全 文 ：正交实验法优选珠子参总皂苷的提取工艺
高培红　曹军毅　指导:宋小妹
(陕西中医学院 ,陕西 咸阳 712046)
摘　要:目的 建立珠子参总皂苷的提取工艺 。方法 以人参皂苷 Re为对照 ,以总皂苷含量为指标 ,设
计L9(34)正交实验 ,确定合理的提取工艺。结果 6倍量 50%乙醇提取 2次 ,每次 2 h 为优化提取方案。结
论 本工艺条件对珠子参总皂苷的提取收率高且稳定 ,为珠子参总皂苷的工业化生产和新药开发提供了依
据。
关键词:珠子参;提取工艺;总皂苷
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1002-168X(2006)02-0066-03
Extract Technology Selecting Rhizoma Panacis Majoris Total Saponin with Orthogonal Test
Gao Peihong　Cao Junyi　Guide:Song Xiaomei
(1.Shaanxi College of Traditional Chinese Medicine , Xianyang , Shaanxi 712046)
Abstract:Objective To establish the extract technology of selecting Rhizoma Panaois Majoris total saponin.
Method Designed L9(3 4)orthogonal test with ginseng saponin Re as control and content of total saponin as index , to
determine the retional extract technology.Result 6 Times quantity more than 50% ethanol was extracted twice , with
2h each time as the best extract plan.Conclusion The extract rate of Rhizoma Panacis Majioris total saponin was high
and steady with this technology , which provided new evidence for industrializing production of the plant and developing
new drug.
Key words:Rhizoma Panacis Majoris;extract technology;total saponin
　　珠子参为五加科植物珠子参(Panax japonicus
C.A.Mey.var.major(Burk.)C.Y.Wu et K.M.Feng
或羽叶三七 Panax japonicus C.A.Mey.var.bipinnati-
fidus(Seem)C.Y.Wu et K.M.Feng 的干燥根茎 。具
有补肺 、养阴 、活络 、止血的功效 。用于气阴两虚 ,
烦热口渴 ,虚劳咳嗽 ,跌扑损伤 ,关节疼痛 ,咳血 ,吐
血 ,外伤出血[ 1] 。化学研究表明 ,珠子参中主要有
效成分为皂苷类 ,其中包括竹节参苷Ⅴ(即人参皂
苷 Ro , chikusetsusaponiⅤ , ginsenoside Ro)、竹节参苷
Ⅳ, Ⅳa , Ⅳa甲酯(chikusetsusaponinⅣ , Ⅳa , Ⅳa mer-
hyl ester),人参皂苷 Rb1 、Rc 、Rd 、Re 、Rg1 、Rg2 ,三七
皂苷 R1 , 、R2(notoginsenosides R1 、, R2),珠子参苷
R1 , 、R2(majorosides R1 、, R2 ), 20-O-葡萄糖基
人参苷 Rf(20-O-glucoginsenoside Rf),齐墩果酸
-3-O-β-D-(6-甲酯)吡喃葡萄糖醛酸苷 ,齐
墩果酸-28-O-D-吡喃葡萄糖苷。此外 ,尚含 β
-谷甾醇-3-O-D-吡喃葡萄糖苷 、氨基酸和多
种微量元素等。药理研究表明 ,珠子参总皂苷及水
提物具有扩血管 、降血压 、中枢抑制 、抗炎 、增强免
疫功能 、抗脑缺血 、促进骨髓造血功能 、保护髓外造
血功能 、保肝作用 、抗肿瘤作用等[ 2] 。本实验采用
正交设计方案 ,以人参皂苷 Re为对照 ,以总皂苷含
量为指标 ,优选出珠子参总皂苷提取的优化工艺条
件 ,为珠子参总皂苷的工业化生产和新药开发提供
了依据。
1　仪器与试药
1.1　仪器　UV-1102 型紫外-可见分光光度计
(上海天美科学仪器有限公司),萨多利斯GB204-
电子天平(瑞典), RE-2旋转蒸发仪(上海亚荣生
化仪器厂),SB-3200D超声波清洗机。
1.2　试药　珠子参药材(购于陕西眉县 ,经陕西中
医学院生药教研室王继涛老师鉴定为珠子参的根
茎);人参皂苷 Re 对照品(中国药品生物制品检定
所);其余试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　珠子参总皂苷含量测定方法的建立
2.1.1　对照品溶液的制备　精密称取人参皂苷
Re对照品 6.5mg 于 25ml容量瓶 ,以甲醇溶解定
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陕 西 中 医 学 院 学 报
Journal of Shaanxi College of Traditional Chinese Medicine
　　　2006年 3 月第 29卷第2 期
Mar.2006　Vol.29　No.2
基金项目:陕西省教育厅资助项目(04JC02)
DOI :10.13424/j.cnki.jsctcm.2006.02.036
容 ,配制成 0.26mg/ml的人参皂苷 Re甲醇溶液作
为对照品溶液。
2.1.2　样品溶液的制备 　取珠子参药材粉末约
1g ,精确称量 ,用乙醚 60ml 置索氏提取器中回流
2h ,取出滤纸筒 ,晾干 ,再置索氏提取器中 ,加甲醇
60ml ,连续回流至提取液无色 ,浓缩至干 ,残渣加
水30ml使溶解 ,用水饱和的正丁醇振摇提取 5次 ,
分别 20 ml 、20ml 、10ml 、10ml 、10ml ,合并正丁醇
液 ,用正丁醇饱和的水洗涤 2 次 ,每次 20ml ,弃去
水液 ,正丁醇液减压回收 ,蒸干 ,用甲醇溶解 ,过滤
并定容至 100ml。
2.1.3　对照品的选择　样品溶液 ,人参皂苷 Re溶
液在同一硅胶 G 板点样 ,以正丁醇-乙酸乙酯-
水-甲醇-乙酸(10:4:10:1:1 ,上层)为展开剂 ,上
行展开 ,挥干溶剂 ,10%硫酸乙醇喷雾 ,加热显色 ,
在365 nm下观察荧光。样品和人参皂苷 Re 在相
同位置有斑点 ,故选择人参皂苷 Re为对照品。
2.1.4　测定波长的选择　移取样品溶液 0.1 ml于
10ml具塞磨口试管中 ,挥干 ,精密加入 5%香草醛
-冰醋酸溶液 0.2ml和高氯酸 0.8 ml ,摇匀 , 60℃
水浴加热 15 min ,流水冷却 3min ,加入冰醋酸5ml ,
摇匀 ,随行试剂做空白 ,用 UV1102紫外光度计在
800 ～ 400 nm范围做一个全程扫描 ,发现其最大吸
收波长在 550 nm左右 。同法对人参皂苷 Re 于 800
-400 nm 范围作全程扫描 ,发现其最大吸收波长
也在 550 nm左右 ,故选择 550 nm为测定波长。
2.1.5　标准曲线的绘制　精密吸取人参皂苷 Re对照
品溶液(0.26mg/ml)0.2ml 、0.4ml 、0.6 ml 、0.8ml 、
1.0ml 、1.2ml 分别于 10ml具塞磨口试管中 ,挥
干 ,精密加入 5%香草醛-冰醋酸溶液 0.2 ml和高
氯酸 0.8ml ,摇匀 , 60℃水浴加热 15min ,流水冷却
3 min ,加入冰醋酸 5ml ,摇匀 ,随行试剂做空白 ,于
550nm处比色测定吸收值(Abs),以人参皂苷 Re 量
为横坐标(X),吸收值(Abs),为纵坐标(Y)绘制标准
曲线 ,结果人参皂苷 Re 在 52μg-312μg范围内呈良
好线性关系 ,得回归方程 Y=0.0272+0.0037X ,
r=0.9994。
2.1.6　精密度考察　精密移取对照品溶液 5份 ,每
份0.6ml ,置于具塞磨口试管中 ,挥干 , 精密加入
5%香草醛-冰醋酸溶液 0.2ml和高氯酸 0.8ml ,
摇匀 , 60℃水浴加热 15min ,流水冷却 3min ,加入
冰醋酸 5ml ,摇匀 ,随行试剂做空白 ,于 550 nm 处
比色测定吸收值(Abs),计算 ,结果 RSD=1.40%。
2.1.7　加样回收率实验 　移取样品溶液 5份 ,分
别精密加入人参皂苷 Re 对照品溶液 ,加甲醇稀释
至刻度 ,摇匀 ,挥干 ,精密加入 5%香草醛-冰醋酸
溶液 0.2ml和高氯酸 0.8ml ,摇匀 , 60℃水浴加热
15min流水冷却 3 min ,加入冰醋酸 5ml ,摇匀 ,随行
试剂做空白 ,于 550 nm 处比色测定吸收值(Abs),
计算得平均回收率为 99.03%, r=1.2%。
2.1.8　样品含量测定 　移取样品溶液 0.1ml 挥
干 ,精密加入 5%香草醛-冰醋酸溶液 0.2ml和高
氯酸 0.8ml ,摇匀 ,60℃水浴加热 15min ,流水冷却
3min ,加入冰醋酸 5ml ,摇匀 ,随行试剂做空白 ,于
550 nm处比色测定吸收值(Abs),计算 ,结果见表
5 ,总皂苷含量为 12.05%。
2.2　珠子参提取方法的选择
2.2.1　水提 、醇提样品制备　称取珠子参药材粗
粉两份 ,各 50g ,分别用水(加溶媒量 10倍 ,提取时
间2 h ,提取三次)、60%乙醇(加溶媒量 8倍 ,提取
时间 2 h ,1 h ,1 h),提取 ,浓缩至干 ,乙醇溶解 、过滤
定容 。
2.2.2　含量测定　分别移取珠子参水提 、醇提样
品溶液适量 ,按 2.1.8项下含量测定方法测定 ,计
算总皂苷收率 ,结果见表 1。
表 1　不同提取方法总皂苷的收率比较
提取方法 总皂苷的含量(%) 总皂苷收率(%)
水 5.78 100
60%乙醇 10.7 185.12
　　从表 1可以看出 ,乙醇回流提取法所得总皂苷收率高 ,
约为水提取的 185.12%。故本实验确定珠子参总皂苷的提
取方法为乙醇回流提取。
2.3　乙醇提取工艺条件优化研究
2.3.1　方案设计　结合生产实际 ,选择溶剂量 、回
流时间 、提取次数 、乙醇浓度作为考察因素 ,设定三
个水平 ,因素水平见表 2 ,根据因素水平表 ,设计正
交实验表见表 3。
称取珠子参药材粉末20g ,共9份 ,根据正交实
验表方案进行提取 ,提取液过滤 、回收乙醇至干 ,用
乙醇溶解 、过滤 、定容 ,得正交实验各样品溶液。
分别吸取上述各样品溶液适量 ,按 2.1.8项下
含量测定方法测定总皂苷含量 ,结果见表 3 ,方差
分析见表 4。
表 2　因素水平表
水平 A乙醇用量/倍
B
提取时间/h
C
提取次数/次
D
乙醇浓度/%
1 6 1 1 50
2 8 1.5 2 60
3 10 2 3 70
表 4　方差分析表
因素 SS j f SS j/2 F
A 6.11 2 3.055 6.64
B 10.05 2 5.025 10.92
C 49.91 2 24.955 54.25
D 0.92 2 0.46
　　 F 0.05(2.2)　　　=19
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Mar.2006　Vol.29　No.2 　　　
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表 3　L9(34)交实验设计及结果表
实验号 A B C D 总皂苷含量(%)
1 1 1 1 1 2.34
2 1 2 2 2 8.35
3 1 3 3 3 9.01
4 2 1 2 3 8.77
5 2 2 3 1 10.62
6 2 3 1 2 6.31
7 3 1 3 2 7.31
8 3 2 1 3 3.84
9 3 3 2 1 10.84
K1 19.7 18.42 12.49 23.8
K2 25.7 22.81 27.96 21.97 G=67.39
K3 21.99 26.16 26.94 21.62 CT=504.60
R 2 2.58 5.16 0.73
SSj 6.11 10.05 49.91 0.92
　　由上述直观分析结果可知 ,以珠子参总皂苷量
为考察指标 ,最佳提取工艺条件为 A2B3C2D2 ,即 8
倍量 60%乙醇回流提取3次 ,每次 2h;方差分析结
果显示 ,C因素(提取次数)对总皂苷提出有显著影
响 ,A因素(溶剂体积)、B因素(回流时间)、D因素
(乙醇浓度)对总皂苷提出无显著影响 ,结合生产实
际 ,从降低生产成本出发 ,对提取条件作适当调整 ,
确定醇提工艺条件为 A1B3C2D1 ,即 6倍量 50%乙
醇提取 2次 ,每次 2 h。
3　提取率的测定
按照优选出的最佳工艺条件 ,取 2份药材进行
提取 ,制备样品 ,结果见表 5。结果表明 ,本工艺条
件提取率高 ,可达 89.79%,收率稳定。
表 5　珠子参总皂苷含量比较
方法 总皂苷含量(%) 平均值(%) 提取率(%)
药材 12.3 12.05 100.00
11.8
最优提取 10.84 10.82 89.79
工艺法 10.79
4　结果与讨论
4.1　结果　实验结果表明 ,珠子参总皂苷的最佳
提取工艺为 6倍量 50%乙醇提取 2次 ,每次 2 h。
以此条件总皂苷提取率可达 89.79%,收率稳定 。
4.2　讨论　珠子参的成分较复杂 ,从目前的研究
进展看 ,珠子参尚缺乏系统化的研究 ,指标性成分
或有效成分对照品的制备及质量标准尚未建立 ,因
此本研究以研究比较成熟的人参皂苷 Re 为对照
品 ,以总皂苷含量为测定指标 。
参考文献
[ 1] 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典(一
部)[ M] .北京 :化学工业出版社 , 2005.192.
[ 2] 王本祥.现代中药药理与临床[ M] .天津:天津科技翻译
出版公司 , 2004.1186-1187.
(收稿日期:2005-12-31)
HPLC法测定七宝美髯颗粒中大黄素的含量
李乃高
(陕西华西制药股份有限公司 ,陕西 宝鸡 721001)
摘　要:目的 用HPLC 法测定七宝美髯颗粒中大黄素的含量 。方法 用C18柱(200 mm×4.6mm ,5μm)为
固定相 ,甲醇-0.1%磷酸(85:15)为流动相 ,流速为 0.8ml/min ,室温 ,检测波长为 254nm 。结果 大黄素在
0.06-0.3μg 范围内线性关系良好 , r=0.9999(n=5),平均回收率为 98.7%, RSD=1.32%。结论 本法操
作简便准确 ,可作为七宝美髯颗粒中大黄素的质量控制方法 。
关键词:HPLC;七宝美髯颗粒;大黄素;含量
中图分类号 R282　R927.2　　文献标识码:A　文章编号:1002-168X(2006)02-0068-02
　　七宝美髯颗粒是《中国药典》2000年版一部中
收载的品种 ,由制何首乌 、当归 、补骨脂(黑芝麻
炒)、枸杞子(酒蒸)、菟丝子(炒)、茯苓 、牛膝(酒蒸)
等七味药组成 ,具有较好的滋补肝肾的作用 ,临床
用于肝肾不足 ,须发早白 ,遗精早泄 ,头眩耳鸣 ,腰
酸背痛的治疗。方中君药为制何首乌。本试验采
用高效液相色谱法对制何首乌中的大黄素进行含
量测定 ,建立了七宝美髯颗粒的质量标准。
1　仪器与试药试液
1.1　仪器　高效液相色谱仪(大连伊利特科学仪
器有限公司), P200Ⅱ型高压恒流泵;μV-200 Ⅱ型
紫外检测器:Echrom98色谱数据处理工作站 。
1.2　试药与试液　甲醇为色谱纯 ,水为自制重蒸
馏水 ,其它试剂均为分析线性;大黄素对照品购自
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