全 文 ：— 69 —现代中药研究与实践2012年第26卷第4期Chin Med J Res Prac,2012 July.,Vol.26 No.4
采用的检测波长，综合分析，选择 280nm 波长作为
本指纹谱的测定波长。
3.4　复方丹参片含有三七药材，但是由于三七主要
为皂苷类成分，与丹参的测定条件很不相同，在一个
条件下比较难同时体现。在《中国药典》复方丹参片
质量标准中，对三七进行了薄层鉴别，以控制复方丹
参片中三七的成分。HPLC 法同时测定复方丹参片中
丹参和三七的指纹图谱有待进一步研究。
3.5　本研究中复方丹参片使用的丹参药材，主要是
河南方城 GAP 基地的药材，在实验中发现，GAP 基
地的药材所生产的制剂，其相似度均在 95％以上，
说明来自同一 GAP 基地的丹参药材所生产的复方丹
参片化学组成差异较小，质量较稳定。
3.6　有关研究表明 [6,7], 不同厂家不同批次的复方丹
参片中各成分含量虽都符合药典标准 , 但差异较大 ,
增加指纹图谱检测项更有意义。以HPLC 梯度洗脱法
对复方丹参片进行指纹图谱研究 [8], 实验证明 , 该方
法可操作性强、重复性好 , 可作为复方丹参片指纹图
谱研究。
　
参考文献
[1]　国家药典委员会 . 中国药典（一部）[S]. 北京 : 北京化学工业出版社 ,
2005:527.
[2]　勾晓洲 , 付春梅 , 刘三康 , 等 . 指纹图谱评价复方丹参片的稳定性 [J]. 华
西药学杂志 ,2009, 24(4) ：377.
[3]　张聪 , 韩晓锦 . 丹参药材 -中间体 -丹参片的HPLC 指纹图谱及其相关
性研究 [J]. 中成药 ,2010,32（10）:1656.
[4]　孙守国 . 复方丹参片的HPLC 指纹图谱研究 [J]. 中成药 ,2009,31(3):339.
[5]　严玉平 , 同利琪 , 郭 聪 , 等 . 复方丹参片指纹图谱及含量测定研究 [J].
中成药 ,2009,31(8):1149.
[6]　 曹虹 , 曹澜 . 4 种市售复方丹参片的质量比较 [J]. 长春中医学院学
报 ,2005,21(4):36.
[7]　吕凤莲 , 宋韶锦 , 宋吉莲 , 等 . 不同厂家复方丹参片的质量考察 [J]. 时珍
国医国药 ,2007,18(9): 2230.
[8]　杨雪梅 .浅谈几种中药指纹图谱技术在中药鉴定中的应用 [J]. 中国药事 ,
2007, 21(2): 11.
紫外 -可见分光光度法测定火绒草提取物中总酚酸含量
王恩 1, 汪保林 1, 董慧君 1, 汪豪 1*, 叶文才 1,2
（1. 中国药科大学天然药物化学教研室 , 江苏 南京 210009; 2. 暨南大学中药及天然药物研究所 ,
广东 广州 510632）
摘要：目的　建立紫外 -可见分光光度法测定火绒草提取物中总酚酸含量的方法。方法　以火绒草提
取物主要成分 3, 4- 二咖啡酰基奎宁酸为对照品，铁氰化钾 -三氯化铁显色，于 750 nm 处测定吸光度，计
算总酚酸含量。结果　线性范围为 1.59~9.56 μg·mL-1(r2 = 0.998 6, n=6) ；平均回收率 100.6 %, RSD = 2.57
% (n=5)。结论　本测定方法简便、准确，专属性较强，适用于火绒草提取物中总酚酸的含量测定。
关键词 :　紫外 -可见分光光度法 ; 火绒草提取物 ; 3,　4- 二咖啡酰基奎宁酸 ; 总酚酸
中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(2012)04-0069-03
Determination of Total Contents of Phenolic Compounds in Leontopodium
leontopodioides Extracts by UV-Vis Spectrophotometry
WANG En1, WANG Bao-lin1, DONG Hui-jun1, WANG Hao1, YE Wen-cai1.2
（1. Department of Natural Medicinal Chemistry, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009，
China; 2. Institute of Traditional Chinese Medicine and Natural Products， Jinan University， Guangzhou
510632，China）
Abstract: Objective To establish a method for the determination of total phenolic compounds in
Leontopodium leontopodioides extracts by UV-Vis Spectrophotometry. Methods Use the major constituent 3,
4-dicaffeoylquinic acid as reference substance, make color by adding potassium ferricyanide and chloride ferric,
determine the absorption value at the wavelength of 750 nm to calculate the contents of total phenolic compounds
in L. leontopodioides extracts. Results The linear range was 1.59~9.56 μg•mL-1 (r2 = 0.998 6, n=6), the average
DOI:10.13728/j.1673-6427.2012.04.021
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recovery was 100.6 %, RSD = 2.57 % (n=5).Conclusion The analysis method was proved to be simple, accurate,
and stable for determination of total phenolic compounds in L. leontopodioides extracts.
Key words: UV-Vis Spectrophotometry; L. leontopodioides extracts; 3, 4-dicaffeoylquinic acid; total
phenolic compounds
火 绒 草 为 菊 科 植 物 火 绒 草 Leontopodium
leontopodioides (Willd.) Beauv. 的干燥地上部分，又名
老头草、老头艾、薄雪草等，主要分布于东北、华
北、新疆等地。本品味微苦，性寒，具有疏风解表、
清热解毒、凉血止血、消炎利尿等功效，主治流行
性感冒、急慢性肾炎，尿路感染、尿血，创伤出血
等症 [1]。药效学研究表明，火绒草提取物可降低正常
小鼠的血糖，对四氧嘧啶引起的小鼠糖尿病有预防
及治疗作用，并可对抗肾上腺素或葡萄糖引起的血
糖升高 [2]。前期研究表明本植物主要药效活性成分为
咖啡酰基奎宁酸衍生物，即 3, 4- 二咖啡酰基奎宁酸
等 [3]。火绒草提取物是从火绒草提取分离得到的总酚
酸类有效部位。目前，国内药品标准未收载火绒草及
含火绒草制剂的含量测定方法。本文采用紫外 -可
见分光光度法，以铁氰化钾 -三氯化铁溶液为显色
剂，本植物分离得到的 3, 4- 二咖啡酰基奎宁酸为对
照品，测定火绒草提取物中总酚酸的含量，为其成方
制剂的质量标准化研究提供科学依据。
1　仪器与试药
UV-2450 型紫外可见分光光度计（日本　岛津）；
Shimadu　AUW120D 十万分之一电子天平（日本　
岛津）；PB-10 精密 pH 计 ( 北京　Sartorius)。火绒草
提取物系药材火绒草经大孔吸附树脂工艺分离纯化
得到；3,　4- 二咖啡酰基奎宁酸为中国药科大学天
然药物化学教研室自制，对照品纯度 >98%　(HPLC-
UV 法，面积归一化法 ) [3]。其他所用试药及溶剂均为
分析纯。
2　方法与结果
2.1　溶液的制备
对照品溶液的制备：精密称取 3, 4- 二咖啡酰基
奎宁酸 4.98 mg，置 25 mL 棕色量瓶中，加无水乙醇
溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：取火绒草提取物约 10 mg，
精密称定，置 25 mL 棕色量瓶中，加无水乙醇溶解
并稀释至刻度，摇匀，即得。
缓冲溶液及显色剂的配制 [4, 5] ：精密称取十二烷
基硫酸钠 0.30 g，加水溶解并定容至 100 mL，配制
成 0.3% 十二烷基硫酸钠溶液；称取 FeCl3·H2O 0.60
g，加水溶解并定容至 100 mL，配制成 0.6 % FeCl3 溶
液；取铁氰化钾 (K3Fe(CN)6) 0.90 g，加水溶解并定容
至 100 mL，配制成 0.9 % K3Fe(CN)6 溶液。
2.2　测定波长的选择
精密量取 3, 4- 二咖啡酰基奎宁酸对照品溶
液 1 mL，置 25 mL 棕色量瓶中，加无水乙醇 5
mL，依次加入 0.3% 十二烷基硫酸钠 2.0 mL、0.9%
K3Fe(CN)6-0.6% FeCl3 (1:1) 混合溶液 1 mL，混匀，避
光放置 5 min，再加 0.1mol·L-1 盐酸溶液稀释至刻度，
摇匀，避光放置 20min。同法制得供试品溶液和空白
溶液，按紫外 -可见分光光度法（《中国药典》2010
年版一部附录 VA）试验，在 300~900 nm 范围内进
行扫描，记录紫外吸收光谱，见图 1。
结果表明，对照品溶液和供试品溶液显色后均在
750 nm 处有最大吸收，且显色前 750 nm 处基本无吸
收，故选择 750 nm 为测定波长。
图 1 对照品 (A) 和供试品 (B) 显色前后的紫外 -可见吸收光谱
Fig.1 UV-vis Spectrum of Substance (A) and Sample (B) before and after colored
2.3　显色条件的考察
2.3.1　十二烷基硫酸钠用量的确定　精密量取供试
品溶液 1 mL 4 份，分别置 25 mL 棕色量瓶中，各加
入无水乙醇 5 mL，依次加入 0.3% 十二烷基硫酸钠溶
液 1.0、2.0、3.0、4.0 mL，按“2.2”项下同法操作，
在 300~900 nm 范围内进行扫描。结果表明：加入 0.3
% 十二烷基硫酸钠溶液 2.0~4.0 mL 样品吸收度较大
收稿日期：2012-1-23
*通讯作者：汪　豪，副教授，Tel: (025)86185376,
E-mail:btwang hao@yahoo.com.cn
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且数据较为稳定，故确定 0.3　%十二烷基硫酸钠溶
液的加入量为 2.0　mL。
2.3.2　显色剂用量的确定　精密量取供试品溶液 1
mL 4 份，分别置 25 mL 棕色量瓶中，各加入无水乙
醇 5 mL，加 0.3% 十二烷基硫酸钠溶液 2.0 mL，再
分别加入 0.9% K3Fe(CN)6-0.6% FeCl3 (1:1) 混合溶液
0.5、1.0、1.5、2.0 mL，按“2. 2”项下同法操作，
在 300~900 nm 范围内进行扫描。结果表明，加入 1.0
mL 0.9% K3Fe(CN)6-0.6% FeCl3 (1:1) 混合溶液的供试
品溶液在 750 nm 处吸收度较大且数据稳定性较好。
故选择显色试剂的用量为 0.9% K3Fe(CN)6-0.6% FeCl3
(1:1) 混合溶液 1 mL。
2.3.3　避光放置时间考察　精密量取供试品溶液 1
mL 5 份，分别置 25 mL 棕色量瓶中，按“2.2”项下
同法操作，定容后避光放置 5, 10, 20, 30, 60 min，在
300~900 nm 范围内进行扫描。结果表明，供试品避
光放置 20 min 在 750 nm 处有最大吸收且数据稳定性
较好，放置 30 min 吸光度有下降的趋势，故选择避
光放置时间为 20 min。
2.4　线性关系考察
精密量取 3, 4- 二咖啡酰基奎宁酸对照品溶液
0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，同“2.2”项操作，
在 750 nm 处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，对照
品浓度为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y =
0.075 9X +0.039 6，r2 =0.998 6。结果显示，对照品在
1.59~9.56 μg·mL-1 范围内线性关系良好。
2.5　精密度试验
取对照品溶液 1.0 mL，按“2.2”项下方法操作，
在 750 nm 处测定吸光度 6次，RSD = 0.32 % (n=6)，
表明本法精密度较好。
2.6　稳定性试验
精密吸取供试品溶液 1.0 mL，按“2.2”项下方
法操作，分别放置 0, 5、10、30、60 min 后，在 750
nm 处测定吸光度，RSD = 1.22 %。结果表明本法显
色的稳定性较好，建议避光反应后 30 min 内测试。
2.7　重现性试验　　
取本品同一火绒草提取物 6 份，按“2.1”项下
方法制备供试品溶液，再按“2.2”项下方法操作并
计算含量，含量均值为 53.4%，RSD = 1.72 % (n=6)。
结果表明本法重现性较好。
2.8　加样回收率　
精密称取已知含量的火绒草提取物 5份（总酚酸
含量：53.4%），各精密加入对照品适量，制备供试
品溶液并按“2.2”项下方法操作，计算加样回收率，
回收率均值为 100.6%，RSD = 2.57%，表明本法准确
度较好。结果见表 1。
表 1　加样回收率试验 (n=5)
Tab.1 Results of recovery test (n=5)
编号 样品中量(μg)
加入量
(μg)
测得量
(μg)
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
1 79.2 85.3 164.1 99.5
100.6 2.57
2 83.2 85.3 170.6 102.5
3 89.1 85.3 175.2 100.9
4 77.2 85.3 160 96.8
5 85.1 85.3 173.2 103.3
2.9　样品测定　　
取本品火绒草提取物样品 4 批，按“2.2”项下
方法操作并计算含量，每批测试 3次，结果见表 2。
表 2　火绒草提取物总酚酸含量测定结果　(n=3)
Tab.2 Results of total phenolic compounds content in the extract
批号 1 2 3 4
含量 (%) 59.9 62.4 63.7 59.2
RSD　(%) 1.33 0.92 1.19 1.66
3　讨论
总酚酸类化合物酚羟基具有还原性，可与铁氰化
钾 -三氯化铁溶液生成普鲁士蓝沉淀，该沉淀在强
酸溶液中溶解，可采用紫外 -可见分光光度法测定
溶液吸光度进行定量分析 [6]。火绒草提取物主要活性
成分为咖啡酰基奎宁酸类化合物，该类化合物经铁氰
化钾 -三氯化铁溶液显色后，在 750　nm 处有最大
吸收，且显色前基本无背景吸收，可避免非酚酸类化
合物成分的干扰。文献报道，对照品选择对测定结
果有很大影响 [7]，本法采用火绒草提取物中主要成分
3,　4- 二咖啡酰基奎宁酸作为对照品，专属性较好。
本测定方法，简便、准确，重现性好，适用于火绒草
提取物及含火绒草制剂的总酚酸含量测定。
参考文献
[1]　《中华本草》编委会 . 中华本草 . 第 7 册 [M]. 上海 : 上海科学技术出版社 ,
1999: 903-904.
[2]　焦淑萍，陈彪，姜虹，等 . 火绒草降血糖作用的初步研究 [J]. 中草药，
1997, 28(11): 673-675.
[3]　靳丽卿，王恩，汪豪，等 . 新疆产火绒草地上部分的化学成分 [J]. 药学
与临床研究，2011, 19(3): 241-243.
[4]　刘瑞玲，李维维，杨维嘉 . 丹参及其注射液中水溶性总酚的测定 [J]. 药
物分析杂志，1983, 3(3): 163-165.
[5]　李敏，王胜春，王晓娟，等 . 五灵丸中丹参总酚性成分的含量测定 [J].
中成药，1990, 12(1): 12-13.
[6]　朴凤玉，张敬爱，俞哲洽，等 . 铁氰化钾与三氯化铁反应产物的鉴定及
含量测定 [J]. 延边大学学报 ( 自然科学版 )，1996, 22(3): 30-33.
[7]　王文祥，周巧霞，顾明，等 . 不同对照品对芎芍胶囊总酚酸含量测定的
影响 [J]. 中成药 , 23(7): 536-537.