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中药田基黄抗幽门螺杆菌的实验研究



全 文 :• 821 •中华中医药杂志(原中国医药学报)2009年 6 月第24 卷第 6 期 CJTCMP , June 2009, Vol . 24, No. 6
·研究报告·
幽门螺杆菌(Hp)在人的胃内定植,与慢性胃炎、消化性溃
疡、胃MALT淋巴瘤和胃癌密切相关[1]。随着抗Hp治疗的广泛
开展,Hp对抗生素的耐药日益严重,导致根除Hp的难度逐渐增
大。根据临床指征,对Hp进行根除治疗是目前医学界的共识,
合理的选择药物对取得理想的根除至关重要,因此寻找高效、
低毒、廉价的抗Hp药物,特别是挖掘中医学宝库开发新型抗Hp
药物的研究引人注目。
田基黄为中医临床治疗肝炎的常用中药之一,具有抑菌、
抗病毒、保肝、抑制癌细胞、增强免疫等多种药理学功效[2],
但未见田基黄抗Hp的报道。笔者实验中发现田基黄体外对幽
门螺杆菌具有较强的抑杀作用,现就有关实验方法及结果报
道如下。
材料和方法
1. 材料 幽门螺杆菌标准菌株NCTC 11637(上海医科大学
华山医院提供),5%小牛血清的BHI琼脂培养基(Biomexieux公
司产Brain-heart infusion),厌氧培养箱(浙江义乌DY-2型厌氧
培养箱),田基黄浸膏(乙醇提取,2g生药/ml)及田基黄提取物
(醋酸乙酯萃取部分,30g生药/g)由江西省中医药研究院中药
研究所提供,克拉霉素原料(由江西制药有限公司提供)。
2. 菌液的准备 将标准Hp菌株NCTC 11637接种于含5%小
牛血清的BHI琼脂培养基平皿,置15%CO2、85%N2培养体系的
37℃厌氧培养箱中,复苏培养72h,再传代厌氧培养72h,经G染
色及尿素酶、触酶试验鉴定后,分别挑取多个典型菌落混悬于
BHI液体培养基中,调整菌液浓度为5×106 CFU/ml。
3. 不同药液浓度的配制 分别将田基黄浸膏加水配成生
药浓度为500mg/L的溶液,田基黄提取物加水配成生药浓度为
400mg/L的溶液,分别以微孔滤膜过滤除菌备用。克拉霉素以
加无菌水配成药物浓度为500mg/L的溶液,备用。
取无菌的24孔细胞培养板,用无菌的含5%小牛血清的BHI
液体培养基分别对田基黄浸膏、田基黄提取物、克拉霉素进行
稀释,调整田基黄浸膏、田基黄提取物浓度为200、100、50、
25、12.5、6.25、0mg/L;克拉霉素浓度为50、25、12.5、6.25、
3.125、1.56、0mg/L。各浓度组中药均取100μl于无菌的96孔细
胞培养板中备用。
中药田基黄抗幽门螺杆菌的实验研究*
虞金宝,聂荣庆,吴东风,李才堂,李晶
(江西省中医药研究院,南昌 330077)
摘要:目的:观察田基黄对幽门螺杆菌(Hp)体外抑菌作用。方法:采用液体稀释法,将田基黄浸膏及提取
物与幽门螺杆菌共同培养,通过比较细菌生长情况而测定田基黄浸膏及提取物的MIC和MBC。结果: 田基黄浸膏及
提取物对幽门螺杆菌均有明显抑杀作用。结论:浓度为25 mg/ml 田基黄浸膏和6.25 mg生药/ml的提取物均可有效抑
制幽门螺杆菌的生长。
关键词:幽门螺杆菌(Hp);田基黄;药敏;实验研究
Experimental study on resistance of hypericum japonicum Thunb. to helicobacter pylori
YU Jin-bao, NIE Rong-qing, WU Dong-feng, LI Cai-tang, LI Jing
(Jiangxi province Academy of Troditional Chinese Medicine, Nanchang 330077, China)
Abstract: Objective: To observe the resistance of hypericum japonicum Thunb. to helicobacter pylori. Methods: Liquid
dilution method was used to culture mixture of hypericum japonicum Thunb. extractum and helicobacter pylori, hypericum
japonicum Thunb. extraction and helicobacter pylori respectively. The minimum inhibitory concentration and minimal bactericidal
concentration of hypericum japonicum Thunb. extractum and extraction were determined by comparing the growth condition
of helicobacter pylori. Results: Both of hypericum japonicum Thunb. extractum and extraction had obvious resistant effect
on helicobacter pylori. Conclusion: 25 mg/ml hypericum japonicum Thunb. extractum and 6.25 mg crude drug/ml hypericum
japonicum Thunb. extraction can suppress the growth of helicobacter pylori effectively.
Key words: Helicobacter pylori; Hypericum japonicum Thunb.; Drug sensitivity;Experimental study
*江西省卫生厅学术带头人计划(No.20045077),江西省自然科学基金项目(No.2007GZY0099)
通讯作者:虞金宝,江西省南昌市文教路529号江西省中医药研究院中药所,邮编:330077,电话:0791-8501404,E-mail:yjb2217@163.com
• 822 • 中华中医药杂志(原中国医药学报)2009年 6 月第24 卷第 6 期 CJTCMP , June 2009, Vol . 24, No. 6
6. 最低杀菌浓度(MBC)测定 厌氧培养72h的96孔细胞
培养板,无细菌生长(清亮的)培养孔均取一环培养物于含5%
小牛血清的BHI固体培养基的平板涂布画线,阴性、阳性对照孔
也均取一环培养物于含5%小牛血清的BHI固体培养基的平板
涂布画线,置15%CO2、85%N2培养体系的37℃厌氧培养箱中培
养72h,观察有无细菌生长。无细菌生长的最低中药浓度,即为
结果
阳性对照孔均有菌生长,阴性对照孔均无菌生长。中药田
基黄、田基黄提取物对幽门螺杆菌有抑菌作用,其MIC值分别为
25mg生药/ml和6.25mg生药/ml。阳性对照药物克拉霉素MIC值为
1.56mg/L。中药田基黄浸膏、田基黄提取物均有明显杀菌作用,
MBC平皿无幽门螺杆菌生长,其MBC值分别为25mg生药/ml和
6.25mg生药/ml。阳性药克拉霉素浓度3.125 mg/L以下对幽门螺杆
菌无明显杀菌作用,MBC平皿仍有微量的幽门螺杆菌生长。
讨论
1. 田基黄是治疗肝炎的常用中药,现代研究也证明,田基
黄具有较好的保肝作用[3-4]。有资料表明,Hp对肝细胞有细胞毒
作用[5],且可作为独立致病因素导致肝脏病变[6]。本实验结果显
示,田基黄及其提取物对Hp有较显著的抑杀作用;但该作用是否
与田基黄的保肝作用有密切关系,还需要进一步研究证实。
2. 随着抗Hp治疗的广泛开展,Hp对抗生素的耐药日益严
重,导致根除Hp的难度逐渐增大;且目前化学药品对Hp的耐药
性尚无良策。由于传统中药具有作用的多靶点性和副作用小的
特点,人们试图从中寻找抗Hp的药物,并进行了中药抗Hp的相
关研究,黄连被认为是对幽门螺杆菌高度敏感的中药,其MIC
值和MBC值0.8%(8mg/ml)[7],中度敏感的黄芩、大黄MIC值分
别为6.3%(25mg/ml)、0.8% (8mg/ml);也有文献报道黄连
MIC值为12.5-25mg/ml[8](其主要成分盐酸小檗碱的MIC值为
25mg/ml[9]),黄芩、大黄MIC值分别为25mg/ml、50mg/ml[8]。本
实验结果显示,田基黄药材的MIC值为25mg/ml,提取物MIC值
和MBC值均仅为6.25mg/ml,与3.125mg/l的克拉霉素相当,其作
用强于黄连,对Hp具有高度敏感性。田基黄抗Hp的作用机理
及物质基础正在进行研究。
参 考 文 献
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[5] 陈仁,范学工,李宁,等.CagA(+)幽门螺杆菌体外诱导肝细胞凋
4. 中药与实验菌液的混合及厌氧培养 各浓度组中药均
取100μl、实验菌液100μl于96孔细胞培养板中,所检测的样
品与实验菌液按1:1混合,每组3孔,空白对照孔不加菌液,将加
好样的96孔细胞培养板置15%CO2、85%N2培养体系的37℃厌
氧培养箱中培养72h。田基黄浸膏、田基黄提取物终浓度分别
为100、50、25、12.5、6.25、3.125、0mg/L;克拉霉素浓度为25、
12.5、6.25、3.125、1.56、0.78、0mg/L。幽门螺杆菌终浓度为2.5
×106CFU/ml。
5. 最低抑菌浓度(MIC)测定 取出厌氧培养72h的96孔
细胞培养板,观察细菌生长情况。0mg/L孔(阳性对照)有细菌生
长,培养液呈混浊状,空白对照孔无细菌生长,培养液清亮,确定
无细菌生长(培养液清亮)的最低中药浓度,此浓度即为田基黄浸
膏、田基黄提取物、克拉霉素最低抑菌浓度(MIC)。见表1。
浓度
(mg/ml)
100.000
50.000
25.000
12.500
6.250
3.125
0
阴性对照
田基








黄浸膏
















田基黄
















提取物








浓度(mg/L)
25.000
12.500
6.250
3.125
1.560
0.780
0
阴性对照








阳性药








克拉霉素








表1 田基黄浸膏及提取物田基黄对Hp菌MIC结果(n=3)
注:-:培养孔中培养物清亮,无细菌生长;+:培养孔中培养
物混浊,有细菌生长;阴性对照:为未加菌液和药液。
1 2 3 1 2 3 1 2 3
克拉霉素



±
±



浓度
(mg/ml)
100.00
50.00
25.00
12.50
6.25
3.125
0
阴性对照
田基黄








浸膏
























田基黄








提取物








阳性药
浓度(mg/L)
25.00
12.50
6.250
3.125
1.560
0.780
0
阴性对照



±
±



阳性药



±
±



表2 田基黄浸膏及提取物对Hp菌MBC结果(n=3)
注:±:平皿上有很少量菌落生长;-:平皿上无菌落生长;+:
平皿有菌落生长;阴性对照:为未加菌液和药液。
1 2 3 1 2 3 1 2 3
最低杀菌浓度(MBC)。阴性对照孔无细菌生长,阳性对照孔有
细菌生长。见表2。
• 823 •中华中医药杂志(原中国医药学报)2009年 6 月第24 卷第 6 期 CJTCMP , June 2009, Vol . 24, No. 6
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(收稿日期:2008年4月14日)
·研究报告·
银屑病中医体质与辨证分型的相关性研究
谢知音1,白彦萍2,杨顶权2
(1北京市昌平区中医医院,北京 102200 ; 2卫生部中日友好医院,北京 100029)
摘要:目的:探讨寻常型银屑病中医体质与辨证分型的相关性。方法:按照中西医相关标准,确诊患者为寻
常型银屑病并对其进行辨证分型、银屑病面积和严重程度指数(PASI)评分。按《中医9种基本体质分类量表》
的分类标准对患者进行中医体质分类。结果:对97名患者进行中医辨证分型发现,血热型最多,占调查总数的
45.4%;血燥型占29.9%;血瘀型占24.7%。对患者进行PASI评分,血热型最高,血燥型最低,其统计学差别有显
著性意义(P<0.05)。对所有患者的中医体质分类中,平和质、湿热质、气郁质人数较多,共占总数的67.1%。
平和质PASI评分最低,与其他体质比较,统计学差异均有显著性意义(P<0.05)。结论:湿热质、气郁质患寻常
型银屑病的机率较其他体质类型高,且发病时多表现为血热型,病情较重。平和质虽也可患病,但多表现为血燥
型,病情较轻。体质类型对于疾病的转归具有一定程度的影响。
关键词:寻常型银屑病;中医体质;辨证分型
Associativity study of TCM constitution and differentiation of signs and symptoms for
syndrome classifi cation in psoriasis patient
XIE Zhi-yin1, BAI Yan-ping2, YANG Ding-quan2
(1Changping TCM Hospital in Beijing, Beijing 102200, China; 2China-Japan Friendship Hospital, Beijing 100029, China)
Abstract: Objective: To study the relationship between TCM constitution and differentiation of signs and symptoms for
syndrome classifi cation in patients with psoriasis vulgaris. Methods: According to associated standard in traditional and western
medicine, psoriasis vulgaris patients were identifi ed, the syndrome differentiation and PASI were performed. Results: Among
97 cases of psoriasis vulgaris, blood-heat syndrome was 45.4%, blood-dryness was 29.9%, blood stasis was 24.7%, the PASI of
blood-heat was signifi cantly more than that of blood-dryness (P<0.05). As far as PASI of TCM constitution, the sum of pinghezhi,
shirezhi and qiyuzhi was 71.1%. PASI of Pinghezhi is significantly less than that of others’ (P<0.05). Conclusion: Shirezhi
and pinghezhi were apt to have psoriasis vulgaris, and blood-heat syndrome was the common seen type with serious condition.
Pinghezhi appeared with blood-dryness and light condition. The type of constitution can infl uence the turnover of disease.
Key words: Psoriasis vulgaris; Constitution of TCM; Differentiation of signs and symptoms for syndrome classifi cation
通讯作者:谢知音,北京市昌平区东环南路南段昌平区中医医院皮肤科,邮编:102200,电话:010-69742196,E-mail:misszhiyin0510@sina.com