全 文 ：知识与经验
柱后衍生－高效液相色谱法测定
金针菜中亚硫酸盐
彭晓俊，邓爱华，庞晋山
（新会出入境检验检疫局，新会５２９１００）
中图分类号：Ｏ６５２．６３　　　文献标志码：Ｂ　　　文章编号：１００１－４０２０（２０１１）１２－１４８８－０３
　　亚硫酸盐包括二氧化硫，有漂白、增白、防褐变
及防腐等作用，在食品工业中被广泛使用，因此食品
中亚硫酸盐的毒性日益受到关注。人体长期摄入亚
硫酸盐会严重损害身体健康。许多国家对食品中的
亚硫酸盐含量规定了最大使用量和最大残留限量，
并且研究了各种亚硫酸盐的测定方法［１－３］。盐酸副
玫瑰苯胺法是我国国家标准规定的方法，也是亚硫
酸盐测定通常采用的方法，此法操作简单、灵敏度
高、再现性好。但由于在操作过程使用了有毒的四
氯汞钠溶液，易对环境造成汞污染。此外在测定金
针菜、菜干、木耳等产品时，四氯汞钠浸泡液颜色非
常深，过滤或用活性炭吸附均不能除去基体颜色，试
样在测定波长有较大吸收，容易产生假阳性［４］。本
工作根据亚硫酸盐的化学性质，建立了高效液相色
谱柱后衍生法测定金针菜中亚硫酸盐的含量，能有
效避免金针菜中亚硫酸盐测定时出现的假阳性。
１　试验部分
１．１　仪器与试剂
ＬＣ－２０ＡＴ高效液相色谱仪（配柱后衍生装置），
ＳＰＤ－Ｍ２０Ａ二级管阵列检测器；反相ＬＣ－Ｃ１８固相萃
取柱（３ｍＬ）。
二氧化硫标准溶液：１００．０ｇ·Ｌ－１。
氢氧 化 四 丁 基 铵 （ＴＢＡＯＨ）溶 液：移 取
０．１０ｍｏｌ·Ｌ－１氢氧化四丁基铵溶液５０ｍＬ，用
０．０３ｍｏｌ·Ｌ－１冰乙酸溶液稀释至１Ｌ。
５，５′－二硫代双（２－硝基苯甲酸）（ＤＴＮＢ）溶液：
移取０．０１０ｍｏｌ·Ｌ－１　５，５′－二硫代双（２－硝基苯甲
酸）溶液８０ｍＬ，用０．２０ｍｏｌ·Ｌ－１磷酸溶液稀释至
收稿日期：２０１０－１１－０８
１Ｌ，浓度为０．８０ｍｍｏｌ·Ｌ－１。
所用试剂为色谱纯，试验用水为去离子水。
１．２　仪器工作条件
色谱条件：Ｄｉｓｃｏｖｅｒ　Ｃ１８色谱柱（４．６ ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ），流动相为０．００５ｍｏｌ·Ｌ
－１氢氧化
四丁基铵－乙腈（８８＋１２）混合溶液，流量１．００ｍＬ·
ｍｉｎ－１，柱温为３５℃，进样体积为２５μＬ，检测波长
为４４５ｎｍ。
柱后衍生条件：衍生试剂为０．０５０ｍｏｌ·Ｌ－１氢
氧化钠溶液和０．８０ｍｍｏｌ·Ｌ－１　ＤＴＮＢ溶液，温度
为５０℃，流量１．００ｍＬ·ｍｉｎ－１。
１．３　试验方法
称取粉碎的金针菜２．００ｇ于５０ｍＬ离心管中，
加入０．１０％（体积分数，下同）甲醛溶液２０ｍＬ，涡
旋振荡３ｍｉｎ，以３　０００ｒ·ｍｉｎ－１转速离心１０ｍｉｎ，
吸取上清液，备用。固相萃取柱用３ｍＬ异辛烷、
３ｍＬ甲醇、５ｍＬ水预洗，吹干，加入上述上清液，弃
去初流液，收集洗脱液３ｍＬ，用０．１０％甲醛溶液稀
释１倍，５０℃加热３０ｍｉｎ，冷却，过０．４５μｍ滤膜，
供高效液相色谱测定。
２　结果与讨论
２．１　稳定剂及用量的选择
亚硫酸盐不稳定，其水溶液极易水解、氧化。通
常在样品中加入三乙醇胺、甘露醇、乙二胺四乙酸和
甲醛等作为稳定剂。考察了不同的稳定剂对测定金
针菜中亚硫酸盐含量的影响。结果表明：用乙二胺
四乙酸作为稳定剂会产生杂质峰干扰，三乙醇胺和
甘露醇的稳定效果稍低，使用甲醛作稳定剂效果
最好。
用甲醛作为稳定剂，用量少了起不到保护的作
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彭晓俊等：柱后衍生－高效液相色谱法测定金针菜中亚硫酸盐
用，使用量过大影响则测定，且毒害性增大，试验考
察了体积分数分别为０．０１０％，０．０２０％，０．０５０％，
０．１０％，０．２０％，０．５０％的甲醛溶液，结果表明：甲醛
的用量在０．１０％比较好。
２．２　净化条件的选择
金针菜中含蛋白质、脂肪、碳水化合物等干扰物
质，不上柱直接测定杂质峰分离不开，易出现假阳性
结果。为了去除蛋白质等的干扰，用反相ＬＣ－Ｃ１８固
相萃取柱净化样品，萃取柱预洗试验考察了二组溶
液，一组是甲醇和水，一组是异辛烷、甲醇和水，结果
表明：在预洗液中加入异辛烷，预洗液的极性降低，
能有效去除杂质峰的干扰且回收率较高，因此，试验
选择用异辛烷、甲醇和水预洗固相萃取柱。
２．３　温度的选择
过柱净化后的金针菜洗脱液加入甲醛溶液作为
提取液，试验考察了温度在２０ ℃，３０ ℃，４０ ℃，
５０℃，６０℃时对甲醛提取效果的影响，结果表明：
随着温度上升，提取效率有所上升，达到５０℃以上，
提取效率已无明显改善，试验选择提取温度为
５０℃。
２．４　检测波长的选择
样品中ＳＯ３２－与甲醛可生成稳定的羟甲基磺酸
盐，在衍生过程中，利用羟甲基磺酸盐在碱性条件下
生成 ＳＯ３２－ 的 特 性，先 使 羟 甲 基 磺 酸 盐 与
０．０５０ｍｏｌ·Ｌ－１氢氧化钠溶液反应，然后在酸性条
件下生成的ＳＯ３２－，被衍生试剂０．８０ｍｍｏｌ·Ｌ－１
ＤＴＮＢ溶液氧化，生成５－巯基－２－硝基苯甲酸。该化
合物在波长４４５ｎｍ处有最大吸收，试验选择检测
波长为４４５ｎｍ。
２．５　流动相的选择
ＳＯ３２－能够与离子对试剂ＴＢＡＯＨ形成一种中
性离子对，因中性离子对具有疏水性，可在反相色谱
中 得 到 分 离［５］。试 验 分 别 考 察 了 ＴＢＡＯＨ、
ＴＢＡＯＨ和甲醇、ＴＢＡＯＨ 和乙腈为流动相时对试
验的影响。用ＴＢＡＯＨ作流动相，标准品峰没有干
扰，但考虑到纯水溶液作流动相容易将色谱柱填料
冲塌陷，因此不应采用。流动相用ＴＢＡＯＨ和甲醇
混合时，无论甲醇用量多少，标准品峰总是和杂质峰
分不开。流动相用ＴＢＡＯＨ和乙腈混合时，样品中
标准 品 峰 和 杂 质 峰 能 完 全 分 离，试 验 选 择
０．００５ｍｏｌ·Ｌ－１　ＴＢＡＯＨ－乙腈（８８＋１２）混合溶液
作为流动相。标准溶液及金针菜样品及金针菜空白
样品的色谱图见图１。
（ａ）　标准溶液
（ｂ）　金针菜样品
图１　标准溶液（ａ）和金针菜样品（ｂ）的色谱图
Ｆｉｇ．１　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ　ｏｆ　ｓｔａｎｄａｒｄ（ａ）ａｎｄ
ｄａｙｌｉｌｙ　ｓａｍｐｌｅ（ｂ）
２．６　线性范围及检出限
将１００．０ｇ·Ｌ－１二氧化硫标准溶液用０．１０％
甲醛溶液将其逐级稀释配成０．０５０～５０．００ｍｇ·
Ｌ－１标准工作溶液。
按仪器工作条件对标准溶液系列进行测定，以
峰面积对质量浓度作线性回归分析。在空白样品中
加入标准溶液，方法的检出限（３Ｓ／Ｎ）为０．６ｍｇ·
ｋｇ－１，测定下限（１０Ｓ／Ｎ）为２ｍｇ·ｋｇ－１。
２．７　回收率和精密度
在金针菜空白样品中添加３组浓度水平的亚硫
酸盐，重复测定５次，测得的回收率和精密度结果见
表１。
表１　回收率和精密度试验结果（ｎ＝５）
Ｔａｂ．１　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｔｅｓｔｓ　ｆｏｒ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ａｎｄ　ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ
标准加入量
ｗ／（ｍｇ·ｋｇ－１）
测定值
ｗ／（ｍｇ·ｋｇ－１）
回收率
／％
ＲＳＤ
／％
２０　 １４．６　 ７３　 ６．０
２００　 １７６．０　 ８８　 ４．３
９００　 ７７４．０　 ８６　 ４．１
由表１可以看出：当添加浓度在２０～９００ｍｇ·
ｋｇ－１范围内，平均添加回收率为７３％～８８％，能够
满足常规检测的需要。回收率偏低的原因可能是样
品过萃取柱脱蛋白质、脱脂肪时，提取过程造成亚硫
酸盐损失。
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彭晓俊等：柱后衍生－高效液相色谱法测定金针菜中亚硫酸盐
２．８　样品分析
按试验方法对来自菜场、超市不同来源的金针
菜进行测定，依据ＧＢ　２７６０－２００７《食品添加剂使用
卫生标准》对亚硫酸盐残留量（以二氧化硫量计）的
规定，试验结果见表２。
表２　样品分析结果
Ｔａｂ．２　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅｓ
样品来源
测定值
ｗ／（ｍｇ·ｋｇ－１）
限量值
ｗ／（ｍｇ·ｋｇ－１）
结论
菜场１　 ７８５　 ２００ 不合格
菜场２　 ９４０ 不合格
超市１ ＜１ 合格
超市２ ＜１ 合格
超市３　 ４６５ 不合格
采用高效液相色谱柱后衍生法测定金针菜中亚
硫酸盐含量，有较好的准确度、精密度和重现性。与
常用的分光光度法比较，此法能有效避免试液颜色
产生的假阳性，满足实际检测工作的需要。
参考文献：
［１］　吴风武，何治柯，罗庆尧，等．二氧化硫研究进展［Ｊ］．分
析科学学报，２０００，１６（３）：２４８－２５２．
［２］　邹月利．高效液相色谱柱后荧光检测法测定腌制大蒜
中亚硫酸盐［Ｊ］．食品检测，２００６，２８（４）：５２－５３．
［３］　范华锋，查河霞．离子色谱法测定食品中亚硫酸盐的方
法探讨［Ｊ］．中国卫生检验杂志，２００３，１３（２）：２９－３１．
［４］　李英，王成云．食品中亚硫酸盐的检测［Ｊ］．湘潭师范学
院学报：自然版，２００１，２（１）：１６－２３．
［５］　ＬＡＵＲＡ　Ｐ，ＧＩＵＳＥＰＰＥ　Ｄ，ＥＮＲＩＣＡ　Ｑ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａ－
ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｒｅｅ，ｂｏｕｎｄ　ａｎｄ　ｔｏｔａｌ　ｓｕｌｐｈｉｔｅｓ　ｉｎ　ｆｏｏｄｓ　ｂｙ　ｉｎｄｉ－
ｒｅｃｔ　ｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ－ＨＰＬＣ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９８，６３
（２）：
櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓櫓
２７５－２７９．
《理化检验－化学分册》２０１２年征订启事
《理化检验－化学分册》杂志创刊于１９６３年，系中国机械
工程学会理化检验分会会刊，由上海材料研究所与中国机械
工程学会理化检验分会联合主办的技术类刊物。
《理化检验－化学分册》为全国中文核心期刊，期刊方针
中双效期刊，已被国内外多种数据库收录。主要报道各种材
料，以及涉及生命科学、生物工程、环境保护、食品卫生、商品
检验等专业领域分析化学的新理论、新技术、新方法、新经
验、新的应用性研究成果。以促进我国理化检验水平的提
高，为我国的经济建设服务为本刊的办刊宗旨；以“面向生
产，注重实用，反映动向，兼顾普及”为本刊的编辑方针。通
过学术交流和成果推广，促进我国分析化学水平的提高和行
业技术的进步与发展。读者对象为科研单位、大专院校、企
业中从事分析化学专业工作的有关科研、教学及测试人员。
《理化检验－化学分册》辟有试验与研究、工作简报、实验
室管理、知识与经验、专题讲座、读者园地、信息与动态、综述
等栏目。
《理化检验－化学分册》为国内公开发行刊物，月刊，大１６
开本，每月１８日出版，定价１５元，全年１８０元，由全国各地
邮政局（所）征订，或向编辑部订阅，邮发代号４－１８２。
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ｔｅｓｔ．ｃｏｍ。
《中国无机分析化学》２０１２年征订启事
《中国无机分析化学》（刊号ＣＮ１１－６００５／Ｏ６）是由北京
矿冶研究总院主办的无机分析化学专业性学术期刊。
《中国无机分析化学》包括岩矿分析、冶金分析、材料分
析、环境分析、化工分析、生物医药分析、食品分析、仪器研
制、综述评论、技术交流、信息之窗等栏目。
读者对象为从事无机分析化学及相关技术的广大科研
人员、工程技术人员、管理人员、大专院校师生、相关公司及
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《中国无机分析化学》将本着“读者第一、作者至上、以人
为本、以质为根”的办刊理念，全方位为中国无机分析化学工
作者服务，促进中国无机分析化学行业的发展！
《中国无机分析化学》在国内外公开发行，暂定为季刊，
大１６开，单价１０．００元，全年４０．００元。邮发代号：８０－３７７。
《中国无机分析化学》联系地址：北京市南四环西路１８８
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