全 文 ：陈燕霞，陈 康，黎 珊，等． 小驳骨中总黄酮、总酚酸含量测定及其抗氧化活性研究［J］． 江苏农业科学，2014，42(4) :258 － 259．
小驳骨中总黄酮、总酚酸含量测定及其抗氧化活性研究
陈燕霞，陈 康，黎 珊，张林杰
(广州中医药大学中药学院，广东广州 510006)
摘要:采用紫外 －可见分光光度法测定小驳骨不同提取溶剂、不同部位总黄酮和总酚酸含量及其抗氧化性。结果
表明，小驳骨茎总黄酮含量高于叶，茎水提取液总黄酮含量最高，为 4． 26%;小驳骨叶总酚酸含量高于茎，叶醇提取液
总酚酸含量最高，为 11． 90%;在抗氧化性方面，茎水提液 ＞茎醇提液 ＞叶水提液 ＞叶醇提液;小驳骨不同部位总黄
酮、总有机酸含量、抗氧化性存在差异;总黄酮含量和抗氧化性具有相关性，表明抗氧化活性可能与黄酮类物质有关。
关键词:小驳骨;总黄酮;总酚酸;抗氧化性
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2014)04 － 0258 － 02
收稿日期:2013 － 10 － 14
作者简介:陈燕霞(1988—) ，女，广东汕头人，硕士研究生，研究方向
为中药炮制现代化、中药饮片质量标准化。E － mail:973414396@
qq． com。
通信作者:陈 康，男，广东阳江人，教授，研究方向为中药炮制现代
化、中药饮片质量标准化及中药新药研究。E － mail:chenkang@
gzucm． edu． cn。
小驳骨(Gendarussa vulgaris Nees．)别名驳骨丹、接骨草、
四季花、小还魂、百节芒、小叶金不换、小接骨草、裹篱樵、长生
木、细骨风等，为双子叶植物爵床科小驳骨属植物小驳骨的干
燥地上部分，全年均可采收，广泛分布于我国的广东、广西、海
南等地。小驳骨性味辛、温，归肝、肾经;功能为祛瘀止痛，续
筋接骨;主用于跌打损伤，筋伤骨折，风湿骨痛，血瘀经闭，产
后腹痛［1］。民间常取小驳骨鲜品捣烂，或用酒调后热敷患
处。据报道，小驳骨含有挥发油、无机元素、生物碱、黄酮苷、
有机酸、糖类、氨基酸等［2 － 4］;卢胜明研究了小驳骨地上部分
的 95%乙醇提取物的化学成分，从中分离并鉴定了 19 个化
合物［5］;江秀娟等对小驳骨药材进行了性状鉴别、显微鉴别、
薄层鉴别，对水分、总灰分、水溶性浸出物含量等进行了测
定［6］。但目前关于小驳骨药材的研究较少。本研究测定了
小驳骨中总黄酮、总酚酸含量，并体外测定其抗氧化活性，以
期为制定小驳骨的质量标准及其全面开发利用提供参考。
1 材料与方法
1． 1 材料
小驳骨饮片购于广东康美药业股份有限公司康美中药饮
片厂，经广州中医药大学炮制教研室陈康教授鉴定为爵床科
小驳骨属植物小驳骨。
芸香苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号:
100080 － 200707) ;咖啡酸对照品(四川省维克奇生物科技有
限公司，批号:110807) ;1，1 － 二苯基 － 2 － 三硝基苯肼
(DPPH，梯希爱化成工业发展有限公司，批号:D0909) ;无水
乙醇为分析纯;水为蒸馏水。
主要仪器:电子天平(上海精科天平有限公司，型号为
MP200B)、8453E紫外 －可见分光光度计(美国 Agilent 科技
公司)、超声波清洗器(东莞市科桥超声波设备有限公司，型
号为 KQ －300)。
1． 2 方法
1． 2． 1 样品溶液制备 (1)醇提液:分别称取小驳骨茎、叶
粉末样品约 2 g，置于 100 mL 锥形瓶中，加 60% 乙醇溶液
60 mL，超声提取 40 min，冷却后补足重量差异，过滤即得。
(2)水提液:分别称取小驳骨茎、叶粉末样品约 2 g，置于
150 mL 圆底烧瓶中，加 60 mL 蒸馏水，回流提取 1 h，冷却后
补足重量差异，过滤即得。
1． 2． 2 水分含量测定 按照《中国药典》(2010 年版)相关
要求测定小驳骨药材含水量。
1． 2． 3 总黄酮含量测定
1． 2． 3． 1 芸香苷标准曲线绘制 采用 NaNO2 － Al(NO3)3 －
NaOH显色体系进行显色分析［7］。称取干燥至恒重的芸香苷
对照品 2． 07 mg，用乙醇溶解置于 10 mL 容量瓶，定容，即得
芸香苷对照品溶液(0． 207 mg /mL)。分别移取 1． 0、1． 5、2． 0、
2． 5、3． 0、4． 0 mL 芸香苷对照品溶液于 10 mL 容量瓶中，加
5% NaNO2 溶液 0． 3 mL，混匀，放置 6 min;加 10% Al(NO3)3
溶液 0． 3 mL，摇匀，放置 6 min;加 1% NaOH 溶液 4 mL，用乙
醇定容至刻度线，摇匀，放置 15 min。以相应试剂为空白，在
510 nm 波长处测定吸光度，每个处理重复 3 次。以芸香苷对
照品溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
1． 2． 3． 2 总黄酮含量测定 分别移取样品溶液 5 mL 于
10 mL 容量瓶中，按上述 NaNO2 － Al(NO3)3 － NaOH 显色体
系方法进行操作，在 510 nm 波长处测定吸光度，每个处理重
复 3 次，根据芸香苷标准曲线计算样品的总黄酮含量。
1． 2． 4 总酚酸含量测定
1． 2． 4． 1 咖啡酸标准曲线绘制 采用铁氰化钾 －三氯化铁
显色体系进行显色分析［8］。称取干燥至恒重的咖啡酸对照
品 1． 45 mg，用乙醇溶解置于 10 mL 容量瓶，定容，即得咖啡
酸对照品溶液(0． 145 g /L)。分别移取 0． 1、0． 2、0． 3、0． 4、
0． 5 mL 于 25 mL容量瓶中，加乙醇至 5 mL，加 0． 3%十二烷
基硫酸钠 2 mL及 0． 6%三氯化铁 － 0． 9%铁氰化钾混合溶液
(V ∶ V = 1 ∶ 1)1 mL，混匀，在暗处放置 5 min，用 0． 1 mol /L盐
酸溶液定容，避光放置 20 min。以相应试剂为空白，在
736 nm 波长处测定吸光度，每个处理重复 3 次。以咖啡酸浓
度为横坐标、吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
—852— 江苏农业科学 2014 年第 42 卷第 4 期
DOI:10.15889/j.issn.1002-1302.2014.04.123
1． 2． 4． 2 总酚酸含量测定 移取样品溶液 0． 2 mL于 25 mL
容量瓶中，按上述铁氰化钾 －三氯化铁显色体系方法进行操
作，在 736 nm波长处测定吸光度，每个处理重复 3 次，根据咖
啡酸标准曲线计算样品总酚酸含量。
1． 2． 5 对 DPPH 清除活性的测定 参照文献中方法［9 － 11］并
作改进，测定样品对 DPPH 清除活性。称取 DPPH 对照品
8 mg，用无水乙醇定容至 100 mL 的容量瓶中，配制成浓度为
0． 08 g /L 的 DPPH溶液，避光保存，现用现配。分别吸取样品
溶液 4 mL至 25 mL容量瓶中，定容，摇匀。取稀释后的样品
溶液 3 mL，加入 2 mL DPPH 溶液，摇匀，室温、避光放置
30 min。以无水乙醇代替 DPPH 溶液为对照，以无水乙醇代
替样品提取液作空白。在 521 nm波长处测吸光度，每个处理
重复 3 次，计算样品对 DPPH自由基的清除率。
DPPH清除率 =(1 －
(D1 － D2)
D0
)× 100%
式中:D0 为 3 mL无水乙醇 + 2 mL DPPH溶液处理的吸光度;
D1 为 3 mL样品溶液 + 2 mL DPPH溶液处理的吸光度;D2 为
3 mL样品溶液 + 2 mL无水乙醇处理的吸光度。
2 结果与分析
2． 1 小驳骨药材水分含量
试验结果显示，小驳骨药材茎、叶的含水量均值分别为
11． 39%、11． 91%(表 1) ，均在《中国药典》(2010 年版)小驳
骨水分规定范围内。
表 1 小驳骨药材不同部位含水量
部位
含水量(%)
重复 1 重复 2 重复 3 均值
茎 11． 34 11． 49 11． 33 11． 39
叶 12． 02 12． 01 11． 69 11． 91
2． 2 总黄酮和总酚酸含量的测定结果
芸香苷对照品溶液浓度为 0． 020 7 ～0． 082 8 mg /mL时，其
与吸光度呈良好线性关系，线性回归方程为:y = 12． 200 0x －
0. 007 5(r2 = 0． 999 7)。咖啡酸对照品溶液浓度为 0． 58 ～
2. 90 μg /mL 时，其与吸光度呈良好线性关系，线性回归方程
为:y = 383． 620x + 0． 034 5(r2 = 0． 999 1)。考察了该方法测
定总黄酮、总酚酸含量的精密性、稳定性、重复性、加样回收
率，其精密性、稳定性、重复性、加样回收率 ＲSD均小于 5%。
由表 2 可以看出，小驳骨不同部位总黄酮及总酚酸含量
存在差异。在总黄酮含量方面，小驳骨茎的含量明显高于叶;
茎的水提液含量最高，为 4． 26%;叶的醇提液含量最低，为
1. 88%。在总酚酸含量方面，醇提液高于水提液，且叶的含量
高于茎;叶的醇提液含量最高，为 11． 90%;而茎的水提液含
量最低，仅为 2． 66%。总黄酮含量由高到低依次为茎水提
液 ＞茎醇提液 ＞叶水提液 ＞叶醇提液;总酚酸含量由高到低
依次为叶醇提液 ＞茎醇提液 ＞叶水提液 ＞茎水提液。
表 2 小驳骨不同部位总黄酮和总酚酸含量
部位 提取类别 总黄酮含量(%) 总酚酸含量(%)
茎 醇提液 3． 14 ± 0． 03 6． 15 ± 0． 14
叶 醇提液 1． 88 ± 0． 04 11． 90 ± 0． 20
茎 水提液 4． 26 ± 0． 03 2． 66 ± 0． 03
叶 水提液 2． 23 ± 0． 03 5． 12 ± 0． 12
2． 3 对 DPPH自由基的清除作用
试验表明，小驳骨茎醇提液、叶醇提液、茎水提液、叶水提
液对 DPPH自由基的清除率分别为 67． 8%、51． 5%、82． 6%、
60． 3%。小驳骨各样品溶液对 DPPH 均有一定的清除能力，
且对 DPPH自由基的清除能力有差异。清除能力由强到弱分
别为茎水提液 ＞茎醇提液 ＞叶水提液 ＞叶醇提液，其中茎水
提液清除能力最强，为 82． 6%。
3 结论与讨论
由于合成抗氧化剂对人类健康的潜在危害，近年来从天
然植物中寻找天然抗氧化剂引起了人们极大的兴趣。以往的
研究表明，传统中药材具有很强的抗氧化活性，并且目前已知
的抗氧化物质多为黄酮类和酚酸类成分。因此本研究采用了
经典的显色体系 NaNO2 － Al(NO3)3 － NaOH和铁氰化钾 －三
氯化铁，检测了小驳骨药材中不同提取溶剂、不同部位的总黄
酮、总酚酸含量。其中茎水提液总黄酮含量最高，为 4． 26%，
叶醇提液总酚酸含量最高，为 11． 90%。
DPPH法是常用的检测化合物清除自由基活性的方法。
本研究显示，小驳骨各样品溶液对 DPPH 均有一定的清除能
力，且对 DPPH自由基的清除能力有差异。不同样品中总黄酮
含量高低与不同样品对 DPPH清除率强弱的规律是一致的，可
以推测小驳骨中总黄酮在清除 DPPH自由基中发挥主要的作
用，这也与以往研究结果［12］一致。此外，小驳骨是疗效确切、
显著的民间常用药，同时被作为绿篱广泛种植，药材来源丰
富。为了提高小驳骨的综合利用度，还应对小驳骨的抗氧化
活性部位进行活性成分筛选，为今后开发利用奠定基础。
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