全 文 ：蓝 靛 果 抗 氧 化 作 用 的 实 验 研 究
韩京振　金　政　金松竹　李相伍
(延边大学医学院·延吉 133000)
　　蓝靛果(Loniceraedulis)是忍冬科忍冬属植物。其果实酸甜可口 、
营养丰富[ 1] 。民间入药有清热解毒作用 ,关于其药理作用国内研究
报道甚少。本文选用几种缺氧模型系统地研究了蓝靛果对缺氧小鼠
的保护作用。
1　材料
1.1　药品与试剂　蓝靛果总提物由延边大学医学院附属医院制剂
科提供。蓝靛果总提物的制备:于 6～ 7月份采集蓝靛果置于阴凉干
燥处干燥 ,再置于干燥器真空干燥 , 备用。准确称取干燥果实 500g ,
加适量蒸馏水浸泡 12h ,用捣碎机捣碎 , 砂布过滤;残渣重新进行捣
碎 ,纱布过滤 ,重复 2次 , 合并滤液 ,滤纸抽滤 , 并将残渣水洗至无颜
色。将滤液用旋转蒸发器浓缩至 1000ml即得。异丙肾上腺素(ISO):
上海天丰制药厂生产。亚硝酸钠系上海试剂厂生产。盐酸普萘洛
尔:北京制药厂生产。
1.2　动物　昆明种小鼠 ,雄性 ,体重 18±2g ,由延边大学医学院实验
动物科提供。
2　方法与结果
2.1　对小鼠常压缺氧的影响
按常压缺氧实验[ 2]将小鼠 75只随机分成 5组 ,即对照组 、蓝靛果
小剂量组(0.5g干果/Kg)、蓝靛果中剂量组(1.0干果/kg)、蓝靛果大
剂量组(2.0g干果/Kg)、盐酸普萘洛尔组(20mg/Kg)。 蓝靛果组灌胃
给药连续 14d ,于末次给药后 30min将小鼠分别置于容量为 250ml放
有钠石灰的广口瓶内 ,密封观察小鼠存活时间。普萘洛尔组于实验
前 30min腹腔注射给药;对照组用等容量的生理盐水 ,给药及实验方
法同蓝靛果组 ,分别记录小鼠缺氧死亡时间 ,结果见表 1。
表 1 蓝靛果对常压缺氧小鼠存活时间的影响(X±S)
组别　　 动物数 剂量(g·Kg -1)　 存活时间(min)　
生理盐水 15 32.9±5.0
蓝靛果(高) 15 2.0 41.9±4.0＊
蓝靛果(中) 15 1.0 39.2±4.6＊
蓝靛果(低) 15 0.5 37.1±6.2＊
盐酸普萘洛尔 15 0.02 39.8±6.1＊
　　与生理盐水组比较＊P<0.05
　　蓝靛果 3个剂量组与生理盐水组比较均能明显延长小鼠的存活
时间 ,说明其具有提高小鼠耐缺氧能力的作用。
2.2　对特异性心肌缺氧小鼠的存活时间的影响
取小鼠 90只 ,体重按表 2的分组及剂量灌胃给药 ,连续 14d;普萘
洛尔组于实验前腹腔注射普萘洛尔 20mg/Kg;末次给药 50min后除Ⅰ
组外 ,均皮下注射异丙肾上腺素 15mg/Kg , 10min后 ,分别放入 250ml
磨口广口瓶中 ,密封 ,记录小鼠存活时间 ,结果见表 2。
由表 2可知 ,在皮下注射异肾上腺素后 ,蓝靛果大中剂量和盐酸
普萘洛尔组均能显著延长小鼠存活时间 ,小剂量组有延长小鼠存活
时间作用 ,但未达到统计学差别。
2.3　对小鼠减压缺氧的保护作用[ 3 ,4]
小鼠 80只 ,随机分为 4组,给药组为两组 ,分别按表 3给药剂量
灌胃给药 14d ,末次给药后 1h ,两个剂量组分别实验 ,每个给药组和对
照组各取 5只放入自制的减压仓 , 将小鼠放入其空箱中 , 减压至负
500KPa ,待仓中全部小鼠死亡一半时 ,立即恢复至常压 ,记录各组的
存活 、死亡数 ,用 X2 统计存活率的显著性 ,结果见表 3。
表 2 蓝靛果对特异性心肌缺氧小鼠存活时间的影响( X±S)
组别　　　 动物数 剂量(g·Kg-1) 存活时间(min)
生理盐水 15 30.1±6.0
生理盐水+ISO 15 17.0±3.6
蓝靛果(高)+ISO 15 2.0 25.5±8.1＊
蓝靛果(中)+ISO 15 1.0 20.7±7.8
蓝靛果(低)+ISO 15 0.5 18.2±4.7
盐酸普萘洛尔+ISO 15 0.02 24.1±8.6＊
　　与生理盐水+ISO组比较＊P<0.05
表 3 蓝靛果对减压缺氧小鼠的保护作用
组别　　 动物数 剂量(g·Kg -1) 存活数 死亡数 存活率(%)
生理盐水 20 6 14 30%
蓝靛果(低) 20 0.5 14 6 70%＊
生理盐水 20 7 13 35%
蓝靛果(高) 20 2.0 15 6 75%＊
　　与生理盐水组比较＊P<0.05
2.4　对小鼠亚硝酸钠中毒的影响
小鼠 60只 ,按表 4的分组及剂量灌胃给药连续 14d ,盐酸普萘洛
尔组于实验前给予盐酸普萘洛尔 20mg/Kg。末次给药后 1h , 各组均
腹腔注射亚硝酸钠 240mg/Kg ,记录小鼠存活时间 ,结果见表 4。
表 4 蓝靛果对小鼠亚硝酸钠中毒缺氧的影响( X±S)
组别　　 动物数 剂量(g·Kg -1) 存活时间(min)
生理盐水 15 10.08±1.85
蓝靛果(高) 15 2.0 20.80±4.30＊
蓝靛果(中) 15 1.0 19.70±3.80＊
蓝靛果(低) 15 0.5 15.06±3.85
普萘洛尔 15 0.02 20.45±3.20＊
　　与生理盐水组比较　＊P<0.05
3　讨论　小鼠耐缺氧实验 ,方法简便易行 ,结果稳定可靠, 是筛选抗
心肌缺血药的方法之一。心肌缺血是冠心病基本的病理生理过程 ,
心肌缺血时因血流量的减少 ,心肌不能获得足够的氧而致心肌缺氧。
心肌缺血缺氧会引起心肌细胞代谢过程紊乱 ,尤其是能量物质的生
成锐减 ,正常心功能难以维持 ,心肌收缩性减弱 ,心舒张功能障碍等。
又因血流中断 ,有害的产物难以清除[ 5] 。 因此 ,心肌缺血的最根本防
治措施仍是改善血供 ,降低氧耗 ,通过消除或对抗有害物质对心肌的
不良影响以保护心肌[6] 。
本文研究证明蓝靛果不仅对常压缺氧和组织缺氧小鼠有保护作
用 ,而且对特异性增加心脏耗氧的小鼠能明显延长其生存时间 ,说明
能改善心肌氧的供求。此外蓝靛果对减压缺氧小鼠也有明显的保护
作用。提示蓝靛果有可能对冠心病显示一定疗效。
综上所述 ,蓝靛果确能增强整体动物在缺氧条件下的生存能力。
关于蓝靛果抗心肌缺氧的机制 ,还有待进一步研究。
　　参考文献
1　李淑芹.东北农业大学学报 1994;5(4):401
·45·2002年第9卷第1期 中国中医药科技　　　　　　　　
2　李仪奎主编.中药药理实验方法学.上海科学技术出版社 , 1991:
110～ 111, 115～ 116
3　陈奇.中药药理研究方法学.北京.人民卫生出版社 , 1993:782～
783
4　陶顺兴 ,等.中草药 1996;27(5):293
5　杨惠玲 ,主编.高级病理生理学.北京:科技出版社 , 1998:188～ 211
6　祝晓光.中国药理学通报 1999;15(3):252
蓝 靛 果 对 四 氯 化 碳 所 致 小 鼠 肝 损 伤
修 复 作 用 的 形 态 学 研 究
金　政　王启伟　金美善　李相伍
(延边大学医学院·延吉 133000)
　　蓝靛果(Loniceraedulis)是忍冬科忍冬属植物 , 主要分布于长白山
及小兴安岭。民间入药有清热解毒作用。也有人报道具有降压作
用[ 1] 。但尚未见对动物急性肝损伤保护作用方面的研究报道。本实
验用蓝靛果提取物对四氯化碳所致小鼠肝损伤的修复作用进行了组
织化学及超微结构观察 ,力求为蓝靛果的保肝机理探讨提供形态学
依据。
1　材料与方法
1.1　实验动物　昆明种小鼠 ,体重 20±2g , 均为雄性 ,购自延边大学
医学院实验动物科。
1.2　主要试剂　蓝靛果提取物由延边大学医学院附属医院制剂科
提供。制备方法:于 6～ 7月份采集蓝靛果置于阴凉干燥处干燥 ,再
置于干燥器内进行真空干燥 ,备用。准确称取干燥果实 500g ,加适量
蒸馏水浸泡 12h ,用捣碎机捣碎 ,砂布过滤;残渣重新进行捣碎 ,纱布
过滤 ,重复 2次 ,合并滤液 ,滤纸抽滤 ,并将残渣水洗至无颜色。将滤
液旋转蒸发器浓缩至 1000ml即得。四氯化碳:北京化学试剂厂产品。
1.3　方法　小鼠 40只 ,随机分为 4组;正常组(10只),肝损伤组(10
只),肝损伤盐水组 20ml/Kg 体重(10只), 肝损伤蓝靛果组 0.2ml(10
只)。正常组不给任何药物 ,正常喂养;后 3组均于第 1、第 4d上午背
部皮下注射 1%CCl410ml/Kg体重。肝损伤盐水组于当日下午开始用
生理盐水 0.2ml灌胃 , 1d1次共 6d ,肝损伤蓝靛果组于当日下午开始
用蓝靛果灌胃 0.2ml , 1d1次共 6d。全部动物均于末次注射后 12h断
头处死 ,迅速取出肝左叶:取小块组织经 Carnoy 液固定 ,石蜡包埋 ,切
片厚 6μm , HE染色;PAS法显示肝糖原。另取肝组织冰冻切片 ,切片
厚 10μm ,进行组织化学染色:油红 O 法显示中性脂肪;陈啸梅[2]等方
法显示琥珀酸脱氢酶活性。取 2～ 3块 1mm3大小的肝组织 , 经 2%戊
二醛固定 , 1%锇酸后固定 , 4%醋酸双氧铀块染 ,环氧树脂 618包埋 ,
超薄切片 70nm ,用 JEM-1200EX透射电镜观察。
2　结果
2.1　一般组织学观察　肝损伤组小鼠肝组织显示以中央静脉为中
心的出血和坏死 ,坏死区周围有大量脂肪变性细胞。 肝损伤蓝靛果
组小鼠肝组织损伤则大为减轻 ,各肝小叶变性坏死范围缩小 ,仅表现
为少数的灶性坏死和轻度的脂肪变性。
2.2　组织化学
2.2.1　中性脂肪　对照组仅见少量散在的被油红 O 染成桔红色的
中性脂肪;肝损伤组坏死区肝细胞的脂滴被油红O 染成桔红色 ,脂滴
大小不等 ,有的大于肝细胞;肝损伤蓝靛果组油红O 染色显示的脂滴
范围和大小均减少。
2.2.2　糖原　正常组肝细胞内糖原丰富 ,被PAS法染成红色 ,一般是
周边区肝细胞糖原多于中央区;肝损伤组糖原减少 , 甚至消失;肝损
伤蓝靛果组糖原基本恢复。
2.2.3　琥珀酸脱氢酶　正常组肝细胞内酶活性强 ,呈紫蓝色颗粒状 ,
核不着色 ,小叶周围活性强于中央带 ,呈明显的分带现象;肝损伤组
酶活性显著降低 ,肝损伤蓝靛果组损伤区域缩小 ,酶颗粒增多 ,染色
较深。
2.3　超微结构观察　正常组肝细胞显示通常的超微结构;肝损伤组
多数动物的肝细胞严重变性 , 表现为核膜肿胀, 界限模糊 ,核染色质
积成大小不等的块状 ,胞质内有大小不等的脂滴 ,内质网减少 ,残存
的粗面内质网扩张 ,所附核糖体有脱颗粒现象;线粒体呈现不同程度
肿胀 ,嵴减少或断嵴 ,糖原颗粒减少 ,肝损伤蓝靛果组粗面内质网恢
复平行排列 ,脱颗粒现象减少 , 滑面内质网有所增加 ,线粒体大小形
态结构基本正常 ,脂滴减少。
3　讨论　本实验用CCl4 造成肝损伤动物模型 ,其主要形态学和组织
化学以及形态结构的变化与前人所见基本一致。主要形态学变化为
小叶发生中心性细胞脂肪变性坏死。各组织化学染色反应均明显降
低。超微结构的变化是粗面内质网扩张 , 核蛋白体脱位 , 线粒体肿
胀 ,嵴降解。
目前认为CCl4 引起的肝细胞中毒机制是 CCl4 经肝细胞微粒体
细胞色素氧化酶系统代谢 、激活后 ,生成 CCl3 , CCl3 攻击肝细胞膜和
细胞器质膜过氧化损伤[3] 。
本实验中肝损伤经蓝靛果治疗后 ,以中央静脉为中心的坏死区
缩小 ,含有脂滴的肝细胞明显减少 ,脂滴由多变少 ,由大变小 ,滑面内
质网有所增加 ,粗面内质网大部分恢复平行排列 ,说明蓝靛果具有减
轻肝细胞坏死 ,防止脂肪变性及促进肝细胞恢复的作用。
SDH 位于线粒体外膜上为其标志酶 , 肝损伤组其活性降低 ,超微
结构呈线粒体肿胀 ,破碎 ,肝损伤蓝靛果组 SDH 活性增强 ,线粒体基
本恢复正常形态 ,表明蓝靛果可促进线粒体恢复和再生。
综上所述 ,我们认为蓝靛果对CCl4损伤的肝组织有保护作用 ,其
机理可能是蓝靛果阻止脂类过氧化以保护肝细胞的膜性结构不受破
坏 ,阻止了内质网的损伤 ,促进蛋白质合成及解毒作用, 继而线粒体
损伤和脂肪变性相应减轻 ,减少了细胞损伤 ,并有促进肝细胞再生 、
恢复肝功能的作用。
　　参考文献
1　郎杰 ,等.中医药信息 1996;1:45
2　陈啸梅 ,等.组织化学手册.人民卫生出版社 , 1982;224
3　黄兆胜 ,等.中国药理学通报 1998;14(6):543
(收稿:2001-01-21)
·46· 　　　　　　　　中国中医药科技 2002年第9卷第1期