全 文 ：亦有人称之为 Mx 耐药蛋白(mistox antone resistance protein ,
M xRP)或 ATP 结合盒式蛋白(ATP2binding cassette protein ,
ABCP)[ 13 , 14] 。现在中药逆转 MDR 的机理研究基本上也是寻
着这些线索进行探索的。
　　本文实验延胡索对 MCF-7耐药细胞有一定的逆转作用 , 在
1.667g/ L的延胡索共培养条件下 , 延胡索能逆转 MCF-7/VCR
的耐药性达 3.27 倍 ,而且该浓度时延胡索的毒性极小 , 即是在
无附加毒性的情况下 VCR 的用药量减少了 3 倍。基于我们发
现的延胡索等效血清也能明显逆转 MCF-7/ VCR的耐药性的结
果 ,我们相信延胡索是我们的目标药物。我们在实验中发现防
己虽然也能逆转 MCF-7 耐药细胞的耐药性 , 但是因其毒性太
大 ,始终无法进行等效血清实验。尽管中药抗肿瘤多药耐药方
面取得了不少成绩 ,但也存在许多不足 , 如药物谱窄 , 仅有少数
几种单味中药或中药复方 , 尚无相应系统的理论总结 , 也未见
成熟的临床药物出现 ,因此在中药逆转肿瘤多药耐药方面还有
许多亟须解决的问题。
参考文献
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An experimental study on Chinese traditional medicine reverse the mammary carcinoma cell resistance
Tan Cheng , Yu Huixin , Lin Xiufeng , Chen Bo , Zhang Rongjun , Cai Gangming , Xiao Ye , Cao Guoxian
(Jiangsu Institute of Nuclear Medicine , Wuxi　214063)
　　Objective:To screen new drug s which can reverse the multidrug resistance(MDR)of mammary carcinoma cell MCF-7 from a large
amounts of Chinese traditional medicine.Methods:We establish a cellular model of mammary carcinoma with MDR.The cy to to xicity and
reverse effects of Chinese traditional medicine and their corresponding serums are identified using SRB assay.Results:Yanhusuo can reverse
the resistance of MCF-7/ VCR and its cytotoxicity is minimal.At the concentration of 1.667g/ L , the reverse effects o f yanhusuo on the
multidrug resistance of MCF-7/VCR is 3.27 fo ld.Conclusion:Yanhusuo can efficiently reverse the resistance of MCF-7/ VCR.
Key words　yanhusuo(延胡索);multidrug resistance;mammary carcinoma
甘西鼠尾草注射液与丹参注射液
对大鼠皮层神经细胞缺血性损伤保护作用的比较研究
程体娟 ,罗慧英 ,王巧明1 ,王志坚2
(兰州医学院药理教研室;1 甘肃省人民医院药剂科 ,兰州　730000;2民乐县人民医院药剂科 ,民乐　734500)
　　提　要　目的:比较甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对体外培养的大鼠大脑皮层神经细胞谷氨酸(Glu)损伤的保护作用。方
法:分离培养新生(1d)大鼠大脑皮层神经细胞 , 加入 Glu 模拟兴奋性损伤 ,MT T 法测定细胞存活率 ,比色法测定上清中 LDH 含量 ,
细胞中 SOD、GSH-Px 活性 、MDA 含量。结果:皮层细胞经 Glu 损伤后 , 上清 LDH 含量 、细胞中 MDA 含量显著增加 , SOD 和GSH-Px
34 中药药理与临床 2005;21(3)
甘肃省教育厅资助科研项目(No 013-01)
DOI :10.13412/j.cnki.zyy l.2005.03.018
活力明显下降 ,甘西鼠尾草注射液与丹参注射液均可改善上述情况。结论:甘西鼠尾草注射液与丹参注射液可保护由 Glu 引起的大
鼠大脑皮层神经细胞的损伤 ,其机理可能与抗脂质过氧化 、清除自由基有关。
　　关键词　甘西鼠尾草注射液;丹参注射液;皮层神经细胞;脑缺血;自由基
　　丹参注射液对脑缺血再灌注损伤的保护作用近年来国内
外已有大量报道 , 但对同属植物甘西鼠尾草(Salvia przewalskii
Max im)的药理作用研究却很少。在我们前期的实验中发现甘
西鼠尾草和丹参注射液对大鼠急性脑缺血 、有基本相同的保护
作用[ 1] ,化学性缺氧小鼠的能量代谢[ 2]及大鼠缺血再灌注损伤
具有相似的保护作用。本研究用细胞培养缺血损伤的体外模
型对两药的作用做进一步的比较。
1　材料与方法
1.1　试验药物　丹参注射液 , 由哈尔滨集团中药二厂生产 ,
(97)卫药准字 Z-100 号 , 批号:02030 ,自配为 1.8g生药/毫升备
用;甘西鼠尾草注射液 , 由本教研室自制 , 1.8g生药/毫升。
1.2　动物　Wistar大鼠乳鼠 , ♀♂兼用 ,由兰州医学院实验动
物中心提供 ,动物合格证号:医动字第 14-005。
1.3　试剂和仪器　DMEM 高糖培养基 、小牛血清 、马血清均为
Gibco公司产品;MTT 为 Sigma公司产品;L-谷氨酸购自上海新
兴医药保健品科技开发中心化工试剂部;盐酸阿糖胞苷为上海
华联制药有限公司产品;LDH、SOD、MDA、GSH-Px、考马斯亮兰
试剂盒 ,均为南京建成生物工程研究所产品。
　　MCO-15AC 二氧化碳培养箱 , 日本三洋电子有限公司产
品;SW.CJ.2FD型超净工作台 ,苏州安泰空气技术有限公司产
品;CK40-F200 倒置显微镜 , 日本 Olympus Opitical 公司产品;
DG3022A 型酶联免疫检测仪 , 南京华东电子医疗装备有限责任
公司产品。
1.4　方法
1.4.1　大鼠大脑皮层神经细胞培养[ 3 ～ 5] 　大鼠乳鼠一只 , 用
75%酒精浸泡 5 ～ 10 分钟 , 取出大脑皮层放入预冷的 D-Hanks
液 ,仔细剥去脑膜和血管 , 放入青霉素小瓶 , 用 D-Hanks 液洗两
次 ,加 0.25%胰酶于 37℃消化约 20 分钟 ,中间振摇一次 , 弃去
胰酶 ,再用 D-Hanks液冲一次 ,加入适量(约 2ml)含 5%小牛血
清和 10%马血清的 DMEM 完全培养液 ,将脑组织剪碎 ,用尖吸
管反复吹打 20 次 , 200 目镍网过滤 , 将滤液细胞数调至 1×109
个/ L ,接种于经鼠尾胶原处理过的细胞培养板或培养瓶 , 置
37℃, 5%CO2 培养箱中培养。 第二天换液以去除未贴壁细胞 ,
然后每 2～ 3 天换液一次 , 第7d 加入终浓度 10μmol/ L 阿糖胞苷
抑制非神经细胞的生长 , 24h 后换液继续培养。
1.4.2　Glu 损伤神经细胞模型的建立　取培养 12 ～ 14d 的皮
层神经细胞 , 吸去原培养液 , 用无 Mg2+Earlies 液洗两遍 , 再用
含 sGlu(终浓度为 5 ×10-4 mol/ L-1)的无 Mg2+Earlies 液处理
15min , 再换以无血清 DM EM 培养液 , 置 37℃ 5% CO 2 培养箱
继续培养 24h。对照组不加 Glu ,其余处理同上。 正常对照 、损
伤组 、给药组在损伤处理前 24h 及处理后分别加入无血清
DMEM 和不同浓度的两种药物。
1.4.3　上清中 LDH 活力测定　皮层细胞经损伤处理后 , 收集
培养上清液 ,参照试剂盒说明测定培养液中 LDH 活性。
1.4.4　细胞存活率的检测[ 6] 　皮层细胞经损伤处理后 , 去除
原培养液 ,用 D-Hanks洗一次 ,换以无血清 DMEM , 每孔加 10μl
MTT(终浓度 0.5g/ L),继续培养 4h , 弃去上清 , D-Hanks 冲洗 ,
每孔加 150μl二甲基亚砜(DMSO)溶解结晶 , 振荡后 ,于 570nm
波长处 ,在酶标仪上检测各组 OD值 , 细胞存活率(%)=处理组
OD值/对照组 OD值×100%。
1.4.5　神经细胞 MDA 含量 、SOD、GSH-Px 活力测定　皮层细
胞损伤处理后及给予不同浓度的两种药物 , 弃去上清 , 用 0.
25%胰酶消化细胞反复吹打 ,待细胞脱落后 ,加完全培养液终止
消化 ,离心收集细胞 , 用 PBS 清洗两遍 ,细胞经反复冻融 , 匀浆
后 ,按试剂盒说明测定 MDA 含量和 SOD、GSH-Px 活力。
2　结果
2.1　对 Glu引起的皮层神经细胞损伤后细胞存活率和 LDH 的
影响　倒置显微镜下正常皮层细胞折光性强 , 轴突清晰可见 ,
细胞呈类纤维状;皮层细胞经 Glu 损伤后的细胞折光度下降 , 突
起收缩 ,形态变圆 , 有许多呈悬浮状;细胞受损时 LDH 释放入培
养上清液中 , 上清液中 LDH 水平反映出细胞损伤或死亡的程
度。丹参注射液和甘西鼠尾草注射液均可改善细胞形态 , 表现
为减少细胞轴突结构的消失 , 显著减轻 Glu 对神经细胞的损伤
作用 ,增加细胞存活率 , 降低培养液中 LDH 活力 , 相同浓度的丹
参注射液和甘西鼠尾草注射液作用无明显差异。结果见表 1。
　　表 1　对 Glu引起的皮层神经细胞损伤后细胞存活率和 LDH 的影
响( x ±s , n=3)
组别 药物浓度(mg/ml)
细胞存活率
(%)
LDH 活力
(kU/ g pro)
空白对照　　 96.03±2.36＊ 34.76±3.40＊
模型对照　　 43.01±3.78 57.17±1.55
丹参注射液　 31.25 48.07±4.23＊ 53.83±2.45＊
62.5 52.87±2.71＊ 51.47±1.06＊
125 56.40±5.42＊ 51.50±2.75＊
250 66.03±2.88＊ 49.27±1.19＊
500 75.26±3.24＊ 45.93±4.06＊
鼠尾草注射液 31.25 46.73±1.31＊ 55.60±2.35＊
62.5 54.77±2.71＊ 55.20±0.95＊
125 59.83±3.19＊ 49.63±5.33＊
250 69.13±2.06＊ 50.23±0.84＊
500 74.52±4.99＊ 42.41±1.97＊
　　与模型组相比 ＊P<0.05(下同)
2.2　对 Glu 引起神经细胞损伤后 MDA 含量 、SOD、GSH-Px 活
力的影响　经 Glu 处理后 , 皮层细胞匀浆中 SOD、GSH-Px 活力
明显下降 ,MDA含量显著增加 , 而丹参注射液和甘西鼠尾草注
射可增加细胞 SOD、GSH-Px 活力 ,而减少 MDA 的生成 , 相同浓
度的丹参注射液和甘西鼠尾草注射液作用无明显差异 , 结果见
表 2。
3　讨论
　　脑缺血时由于各种原因引起细胞外 Glu 堆积 , 使突触后膜
的谷氨酸受体过度激活引起细胞外 Ca2+超载 , 引起损伤 。钙超
载是神经元损伤的决定性因素 , 钙超载后可激活一系列钙依赖
性酶 ,增加花生四烯酸的代谢 , 激活黄嘌呤氧化酶系 , 从而产生
35中药药理与临床 2005;21(3)
　　表 2　对 Glu引起神经细胞损伤后 MDA 含量 、SOD 、GSH-Px 活力
的影响( x ±s , n=3)
组别 剂量(mg/ml)
MDA　
(μmol/g pro)　
SOD　
(kU/ g pro)　
GSH-Px　
(kU)　
空白对照　　 3.17±0.42＊ 1.91±0.40＊ 14.43±0.37＊
模型对照　　 12.07±1.39 0.96±1.23 7.34±1.61
丹参注射液　 31.25 10.77±0.61＊ 1.08±0.09＊ 7.98±0.14＊
62.5 10.40±0.53＊ 1.12±0.01＊ 8.14±0.03＊
125 9.97±0.51＊ 1.21±1.13＊ 8.33±1.05＊
250 9.25±0.84＊ 1.28±0.17＊ 8.58±0.32＊
500 7.43±0.47＊ 1.33±0.11＊ 9.70±1.54＊
鼠尾草注射液 31.25 11.50±0.95＊ 0.93±0.15＊ 7.51±0.90＊
62.5 10.47±0.85＊ 1.15±0.18＊ 7.39±0.27＊
125 9.27±0.76＊ 1.19±1.25＊ 7.93±1.29＊
250 8.80±1.72＊ 1.25±1.12＊ 8.61±0.88＊
500 7.77±1.32＊ 1.32±0.09＊ 9.52±1.26＊
大量的氧自由基 ,引起细胞损伤。本文采用体外培养的大鼠大
脑皮层神经细胞中加入一定浓度的 Glu 引起细胞损伤 , 比较了
丹参注射液和甘西鼠尾草注射对细胞损伤的保护作用。该模
型模拟了脑缺血时神经细胞的状态 ,比较接近临床的缺血性脑
血管疾病。本实验结果表明 ,细胞损伤后 , LDH 漏出增加 , MDA
含量增加 , SOD、GSH-Px 活力下降。丹参注射液和甘西鼠尾草
注射液可不同程度地减轻由 Glu 引起的神经细胞损伤。推测其
机理可能为直接减少氧自由基 , 或通过提高细胞内抗氧化酶活
性抑制自由基 ,从而发挥抗脂质过氧化损伤作用;增强细胞本
身抗氧化系统功能 , 从多个环节阻断自由基损伤作用;可能是
通过保护细胞膜 ,线粒体膜而促进 SOD合成。本实验结果与我
们前期的整体动物实验结果相符[ 1 , 2] , 提示甘西鼠尾草注射液
在体内 、外均对大鼠缺血再灌注损伤和神经细胞损伤具有与丹
参注射液相似的保护作用。
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Comparison between S.miltiorrhize Bunge Injection and S.przewalskii
Maxim Injection on ischemic injury in cultured cortical neurons
Cheng T ijuan , Luo Huiying , Wang Qiaoming , Wang Zhijian
(Department of Pharmacology , Lanzhou Medical College , Lanzhou　730000)
　　Objective:To compare the pro tective effect of S.miltiorrhiza Bunge Injection(SMBI)and S.przewalskii Maxim Injection(SPMI)on
ischemic injury induced by glutamicacid(Glu)co rtical neurous of new born rat were cultured in vitro.Methods:Cor tical neurons of new born
rat w ere cultured in vitro.Survival rate of the neurons was measured by M TT method , LDH activities in ex tra-cellular bathing media were
measured by colorimetry , the content of MDA , the activities of SOD and GSH-Px in the homogena te of co rtical cells were also measured.
Resuits:When cells were treated with Glu , the activities of LDH and the content of MDA increased w hile the activities of SOD and GSH-
Px decreased significantly.SMBI and SPM I both could effectively prevent these changes.Conclusion:I t showed that SMBI and SPM I
have comparable protectiv e effect on neurons injury induced by G lu in vitro.The mechanism o f action may be related to suppressing the gen-
eration of lipids pero xides and cleaning excessive free radicals.
Key words　S.miltiorrhiza Bunge Injection(SMBI ,丹参注射液);S.przewalskii Maxim Injection(SPM I , 甘西鼠尾草注射液);cerebral
cor tex neurons;brain ischemia;free radical
独一味颗粒剂的主要药效学研究
李元静 ,张月玲 ,刘近荣1 ,芮　菁
(天津市药品检验所 ,天津　300070;1山西泰盛制药有限公司 ,大同　037006)
　　提　要　目的:研究独一味颗粒剂的镇痛 、抗炎和止血作用 , 并与原剂型独一味胶囊进行比较。方法:醋酸致小鼠扭体反应;
角叉菜胶致大鼠足跖炎症;甲醛致小鼠牙龈炎症;小鼠止血时间;大鼠凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(KPTT)和纤维蛋白原
(FIB)含量测定;大鼠血小板聚集试验。结果:独一味颗粒剂能明显抑制小鼠扭体反应及大鼠的足肿炎症;增加小鼠牙龈持续性炎
症期间的摄料量;提高血小板最大聚集率 , 明显延长血小板最大聚集时间 , 减慢解聚速度 , 缩短小鼠止血 、凝血时间和大鼠凝血酶原
36 中药药理与临床 2005;21(3)