全 文 ：湖 北 农 业 科 学 2011 年
收稿日期：2010－07－05
基金项目：青海省科技厅项目（2008－s－28）
作者简介：王 欢（1982－），女，陕西渭南人，在读硕士研究生，研究方向为药物分析，（电话）13997269851（电子信箱）wanghuan1028happy＠163．com；
通讯作者，卢永昌，教授。
第 50 卷第 5 期
2011年 3 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 50 No.5
Mar．，2011
乳白香青（Anaphalis lactea Maxim.）属菊科香
青属多年生草本植物，主要分布于青海东部、甘肃
南部及四川西北部。 为常用藏药，全草用药，具有活
血散瘀、祛风湿、消痞瘤、平肝潜阳、祛痰、平喘及外
用止血、治风寒感冒、胃溃疡等功效［1－3］。绿原酸具有
抗菌、抗病毒 ［4］、止血、抗氧化、消除自由基、抑制突
变和抗肿瘤等作用［5］。
对于乳白香青中的绿原酸的研究较少，尤其使
用高效液相色谱法测定乳白香青中的绿原酸含量
的研究在国内尚未见报道。 试验以乳白香青为试验
材料，甲醇为溶剂，采用超声的方法进行提取，使用
高效液相色谱法对乳白香青提取液中的绿原酸的
含量进行了测定，旨在为乳白香青的进一步开发利
用提供参考。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 试验药材 乳白香青于 2009 年 7 月采自青
海互助北山林场，由中国科学院西北高原生物研究
所孙洪发研究员鉴定，样品阴干后粉碎过 80 目筛，
冷藏保存。
1．1．2 试剂 绿原酸对照品（中国药品生物制品检
定所，批号 110753－200413）；甲醇为色谱纯，水为去
离子水；其他提取试剂均为分析纯。
1．1．3 仪器 高效液相色谱仪（Agilent 1100，含二
元泵，DAD检测器），KQ3200B型超声波清洗器 （昆
仑超声仪器有限公司），ME215S 型电子天平 （赛多
利斯）。
乳白香青中绿原酸含量的 HPLC法测定
王 欢，吉守祥，虎明山，卢永昌
（青海民族大学化学与生命科学学院，西宁 810007）
摘要：建立高效液相色谱法测定乳白香青中绿原酸含量的方法。 采用 ZORBAXSB－C18 色谱柱（250 mm×
4．6 mm，5 μm）；以甲醇∶0．04％磷酸（V∶V＝23∶77）为流动相，流速 1．0 mL ／ min；检测波长 330 nm；柱温 30℃；
进样量 10 μL。 绿原酸标准品的进样浓度在 0．012～0．240 mg ／ mL 的范围内呈现良好的线性关系 ，
r＝0．999 9，加标回收率平均值为 101．20％，RSD＝1．30％（n=9）。 高效液相色谱法精密度高，重现性好，是测
定乳白香青中绿原酸含量准确、简便、有效的方法。
关键词：高效液相色谱法；乳白香青；绿原酸
中图分类号：O657．7＋2 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2011）05－1030-02
Determination of the Contents of Chlorogenic Acid in Anaphalis lactea by HPLC
WANG Huan，JI Shou－xiang，HU Ming－shan，LU Yong－chang
（Qinghai Nationalities College of Chemistry and Life Science，Xining 810007，China）
Abstract： To establish an HPLC method to determine chlorogenic acid of Anaphalis lacteal Maxim by HPLC． It was assayed
with zorbaxSB－C18 column （250．0 mm×4．6 mm，5 μm）． The mobile phase was consisted of Methanol－0． 04％ phosphoric acid
aqueous solution （23∶77） with the flow rate of 1．0mL ／ min， the detecting wavelength was at 300nm， and column temperature
of 30℃． The injection volume was 10μL． The results showed that there was a good linear range of 0．012～0．240 mg ／ mL （r＝
0．999 9）， the average recovery was 101．20％， RSD was 1．30％． In conclusion， HPLC was an actually， simple， and effective
method to detect chlorogenic acid in Anaphalis lactea Maxim．
Key words： HPLC； Anaphalis lacteal Maxim.； chlorogenic acid
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2011.05.056
第 5 期
1．2 方法
1．2．1 提取方法 准确称取乳白香青样品粉末 2．0 g，
用 15 mL 95％甲醇超声提取 45 min， 同条件提取 3
次，过滤，合并滤液，用甲醇定容于 50 mL 容量瓶
中。混合均匀后经 0．45 μm微孔滤膜过滤，滤液备用。
1．2．2 绿原酸定量 根据 DAD 检测器对绿原酸在
200～400 nm 范围扫描，用高效液相色谱仪测定保留
时间与对照品对比，制作标准曲线，采用外标法定
量。
标准曲线的绘制：精密称取绿原酸对照品 1．2mg，
用甲醇溶于 5 mL 容量瓶中， 定容至刻度， 配制成
0．24 mg ／ mL 的标准储备液。 取标准储备液 0．1、0．4、
1．0、1．2、1．6、2．0 mL 定容至 2 mL 的流动相溶液中，
配 制 成 浓 度 分 别 为 0．012、0．048、0．120、0．144、
0.192、0．240 mg ／ mL 的系列标准溶液，将标准溶液用
0．45μm微孔滤膜过滤，在下述色谱条件下进样 10μL。
以峰积分面积为纵坐标，绿原酸的浓度为横坐标进
行线性回归分析，绘制标准曲线：y赞 ＝230．6x－93．95，
r＝0．999 9， 说明绿原酸的浓度与吸光度在 0．012～
0．240 mg ／ mL 的范围内呈现良好的线性关系。
1．2．3 色谱条件 ZORBAXSB－C18 色谱柱 （250
mm×4．6 mm，5 μm）； 流动相为甲醇∶0．04％磷酸＝23∶
77，流速 1．0 mL ／ min；检测波长 330 nm；柱温 30℃；
进样量 10 μL。 此条件下绿原酸得到较好的分离。
1．2．4 样品的测定 精密吸取供试品溶液 10 μL进
样， 按上述色谱条件， 用外标法计算绿原酸的含量
分别为 0．57、0．49和 0．56mg ／ g，平均含量为 0．54mg ／ g，
RSD＝0．40％（n＝3）。
1．2．5 精密度试验 精密吸取浓度为 0．240 mg ／ mL
的标准溶液 10 μL， 在上述色谱条件下连续重复进
样（n＝5），记录每次绿原酸的峰面积， 计算峰面积
的 RSD。
1．2．6 加标回收率试验 称取已知绿原酸含量的
乳白香青 9份，每份约 2 g，分别加入高、中和低量的
绿原酸标准溶液各 3 份， 按前面提取方法提取、定
容和过滤，在上述色谱条件下进样 10 μL。记录每个
样品浓度，计算加标回收率及平均值。
2 结果与分析
2．1 提取条件的选择
选择考察了水、75％乙醇和 95％甲醇的提取效
率， 结果表明，95％甲醇提取效率最高；提取时间不
宜太短，否则提取不完全，也不应太长，太长会破坏
绿原酸的结构。 提取时间为 45 min时提取较完全。
2．2 流动相的选择
以甲醇－0．04％磷酸溶液和乙腈－0．04％磷酸溶
液为流动相，基线稳定，分离度好，峰形对称，但考
虑到乙腈的成本高，最终确定采用甲醇－0．04％磷酸
溶液作为流动相。 以峰的保留时间和分离效果为定
性指标， 峰面积为定量指标， 确定在甲醇∶0．04％磷
酸＝23∶77 为流动相时， 绿原酸的保留效果较好，达
到基线分离。
2．3 光谱扫描
用 DAD 检测器对绿原酸的标准品在 200～
400 nm 范围进行扫描，得到绿原酸的光谱图，最大
吸收峰所对应的波长为 330 nm， 即为绿原酸的最
佳检测波长。 取乳白香青的提取液 3 份，经高效液
相色谱仪分离后， 对与绿原酸保留时间相同的组
分，在波长 200～400 nm 范围进行扫描，其光谱图与
绿原酸的光谱图完全一致，说明提取液中含有绿原
酸，因此，选择 330 nm作为检测波长。
2．4 精密度试验结果
精密度试验结果表明，0．240 mg ／ mL 的标准溶
液的峰面积 RSD 为 0．97％（n＝5）， 说明该检测方法
精密度高，具体见表 1。
2．5 加标回收率试验结果
加标回收率试验结果表明，绿原酸的平均回收
率为 101．20％，RSD 为 1．30％（n＝9）， 说明该检测方
法精密度高，重现性好，适合用于乳白香青中绿原
酸的定量分析，结果见表 2。
3 小结
采用高效液相色谱法可以准确测定乳白香青
中绿原酸的含量。 试验采用 ZORBAXSB－C18 色谱
柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；以甲醇 ∶0．04％磷酸（V∶
V＝23∶77）为流动相，流速为 1．0 mL ／ min；检测波长
表 2 加标回收率试验（n=9）
样品
1
2
3
4
5
6
7
8
9
样品中含量
mg
1.125 7
1.120 1
1.152 5
1.176 4
1.168 2
1.157 8
1.157 5
1.153 1
1.151 4
标准品加入量
mg
0.55
0.55
0.55
1.14
1.14
1.14
1.62
1.62
1.62
测定总量
mg
1.687 9
1.679 4
1.698 9
2.315 4
2.301 5
2.330 4
2.801 6
2.810 7
2.796 1
回收率
%
102.22
101.69
99.35
99.91
99.41
102.86
101.49
102.32
101.52
平均回收率
%
101.20
RSD
%
1.30
表 1 精密度试验结果（n=5）
编号
峰面积
1
435.1
2
429.0
3
430.8
4
436.2
5
439.5
平均值
434.1
RSD
0.97%
王 欢等：乳白香青中绿原酸含量的 HPLC 法测定 1031
湖 北 农 业 科 学 2011 年
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
（责任编辑 王晓芳）
330 nm；柱温为 30℃。 加标回收率平均值为101．20％，
精密度高。 说明高效液相色谱法可用于测定乳白香
青中绿原酸的含量，且方法简单、快速、准确率高。
参考文献：
［1］ 罗达尚． 中华藏本草［M］． 北京： 民族出版社，1997．
［2］ 中国科学院西北高原生物研究所． 藏药志［M］． 西宁：青海人民
出版社，1996．
［3］ 袁彦平， 刘兆平， 金东庆． 乳白香青治疗气管炎的动物实验研
究［J］． 中国比较医学杂志， 2004，14（6）：388．
［4］ 王关林，黄红光，吴海东，等．甘薯抗氧化物的分离提取及其生物
活性研究［J］．营养学报，2005，27（6）：479－482．
［5］ 娄红祥，郎伟君，吕木坚．金银花中水溶性化合物的分离与结构
确定［J］．中草药，1996， 27（4）：195－199．
收稿日期：2010－08－05
基金项目：湖南省教育厅课题（201010C0730）
作者简介：蒋海明（1979－），男，湖南永州人，讲师，从事有机合成和分析化学教学方面的工作，（电话）13135277606（电子信箱）3339212＠qq．com；
通讯作者，刘小文，（电子信箱）lxw1110＠126．com。
第 50卷第 5 期
2011年 3月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 50 No.5
Mar．，2011
鱼腥草 （Houttuynia cordata Thunb.）为三白草
科一年生草本植物，始载于《名医别录》，自古以来
供食药两用［1］，现被国家卫生部正式确定为“既是食
品，又是药品”，极具开发价值 ［2－4］。 紫赤色，易于种
植，肥地能蔓生，多生长在湿地山谷阴处。 黄酮类化
合物（Flavonoids）是经植物光合作用产生的一大类
化合物［5，6］，它广泛存在于药用植物、水果和蔬菜中，
特别是高等植物的花、叶、根中较多［7］。 黄酮具有广
鱼腥草全草中黄酮的提取和含量测定
蒋海明，戴永强，刘小文，桂莹芳
（湖南科技学院生命科学与化学工程系，湖南 永州 425100）
摘要：以乙醇为溶剂，采用索氏回流法提取鱼腥草全草中的黄酮。 优化了索氏回流法的提取温度、乙醇体
积分数、提取时间、固液比等提取条件；索氏回流法的最佳提取条件为提取温度 100℃、乙醇体积分数
80％、提取时间 4 h、固液比 1∶30（m/V，g∶mL，下同），在此条件下，黄酮提取率为 12．59％。 采用硝酸铝比色
法测定鱼腥草全草中的黄酮含量，结果表明，芦丁浓度在 48．75～377．31μg ／ mL 范围内与吸光度呈良好的
线性关系（R2＝0．999 4）；相对标准差 RSD 为 0．21％，加样平均回收率为 99．10％，表明该方法重复性良好，
结果稳定可靠。
关键词：鱼腥草全草；黄酮；索氏提取法；紫外分光
中图分类号：Q949．732．2；R284 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2011）05－1032-03
Content Determination of Flavonoid in Whole Plants of Houttuynia cordata
JIANG Hai－ming，DAI Yong－qiang，LIU Xiao－wen，GUI Ying－fang
（Hunan University of Science and Engineering， Yongzhou 425100，Hunan， China）
Abstract：Taking the whole plant of Houttuynia cordata Thunb. as the raw material， ethanol as solvent extraction， Soxhlet
extraction method was used to extract flavonoid． The elements such as extraction temperature， ethanol concentration， extraction
time， solid－liquid ratio which affected the yield of flavonoid from whole plants of H. cordata were investigated by orthogonal
experiment． Content of flavonoid was determined by Al（NO3）3 colorimetry． The results showed that absorption had good linear
relationship with rutin concentration at the range of 48．75 ~377．31μg ／ mL （R2＝0．999 4）． RSD was 0．21％ ， indicating good
repetitiveness． The average recovery rate was 99．10％ ， it showed that the method was stable and reliable． The optimal
conditions were as follows： extraction temperature at 100℃，ethanol concentration of 80％ ， extraction time 3 h， solid－liquid
ratio 1∶30． The yield was 12．59％ under these conditions．
Key words： Houttuynia cordata Thunb whole plant； flavonoids； soxhlet extraction method； spectrophotometry