全 文 ：两种香青中总黄酮含量测定及抗氧化活性①
① 国家自然科学基金 ( 31101012) ;国家科技攻关项目 ( 0713351614)
② 联系人:电话: ( 0971) 6117264; E-mail: w ql@ nwipb. cas. cn
作者简介:王瑛 ( 1987— ) ,女 ,辽宁省大连市人 ,硕士研究生 ,主要从事天然药化研究工作。
收稿日期: 2013-04-08;接受日期: 2013-04-16
王 瑛a ,b　张本印a　党 军a,b　陶燕铎a　梅丽娟a　王启兰② a
a (中国科学院西北高原生物研究所　青海省西宁市新宁路 23号　 810008)
b(中国科学院研究生院　北京市石景山区玉泉路 19号　 100049)
摘　要　研究对乳白香青和珠光香青进行定性、定量比较分析 ,建立乳白香青与珠光香青总黄酮含量
测定方法并进行对比分析。采用薄层层析实验对乳白香青与珠光香青中总黄酮进行定性鉴别 ;用紫外分光
光度法 ,对两种香青的总黄酮含量及其抗氧化活性进行测定。经测定 ,乳白香青与珠光香青中总黄酮含量
分别为 40. 43mg /m L和 34. 32mg /m L;乳白香青抑制 DPPH自由基的能力 IC50为 2. 96mg /m L;珠光香青
IC50为 3. 488mg /mL。
关键词　珠光香青 ;乳白香青 ;总黄酮 ;抗氧化活性
中图分类号: O657. 32; O657. 7　　　文献标识码: A　　　文章编号: 1004-8138( 2013) 05-2104-05
1　引言
乳白香青 ( Anaphalis lactea Maxim. )与珠光香青 ( Anaphalis margaritacea ( l inn. ) Benth. et
Hook. f. )均属菊科香青属多年生草本植物 ,主要分布于青海东部、甘肃南部及四川西北部。为常用
藏药 ,全草用药 ,具有活血散瘀、祛风湿、消痞瘤、平肝潜阳、祛痰、平喘及外用止血、治风寒感冒、胃
溃疡等功效 [1— 4 ]。对开发和利用乳白香青资源有重要意义。研究表明乳白香青和珠光香青中含有大
量黄酮类化合物 [5 ]。黄酮类化合物具有广泛的生物活性及药理作用 ,如它是一种很强的抗氧剂 [6, 7 ] ,
可有效清除体内的氧自由基 ,这种抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老 ,也可阻止癌症的发
生 [8, 9 ] ,对肾脏的保护作用、营养作用、对心血管的保护作用 [10 ]、抗辐射、抗炎 [11 ]、驱虫 [12 ]、镇痛解热
及护肝等作用等 ,且无毒无害。对于以上两类香青的研究主要集中于对化学成分研究 ,除了包锦渊
等 [13 ]对乳白香青中黄酮含量进行测量过以外 ,其他成分均未见报道。本文利用薄层层析法对乳白
香青、珠光香箐中黄酮类成分进行定性检测 ,用分光光度法进行定量分析。并对二者性质、含量以及
抗氧化活性进行了比较研究 ,这对进一步研究其相关药理作用及开发西部地区药用植物资源有重
要意义。
　 2　实验部分
2. 1　试剂与仪器
HH-6型数显恒温水浴锅 (常州国华电器有限公司 ) ; N-1001型旋转蒸发仪 (上海爱朗仪器有限
公司 ) ; 752型可见分光光度计 (上海第三分析仪器厂 ) ;循环水式真空泵 (郑州长城科工贸有限公
司 ) ; 101A-2E型电热鼓风干燥箱 (上海实验仪器有限公司 ) ; HSGF254型硅胶薄层板 (青岛海洋化
工厂分厂 ) ; AG204型电子分析天平 (瑞士苏黎世梅特勒公司 ) ; DFY-300型摇摆式高速万能粉碎机
(浙江温岭市林大机械有限公司 ) ;芦丁标准品 (中国药品生物制品检定所批号 100080-200306) ;三
氯甲烷、甲醇和乙醇等试剂均为分析纯 ;乳白香青、珠光香青 ( 2011年 8月采于青海省互助北山林场 ,
阴干 ,粉碎 ,过 80目筛 )。
2. 2　实验方法
图 1　芦丁校准曲线
2. 2. 1　对照品储备液的制备
准确称取在 120℃干燥至恒重的芦丁对照
品 25mg,置于 100mL容量瓶中 ,加乙醇适量 ,超
声处理使之溶解 ,冷置 ,加乙醇至刻度并摇匀。
准确量取 20mL,置于 50mL容量瓶中 ,加水至刻
度并摇匀 ,即得 0. 1mg /mL的芦丁对照品溶液。
以浓度为横坐标 ,吸光度为纵坐标 ,绘制校准曲
线 ,结果见图 1。
2. 2. 2　供试品储备液的制备
称取珠光香青、乳白香青粗粉 ( 80目 )各约
1. 0g置于索氏提取器中 ,加入适量三氯甲烷回流提取至无色 ,弃去三氯甲烷液 ,药渣挥去三氯甲
烷 ,加甲醇继续提取至无色 (约 2h) ,提取液蒸干 ,残渣加稀乙醇溶解 ( 30%— 40% ) ,转移至 50 mL容
量瓶中 ,加稀乙醇至刻度并摇匀 ,作为供试品储备液。
3　结果与讨论
3. 1　定性检验
分别取珠光香青 ,乳白香青粉各 5g ,分别置于两个 100mL烧杯中 ,各加入 50mL甲醇 ,放于超声
仪上进行超声提取 10— 20min,过滤 ,甲醇定容 ,所得溶液作为样品定性溶液。
采用薄层层析法 ,各取少量样品溶液 ,以毛细管吸取分别在两个聚酰胺薄膜上进行点样 ,两类
样品均以芦丁为标准品进行点样 ,将薄层板同时置于相应展开剂 (乙醇 丙酮 水= 7 5 6)中 ,溶剂
展开后热风吹干 ,喷以三氯化铝试液 ,热风吹干 ,取出 ,放于紫外灯光 ( 365nm )下检视 ,在于对照品
相应的位置上 ,显示相同颜色的荧光斑点。
3. 2　定量测定
3. 2. 1　线性关系的确定
准确吸取对照品溶液 0. 0, 1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0, 5. 0, 6. 0mL,分别置于 25mL容量瓶中 ,各加水
6mL,分别加入 5% NaNO2 1mL,混合均匀 ,放置 6min;然后加入 10% Al( NO3 ) 3 1mL,摇匀 ,放置
6min;再分别加入 4% NaOH 10mL,加水至刻度 ,摇匀 ,放置 15min。以第一份溶液为空白 ,在 500nm
处测吸光度值。得回归方程 A= 8. 8786C+ 0. 0267,相关系数 r= 0. 9976,线性范围: 0. 009— 0.
0482g /L。
3. 2. 2　样品含量的测定
准确称取乳白香青、珠光香青粗粉各 1份 ,按 3. 2. 1节处理 .按 3. 2. 1节的操作测乳白香青中总黄
酮含量及珠光香箐中总黄酮含量。
2105第 5期 王 瑛等:两种香青中总黄酮含量测定及抗氧化活性
3. 3　方法学考察
3. 3. 1　稳定性测定实验
准确量取两类供试品溶液各 0. 1mL,分别置 25 mL容量瓶中 ,按 3. 2. 1节操作 ,每 5min测定 ,结
果表明在 40min内样品溶液的稳定性良好 ,乳白香青 RSD为 2. 6% ,珠光香青 RSD为 1. 31%。
3. 3. 2　精密度考察
取对照品溶液 ,按 3. 2. 1节的操作 ,连续测定其吸光度 6次 ,乳白香箐 RSD为 0. 85% ,珠光香青
RSD为 0. 38% ,表明用本方法精密度良好。
3. 3. 3　样品回收率实验
取样品液 5份 ,分别置于 25mL容量瓶中 ,每份中加入芦丁对照品分别 3. 0mL,按 3. 2. 1节的操
作 ,得乳白香青平均回收率为 93. 3% , RSD为 3. 6% ,珠光香青平均回收率为 99. 32% , RSD为 3.
7% 。
图 2　两种香青总黄酮对 DPPH自由基抑制率
3. 4　抗氧化活性的测定
参考 La rrauri[ 14]和 Yokozawa[15 ]的测定方法并
加以改进。准确称取 DPPH配制成 0. 06mmol /L无
水甲醇溶液 ,同时将样品用甲醇配制成一系列浓
度。取各浓度下样品 0. 1mL加入到 3. 5mL DPPH
溶液中 ,用无水甲醇定容至 5mL,充分混匀 ,在室温
下静置 30min后 ,利用在 515nm波长下 DPPH有
紫红色团的特征吸收峰 ,以紫外分光光度法测定
加入样品提取物后吸光度的变化 ,测其吸光度值。DPPH自由基的清除率计算公式: 清除率 (% )=
( A0 - A ) /A0× 100,式中: A0—— 未加提取液时 DPPH溶液的吸光度值 ; A——加入提取液测定时
的吸光度值。以样品 ( mg /mL)对 DPPH清除率作图 (图 2) ,就可以得到清除 50% DPPH时所需样品
的量 ,即 IC50值。IC50值以清除每毫克 DPPH所需样品量表示。
3. 4. 1　含量测定与抗氧化活性
由表 1可知 ,乳白香青总黄酮含量 40. 43mg mL- 1 , IC50为 2. 96mg mL- 1;珠光香青中总黄酮含
量 34. 32mg mL- 1 , IC50为 3. 488mg m L- 1 ;由于 IC50值越小 ,抗氧化活性越强。故表明乳白香青较珠
光香青有较好的抗氧化活性。
表 1　两种香青中总黄酮含量及 IC50 (mg /mL)
总黄酮含量 ( mg /m L) IC50( mg /m L)
乳白香青 40. 43 2. 960
珠光香青 34. 32 3. 488
3. 5　讨论
3. 5. 1　乳白香青与珠光香青总黄酮鉴定
由实验可看出 ,以三氯化铝试液做显色剂 ,薄层层析法对香青中总黄酮进行鉴定 ,效果明显 ,表
明该方法不仅简便易行 ,而且结果可靠。
3. 5. 2　乳白香青与珠光香青含量比较
经过试验测定 ,乳白香青中总黄酮含量为 40. 43mg /mL,珠光香青总黄酮含量为 34. 32mg /mL,
2106 光谱实验室 第 30卷
实验表明乳白香青中含有较高含量的黄酮 ,同时为从香青中提取黄酮的最佳工艺研究提供了依据 ,
有重要应用价值。
3. 5. 3　方法学考察结果分析
( 1) 通过用三氯甲烷和甲醇提取乳白香青、珠光香青中的黄酮 ,由实验得出的测定结果 ,表明
提取黄酮较为完全 ,提取含量较高。
( 2)用 NaNO2 A1( NO3 ) 3-NaOH体系与黄酮形成络合物的化学吸光分析法 ,其回归方程的相
关分析和方差分析结果表明 ,线性关系好 ,且线性范围宽 ,其方法简便快捷。
( 3) 对本次试验进行稳定性、精密度以及回收率检验 ,结果表明在 40min内样品溶液的稳定性
良好且本方法精密度良好 ,样品回收率较高。
4　结论
本实验测定方法可以准确地进行定性、定量检测 ,操作简便快速、结果可靠、重现性好 ,可完善
在乳白香青、珠光香青化学成分方面的研究 ,并有效控制其质量 ,同时也为乳白香青、珠光香青中化
学成分的研究提供了一定的科学依据。
以芦丁为对照品 ,亚硝酸钠 -硝酸铝 -氢氧化钠体系作为显色剂 ,建立了用紫外分光光度法测定
两种香青中总黄酮含量的方法 ,并用于测定乳白香青与珠光香青中总黄酮的含量 ,结果表明本法操
作简便快速 ,结果稳定可靠 ,可用于测定香青总黄酮含量。同时对其抗氧化活性进行测定 ,其 IC50值
分别为 2. 960mg mL- 1和 3. 488mg /mL,说明两种香青总黄酮均具有一定的抗氧化活性。因此 ,可以
对这两种香青中总黄酮作为天然抗氧化剂来开发。目前国内外对乳白香青与珠光香青的研究很少 ,
对化学成分和相关活性的研究也仅停留在成分预试和有效成分含量分离测定方面。为了更好的开
发、利用这一植物资源 ,对乳白香青与珠光香青中抗氧化类物质的提取、分离及各成分间的协同作
用和活性有待进一步深入研究。
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Determination of Total Flavones and Antioxidant Activity
of Anaphalis lactea Maxim. And Anaphalis margaritacea Benth.
W ANG Yinga,b　 ZHANG Ben-Yina　 DANG Juna,b　 TAO Yan-Duoa　 MEI Li-Juana　 WAN G Qi-Lana
a (Northwest Institute of Plateau Biolog y,Chinese Acad emy of Sciences, X ining , Qinghai 810008,P . R.Ch ina )
b (Graduate University of Ch inese Academ y of Sciences ,Beijing 100049,P . R.Ch ina )
Abstract　 To screen the ex tracting method of total flavones in Anaphal is lacteal Maxin and
Anaphalis margaritacea Benth, this study took di fferent methods to make a qualita tive analysis, this
research provide a scientific basis for further study of optimized ex tracting technique of total flav ones.
It also make full use of Anaphal is lacteal Maxin and Anaphalis margaritacea Benth resources. This
study used rutin as a comparison, applied spect ropho tometry at 500 nm to determine the content of
total flav ones in. The qualitativ e analysis is mainly in chemical analy sis w ays. By comparing and
analysis, The content of total flav ones in Anaphalis lacteal Maxin ( 40. 43 mg /mL) relativ ely higher
than in Anaphalis margaritacea Benth( 34. 32 mg /mL) .
Key words　 Anaphalis lacteal Maxin; Anaphalis margaritacea Benth; Total Flav ones;
Antioxidant Activi ty
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