全 文 ：HPLC同时测定雪胆胃肠丸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱
郭兆荣 1, 2 , 李笑然 1 , 杨世林 1, 2, 3 , 许琼明 1＊ , 高红伟1 , 董更婷 1
(1.苏州大学药学院 ,江苏 苏州 215123;2.江西中医学院 ,江西 南昌 330004;3.国家中药固体制剂工程技
术研究中心 ,江西 南昌 330006)
收稿日期:2008-04-24
基金项目:国家 “十一五 ”科技支撑计划重点项目子课题(2006BA108B03-05)
作者简介:郭兆荣(1985-),男 ,硕士研究生 ,研究方向:天然药物活性成分研究及中药新药开发。 E-mail:gzr1985@163.com
＊通讯作者:许琼明(1975-),男 ,讲师 ,博士 ,从事天然药物活性成分研究及中药新药开发。 Tel:(0512)65880301 E-mail:xuqiongming@
suda.edu.cn
关键词:雪胆胃肠丸;吴茱萸碱;吴茱萸次碱;HPLC
中图分类号:R927.2 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2009)02-0326-02
雪胆胃肠丸是从苗族民间传统秘方中开发出来的中药
复方 , 含有雪胆 、吴茱萸 、木香 、白及 、黄芪等十多味中药材。
经临床研究表明 , 雪胆胃肠丸对胃炎 、萎缩性胃炎 、十二指肠
溃疡等疾病有独特的疗效。吴茱萸是雪胆胃肠丸中一味重
要的药材 , 吴茱萸药材中的主要活性成分是吴茱萸碱和吴茱
萸次碱 , 具有止呕 、止泻 、抗实验型胃溃疡作用 [ 1, 2] 。 目前 ,
雪胆胃肠丸的质量标准中还没有对吴茱萸的成分进行检测
控制。为了给雪胆胃肠丸生产检验中提供检测指标和进一
步完善其质量标准 , 我们采用 HPLC法测定雪胆胃肠丸中吴
茱萸碱和吴茱萸次碱的含量。
1 仪器与试药
日本 SHIMADZULC-20A高效液相色谱仪 , SPD-M20A
二极管阵列检测器 , LCSolution化学工作站;N-1001旋转蒸
发仪(日本东京理化器械株式会社);EL-204万分之一分析
天平(梅特勒-托利多仪器有限公司);SE-93自动双重蒸馏
水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂);KQ-100DE数控超声仪
(昆山市超声仪器有限公司)。
吴茱萸碱对照品(批号:1269-060618)和吴茱萸次碱对
照品(批号:1270-060618)均由中药固体制剂制造技术国家
工程研究中心提供 , 供含量测定用 ,使用前置硅胶干燥器中
干燥至恒重。甲醇 、乙腈为色谱纯 ,其余试剂为分析纯 , 水为
双重蒸馏水。雪胆胃肠丸由昆明生达制药有限公司提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:HypersilODS2(250 mm×4.6 mm, 5 μm), 柱
温:25 ℃;流动相:乙腈-水(39∶61), 流速:1.0 mL/min;检测
波长:225 nm。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取吴茱萸碱对照品 6.55 mg, 置于 50 mL量瓶
中 , 加甲醇溶解并定容 , 制成浓度为 131 μg/mL的储备液;
精密称取吴茱萸次碱对照品 8.80 mg, 置于 50 mL量瓶中 ,
加甲醇溶解并定容 , 制成浓度为 176 μg/mL的储备液。分
别取吴茱萸碱和吴茱萸次碱对照品储备液 4.0 mL, 共置于
50 mL量瓶中 , 加甲醇稀释并定容至刻度 ,制成含吴茱萸碱
10.480 μg/mL和吴茱萸次碱 14.080 μg/mL的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取本品 100丸 , 切碎 , 取粉末约 5.0 g, 精密称定 , 精密
加入等量的硅藻土 ,研匀 , 精密称取约 8 g,置具塞锥形瓶中 ,
精密加入甲醇 25 mL, 密塞 , 称定重量 , 超声处理 40 min,
取出 , 放冷 , 再称定重量 , 用甲醇补足减失的重量 , 摇匀 ,
滤过 , 取续滤液 , 即得。
按处方比例称取不含吴茱萸的阴性样品 , 按上述方法制
备阴性样品溶液。
2.4 系统适用性试验
分别取对照品溶液 , 供试品溶液及阴性对照溶液各 20
μL进样测定。在选定色谱条件下 , 吴茱萸碱 ,吴茱萸次碱与
样品中其它组分色谱峰可基线分离 , 分离度大于 1.5, 按吴
茱萸碱峰计算 ,理论板数(N)在 8 000以上 ,拖尾因子(T)为
1.02;阴性对照溶液在吴茱萸碱和吴茱萸次碱色谱峰位置处
无相应色谱峰出现。吴茱萸碱和吴茱萸次碱对照品 、供试品
及阴性图谱见图 1。
2.5 线性关系考察
分别精密量取 2.2项下的对照品混合溶液 2.0, 4.0,
6.0, 8.0, 10.0 mL置于 10 mL量瓶中 , 用甲醇稀释至刻度 ,
摇匀 , 分别吸取上述溶液 20 μL注入高效液相色谱仪 , 记录
色谱图 , 测定其峰面积 , 以浓度(X)为横坐标 , 峰面积值
(Y)为纵坐标 ,进行线性回归 , 得吴茱萸碱的回归方程为:Y
=234 558.6X+568.1, r=0.999 9;吴茱萸次碱的回归方程
为:Y=71 599.9X+875.5, r=0.999 9。
试验结果表明:吴茱萸碱在 2.096 ～ 10.480 μg/mL范围
内 、吴茱萸次碱在 2.816 ～ 14.080 μg/mL范围内线性关系良
好。
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第 31卷 第 2期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
February2009
Vol.31 No.2
AB
C
图 1 HPLC色谱图
A.对照品 B.样品 C.阴性样品 1.吴茱萸碱 2.吴茱萸次碱
2.6 精密度试验
精密吸取上述对照品溶液 ,重复进样 6次 , 每次 20 μL,
分别测定吴茱萸碱和吴茱萸次碱的峰面积 ,结果吴茱萸碱的
RSD为 1.69%, 吴茱萸次碱的 RSD为 1.31%。
2.7 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液 20μL,分别于 0, 3, 6, 12, 24h
进样 , 分别测定吴茱萸碱和吴茱萸次碱的峰面积 , 结果吴茱
萸碱的 RSD为 1.14%, 吴茱萸次碱的 RSD为 1.69%。
2.8 重复性试验
取同一批(批号 070401)样品 6份 , 分别精密称定 , 制
备供试品溶液 , 20 μL进样测定 , 分别测得吴茱萸碱和吴茱
萸次碱的含量 , 结果吴茱萸碱的 RSD为 1.31%, 吴茱萸次碱
的 RSD为 1.31%。
2.9 加样回收率试验
取已知含量的样品(每克含吴茱萸碱 0.033 0 mg、吴茱
萸次碱 0.046 5 mg)约 2.5 g共 6份 , 精密称定 , 置具塞三
角瓶中 , 每份分别加入吴茱萸碱对照品和吴茱萸次碱对照
品适量 , 按上述供试品溶液制备方法 , 制备加样回收供试品
溶液 , 并注入高效液相色谱仪 , 记录峰面积 , 分别计算吴茱
萸碱 , 吴茱萸次碱的回收率。结果吴茱萸碱的平均回收率
为 99.85%,其 RSD为 0.94%;吴茱萸次碱的平均回收率为
99.78%, 其 RSD为 1.38%。
2.10 样品测定
分别精密吸取吴茱萸碱 , 吴茱萸次碱对照品溶液及供
试品溶液各 20μL, 注入高效液相色谱仪 , 按外标法计算吴
茱萸碱 、吴茱萸次碱总量 , 分别测定了 3批样品中吴茱萸碱
和吴茱萸次碱的含量 , 按每袋(标示重量 4.5g)计算结果见
表 1。
表 1 样品测定结果(n=5)
批号 含量 /(mg/袋) RSD/%
070401 0.153 1.64
070402 0.149 1.01
070403 0.151 1.72
3 讨论
雪胆胃肠丸目前是执行国家药品监督管理局颁布的
WS-10312(ZD-0312)-2002试行标准。在该标准方案中 , 以
阿魏酸为对照品 ,选择当归作为含量测定项目。由于当归对
胃肠道疾病方面目前尚无药理作用方面的文献资料 , 以其为
质控指标难以反映该制剂的内在质量。 吴茱萸在该复方中
是一味重要的药材 ,其主要成分在胃肠道疾病方面有显著疗
效。因此 ,以吴茱萸碱和吴茱萸次碱为对照品 , 选择吴茱萸
作为含量测定项目 ,更为合适。
供试品溶液的制备主要参照中国药典 2005版一部 [ 3]中
吴茱萸药材含量测定项下供试品溶液的制备方法 , 结合文
献报道 [ 3 , 4]采用超声提取 40 min的方法。
雪胆胃肠丸是含有十多味中药的复方 , 所以在液相的图
谱中干扰杂质成分很多。我们曾参照中国药典 2005版一
部 [ 5]中对吴茱萸药材含量测定 , 选用乙腈-0.04%辛烷磺酸
钠溶液(43∶57)为色谱条件 , 结果吴茱萸碱 、吴茱萸次碱和
其他干扰成分分离效果很不理想。根据摸索不同比例的流
动相和不同的柱温条件 , 发现当流动相为乙腈-0.04%辛烷
磺酸钠溶液(39∶61)时 , 吴茱萸碱 、吴茱萸次碱与杂质峰的
分离情况最佳。我们比较流动相乙腈-0.04%辛烷磺酸钠溶
液(39∶61)和乙腈-水(39∶61)的分离情况 ,发现加了辛烷磺
酸钠后图谱峰的分离情况和峰形并没有显著差异 , 在用乙
腈-水(39∶61)为流动相时分离度和拖尾因子均能达到中国
药典的要求 ,考虑到实际操作的便捷性 , 色谱条件最终选定
为乙腈-水(39∶61),柱温:35℃。检测波长参照中国药典及
相关文献选用 225nm。
参考文献:
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验研究 [ J] .中国临床药理学与治疗学 , 2005, 10(10):1104-
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结肠炎的药效学研究 [ J].中药药理与临床 , 2003, 19(6):16-
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第 31卷 第 2期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
February2009
Vol.31 No.2