全 文 ：收稿日期:2011 － 03 － 16;修回日期:2011 － 05 － 13
基金项目:内蒙古自治区自然科学基金(2010MS1206)
作者简介:王晋(1964 －) ，男，内蒙古医学院附属人民医院药剂科主任药师。
通讯作者:罗素琴，教授，硕士研究生导师，E － mail:luosuqin1954@ sina． com 内蒙古医学院药学院，010059
阿尔泰狗娃花根部多糖含量的测定
王 晋1， 罗素琴2， 王来兵2， 于姝燕2， 孙正武2， 张 硕3
(1．内蒙古医学院附属人民医院 药剂科，内蒙古 呼和浩特 010020;
2．内蒙古医学院 药学院; 3．中国药科大学药学院)
摘 要:目的:测定狗娃花(根部)多糖的含量。方法:以葡萄糖为标准品，用苯酚 －硫酸法测定狗娃花(根
部)多糖的含量。结果:葡萄糖标准品在 498. 5nm 有最大吸收，回归方程为 A = 16. 9715c － 0. 08919(r =
0. 9995) ，精密度(RSD)为 1. 536%，多糖的稳定性(RSD)为 0. 223%，加样回收率为 98. 736%，狗娃花(根部)中
多糖含量为 0. 0168%。结论:此测定方法为化学法，所需仪器设备简单，操作方便，适用于狗娃花(根部)多糖含
量的测定，也为其他多糖含量的测定提供了参考。
关键词:狗娃花;多糖;苯酚 －硫酸法
中图分类号:R778． 2 文献标识码:A 论文编号:1004 － 2113(2011)03 － 0182 － 04
DETERMINATION OF POLYSACCHARIDE CONTENT OF
MONGOLIAN HERB HETEROPAPPUS ALTAICUS (THE ROOT)
WANG Jin， LUO Su － qin， WANG Lai － bing，et al．
(Department of Pharmacy，Affiliated People Hospital，Inner Mongolia Medical College，Hohhot 010020 China)
Abstract:Objective:To determine polysaccharide content of Heteropappus altaicus (the root)．
Method:By the phenol － sulfuric acid method，with glucose as standard substance，was used to deter-
mine polysaccharide content of Heteropappus altaicus． Results:The standard glucose at 498. 5nm has
the maximum absorption volume，the return equation is A = 16. 9715c － 0. 08919 (r = 0. 9995) ，pre-
cision (RSD)is 1． 536%，the stability of polysaccharide (RSD)is 0． 223%，and recovery percentage
is 98． 736%，the polysaccharide content of Heteropappus altaicus(the root)is 0． 0168% ． Conclusion:
The determination is a chemical method，the apparatus required are simple，easy to operate，which is
suitable for polysaccharide content determination of Heteropappus altaicus(the root) ，in addition it pro-
vides a reference for other polysaccharide content determination．
Key words:Heteropappus altaicus;polysaccharide;phenol － sulfuric acid method
阿尔泰狗娃花(Heteropappus altaicus (willd．)
Novopokr．)又名阿尔泰紫菀，蒙名巴嘎 －浩宁、尼
敦其其格、鲁格冲，为菊科植物狗娃花属阿尔泰狗
娃花(Heteropappus altaicus)的干燥头状花序［1］。
分布于内蒙古全区各地，资源十分丰富。其味甘、
苦，性凉、淡、涩轻，功能为杀虫、清热、解毒。主治
·281· Journal Of Inner Mongolia Medical College June 2011 Vol． 33 No． 3
DOI:10.16343/j.cnki.issn.2095-512x.2011.03.005
传染性热病、肝胆火旺、天花、麻疹、疱疹疮疖、血瘀
病、瘟病之功效［2］。根入中药，能润肺止咳，主治
肺虚咳嗽、咯血、慢性支气管炎、淋病、小便
不利［3］。
本文对阿尔泰狗娃花(根部)进行多糖的提取
和分离，用苯酚 －硫酸法对狗娃花多糖的含量进行
测定。苯酚 －硫酸法测定多糖的原理是依据糖经
浓硫酸处理后脱水产生糠醛或糠醛衍生物，再与苯
酚缩合生成橙黄色物质于 490nm处比色［4］。
1 实验材料
1． 1 药材、仪器、试剂
阿尔泰狗娃花(全草)药材购买于呼和浩特市
中蒙医院，经内蒙古医学院乔俊缠教授鉴定。取其
根部，用粉碎机粉碎成粉末状备用。
DHT型搅拌恒温电热套，双光束紫外可见分
光光度计，循环水式真空泵，电子天平，干燥箱，恒
温水浴锅，旋转蒸发仪。
葡萄糖，苯酚，浓硫酸，95%乙醇，无水乙醇，氯
仿，正丁醇，丙酮，乙醚，所有试剂为分析纯。
2 实验方法
2． 1 线性关系考察
2． 1． 1 标准溶液的配制 精确称取干燥至恒重的
葡萄糖 200mg，加入蒸馏水定容于 100mL 容量瓶
中，再精密量取 2. 0mL溶液，定容于 100mL容量瓶
中，摇匀，得到 0. 04mg /mL葡萄糖标准溶液，备用。
2． 1． 2 5%苯酚溶液的配制 精确称取苯酚 5g，
加入蒸馏水定容于 100mL 容量瓶中，低温避光放
置，备用。
2． 1． 3 标准曲线的测定 分别精确吸取葡萄糖标
准溶液 0、0. 25、0. 5、1. 0、1. 5、2. 0mL于 6 个不同的
10mL刻度试管中，再用吸量管依次加入蒸馏水 2、
1. 75、1. 5、1. 0、0. 5、0mL，摇匀，分别加入 5%苯酚
溶液 1. 0mL，摇匀，再加入 5. 0mL 浓硫酸，充分摇
匀，放置至室温，在恒温水浴箱中沸水浴 20min，冷
却至室温。
在 200 ～ 800nm之间扫描，结果在 489. 5nm 处
有最大吸光度。得到回归方程 A = 0. 33943V －
0. 08919(r = 0. 9995) (图 1) ，经整理得回归方程 A
=16. 9715c － 0. 08919(r = 0. 9995) (图 2)。各组
体积、浓度、吸光度的关系见表 1。
图 1 葡萄糖标准曲线(A － V)
Fig． 1 Glucose Standard Curve(A － V)
图 2 葡萄糖标准曲线(A － c)
Fig． 2 Glucose Standard Curve(A － c)
表 1 各组体积、浓度、吸光度
Tab． 1 Volume，density and absorbance of different groups
序 号 1 2 3 4 5
体积 V(mL) 0． 25 0． 5 1 1． 5 2
浓度 c(mg /mL) 0． 005 0． 01 0． 02 0． 03 0． 04
吸光度 A －0． 007 0． 081 0． 26 0． 408 0． 594
2． 2 多糖的提取与分离
准确称取 15g 狗娃花(根部)粉末，加入 150mL
95%乙醇浸泡 48h 后，移入 500mL 圆底烧瓶中，在
100V的电热套条件下回流 2次，3h /次，抽滤。
残渣中加入 150mL 蒸馏水在 100V 的电热套
条件下微沸回流 3h，抽滤，弃渣合并滤液，将合并
后的滤液在旋转蒸发仪上加热浓缩，得到狗娃花
(根部)的提取液。
在狗娃花(根部)的提取液中加入 4 倍量的无
水乙醇，醇沉，离心 2 次，每次 30min(5000r /min) ，
抽滤，35℃下干燥得到粗多糖。
将干燥后的粗多糖中加入适量蒸馏水溶解，用
Sevag法去蛋白［5］(加入 0. 2 倍多糖溶液体积的氯
仿和 0. 04 倍体积的正丁醇混合振荡 30min 后，在
·381·内蒙古医学院学报 2011 年 6 月 第 33 卷 第 3 期
分液漏斗中静置并进行分离，直至氯仿与水的界面
无沉淀为止，重复处理 2 ～ 3 次才能有效的去除多
糖中的蛋白质) ，上清液用无水乙醇，醇沉，离心
30min，抽滤。
对于含萜类、甾体、油脂等脂类成分较多的药
材则应该视具体情况用丙酮、乙醚、乙醇等有机溶
剂进行处理，其目的是脱脂［6］，同时也使糖苷酶失
去活性。
残渣中加入丙酮搅拌，离心 30min，抽滤，残渣
中加入乙醚搅拌，离心 30min，抽滤，在 35℃的干燥
箱条件下烘干残渣，得到狗娃花(根部)多糖。
将提取的 8． 9mg干燥多糖加入适量的蒸馏水
溶解，转移至 50mL 容量瓶中，摇匀，定容，得到均
匀的多糖溶液。
2． 3 精密度实验
分别量取 2． 0mL葡萄糖标准溶液 5 份于 5 个
不同的 10mL刻度试管内，用苯酚 －硫酸法显色。
在 489． 5nm下，测定多糖溶液的吸光度(n = 5) ，
RSD =1. 536%，表明精密度良好(表 2)。
表 2 葡萄糖标准溶液的精密度
Tab． 2 Precision of Glucose Standard Solution
序号 1 2 3 4 5 RSD(%)
吸光度 A 0． 729 0． 730 0． 708 0． 724 0． 738 1． 536
2． 4 稳定性实验
对同一多糖溶液每隔 20min 测定其吸光度(n
= 5) ，RSD =0. 223%，结果表明相对稳定(表 3)。
表 3 多糖溶液的稳定性
Tab． 3 Stability of Polysaccharide Solution
序号 1 2 3 4 5 RSD(%)
时间(min) 20 40 60 80 100
吸光度 A 0． 773 0． 776 0． 777 0． 777 0． 777
0． 223
2． 5 加样回收率实验
分别量取 2. 0mL多糖溶液 5 份于 5 个不同的
10mL 刻度试管内，用苯酚 － 硫酸法显色。在
489. 5nm下，测定多糖溶液的吸光度(n = 5)。
再分别量取 2． 0mL 葡萄糖标准溶液 5 份于 5
个不同的 10mL 刻度试管内，用苯酚 － 硫酸法显
色。在 489. 5nm下，测定多糖溶液的吸光度(n =
5)。
最后在另外 5 个 10mL 刻度试管中各加入
1. 0mL多糖溶液和 1． 0mL 葡萄糖标准溶液，混匀
用苯酚 － 硫酸法显色。在 489. 5nm 下，测定其吸
光度(n = 5)。
通过标准曲线，并经过换算得到加样前多糖
量、加入葡萄糖量、加样后的糖量。加样回收率结
果见表 4。加样回收率公式如下:
加样回收率(%)=(加样后的糖量 －加样前
多糖量)/加入葡萄糖量 × 100%
表 4 加样回收率结果
Tab． 4 Spiked sample recovery rate
1 2 3 4 5
多
糖
吸光度 A1 0． 765 0． 791 0． 776 0． 738 0． 759
已知量(mg) 0． 0503 0． 0519 0． 0510 0． 04874 0． 04998
加样前多糖量(mg) 0． 02515 0． 02595 0． 0255 0． 02437 0． 02499
葡
萄
糖
吸光度 A 20． 729 0． 730 0． 708 0． 724 0． 738
葡萄糖量(mg) 0． 0482 0． 0483 0． 0470 0． 0479 0． 0487
加入葡萄糖量(mg) 0． 0241 0． 02415 0． 0235 0． 02395 0． 02435
加
样
后
加样后的吸光度 A 0． 740 0． 745 0． 737 0． 724 0． 756
加样后的糖量(mg) 0． 0489 0． 0492 0． 0487 0． 0479 0． 0498
加样回收率(%) 98． 55 96． 27 98． 72 98． 25 101． 89
平均加样回收率(%) 98． 736
RSD(%) 2． 045
·481· Journal Of Inner Mongolia Medical College June 2011 Vol． 33 No． 3
2． 6 多糖的含量测定
准确称取提取得到的多糖 8． 9mg 溶解，定容
至 50mL，吸取 1． 0mL 于刻度试管，测定提取液中
多糖的含量。测定结果见表 5。
表 5 多糖含量测定结果
Tab． 5 Determination of polysaccharide
样品质
量(g)
提取到的多
糖量(mg) 吸光度 A
多糖溶液浓
度(mg /mL)
多糖总
量(mg)
多糖含
量(%)
15 8． 9 0． 766 0． 0504 2． 52 0． 0168
3 讨论
由于药材根部的木质化程度较高，为了更好的
提取、分离和有利于加热回流的搅拌，应将药材粉
末置于适量 95%乙醇中浸泡数天［7］。
为了尽可能多的提取药材根部多糖，应进行多
次水提回流操作。
合并后的滤液加热浓缩时，使用小型旋转蒸发
仪进行浓缩优于使用传统的蒸馏方式，原因是前者
不仅方便、快捷，而且多糖提取液黏度高，使用后者
后部分粗多糖容易粘在沸石上，不易处理。
配置葡萄糖标准溶液、5%苯酚溶液、供试品多
糖溶液时，所用固体粉末应干燥并使其温度在室温
下恒定后，再用电子天平精确称取。另外所用苯酚
固体中不应有粉红色氧化物，所配的 5%苯酚溶液
不稳定，应注意低温、避光放置。
显色时，要先将显色后的溶液充分摇匀，待其
温度降至室温，溶液均匀、稳定后(不要用冷水浴
降温，原因是温度骤降不利于多糖的充分显色，导
致溶液不够稳定，从而影响测定结果) ，再进行沸
水浴，冷却至室温，再测定其吸光度。
参考文献
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［2］中国医学百科全书编委会．中国医学百科全书一蒙医
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［6］Jann B，S，Shashkov A，Kochanowski H，et al． Structure of
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NMR investigation［J］． Carbohydr Research，1994;264
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［7］王晋，刘乐乐，罗素琴，等．不同条件对锁阳多糖提取率
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(责任编辑:程立新)
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