 8%，
ＲSD 1. 0%，表明该方法准确可靠。
2. 6 不同采收期坚杆火绒草不同部位中总酚酸的
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含量测定 精密称取不同采收期坚杆火绒草不同部
位的粗粉各 1. 0 g(n = 3) ，按 2. 2 项下方法制备供
试品溶液，按 2. 4 项下方法测定 A，计算总酚酸含
量，见图 1。结果表明坚杆火绒草总酚酸含量随采
收期的不同而变化，花期总酚酸含量明显高于果期;
对同一植株不同部位总酚酸的含量进行统计学分
析，发现花期采样的 4 个部位及果期采样的 4 个部
位的 P均 ＜ 0. 05，说明同一植株不同部位总酚酸的
含量有显著性差异。花期采收的坚杆火绒草叶子总
酚酸含量最高，平均高达 190. 606 mg·g －1。
图 1 坚杆火绒草中总酚酸的含量(n = 3)
Fig． 1 Determination of total phenolic acids in Leontopodium
franchetii(n = 3)
3 讨论
福林酚显色法常用于测定蛋白，以增加测定的
灵敏度［18］。该方法的原理为福林酚试剂在碱性条
件下极不稳定，其磷钼酸盐-磷钨酸盐易被酚酸类化
合物还原而呈蓝色反应(钼蓝和钨蓝的混合物) ，在
可见光区能获得稳定的特征吸收峰，且在一定浓度
范围内蓝色的深浅度与酚酸类化合物浓度呈线性关
系，可用来定量测定总酚酸含量。研究表明福林酚
显色法具有灵敏高、误差小、稳定等优点［19］，故本文
选择福林酚显色法测定坚杆火绒草中总酚酸含量。
本文比较了不同采收期坚杆火绒草不同部位中总酚
酸含量，确定总酚酸可作为该药材最佳采收期及药
用部位的评价指标，为坚杆火绒草中酚酸类物质的
开发利用及质量控制提供参考，验证了藏医临床
“在秋季花开旺盛时择吉日采集全草”的合理性，确
定其最佳药用部位为叶和花。
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［责任编辑 刘德文］
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