全 文 ：· 2832· China Pharm acy 2009 Vol.20 No.36 中国药房 2009年第 20卷第 36期
·中药分析与鉴定·
RP -HPLC 法同时测定雪胆胃肠丸中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量 Δ
郭兆荣 1 , 2* ,杨世林 1 , 2 ,3 ,李笑然 1 ,郝丽莉 1 ,许琼明 1# ,陈韶华 1(1.苏州大学药学院 ,苏州市 215123;2.江西
中医学院 ,南昌市 330004;3.中药固体制剂制造技术国家工程技术研究中心 , 南昌市 330006)
中图分类号 R283.64;R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2009)36-2832-03
摘 要 目的:建立以反相高效液相色谱法同时测定雪胆胃肠丸中木香烃内酯和去氢木香内酯含量的方法 。方法:色谱柱为
Shim-pack VP-ODS(150 mm ×4.6 mm ,5μm),流动相为甲醇-水(60∶40),检测波长为 225 nm 。结果:木香烃内酯 、去氢木香
内酯的检测浓度分别在 13.6 ～ 272.0 、11.25 ～ 225.0μg ·mL -1范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r 均为 0.999 8);
二者平均回收率分别为 99.47%和 99.62%, RSD 分别为 1.75%和 1.14%(n 均为 6)。 结论:本方法简便易行 、准确可靠 ,可用于
雪胆胃肠丸的质量控制 。
关键词 雪胆胃肠丸;木香烃内酯;去氢木香内酯;反相高效液相色谱法;含量测定
Simultaneous Determination of the Contents of Costunol ide and Dehydrocostuslactone in Xuedan Weichang
Pi ll by RP-HPLC
GUO Zhao-rong , YANG Shi-lin , LI Xiao -ran ,HAO Li-li , XU Qiong -ming ,CHEN Shao-hua(College
of Pharmacy , Soochow Universi ty , Suzhou 215123 , China)
GUO Zhao-rong , YANG Shi -lin(Jiang xi Colleg e of T raditio nal Chinese M edicine ,Nanchang 330004 , China)
YANG Shi -lin(National Pharmaceut ical Engineering Center for So lid Prepa ra tion in Chinese Herbal
M edicine , Nanchang 330006 , China)
ABSTRACT OBJECTIVE:T o est ablish an RP -HPLC method fo r simultaneous dete rmination of the contents of costunolide
and dehydrocostuslac tone in Xuedan w eichang pill.M ETHODS:The dete rmination w as perfo rm ed on Shim-pack VP -ODS
column(150 mm×4.6 mm , 5μm)w ith methano l-w ater(60∶40)as mobile phase and the de tection waveleng th w as se t at 225
nm.RESULTS:The linear ranges o f costunolide and dehydrocostuslac tone were 13.6 ～ 272.0 μg ·mL -1 and 11.25 ～ 225.0
μg ·mL -1 , respectively , and t heir average recover ies were 99.47%and 99.62%, respectively w ith RSD of 1.75%(n =6)and
1.14%(n=6), respec tively.CONCLUSION :T he m ethod established is simple , feasible , accurate and reliable , and it is ap-
plicable f or the quality control o f Xuedan w eichang pill.
KEY WORDS Xuedan w eichang pill;Costunolide;Dehydrocostuslactone;RP -HPLC;Content de term ina tion
雪胆胃肠丸是从苗族民间传统秘方中开发出来的中药复
方制剂 , 含有雪胆 、吴茱萸 、木香 、白及 、黄芪等 10多味中药
材 。临床研究表明 ,雪胆胃肠丸对胃炎 、萎缩性胃炎、十二指肠
溃疡等疾病有独特的疗效 。木香是雪胆胃肠丸中一味重要的药
材 , 其主要活性成分是木香烃内酯和去氢木香内酯 , 具有显著
的利胆和抑制溃疡作用 [1 ]。为了进一步完善该制剂的质量标
Δ国家科技支撑计划子课题(2006BA108B03-05)
*硕士研究生。研究方向:天然药物活性成分、中药新药开发。E-
mail:gz r1985@163.com
#通讯作者:讲师 , 博士。研究方向:天然药物化学、中药新药开
发。电话:0512-65880301。E-mail:xuqiongming@suda.edu.cn
小 , 表明建立的数学模型可用来预测四物汤提取工艺的总评指
标 。因此 ,最佳提取工艺为加水 10.2倍量 ,浸泡 68 min后提取
105 min 。
3 讨论
在提取工艺中 , 通常需兼顾多个影响因素和多个参考指
标 。效应值在最佳试验条件区域附近变化比较灵敏 , 条件的微
小变化可造成效应值的大幅变化 , 用效应面表示弯曲面 , 适用
于非线性模型拟合 , 并且随着试验条件远离较优区 , 效应面弯
曲度逐渐减小 ,愈远离 ,线性愈好 。如果以均匀设计和正交设计
法进行模型拟合 , 线性相关系数愈大 , 因素水平的选择反而离
最优区愈远(效应与因素之间呈线性关系的除外 , 但完全线性
关系较少),这与优化的目的不符 。星点设计-效应面法则适用
于非线性模型 , 能提高数学模型的预测性 ,更好地体现各因素 、
指标与效应值的关系 。因此 , 采用星点设计-效应面法能优选
条件 、量化指标 ,从而提高优化预测的准确性 ,为中药方剂的提
取工艺研究提供一条好途径 。
参考文献
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168 ～ 169.
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ation of central composite designs to the prepara tion o f
po lycapro lactone nanopar ticles by solvent displacem ent
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(收稿日期:2009-01-17 修回日期:2009-04-17)
中国药房 2009年第 20卷第 36期 China Pharmacy 2009 Vol.20 No.36 · 2833·
准 ,笔者采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定该制剂中
木香烃内酯和去氢木香内酯的含量 。该方法简便易行 、准确可
靠 ,可用于雪胆胃肠丸的质量控制 。
1 仪器与试药
LC-20A 型 HPLC 仪 、 SPD-M 20A 型二极管阵列检测
器 、LC Solution化学工作站(日本 Shimadzu公司);EL -204
型万分之一分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司);KQ -
100DE型数控超声仪(昆山市超声仪器有限公司)。木香烃内酯
对照品(批号:11524-200603)、去氢木香内酯对照品(批号:
11525-200603)均由中国药品生物制品检定所提供 ,使用前置
硅胶干燥器中干燥至恒重;甲醇 、乙腈为色谱纯 ,氯仿 、乙醚为
分析纯 , 水为重蒸馏水;雪胆胃肠丸(昆明生达制药有限公司 ,
批号:070401 、070402 、070403)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱 :Shim -pack VP -ODS(150 mm ×4.6 mm , 5
μm);柱温:35 ℃:流动相:甲醇-水(60∶40);流速:1.0 mL ·
min -1;检测波长:225 nm 。
2.2 混合对照品溶液的制备
精密称取木香烃内酯对照品 13.60 mg , 置于 10 mL 量瓶
中 , 加甲醇溶解并定容 , 制成浓度为 1.360 mg ·mL -1的对照
品贮备液;精密称取去氢木香内酯对照品 11.25 mg , 置于 10
mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并定容 ,制成浓度为 1.125 mg ·mL -1
的对照品贮备液 。分别取 2种对照品贮备液 1.0 mL ,共置于 25
mL 量瓶中 , 加甲醇溶解并定容 , 制成含木香烃内酯 54.4μg ·
mL
-1和去氢木香内酯 45.0μg ·mL -1的混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液及阴性对照溶液的制备
取本品 50丸 , 捣碎 ,取粉末约 2.5 g , 精密称定 , 精密加入
等量的硅藻土 ,研匀 ,精密称取约 4 g ,置于具塞锥形瓶中 ,精密
加入甲醇 25 mL , 密塞 , 称定质量 ,超声处理 40 min , 取出 , 放
冷 , 再称定质量 , 用甲醇补足减失的质量 , 摇匀 , 滤过 , 取续滤
液 ,即得 。
按处方比例称取不含木香的阴性样品 , 同法制备阴性对照
溶液 。
2.4 系统适用性试验
分别取混合对照品溶液 、供试品溶液及阴性对照溶液各 20
μL进样测定 。在上述色谱条件下 , 木香烃内酯 、去氢木香内酯
与样品中其它组分色谱峰可基线分离 ,分离度>1.5;按木香烃
内酯峰计算 , 理论塔板数(N)在 4 000以上 , 拖尾因子(T)为
1.03;阴性对照溶液在木香烃内酯和去氢木香内酯色谱峰位置
处无相应峰出现 。色谱见图 1。
2.5 线性关系考察
分别精密量取 4.0 mL 木香烃内酯 、去氢木香内酯的对照
品贮备液 , 共置于 25 mL 量瓶中 , 加甲醇溶解并定容 , 制备混
合对照品溶液。分别精密量取该溶液 0.5 、1.0 、2.0 、3.0 、5.0 、
10.0 mL ,置于 10 mL 量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 。吸取
上述溶液各 20μL 注入液相色谱仪 , 记录色谱图 , 测定峰面
积 。以浓度(Y )为纵坐标 ,峰面积积分值(X)为横坐标 ,进行线
性回归 , 得木香烃内酯的回归方程为 Y =2.25×10 -5X +
0.55(r =0.999 8);去氢木香内酯的回归方程为 Y =
3.51×10 -5X +0.68(r =0.999 8)。结果表明 ,木香烃内酯 、去
氢木香内酯的检测浓度分别在 13.6 ～ 272.0 、 11.25 ～ 225.0
μg ·mL -1范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系 。
2.6 精密度试验
精密吸取“2.2”项下混合对照品溶液 ,重复进样 6次 ,每次
20μL ,分别测定 2种成分的峰面积 。结果 ,木香烃内酯和去氢
木香内酯峰面积的 RSD 分别为 0.54%和 0.53%,表明仪器精
密度良好 。
2.7 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液 20μL , 分别于 0 、3 、6 、12 、24 h
进样 ,测定 2种成分的峰面积 。结果 ,木香烃内酯和去氢木香内
酯峰面积的 RSD 分别为 1.83%和 1.77%,表明供试品溶液在
24 h内稳定性良好 。
2.8 重现性试验
取同一批 (批号:070401)样品 6份 , 精密称定 , 分别按
“2.3”项下方法制备供试品溶液 , 进样 20μL , 分别测定 2种成
分的含量 。结果 , 木香烃内酯和去氢木香内酯含量的 RSD 分
别为 1.57%和 1.17%,表明方法重现性良好 。
2.9 加样回收率试验
取已知含量的样品(每 1 g 含木香烃内酯 0.845 mg 、去氢
木香内酯 1.195 mg)约 2.5 g ,共 6份 ,精密称定 ,置于具塞三
角瓶中 , 分别加入木香烃内酯和去氢木香内酯对照品溶液适
量 , 按“2.3”项下方法制备供试品溶液 ,注入液相色谱仪 ,测定
峰面积 ,计算加样回收率 。结果 ,木香烃内酯和去氢木香内酯的
平均回收率分别为 99.47%和 99.62%, RSD 分别为 1.75%和
1.14%(n 均=6)。
2.10 样品含量测定
分别精密吸取木香烃内酯 、去氢木香内酯对照品溶液及供
试品溶液各 20μL ,注入液相色谱仪 ,按外标法计算 2种成分的
含量 。结果 ,3批样品(批号分别为 070401 、070402 、070403)中
木香烃内酯和去氢木香内酯的总含量分别为每袋 (标示质量
4.5 g)7.722 、8.123 、7.794 mg , R SD 分别为 1.36%、1.51%、
1.02%。
3 讨论
雪胆胃肠丸目前执行的是国家药品监督管理局颁布的
WS-10312(ZD-0312)-2002试行标准 。在该标准方案中 ,以
阿魏酸为对照品 , 选择当归作为含量测定项目 。由于当归对胃
肠道疾病目前尚无药理作用方面的文献资料 , 以其为质控指标
难以反映本制剂的内在质量 。而木香在本制剂中是一味重要的
药材 ,其主要成分在胃肠道疾病方面有显著疗效 。因此 ,以木香
烃内酯和去氢木香内酯为对照品 , 选择木香作为含量测定项目
更为合适 。
雪胆胃肠丸是含有 10多味中药的复方制剂 , 故在 HPLC
测定中干扰杂质成分很多 。笔者曾参照文献 [2]方法 ,选用甲醇-
水(65∶35)为流动相 , 结果木香烃内酯 、去氢木香内酯与其它
干扰成分的分离效果很不理想 。经过多次试验摸索 , 最终确定
流动相为甲醇-水(60∶40),分离效果好 。
供试品溶液的制备方法参照文献[2 ～ 4 ]采用超声提取法 , 并对
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地黄寡糖质量标准研究 Δ
刘 影 1 *,杨 菁 1 #,安 阳 2 ,刘 涛 1 ,韦忠民 1(1.辽宁医学院细胞生物学及新药开发重点试验室 ,锦州市
121001;2.锦州奥鸿药业有限责任公司 ,锦州市 121000)
中图分类号 R284.2;R927.1 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2009)36-2834-02
摘 要 目的:建立地黄寡糖的质量标准 。方法:采用薄层色谱(TLC)法对方中的水苏糖进行定性鉴别;以高效液相色谱法测定梓
醇及高分子物质的含量 , 干燥失重法测定干物质含量 ,苯酚-硫酸法测定寡糖含量 。 结果:T LC斑点清晰 ,分离度好;梓醇进样量
在 5 ～ 80 μg(r =0.997 5)范围内与峰面积积分值呈良好线性关系 ,平均回收率为 98.5%, RSD =1.28%(n =6);高分子物质的
含量≤2.0%;干物质含量为 18.0 ～ 22.0 g ·L -1 ;寡糖含量均>85.0%。结论:所建标准可用于地黄寡糖的质量控制 。
关键词 地黄寡糖;质量标准;薄层色谱法;高效液相色谱法;干燥失重法;苯酚-硫酸法
Quality Standard of Dihuang Guatang
LIU Ying , YANG Jing , LIU Tao ,WEI Zhong-min(Key Lab.o f Cy tobiology and New Drug Development ,
Liaoning Medical Colleg e , Jinzhou 121001 , China)
AN Yang(Jinzhou Aohong Pharmaceut ical Co.,Ltd., Jinzhou 121000 , China)
ABSTRACT OBJECT IVE:To establish the quality standard of Dihuang guatang.M ETHODS:The quality of stachyose in
Dihuang gua tang w as identified by T LC.T he contents o f ca talpol and high -molecular subst ance w ere de termined by
HPLC.T he content of dry subst ance w as dete rmined by drying method.The con tent o f oligosaccharides w as de te rmined by
phenol-sulfuric acid method.RESULTS:The TLC spot s of stachyose w ere distinctive and w ell-iso la ted.The linear rela tio_
nship of catalpo l w as good in the range o f 5 ～ 80μg(r =0.997 5)with an average recovery o f 98.5%(RSD=1.28%, n =6).
T he content of high -molecular substances w as less than 2.0%.The conten t o f dry substance w as 18.0 ～ 22.0 g · L -1.The
content of oligosaccharides w as more than 85.0%.CONCLUSION :The established quality standard can be used fo r the quality
contro l o f Dihuang guatang.
KEY WORDS Dihuang gua tang ;Quality standard;T LC;HPLC;Drying method;Pheno l-sulfu ric acid met hod
Δ辽宁省博士启动、自然科学基金项目(20072202);辽宁省教育厅
2007～ 2008年度创新团队项目计划(2008T115)
*助理实验师 ,硕士。研究方向:中药提取。电话:0416-4673465。
E-mail:ly 0924-1979@163.com
#通讯作者:副教授, 博士。研究方向:新药研发。电话:0416-
4673465。E-mail:jzy angjing @gmail.com
提取时间进行了考察。结果 ,超声处理 40 min时木香烃内酯和
去氢木香内酯的含量已不再增加 ,故确定超声时间为 40 min。
另外 , 为了使提取条件最优化 , 笔者先后比较了甲醇冷浸放置
过夜后超声处理 、加热回流提取 、索式提取等方式 。结果表明 ,
甲醇冷浸后超声 40 min法提取最充分 , 且提取杂质少 、操作便
捷 。
参考文献
[ 1] Taniguchi M ,Kataoka T , Suzuki H , e t al.Costunolide
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复胃口服液中木香烃内酯的含量 [ J] .中国药房 , 2006 ,
17(3):211.
(收稿日期:2009-01-06 修回日期:2009-04-24)
地黄寡糖是以地黄为原料 , 依据特定工艺 [1 ] 制备的提取
液 。现已证明 , 该提取液对脑缺血再灌注所致痴呆大鼠的学习
记忆能力 、谷氨酸致原代培养的海马神经细胞具有保护作用[2 ] 。为
控制该提取液药效 , 笔者采用薄层色谱(TCL)法对方中的水苏
糖进行定性鉴别 ,并采用苯酚-硫酸法和高效液相色谱(HPLC)
法分别测定了制剂中的寡糖及梓醇 、高分子物质含量。
1 材料
1.1 仪器
LC-10Avp型 HPLC仪 、 UV2201型紫外-可见分光光
度计(日本岛津公司);KQ -250B型超声波清洗器(昆山市超
声仪器有限公司);A240型电子天平 (美国梅特勒-托利多公
司);恒温水浴箱 (北京市永光医疗仪器厂);电热恒温干燥箱
(北京市永光医疗仪器厂)。
1.2 试药
生地黄产自河南武涉县西陶镇 , 由锦州奥鸿药业有限责任
公司质量部鉴定为真品;水苏糖标准品 (北京慧德易科技有限
公司 ,批号:20070514 ,含量:97%);梓醇 、葡萄糖对照品(中国
药品生物制品检定所 , 批号分别为 110808-200407 、110832-
200503);地黄寡糖 (辽宁医学院药物研究所自制 , 批号 :
20080301 、20080302 、20080303);其余试剂均为分析纯 。
2 方法与结果
2.1 性状