全 文 ：［收稿日期］ 20130207(001)
［基金项目］ 福建省自然科学基金课题(2010J01198) ;福建省
重点高校服务海西项目(No． 5)
［第一作者］ 林珊，硕士，实验师，从事中药化学成分提取分离
及活性筛选研究，Tel:0591-22861168，E-mail:
lisa3350@ 163. com
［通讯作者］ * 吴锦忠，博士，教授，从事复方中药天然药物物
质基础研究，Tel:0591-22861161，E-mail:jinzhongfj
@ 126. com
泥胡菜总黄酮大孔树脂纯化工艺优化
林珊1，刘仁根2，曾建伟1，邹秀红3，吴锦忠1，2*
( 1. 福建中医药大学中西医结合研究院，福州 350122;
2. 福建中医药大学药学院，福州 350122; 3. 福建省永春县林业局，福建 永春 362600)
［摘要］ 目的:优选大孔树脂纯化泥胡菜总黄酮的工艺条件。方法:采用静态吸附-洗脱试验筛选大孔树脂型号，动态吸
附法优化大孔树脂纯化泥胡菜总黄酮工艺参数。结果:优选的纯化工艺为选用 D101 型树脂，上样液质量浓度 1. 5 g·L －1，上
样速率 3 BV·h －1，上样体积 4 BV，上样液 pH 5，加 50%乙醇 5 BV以 2 BV·h －1流速洗脱，泥胡菜总黄酮纯度达 47. 8%。结论:
D101 型大孔树脂对泥胡菜总黄酮具有良好的纯化效果。
［关键词］ 泥胡菜;总黄酮;大孔树脂;纯化
［中图分类号］ Ｒ283. 6 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)12-0034-03
［doi］ 10． 11653 /syfj2013120034
Optimization of Purification Technology of Total Flavonoids from
Hemisteptia lyrata by Macroporous Ｒesin
LIN Shan1，LIU Ｒen-gen2，ZENG Jian-wei1，ZOU Xiu-hong3，WU Jin-zhong1，2*
(1. Fujian Academy of Intergrative Medicine，Fujian University of Traditional Chinese Medicine (TCM) ，
Fuzhou 350122，China;2. College of Pharmacy，Fujian University of TCM，Fuzhou 350122，China;
3. Forestry Bureau of Yongchun County，Yongchun 362600，China)
［Abstract］ Objective:To optimize purification technology conditions of total flavonoids from Hemisteptia
lyrata by macroporous resin． Method:Two models of macroporous resins were selected by static adsorption-elution
test，purification technology of total flavonoids from H． lyrata with macroporous resin was optimized by dynamic
adsorption method． Ｒesult:D101 resin was adopted，optimized purification technology was as following: the
concentration of sample solution 1. 5 g·L －1 with pH 5，adsorption velocity 3 BV·h －1，sample volume 4 BV，then
eluted with 5 BV 50% ethanol at the speed of 2 BV·h －1，collected eluate． Under these conditions，yield of total
flavonoids was 47. 8% ． Conclusion:D101 macroporous resin could purify total flavonoids from H． lyrata
effectively．
［Key words］ Hemisteptia lyrata;total flavonoids;macroporous resin;purification
泥胡菜广泛分布于我国各地，具有清热解毒、消 肿祛瘀的作用，临床用于治疗痔漏、痈肿、疔疮、外伤
出血和骨折等症［1］。其主要化学成分为黄酮、甾醇
和木脂素等化合物［2-7］。目前对泥胡菜黄酮类化合
物的研究主要为成分分离和含量测定方面，有关其
纯化工艺的研究尚未见报道。近年利用大孔树脂技
术对总黄酮进行纯化取得了良好效果［8-10］。在前期
研究已优化了泥胡菜总黄酮提取工艺的基础上，本
实验选用大孔树脂对泥胡菜总黄酮进行纯化，并优
选其工艺条件，为泥胡菜总黄酮的进一步研究提供
参考。
·43·
第 19 卷第 12 期
2013 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 12
Jun．，2013
1 材料
UV-1800 型紫外分光光度计(日本岛津公司) ，
SFG-02B型电热恒温鼓风干燥箱(黄石市恒丰医疗
器械有限公司) ，AＲ2130 型电子天平(奥豪斯仪器
有限公司) ，ELIX5 型纯水制备系统(厦门精艺兴业
科技有限公司) ，QYC-200 型震荡仪(上海福玛实验
设备有限公司)。
泥胡菜采自福建省永春县，经福建中医药大学
中药鉴定教研室杨成梓副教授鉴定为菊科泥胡菜属
泥胡菜 Hemisteptia lyrata Bunge 的干燥全草。芦丁
对照品(中国药品生物制品检定所，批号 200707) ，
D101 和 AB-8 型大孔吸附树脂(安徽三星树脂科技
有限公司) ，试剂均为国产分析纯。
2 方法与结果
2. 1 标准曲线的绘制［11-12］ 称取芦丁对照品 10. 0
mg，用 60%乙醇溶解并定容于 50 mL 量瓶中，得对
照品贮备液。分别吸取该储备液 1，2，4，6，8 mL 置
于 25 mL量瓶中，用 60%乙醇溶液补至 12. 5 mL，加
5%亚硝酸钠试液 0. 75 mL 摇匀，放置 5 min，加
10%硝酸铝试液 0. 75 mL，摇匀，放置 5 min，加 1
mol·L －1氢氧化钠试液 10 mL，用 60%乙醇定容至刻
度，摇匀，放置 10 min。以 60%乙醇溶液为参比，于
510 nm处测定吸光度(A) ，以 A为纵坐标，质量浓度
为横坐标，得回归方程 Y = 11. 880X － 0. 027(r =
0. 999 8) ，线性范围 0. 008 ～ 0. 064 g·L －1。
2. 2 树脂预处理 取大孔树脂适量加 95%乙醇浸
泡 24 h，用 95%乙醇冲洗至流出液加水无白色浑
浊，水洗至无醇味;加 4% HCl 溶液浸泡 4 h，水洗至
中性;加 4%NaOH溶液浸泡 4 h，水洗至中性，备用。
2. 3 泥胡菜总黄酮提取液的制备 称取泥胡菜药
材 200 g，加 10 倍量 50%乙醇回流提取 2 次，每次
1. 5 h，过滤，合并提取液，减压浓缩至 100 mL，测得
总黄酮质量浓度 2. 0 g·L －1。
2. 4 大孔树脂型号筛选
2. 4. 1 静态吸附率的测定 选取 D101 和 AB-8 型
预处理的大孔吸附树脂各 1 g，分别置于 100 mL 锥
形瓶中，加入上述提取液 50 mL，在摇床上振荡吸附
24 h，过滤，测定滤液中总黄酮质量浓度，计算吸附
率分别为 83. 3%，56. 6%。
吸附率 =(C0V0 － C1V1)/C0V0 × 100%
式中 C0 为上样液质量浓度，C1 为吸附后剩余
溶液的质量浓度，V0 为上样体积，V1 为吸附后剩余
溶液体积。
2. 4. 2 静态洗脱率的测定 将 2. 4. 1 项下已达饱
和吸附的树脂过滤，分别置于 100 mL 锥形瓶中，加
70%乙醇 50 mL，在摇床上振荡洗脱 24 h，过滤，测
定滤液中总黄酮质量浓度，计算洗脱率分别为
94. 9%，89. 2%。
洗脱率 = C2V2 /(C0V0 － C1V1)× 100%
式中 C0 为上样液质量浓度，C1 为吸附后剩余
溶液的质量浓度，C2 为洗脱液质量浓度，V0 为上样
体积，V1 为吸附后剩余溶液体积，V2 为洗脱液体积。
由以上结果可知，D101 型大孔树脂对泥胡菜总
黄酮的吸附率和洗脱率均高于 AB-8 型大孔树脂，
故选择 D101 型大孔树脂进行纯化试验。
2. 5 纯化工艺优选
2. 5. 1 上样液质量浓度考察 称取 D101 型大孔
树脂 5 份，每份 2 g，湿法装柱(2. 2 cm × 5 cm，
1 BV =20 mL) ，分别加总黄酮质量浓度为 0. 5，1. 0，
1. 5，2. 0，2. 5 g·L －1的上样液各 60 mL，以 3 BV·h －1
的流速过柱进行动态吸附，收集流出液，用 3 BV 去
离子水洗脱，合并两部分流出液，测定总黄酮质量浓
度，计算吸附率分别 73. 3%，78. 0%，85. 1%，
64. 6%，53. 9%，故选用上样液质量浓度 1. 5 g·L －1。
2. 5. 2 上样流速考察 量取总黄酮质量浓度 1. 5
g·L －1的试液 60 mL，分别以 1，2，3，4，5 BV·h －1的流
速上样，收集流出液，用 3 BV去离子水洗脱，合并两
部分流出液，测定总黄酮质量浓度，计算吸附率分别
为 89. 8%，90. 1%，88. 7%，64. 4%，47. 5%。综合
时耗和吸附率考虑，选择上样流速 3 BV·h －1。
2. 5. 3 上样量考察 量取总黄酮质量浓度 1. 5 g·
L －1的试液，以 3 BV·h －1流速上样，每 10 mL 收集 1
份，测定每份流出液中总黄酮质量浓度，见图 1。结
果发现上样体积在 80 mL 内泄漏较少，而 ＞ 80 mL
出现明显泄漏，当上样体积达 170 mL 时，几乎达到
完全泄漏，故选上样体积 80 mL，即 8 BV。
图 1 泥胡菜总黄酮泄漏曲线
2. 5. 4 上样液 pH考察 量取总黄酮质量浓度 1. 5
g·L －1试液 80 mL，调 pH分别为 4，5，6，7，8，以 3 BV
·h －1流速上样，收集流出液，用 3 BV去离子水洗脱，
·53·
林珊，等:泥胡菜总黄酮大孔树脂纯化工艺优化
合并两部分流出液，测定总黄酮质量浓度，计算吸附
率分别为 86. 7%，89. 8%，79. 1%，64. 4%，47. 5%，
故选取上样液 pH 5。
2. 5. 5 乙醇体积分数考察 量取总黄酮质量浓度
1. 5 g·L －1的试液 80 mL，以 3 BV·h －1流速上样，用 3
BV去离子水冲洗，收集两部分流出液，测定总黄酮
质量浓度。分别用 5 BV 体积分数为 30%，40%，
50%，60%，70%，80%，90% 的乙醇溶液以 3 BV·
h －1流速洗脱，收集洗脱液，测定总黄酮质量浓度，计
算洗脱率分别为 58. 4%，72. 9%，92. 8%，77. 2%，
72. 1%，67. 3%，62. 0%，故选用 50%乙醇。
2. 5. 6 洗脱流速的考察 量取总黄酮质量浓度
1. 5 g·L －1的试液 80 mL，以 3 BV·h －1流速上样，用 3
BV去离子水冲洗，加 50%乙醇 5 BV分别以 1，2，3，
4 BV·h －1的速度洗脱，收集洗脱液，测定总黄酮质
量浓度，计算洗脱率分别为 86. 5%，92. 8%，
89. 1%，70. 7%，故选择洗脱流速 2 BV·h －1。
2. 5. 7 洗脱剂用量的考察 量取总黄酮质量浓度
1. 5 g·L －1的试液 80 mL，以 3 BV·h －1流速上样，用 3
BV去离子水冲洗，加 50%乙醇以 2 BV·h －1的速度
洗脱，直至洗脱液无色，收集流出液，每 20 mL 为 1
份。结果洗脱液体积为 1，2，3，4，5 BV时，测得流出
液中总黄酮质量浓度分别为 1. 31，1. 04，0. 67，
0. 33，0. 09 g·L －1，故选乙醇 5 BV。
2. 6 验证试验 按优选的纯化工艺平行制备 3 批
样品，依 2. 1 项下方法测定总黄酮含量，计算总黄酮
平均质量分数 47. 8%(n = 3，ＲSD 1. 15%) ，说明该
工艺稳定可靠。
3 讨论
样品液 pH 对化合物的吸附、分离效果的影响
较大。根据化合物结构的特点调整原液 pH，可达到
较好的吸附效果。一般情况下酸性物质易在酸性溶
液中被吸附，碱性物质易在碱性溶液中被吸附［13］。
在酸性条件下对泥胡菜总黄酮的吸附性能较好，这
可能与提取物呈弱酸性有关。
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［责任编辑 仝燕］
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第 19 卷第 12 期
2013 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 12
Jun．，2013