全 文 ：收稿日期:2003-08-21
基金项目:吉林省延边朝鲜族科技发展计划项目(YBKJ027)
珍珠梅提取物对 DEN 所致大鼠肝癌前病变
抑制作用的研究
张学武 ,张学斌2
(1延边大学医学院生物化学与分子生物学教研室 ,吉林 延吉　133000;
2 吉林大学中日联谊医院 ,吉林 长春　130031)
　　摘要:目的:研究珍珠梅提取物对二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine , DEN)致大鼠肝脏癌前病变的抑制作用。方法:给动物 ig
给药 ,用 DEN 制备大鼠肝脏癌前病变模型;用免疫组织化学 S-P法检测大鼠肝脏谷胱甘肽 S-转移酶(GST-P)的表达水平 , 用比
色分析法检测血清 、肝匀浆 、线粒体SOD、GSH-Px 的活性及MDA含量的变化。结果:珍珠梅提取物能显著降低DEN致癌前病变
大鼠肝脏GST-P的表达 , 升高血清 、肝匀浆 、肝线粒体SOD、GSH-Px 的活性 ,降低 MDA的含量。结论:珍珠梅提取物对 DEN致大
鼠肝脏癌变有抑制作用。
关键词:珍珠梅;肝肿瘤 化学诱导;二乙基亚硝胺 毒性
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1005-9903(2004)04-0033-03
Inhibitory Effect of Sorbaria Sorbifolia Extract on DEN-induced Precancerous Hepatic in Rats
ZHANG Xue-wu , ZHANGXue-bin2
(1 Department of Biochemistry &Molecular Biology ,Yanbian University College of Medicine , Yanji 133000 , China;
2 China-Japan Union Hospital , Jilin University , Changchan 130031 , China)
Abstract:Objective:To investigate the inhibitory effect of Sorbaria Sorbifolia extract on diethylnitrosamine (DEN)
induced precancerous hepatic in rats.Methods:Sorbaria Sorbifolia was administrated ig.to rats with DEN-induced
precarcinogenesis, Then using the immunohistochemical S-P method , the p53 and bcl-2 proteins were detected.The
activities of superoxide dismutase(SOD), glutathione peroxidase (GSH-Px), and the concentrations of malondialdehyde
(MDA)were investigated by colorimetric method.Results:Sorbaria Sorbifolia significantly decreased the expression of
GST-P , and increased the SOD , GSH-Px and decreased MDA level in serum , liver cell homogenate and liver cell
mitochondria.Conclusion:Sorbaria Sorbifolia extract has inhibitory effect on DEN-induced precancerous hepatic in rats.
Key words:Sorbaria Sorbifolia;liver neoplasm chemically induced;diethylnitrosamine toxicity
　　珍珠梅(Sorbaria Sorbifolia)属蔷薇科植物 ,又称
“山高粱” 、“八木条” ,广泛分布于云南 、贵州 、四川 、
湖北 、甘肃 、宁夏及东北 ,有活血化瘀 ,消肿止痛 ,治
骨折及跌打损伤的作用。从中分离出胡萝卜苷 、甲
基黄酮类化合物 、大黄素 、原儿茶酸等化学成分[ 1] ,
其乙酸乙酯提取物能使四氯化碳肝损伤大鼠血清丙
氨酸转氨酶(ALT)活性降低 、肝线粒体琥珀酸脱氢
酶活性升高 ,抑制肝匀浆脂质过氧化物的生成[ 2-3] ,
对小鼠 S180肉瘤生长有抑制作用[ 4] 。本实验研究珍
珠梅乙酸乙酯提取物对 DEN致癌前病变大鼠肝脏
GST-P 表达的影响 ,以及 SOD 、GSH-Px 活性及 MDA
含量的变化 ,旨在阐明珍珠梅的抗肿瘤作用及可能
机理。
1　材料与方法
1.1　珍珠梅生物活性成分的制备　珍珠梅茎 、叶 、
花 ,采集于吉林省延吉市市郊 ,经延边大学药学院刘
永镇教授鉴定为正品 。乙酸乙酯提取物:乙酸乙酯
分 3次浸泡珍珠梅 ,温度为 40℃,每次 12h ,合并三
次滤液 ,用旋转蒸发器减压浓缩 ,获珍珠梅乙酸乙酯
提取物浸膏(1g 珍珠梅有效成分相当于 33.3g 生
药)。
1.2　试剂　DEN 、乙酰氨基芴(2-acetylaminofluorene ,
AAF)系Sigma公司产品;GST-P 及S-P 试剂盒均为福
建迈新生物技术开发公司产品;SOD 、MDA 、GSH-Px
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第 10卷第 4 期
2004年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.10 , No.4
Aug., 2004
DOI :10.13422/j.cnki.syf jx.2004.04.014
试剂盒为南京建成生物工程研究所产品;其他试剂
均为国产分析纯 。
1.3　动物　Wistar 雄性大鼠 ,体重为 180 ～ 200g ,由
延边大学医学院动物科提供。
1.4　造模 、给药方法及检测指标　取 36 只Wistar
雄性大鼠随机分为正常组 、模型组 、治疗组 3 个组。
按改良的 Solt-Farber[ 5] 氏方法制作大鼠肝脏癌前病
变模型。正常组腹腔注射生理盐水 、模型组和给药
组腹腔注射 DEN ,剂量为 200mg kg , 2w 后 ,模型组和
给药组在饲料中添加 0.008%AAF , 同时给药组按
6.6g kg剂量每天连续灌胃 。注射 DEN 3w 后进行脏
脏部分切除术 。3 个组的大鼠共饲养 8w 后全部处
死 ,采取血液并分离血清 ,进行生化指标的测定。立
即称取 1.0g新鲜肝组织放入置冰冷的匀浆介质(pH
= 7.5 , 0.25mol L 蔗 糖 , 0.005mol L Tris-HCl ,
0.001mol L EDTA)的玻璃匀浆器中 , 在冰浴中制成
100g L匀浆 ,在 2000r min离心 10min ,取上清液 ,为
肝匀浆 , 用低温超速离心机以 16000r min 离心
20min ,取其沉淀部分 ,即为线粒体 。再加入匀浆介
质(pH =7.5 , 0.25mol L 蔗糖 , 0.005mol L Tris-HCl ,
0.001mol L EDTA)2ml ,用超声波打碎线粒体膜性结
构 ,制成线粒体悬浮液 ,进行生化指标的测定。剩余
肝脏标本用中性福尔马林固定 ,石腊包埋 , 5μm 连续
切片。用免疫组织化学染色方法 ,按 S-P 试剂盒说
明书检测GST-P 表达水平 。
1.5　GST-P 免疫组织化学检测　按 S-P 法进行。
GST-P 阳性灶的定量分析用 CAMIS 图像分析仪(日
本产)测量直径在 0.1mm 以上的GST-P 阳性灶数量
(个 cm2)和面积(mm2 cm2)。
1.6　统计学处理　应用 SPSS-10.0统计软件进行方
差分析 、卡方检验。
2　结果
2.1　珍珠梅对大鼠肝脏癌前病变 GST-P 表达水平
的定量分析 　与模型组比较 , 正常组 、治疗组的
GST-P 阳性灶数量 、面积显著低于模型组(P <
0.05)。见表 1。
表 1　珍珠梅对肝脏癌前病变大鼠 GST-P 表达的影响
分　组 n GST-P 阳性(%)
阳性灶数量
(个 cm2)
阳性灶面积
(mm2 cm2)
正常组 21 阴性 0　　　 0　　　
模型组 15 13(86.7%) 18±4.3 2.61±1.60
治疗组 21 6(28.6%)＊ 4±2.7＊ 0.87±0.42＊
　　注:与模型组比较 , ＊P<0.05
2.2　珍珠梅对大鼠肝癌前病变血清 、肝匀浆 、肝线
粒体 SOD 、MDA 、GSH-Px 的影响　珍珠梅提取物能
显著升高 DEN 所致肝脏癌前病变大鼠血清 、肝匀
浆 、肝线粒体SOD 、GSH-Px 的活性 ,降低MDA的含量
(P <0.05)。见表 2 、3 、4。
表 2　珍珠梅对肝脏癌前病变大鼠 SOD的影响( x ±s)
分　组 n 血清(NU ml)
肝匀浆
(NU mgpro ml)
肝线粒体
(NU mgpro ml)
正常组 21 131.4±38.9＊ 72.9±39.8＊ 153.4±56.1＊
模型组 15 92.6±42.7 49.8±14.0 115.3±31.9
治疗组 21 126.7±27.3＊ 61.3± 6.7＊ 144.1±45.4＊
表 3　珍珠梅对肝脏癌前病变大鼠MDA的影响( x ±s)
分　组 n 血清(nmol L)
肝匀浆
(nmol mgpro)
肝线粒体
(nmol mgpro)
正常组 21 0.8±0.1＊ 1.0±0.2＊ 1.2±0.3＊
模型组 15 1.1±0.1 1.5±0.1 1.6±0.2
治疗组 21 0.8±0.1＊ 0.7±0.3＊ 0.9±0.4＊
表 4　珍珠梅对肝脏癌前病变大鼠 GSH-Px 的影响( x ±s)
分　组 n 血清(mg L)
肝匀浆
(U mg)
肝线粒体
(U mg)
正常组 21 28.6±5.69＊ 35.7±9.15＊ 35.1±10.7＊
模型组 15 16.2±3.69 16.2±5.69 15.4±1.9
治疗组 21 26.8±6.17＊ 31.4±6.55＊ 36.2±16.4＊
3　讨论
大鼠胎盘型谷胱甘肽 S-转移酶(GST-P)可以作
为大鼠肝脏癌前病变和肝癌的极为敏感的标志[ 6] ,
GST-P 阳性灶的检测 ,目前已经成为检测环境致癌
物的敏感的体内实验法 。本实验结果表明 ,大鼠给
予致癌剂 DEN和 AAF ,并进行部分肝脏切除术 ,形
成再生肝 ,以促进致癌过程的模型组中 15例中的 13
例大鼠肝脏呈 GST-P 阳性。然而 ,在同时给予珍珠
梅提取物的治疗组 21例中仅有 6例GST-P 呈阳性 ,
且阳性灶的平均数量和面积均显著小于模型组 。
现已证明 ,在癌变的诱发和促发阶段均有自由
基参与 。各种诱癌因素和促癌因素通过各自的转化
途径 ,终使自由基水平增加 , 从而参与癌变过程 。
SOD 、GSH-Px 是属于体内消除自由基和脂质过氧化
物的酶类 ,与体内其他酶类及抗氧化剂组成一个自
由基的防御系统 ,以清除过多的自由基 , MDA是自
由基代谢的产物 。本实验中对照组 SOD 、GSH-Px 活
性均显著低于实验组 ,而 MDA 含量显著高于实验
组 。说明珍珠梅可以通过清除自由基抑制肿瘤的生
长 ,这可能是珍珠梅抑制肿瘤生长的一个重要机制 。
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第 10卷第 4 期
2004年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.10 , No.4
Aug., 2004
参考文献:
[ 1] 　李孝栋 ,吴立军 , 臧晓燕 ,等.东北珍珠梅化学成分的研
究[ J] .中国中药杂志 , 2002 , 27(11):841.
[ 2] 　金海玲 , 张学武 ,赵红 ,等.珍珠梅对四氯化碳所致急性
肝损伤的保护作用[ J] .世界华人消化杂志 , 2001 , 10
(3):783.
[ 3] 　张学武 , 金海玲 ,赵红 ,等.珍珠梅对四氯化碳致肝损伤
大鼠自由基的影响[ J] .中国中医药科技 , 2001 , (6):
373.
[ 4] 　金海玲 , 张学武 ,朴春梅 , 等.珍珠梅提取物对小鼠 S180
肉瘤的抑制作用[ J] .延边大学医学报 , 2002 , 11(1):14.
[ 5] 　Yin Z , Sato K , Tsuda H , et al.Change in activities of uridene
diphate-glucuronyl transferases during chemical hepatocarcino-
gensis[ J] .Gann(Jpn J Cancer Rea), 1982 , 73:239.
[ 6] 　Sato K.Glutathione transferases as markers of preneoplasia
and neoplasis[ J] .Advances in Cancer Res , 1989 , 52:205.
[ 7] 　沈明花 , 尹宗柱.草苁蓉提取物对二乙基亚硝胺诱发的
肝癌前病变大鼠抗氧化活力的影响[ J] .中国中药杂
志 , 1999 , 24(12):746.
收稿日期:2004-01-02
基金项目:国家重点基础研究发展规划项目(1999054403)
复方丹参方对肾上腺素血瘀模型大鼠血小板
粘聚性及 TXB2 、6-Keto-PGF1α的影响
刘　婷1 ,秦彩玲1 ,张　毅1 ,杨　佳1 ,孙有富1 ,张淑运1 ,张伯礼2
(1 中国中医研究院中药研究所 ,北京　100700;2 天津中医药大学 ,天津　300193)
　　摘要:目的:研究复方丹参方对肾上腺素血瘀模型大鼠血小板粘聚性及 TXB2 、6-Keto-PGF1α含量的影响。方法:采用皮下注
射肾上腺素加冰水冷浴法造大鼠血瘀模型 ,观察复方丹参方对血小板粘聚性及 TXB2 、6-Keto-PGF1α含量的影响。结果:大鼠肾
上腺素血瘀模型组与正常对照组比较 ,血浆血小板聚集性 、粘附性均显著升高;复方丹参方对肾上腺素血瘀模型大鼠血小板粘
聚性升高有明显抑制作用 ,对血浆中 TXB2 及血浆中 6-Keto-PGF1α、腹主动脉组织 6-Keto-PGF1α均有明显升高的作用 , 对 TXB2 6-
Keto-PGF1α无明显影响。结论:此血瘀模型复制成功 ,推测其升高血小板粘聚性的机理与 TXB2-PGI2 系统无明显关系。复方丹
参方对肾上腺素血瘀模型大鼠血小板粘聚性升高有明显抑制作用。
关键词:复方丹参方;肾上腺素;血小板聚集性;血小板粘附性;TXB2
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1005-9903(2004)04-0029-04
Effects of Fufangdanshenfang on Platelet Adhesion ,Aggregation and
TXB2 、6-Keto-PGF1α in Blood Stasis Syndromes Model Rats
LIU Ting
1 , QIN Cai-ling1 , ZHANGYing1 ,YANGJia1 ,SUN You-fu1 , ZHANG Shu-yun1 , ZHANG Bo-li 2
(1 Institute of Chinese Materia Medica , China Academy of Traditional Chinese Medicine ,Beijing ,100700 , China;
2 Tianjing University of Traditional Chinese Medicine , Tianjing ,300193 , China)
Abstract:Ojbect:To study the effects of Fufangdanshenfang on Platelet Adhesion ,Aggregation and TXB2 、6-Keto-
PGF1α in Blood Stasis Syndromes Model Rats.Methods:The rat blood stasis syndromes model was caused by subcutaneous
injection of Adr and ice-bathing.We studied the effects of Fufangdanshenfang on platelet aggregation , adhesion ,TXB2 and
6-Keto-PGF1α in blood stasis syndromes model rats.Results:The results indicated that compared with normal rats , the
platelet aggregation and platelet adhesion were markedly increased.Fufangdancanfang was antagonized the increase of
platelet adhesion and ADP-induced platelet aggregation in model rats.Fufangdancanfang markedly increased the level of
TXB2 、6-Keto-PGF1α in plasma and the content of abdominal aorta tissue 6-Keto-PGF1α in model rats ,but had little effect
on the proportion of TXB2 6-Keto-PGF1α.Conclusion:The results suggested that rat blood stasis syndromes model of Adr
was caused successfully , and we inferred that the effects on the platelet aggregation and platelet adhesion might not be
connected with the system TXB2-PGI2.Fufangdancanfang was antagonized the increase of platelet adhesion and ADP-
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第 10卷第 4 期
2004年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.10 , No.4
Aug., 2004