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图 2　未搭载的丹参种子的幼苗 (28 d)
Fig 2　Spear of the g rou nd Sa lvia m il t iorrh iza Bge.seeds(28 d)
的土质有一定关系 , 该土质不易积水 , 土壤通透性好 , 使种
子能够充分的吸收水分 , 促进种子发芽。
3.3　太空诱变对丹参幼苗长势的影响
本实验目前研究结果表明 , DSⅢ种子的幼苗生长情况明
显优于对照组。但太空诱变后对丹参的生长 、 有效成分含量
的影响还有待下一步研究。
3.4　储藏时间与种子活力关系
2009 年所采收的新鲜丹参种子的发芽率明显高于 2008
年所采收的种子 , 种子的发芽率会随着储藏年限的延长而降
低 , 活力也随之降低。其降低的原因还有待进一步研究。
3.5　CaCl2 溶液对发芽率的影响
CaCl2 从种子处理试验结果中表明 , 丹参种子经过 100
mmol· L-1 CaCl2 溶液浸泡能够明显提高发芽势 、 发芽率 ,
出苗率整齐度也大大提高 , 这对改进大田育苗技术有一定的
参考价值。
参考文献
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(收稿日期:2009-11-13;修回日期:2009-12-08)
高效液相色谱法同时测定田基黄药材中
槲皮素 、芦丁和异鼠李素的含量
滕久理 , 欧辽毅 , 田江涛 (麻阳苗族自治县人民医院药剂科, 湖南 怀化　419400)
摘要:目的　建立高效液相色谱法同时测定田基黄药材中槲皮素 、 芦丁和异鼠李素的含量。方法　采用 HPLC 法 ,
色谱柱为 Agilet Hyper sil C18 (4.6 mm×250 mm , 5 μm), 甲醇-0.2%磷酸 (54∶46)为流动相 , 流速为 1 mL ·
min -1 , 检测波长 261 nm , 柱温为室温。 结果　槲皮素 、 芦丁和异鼠李素分别在 0.265 ～ 4.240、 0.201 ～ 3.22、
0.0755 ～ 1.208 μg 线性关系良好 , 平均回收率分别为 99.7%、 99.7%、 100.8%, RSD 分别为 0.76%、 1.28%、
2.69%。结论　所建立的方法简单易行 , 准确可靠 , 可用于田基黄药材中槲皮素 、 芦丁和异鼠李素的含量测定。
关键词:田基黄;槲皮素;芦丁;异鼠李素;高效液相色谱法
中图分类号:R928.4 , R927.2　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672-2981 (2010)01-0041-04
　　作者简介:腾久理 , 男 , 主管药师 , 主要从事医院药学工作 , Tel:(0745) 5823480, E-mail:my tj1999@163.com
中南药学 2010年 1月第 8卷第 1期　Cent ral S ou th Pharmacy.January 2009 , Vol.8 No.1
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Simultaneous determination of quercetin , rutoside and isorhamnetin
in Hypericum japonicum Thunb.by HPLC
TENG Jiu-li , OU Liao-y i , TIAN Jiang-tao (Department o f Pharmacy , Peop le s Hospital o f the Miao Nationality
A utonomous County of Mayang , Huaihua H unan 419400)
Abstract:Objective　 To establish an HPLC method fo r simultaneous content de te rmination of quercetin , ruto side and
iso rham netin in Hypericum j aponicum Thunb..Methods　H PLC method w as used.Agilet Hyper sil C18 co lumn (4.6
mm×250 mm , 5 μm)w as used with methanol-0.2%phospho ric acid (54∶46)as the mobile phase.The flow rate
wa s 1 mL·min-1 .The detection waveleng th w as 261 nm , and the co lumn tempe rature w as ro om tempera tur e.Re-
sults　The linear range of quercetin , rutoside and iso rhamnetin w as 0.265 -4.240 , 0.201 -3.22 , and 0.0755 -
1.208 μg.The average recove ry w as 99.7%, 99.7% and 100.8% w ith RSD w as 0.76%, 1.28% and 2.69%, re-
spectively.Conclusion　The method is sensitive , accur ate and can be used fo r content of que rcetin , rutoside and
iso rham netin in H ypericum japonicum Thunb.
Key words:Hypericum japonicum Thunb.;quercetin;rutoside;iso rham netin;H PLC
　　田基黄 (又名地耳草), 为藤黄科金丝桃属植物田基黄
Hypercum j aponicum Thunb.的干燥全草 , 原标准收载于中
国药典 1977 年版一部[ 1]和部颁中药材标准[ 2] 。田基黄具有
清热利湿 、 解毒消肿 、 散瘀止痛的功效 , 用于治疗急 、 慢性
肝炎[ 3] , 临床上以单方或复方治疗急 、 慢性肝炎 , 获较好疗
效。田基黄中含槲皮苷 、 异槲皮苷 、 槲皮素-7-鼠李糖苷 、
3 , 5 , 7 , 3′, 4′-五羟基黄酮-7-鼠李糖苷 、 异鼠李素 、 芦
丁[ 3-5]等黄酮类成分。目前已有文献报道采用 HPLC 法测定
田基黄中槲皮素的含量及 HPLC 法测定田基黄中槲皮苷和
异槲皮苷的含量[6-7] , 但未见同时测定田基黄药材中槲皮素 、
芦丁和异鼠李素含量的报道。 本研究采用 HPLC 法对田基
黄中槲皮素 、 芦丁和异鼠李素的含量同时进行测定 , 现报道
如下。
1　仪器与药品
H P-1100 高效液相色谱仪 (美国惠普公司 , 配备 HP
化学工作站 , DAD检测器 , 四元梯度泵);AG-135电子天
平 (梅特勒-托利多)。
槲皮素对照品 (供含量测定用 , 批号:0081-0406 , 中
国药品生物制品检定所), 芦丁对照品 (供含量测定用 , 批
号:0080-9705 , 中国药品生物制品检定所), 异鼠李素对照
品 (供含量测定用 , 批号:0860-0107 , 中国药品生物制品
检定所), 甲醇为色谱纯 , 水为重蒸馏水 , 其他试剂均为分
析纯。
田基黄药材为自采及购买, 经麻阳苗族自治县人民医院
涂元文中医副主任医师鉴定为藤黄科金丝桃属植物田基黄
Hypericum japonicum Thunb.的干燥全草 , 具体产地见表 2。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱:Agilet Hypersil C18 (4.6 mm ×250 mm , 5
μm), 流动相:甲醇-0.2%磷酸 (54∶46), 流速:1 mL ·
min -1 , 检测波长:261 nm , 柱温:室温 , 进样量:10 μL。
2.2　溶液配制
2.2.1　对照品溶液的配制　取芦丁对照品 、 槲皮素对照品 、
异鼠李素对照品各适量 , 分别置于 3 个 50 m L 量瓶中 , 加
甲醇溶解并稀释制成每 1 mL 含芦丁 530 μg、 槲皮素 402.5
μg 、 异鼠李素 151 μg 的储备液。取芦丁 、 槲皮素 、 异鼠李
素对照品储备液各 10 m L , 分别置于 3 个50 mL 量瓶中 , 加
甲醇稀释并定容至刻度 , 分别得每 1 m L 含芦丁 106.0 μg 、
槲皮素 80.5 μg 、 异鼠李素 30.2 μg 的对照品溶液。取芦丁 、
槲皮素 、 异鼠李素对照品储备液各 10 mL 置于同一 50 m L
量瓶中 , 加甲醇稀释并定容至刻度 , 得每 1 m L 含芦丁
106.0 μg、 槲皮素 80.5 μg、 异鼠李素 30.2 μg 的混合对照
品溶液。
2.2.2　供试品溶液的配制　取田基黄药材粗粉 2.0 g , 精密
称定 , 置 100 mL 具塞三角瓶中 , 加 60%乙醇超声处理 (功
率 360 W , 频率 35 kH z)3 次 , 20 mL ·次-1 , 10 min , 过
滤 , 合并滤液 , 减压回收溶剂至干。精密加入 50%甲醇 10
m L 使溶解 , 用微孔滤膜 (0.45μm)过滤 , 取续滤液 , 即得。
2.3　系统适用性试验
按 “2.1” 项下色谱条件 , 分别取芦丁 、 槲皮素 、 异鼠
李素对照品溶液和田基黄药材供试品溶液注入高效液相色谱
仪 , 理论塔板数以芦丁 、 槲皮素 、 异鼠李素峰计算 , 均≥
4 000 , 芦丁 、 槲皮素 、 异鼠李素峰与相邻峰之间的分离度
均>1.5 , 对称因子均在 0.95 ～ 1.05 , 芦丁 、 槲皮素 、 异鼠
李素的对照品 、 供试品分别在约 5 、 8、 12.5 min 出现相同
色谱峰 (见图 1)。
2.4　线性关系考察及线性范围
取 “ 2.2.1” 项下混合对照品溶液 , 分别进样 2.5 、 5 、
10 、 20 、 30 、 40 μL;按 “2.1” 项下色谱条件进行分析 , 以
进样量 C (μg)为横坐标 , 峰面积值 A 为纵坐标 , 进行回归
分析 , 计算回归方程为:芦丁:A =0.011 15 C-0.011 15 ,
r=0.999 9;槲皮素:A =26.56 C-1.983 , r = 0.999 1;
异鼠李素:A=27.68 C-0.741 3 , r =0.999 1 。结果表明
芦丁 、 槲皮素 、 异鼠李素进样量分别在 0.265 ～ 4.240 、
0.201 ～ 3.22 、 0.075 5～ 1.208 μg 与峰面积线性关系良好。
2.5　精密度试验
C ent ral South Pharm acy.Jan uary 2010 , Vol.8 No.1　中南药学 2010年 1月第 8卷第 1期
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图 1　对照品及供试品 HPLC 图
Fig 1　HPLC of s amp le and reference
A.芦丁对照品溶液 (ru tin);B.檞皮素对照品溶液 (qu ercet in);C.异鼠李素对照品溶液 (iso rh amn et in);D.田基黄药材 (H y per icum ja-
ponicum T hunb.);1.芦丁 (ru tin);2.檞皮素 (quercetin);3.异鼠李素 (i sorhamnetin)
　　精密吸取芦丁 、 槲皮素 、 异鼠李素对照品溶液各
10 μL , 在 “ 2.1” 项下色谱条件下 , 连续进样 6 次进行测
定 , 芦丁 、 槲皮素 、 异鼠李素峰面积的 RSD分别为 0.59%、
0.82%、 0.96% (n= 6)。
2.6　稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液各 10 μL , 分别在 0 、 1 、 3 、
6 、 12 、 24 、 48 h 进样 , 测定芦丁 、 槲皮素 、 异鼠李素色
谱峰 , 结果表明 , 供试品溶液在 48 h 内保持稳定 , RSD分别
为 1.55%、 0.99%和 1.13 %(n= 7)。
2.7　重复性试验
精密称取同一批号的样品 (批号:20070909)各 6 份 ,
分别按 “2.2.2” 项下方法操作 , 精密吸取各供试品溶液各
10 μL , 分别注入高效液相色谱仪 , 测定。 结果样品中芦丁
平均含量为 0.190%, RSD=1.82% (n=6);槲皮素平均
含量为 0.126 %, RSD=1.55 %(n=6);异鼠李素平均含
量为 0.048%, RSD=1.55%(n=6)。
2.8　加样回收率试验
精密称取已知含量的芦丁 (1.90 mg · g -1)、 槲皮素
(1.26 mg· g -1)、 异鼠李素 (0.48 mg · g-1)样品适量 , 分
别精密加入一定量的混合对照品溶液 , 按 “2.2.2” 项下方
法操作及 “2.1” 项下色谱条件测定 , 计算回收率 (见表 1)。
表 1　芦丁、 槲皮素 、 异鼠李素的加样回收试验结果
Tab 1　Recovery of quercetin, rutoside and isorhamnetin
成分
(componen t)
称样量
(sample weight)
/ g
样品含量
(sam ple con tent)
/mg
加入量
(added am ount)
/mg
测得量
(detected amoun t)
/mg
回收率
(recovery)
/ %
平均回收率
(average recovery)
/ %
RSD
/ %
芦丁 0.926 8 1.761 1.590 3.338 99.2
0.925 4 1.758 1.590 3.360 100.7
0.930 2 1.767 1.590 3.370 100.3
0.926 0 1.759 1.590 3.332 99.0 99.7 0.76
0.931 4 1.769 1.590 3.340 98.9
0.928 6 1.764 1.590 3.356 100.1
槲皮素 0.926 8 1.168 1.208 2.348 97.7
0.925 4 1.166 1.208 2.370 99.7
0.930 2 1.172 1.208 2.399 101.6
0.926 0 1.167 1.208 2.368 99.4 99.7 1.28
0.931 4 1.174 1.208 2.386 100.3
0.928 6 1.170 1.208 2.370 99.3
异鼠李素 0.926 8 0.449 0.453 0.886 96.5
0.925 4 0.442 0.453 0.892 99.3
0.930 2 0.446 0.453 0.916 103.8
0.926 0 0.444 0.453 0.910 102.9 100.8 2.69
0.931 4 0.447 0.453 0.909 102.0
0.928 6 0.446 0.453 0.899 100.0
中南药学 2010年 1月第 8卷第 1期　Cent ral S ou th Pharmacy.January 2009 , Vol.8 No.1
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2.9　样品测定
按 “2.2.2” 项下方法制备和 “ 2.1” 项下条件测定 5 批
田基黄药材中芦丁 、 槲皮素 、 异鼠李素的含量 , 结果见表 2。
表 2　样品测定结果
Tab 2　Sample determination
批号
(batch No.)
产地
(place of
produ ct ion)
芦丁
(rutoside)
/ %
槲皮素
(qu ercet in)
/ %
异鼠李素
(isorh amnet in)
/ %
20070221 广西桂林 0.583 0.072 未检出
20070818 广西钦州 0.504 0.154 0.011
20070909 湖南郴州 0.193 0.132 0.042
20071110 福建龙岩 0.100 0.016 0.005
20071019 湖南怀化 0.293 0.112 0.022
3　讨论
3.1　检测成分的选择
经文献检索显示 , 田基黄中的主要成分为黄酮类 、 内酯
类等[ 8] 。而人们的研究发现 , 黄酮类化合物除了具有对心脑
缺血损伤 、 心律失常的保护作用以及镇痛作用外 , 对肝损伤
还具有保护作用[9] 。中国药典 1977 年版一部收载的 “地耳
草 (田基黄)” 项下为春 、 夏二季花开时采挖 , 其临床主要
用于急 、 慢性肝炎。现代研究显示 , 田基黄中的黄酮类成分
为其保肝作用的主要有效成分之一[ 10] 。芦丁 、 槲皮素 、 异
鼠李素都为黄酮类成分 , 因此检测这三者的含量 , 有利于了
解田基黄药材的质量。
3.2　含量差异
根据上述不同产地 、 不同采收期的田基黄样品中芦丁 、
槲皮素 、 异鼠李素的含量测定结果 , 可知不同采收季节和不
同产地的田基黄中这三者的含量有较大的差别 , 这些差异可
能是由气候 、 生长环境 、 采收期和储藏方法等不同引起的。
但由于所检测的样品数量有限 , 对于田基黄药材品质评定有
待于对不同采收季节 、 不同产地的田基黄药材进行多批次的
研究 , 而对于含量差异的具体因素还有待研究 , 而所含其他
成分及药理作用有无差异 , 也有待进一步研究。
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(收稿日期:2009-12-18;修回日期:2009-12-29)
《中南药学》 2009年计量指标
　　根据 《中国科技期刊引证报告 (核心版)》 (2009年版), 《中南药学》 计量指标统计如下。
总被引
频次
影响
因子
即年
指标
他引总
引比
引用半
衰期
被引半
衰期
基金论
文比
引用
刊数
扩散
因子
学科影
响指标
学科扩
散指标
439 0.560 0.077 0.65 5.34 3.25 0.20 245 1.59 0.73 3.77
《中南药学》 2008年计量指标
　　根据 《中国科技期刊引证报告 (核心版)》 (2008年版), 《中南药学》 计量指标统计如下。
总被引
频次
影响
因子
即年
指标
他引总
引比
引用半
衰期
被引半
衰期
基金论
文比
引用
刊数
扩散
因子
学科影
响指标
学科扩
散指标
273 0.375 0.118 0.59 4.52 2.87 0.20 92 33.70 0.60 2.63
C ent ral South Pharm acy.Jan uary 2010 , Vol.8 No.1　中南药学 2010年 1月第 8卷第 1期