全 文 ：珍珠梅活性成分的提取分离及体内抑瘤作用的研究
张学武1　张玉梅2　关丽萍3　权迎春3　孙　权1
(1.延边大学医学院 ,吉林延吉 133000;2.吉林省白城市中心医院 ,吉林白城 137000;3.延边大学药学院 ,
吉林延吉 133000)
　　摘要　目的:对珍珠梅进行化学成分和体内抑瘤作用的研究。 方法:用硅胶柱色谱法对珍珠梅乙酸乙酯提取
物进行分离纯化 ,通过理化常数和光谱分析鉴定化合物结构;并按照标准方法给 36 只小鼠接种 S180肉瘤后 ,灌胃给
予珍珠梅乙酸乙酯提取物10 d ,观察瘤重及体重 , 检测NK细胞活性及血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-2(IL-2)的
含量 。结果:从珍珠梅乙酸乙酯提取物中分离 3 种化合物 ,分别鉴定为:5 , 2′, 4′-三羟基-6 , 7 , 5′-三甲氧基黄酮(Ⅰ),
丁二酸(Ⅱ),对羟基苯甲酸(Ⅲ);实验组与对照组瘤重有显著性差异(P<0.05),实验组与对照组体重变化无显著性
差异(P>0.05), 实验组脾细胞 NK 细胞活性及血清 TNF-α、IL-2 的含量明显高于对照组(P<0.05 或 P<0.01)。 结
论:化合物Ⅰ 、Ⅱ为首次从珍珠梅中获得。珍珠梅乙酸乙酯提取物可以改善 S180荷瘤小鼠免疫功能 , 增强机体抗肿
瘤能力。
关键词　珍珠梅　S180肉瘤　抑瘤
　　珍珠梅(Sorbaria sorbifolia)属蔷薇科植物 ,又称
“山高梁” 、“八木条” ,广泛分布于云南 、贵州 、四川 、
湖北 、甘肃 、宁夏及东北 ,有活血化瘀 ,消肿止痛 ,治
骨折及跌打损伤的作用 ,其主要成分为黄酮类化合
物〔1〕 。20世纪 80年代初期国内学者研究发现珍珠
梅水提物有抗缺氧作用〔2〕 。笔者曾报道珍珠梅乙酸
乙酯提取物对亚硝酸钠和四氯化碳致急性肝损伤具
有保护作用〔3〕。本次实验对珍珠梅化学成分及药理
作用进行了初步研究 ,从珍珠梅中分离出 3种化合
物 ,其中 5 ,2′,4′-三羟基-6 ,7 ,5′-三甲氧基黄酮 、丁二
酸为首次从珍珠梅中获得 ,并对珍珠梅的有效部位
进行了体内抑瘤实验 。
1 　仪器与试药
仪器:XRC-1型显微熔点测定仪(温度未校正);
Perkin-Elmer 577 红外光谱仪(KBr 压片);UV-210A
紫外光谱仪;VG-7070H 型质谱仪;JEOL-300 型核磁
共振仪;γ-放免计数仪。薄层色谱硅胶GF254和柱层
色谱硅胶 H 为青岛海洋化工厂产品;TNF-α、IL-2试
剂盒为北京北方生物制品技术研究所产品 ,其他试
剂均为国产分析纯。S180细胞株由吉林大学预防医
学研究所提供。昆明种小鼠 ,体重为 18 ～ 22 g , 雄
性 ,由延边大学医学院动物科提供 。
2 　方法与结果
2.1 　提取与分离　珍珠梅采自吉林省延吉市市
郊 ,并经延边大学药学院刘永镇教授鉴定。晒干的
珍珠梅茎 、叶 、花 15 kg ,粉碎后 ,用乙酸乙酯回流提
取3次 ,每次 2 h ,提取液减压浓缩 ,得稠浸膏(乙酸
乙酯提取物)450 g 。浸膏用少量乙酸乙酯溶解 ,拌
入450 g 硅胶 ,干燥后上硅胶柱 ,反复分离 ,氯仿-甲
醇梯度洗脱及重结晶 ,得化合物 Ⅰ ～ Ⅲ。
2.2 　结构鉴定　化合物 Ⅰ:黄色粉末;C18H16O8;mp
300℃以上 , 盐酸-镁粉反应阳性 。UVλMeOHmax nm:337 ,
274 ,263;IR(KBr)cm-1:3415(-OH),3200(-OH),1640
(羰基),1605(芳环)。EI-MS m/ z:360(M+ ,100),345
(90),331(19), 317(13), 314(20), 181(34), 167(7),
165(25), 153(29)。1HNMR(DMSO-d6)δ:3.72(3H , s ,-
OCH3),3.74(3H , s ,-OCH3),3.73(3H , s ,-OCH3),6.07
(1H , s ,3′-H), 6.45(1H , s , 6 -H), 6.14(1H , s , 3-H),
10.02(1H ,br.s ,-OH),10.44(1H ,br.s ,-OH)。13CNMR
(DMSO-d6)δ:57.0(-OCH3), 57.1(-OCH3), 56.3(-
OCH3), 162.6(C-2), 98.6(C-3), 184.6(C-4), 153.2
(C-5),129.7(C-6),159.1(C-7),95.7(C-8), 153.7(C-
9),105.3(C-10),107.3(C-1′),152.3(C-2′),104.8(C-
3′),144.7(C-4′),142.1(C-5′),111.9(C-6′)。分析以
上数据确定为 5 , 2′,4′-三羟基-6 , 7 , 5′-三甲氧基黄
酮 。
化合物 Ⅱ:白色方晶;C4H6O4 ,mp 181 ～ 183℃。
EI-MS m/ z:118(M+ , 1.1), 101(12.6), 100(35), 74
(99.9), 73(17.3), 56(35.5), 55(100), 46(12.3), 45
(93.7)。1HNMR(DM-SO-d6)δ:11.93(2H , br.s ,-
COOH),2.43(4H , s ,-CH2CH2)。13CNMR(DMSO-d6)δ:
173.1(-COOH),28.6(-CH2)。经与文献〔4〕对照 ,确定
为丁二酸。
化合物 Ⅲ:无色方晶;C7H6O4;mp 212 ～ 213℃,
IR(KBr)cm-1:3415(OH), 3200(OH), 1640(羰基),
1605(芳环)。EI-MS m/z:138(M+ ,18), 121(15), 108
(20),93(20), 91(75)。1HNMR(DMSO-d6)δ:12.5(1H ,
br.s ,-OH), 10.3(1H , br.s ,-OH), 6.91(2H , d , H-3),
·36· 中药材第 27 卷第 1期 2004年 1 月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2004.01.020
6.91(2H , d , H-5), 7.93(2H , d ,H-2), 7.93(2H , d , H-
6)。13CNMR(DMSO-d6)δ:131.6(C-2), 115.8(C-3),
161.6(C-4),115.1(C-5), 131.6(C-6),172.2(-COOH)
.经与文献〔5〕对照 ,确定为对羟基苯甲酸。
2.3 　体内抑瘤实验
2.3.1 　造模方法:取 36只小鼠 ,随机分成 3组:实
验Ⅰ组 、实验 Ⅱ组 、对照组 ,每组 12只 ,在无菌条件
下 ,取传代第 9 d 的 S180肉瘤小鼠腹水 ,用生理盐水
以1∶3比例稀释 ,给每只小鼠右腋窝部皮下注射 0.2
ml ,相当于 2×105 瘤细胞/只小鼠 。对照组每天灌
胃生理盐水 10 ml/kg ,实验Ⅰ 、Ⅱ组每天分别灌胃珍
珠梅乙酸乙酯提取物 16.7 、8.4 g/kg ,连续 10 d。实
验期间让动物自由进食和饮水 。
2.3.2 　检测指标:在动物荷瘤第 11 d ,将小鼠称
重 ,眼球取血并分离血清 ,测定 TNF-α、IL-2的含量 ,
常规制备脾细胞悬浮液 ,用 LDH 释放法〔6〕测定 NK
细胞活性 ,根据动物荷瘤第 1 d与第 11 d体重之差
计算各组动物平均体重变化幅度。肿瘤生长抑制率
采用下列公式计算:
抑制率=对照组平均体重-实验组平均体重对照组平均体重 ×100%
2.3.3 　统计学处理:数据以 x ±s 表示 , 应用
SPSS10.0统计软件进行方差分析 。
2.3.4 　对小鼠 S180肉瘤的抑制率:从表 1中可以看
出 ,实验 Ⅰ组 、实验 Ⅱ组的小鼠瘤重明显低于对照
组 ,其抑瘤率分别达 46%、57%,而实验组间无显著
性差异。如表 2所示:至动物荷瘤第 11 d ,各组荷瘤
小鼠体重增重变化无显著性差异(P>0.05)。
　Tab 1　　　　Tumor weight of mice inoculated
sarcoearcinoma 180
Group Number
tumor weight( x±s) rate of inhibition(%)
testⅠ 11 1.49±0.92＊ 46
testⅡ 11 0.93±0.31＊＊ 57
control 12 2.75±1.27
　　＊P<0.05, ＊＊P<0.01 vs control group
　Tab 2　　　　Body weight of mice inoculated
sarcoearcinoma 180
组别 荷瘤第 1天(g) 荷瘤第 11 天(g) 体重增加(g)
testⅠ 22.1±0.5 29.4±2.8 5.1±2.3
testⅡ 22.8±0.8 27.8±3.4 4.3±1.9
control 22.6±0.6 28.3±1.1 4.6±1.2
2.3.5 　对小鼠 S180肉瘤NK细胞活性 、TNF-α及 IL-
2的影响:由表 3可知 ,实验 Ⅰ组 、实验 Ⅱ组的脾细
胞NK细胞活性及血清 TNF-α、IL-2含量明显高于对
照组(P<0.05或 P<0.01)。
　Tab 3　　　The activities of NK cell and the
contents of TNF-α, IL-2 in serum( x±s)
group n activity of NK cell(%) TNF-α(ng/ml) IL-2(U)
testⅠ 11 34.5±10.2＊＊ 2.36±0.32＊ 58.2±12.5＊
testⅡ 11 33.2±11.3＊＊ 2.52±0.26＊ 65.1±15.1＊
control 12 21.1±9.2 0.89±0.31 28.1±9.53
　　Compared with cont rol group , ＊P<0.05 , ＊＊P<0.01
3 　讨论
本实验从珍珠梅乙酸乙酯提取物中分离出 3种
新的化合物 ,其中 2种为首次分离得到。通过观察
不同浓度的珍珠梅乙酸乙酯提取物对 S180肉瘤的抑
制作用 ,结果显示大 、小剂量组的抑制作用均超过
45%,表明珍珠梅在动物体内有较强的抑瘤作用。
现代研究表明:NK细胞是机体的重要免疫监视
细胞 ,在机体第一线防御机制中起主要功能 ,可直接
杀伤多种肿瘤细胞等 ,并参与机体对免疫反应的调
节〔7〕 。 IL-2主要由 CD4+和CD8+T 淋巴细胞产生 ,可
诱导 T 杀伤细胞 ,参与肿瘤免疫治疗的 TH 、Tc 、T5 都
是 IL-2的反应细胞 , IL-2能直接作用用于 B细胞和
NK细胞 , 促进其增殖 、分化和免疫效应的表达。
TNF 则作为吞噬细胞产生的一种糖蛋白 ,既可直接
杀伤肿瘤细胞 ,也可间接通过活化机体的免疫功能 ,
发挥抗肿瘤的作用 。本实验结果表明 ,珍珠梅乙酸
乙酯提取物在调节机体免疫功能方面 ,有着较好抗
肿瘤的作用:既可抑瘤 ,又可增强参与免疫调节作用
的细胞因子的分泌和免疫细胞的杀伤能力 。有关珍
珠梅活性成分抗肿瘤作用的最佳时间和最佳剂量有
待于进一步研究。
基金项目:吉林省延边朝鲜族自治州科技发展计划项目
(2003YBKJ027)
参 考 文 献
1 　江苏新医学院编.中华大辞典.上海:上海科学技术出
版社 , 1994∶8
2 　李亦秀 ,等.中草药山高梁的抗缺氧作用的初步研究.
哈医大学报 , 1981 , 4(1)∶1
3 　金海玲 ,等.珍珠梅对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤的
保护作用.世界华人消化杂志 , 2002 , 10(7)∶783
4 　李文魁 ,等.黄花远志化学成分研究.中国中药杂志 ,
1999 , 24(8)∶477
5 　毛士龙 ,等.黄花远志根中两个新化合物的结构鉴定.
药学学报 , 1997 , 31(5)∶360
6 　石卫.天然杀伤(NK)细胞活性的测定.中国免疫学杂
志 , 1986 , 2(1)∶14
7 　王忱 ,等.甘草多糖的体内抑瘤作用及其机制的研究.
临床肿瘤学杂志 , 2003 , 8(2)∶85
(2003-08-19收稿)
·37·中药材第27卷第 1 期 2004 年 1月
Study on Extraction and Isolation of Active Constituents from Sorbaria
sorbifolia and Antitumor Effect of the Constituents in Vivo
Zhang Xuewu1 , Zhang Yumei2 , Guan Liping3 , Quan Yingchun3 , Sun Quan1
(1.Medical College , Yanbian University , Yanji , Jilin 133000;2.Central Hospital of Baicheng , Baicheng , Jilin 137000;3.College of Pharma-
cognosy , Yanbian University , Yanji , Jilin 133000)
Abstract　Objective:To study the constituents from Sorbaria sorbifolia and their antitumor activities.Methods:The constituents were
isolated with silia gel column chromatography and identified by physicochemical properties and spectroscopic analysis.Thirty six mice were in-
oculated with sarcocarcinoma 180 according to the standard method , Sorbaria sorbifolia ethyl acetate etract was administrated for 10 days , tu-
mor and body weight , the activities of NK cell and the contents of TNF-α, IL-2 in serum were detected.Results:Three compounds were isolat-
ed from the ethyl acetate extract and identified as 5 , 2′, 4′-trihydroxy-6 , 7 , 5′-trimethoxyflavone(Ⅰ), succinic acid(Ⅱ)and p-hydroxybenzoic
acid(Ⅲ).The tumor of the test groups were lighter than that of control group(P<0.05).There was no remarkable difference between the
control and test groups in body weight(P>0.05).The activitiy of NK cell and the contents of TNF-α, IL-2 in serum were higher than that of
control group(P<0.05).Conclusion:Compounds Ⅰ and Ⅱ were isolated from Sorbaria sorbifolia ethyl acetate extract for the first time.The
ethyl acetate extract could improve immune function and strengthen antitumor effect in sarcocarcinoma 180.
Key words　Sorbaria sorbifolia;Sarcocarcinoma 180;Antitumor
补肾化瘀解毒方对小鼠肝癌H22的抑瘤增效作用
曹　勇1　张　丹2　郑广娟2　唐　勇1　张　静2
(1.暨南大学医学院 ,广州 510632;2.山东中医药大学肿瘤药理室 ,济南 250014)
　　摘要　目的:探讨补肾化瘀解毒方水煎液对肿瘤的抑制和化疗的协同增效作用。方法:选择小鼠移植性肝癌
H22为模型 , 分别观察补肾化瘀解毒方水煎液单用以及与顺铂(DDP)联合应用时的抑瘤率。结果:补肾化瘀解毒方
水煎液对小鼠移植性肝癌H22有显著的抑制作用(P<0.05),并能增强 DDP对小鼠肝癌 H22的抑瘤作用 , 但无统计学
差异。结论:补肾化瘀解毒方水煎液对小鼠移植性肝癌有抑制作用 ,对化疗药物 DDP有一定的协同增效作用。
关键词　补肾化瘀解毒方　小鼠肝癌 H22　抑瘤作用　协同增效
　　补肾化瘀解毒方对临床多种肿瘤均有较好的疗
效 ,为了进一步证实补肾化瘀解毒方的抑瘤和增效
作用 ,本文选择了小鼠移植性肝癌 H22为荷瘤动物
模型 ,并以顺铂(DDP)为对照 ,研究了补肾化瘀解毒
方水煎液对动物移植性肝癌的抑制作用和对化疗药
物DDP 的抑瘤增效作用 ,以便为临床应用补肾化瘀
解毒方提供客观的实验佐证。
1 　材料
1.1 　药物　补肾化瘀解毒方水煎液的制备:取中
药补肾化瘀解毒方(肉桂 , 补骨脂 ,莪术 ,大黄等组
成)饮片置煎煮容器内 ,加相当于药材量 5 ～ 7倍的
冷水浸泡 1 ～ 2 h ,煮沸 30 min ,过滤。药渣加 3 ～ 5
倍量水继续煎煮 ,煮沸 20 min ,过滤 。合并两次滤
液 ,于水浴上浓缩成相当于原生药材 1.5 g/ml的药
液 ,冷却装入灭菌药瓶 ,置 4℃冰箱备用 。
顺铂(DDP):济南齐鲁制药厂生产 , 20 mg/瓶 ,
批号:0101002。
1.2 　动物　一级昆明种小鼠 ,由山东中医药大学
实验动物中心提供 。
1.3 　瘤株　肝癌 H22瘤株 ,由山东中医药大学肿瘤
防治中心肿瘤药理室提供。
1.4 　主要仪器　超净工作台:苏州宇化设备公司
生产;电子天平(FA2004型):上海天平仪器厂生产 。
2 　方法
荷瘤模型造模及化疗药物给药均参照徐叔云等
主编的《药理实验方法学》所述方法〔1〕 。以下实验
中 ,中药水煎剂的量均以生药量计。补肾化瘀解毒
方分别按26.6 g/kg 、13.3 g/kg 给药 ,顺铂(DDP)按 1
mg/kg(1 mg/kg 相当于 1/10 LD50)给药 。
2.1 　对小鼠肝癌 H22的抑制作用　无菌条件下抽
取肝癌H22小鼠腹水 ,用生理盐水按 1∶4稀释 ,调整瘤
细胞浓度为 1×107/ml ,选体重 18 ～ 22 g的昆明种小
鼠 40只 ,每鼠 0.2 ml右前肢腋部皮下注射 ,24 h后
称重随机分组 , 设荷瘤模型组 ,补肾化瘀解毒方
(BSHYJDF)高 、低两个剂量组 ,DDP 组 ,每组动物 10
只 ,均为同一性别 。
·38· 中药材第 27 卷第 1期 2004年 1 月