全 文 ：[论 著]
雪灵芝调节小鼠免疫功能作用的实验研究
李凤文 ,赵鹏 ,刘荣珍 ,李彬 ,黄超培 ,杨俊峰 ,王彦武 ,覃辉艳 ,姚思宇 ,粱慧莉 ,傅伟忠 ,何励 ,梁坚
摘要:目的 探讨雪灵芝对小鼠免疫功能的调节作用。 方法 以小鼠为实验对象 , 分别以 0.21、0.42、0.63ml/kg
·bw 3 个剂量组的雪灵芝给予小鼠灌胃 30 ～ 35D ,进行脾淋巴细胞转化 、迟发型变态反应 、抗体生成细胞 、血清溶血素 、
碳廓清 、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞 、NK 细胞活性等七项免疫指标的测定。 结果 各剂量组的各项检测结果与阴
性对照组比 , 均能刺激小鼠脾淋巴细胞增值 、转化作用 , 促进小鼠迟发型变态反应作用 , 提高小鼠抗体生成细胞数 , 提
高小鼠的血清溶血素水平 , 增强小鼠的单核-腹腔巨噬细胞吞噬和碳廓清能力 , 但对小鼠 NK 细胞活性功能无明显作
用。 结论 雪灵芝具有增强小鼠免疫功能作用。
关键词:雪灵芝;小白鼠;免疫功能
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1009-9727(2007)11-1999-02
Studies on the DNA damage in transformed bronchial epithlial cells induced by cadmium chloride.LI Feng-wen , ZHAO
Peng , LIU Rong-zhen , et al.(Guangxi Zhuang Autonomous Region Center for Disease Prevention and Control , Nanning 530021 ,
Guangxi , China)
Abstract:Objective The aim of this study was to influence of Xue Lingzhi on the immune system. Methods The mice were
feed with Xue Lingzhi at the doses of 0.21、0.42 and 0.63mg/kg bw , respectively , once a day for 30-35 days.And then 7 immune
function indexes were measured to judge the effect of Xue Lingzhi on immune system. Results All the examination results of the
experimental group in comparison with the control show the ability on transformation and proliferation of splenic lymphocyte were
raised;the quantity of the mice antibody-producing cell and the sheep erythrocyte antibody levels in serum increased;the ability of
mononuclear macrophage eliminating carbon and mononuclear celiac macrophage phagocytic activity were raised;the delayed allergy
was accelerated;but the activity of NK cell was no obvious raised. Conclusion It is suggested that Xue Lingzhi could enhance im-
mune function.
Key words:radix Xue Lingzhi;mice;immune function
雪灵芝(Xue Lingzhi)又名草灵芝 , 为高原野生植物 , 学名卵
瓣蚤缀(Areneria Kensuensis Var Ovatipetala Tsui),族人称之为人
间仙草;藏药名阿仲尕保 , 为石竹科蚤缀属 ,是多年生垫状草本
植物 ,分布青藏高原海拔 5 000m 左右的草甸和石缝中 , 采集十
分不易 ,是当今地球上海拔最高的绿色开花植物之一 , 也是一
种极为宝贵的野生藏药资源[ 1 , 2] 。雪灵芝含有生物碱 、皂甙 、
香豆素 、多糖 、黄酮和 18 种氨基酸 , 其中人体 8 种必需氨基酸
齐全 、并含有多种维生素及 10 种微量元素等[ 2] 。本实验探讨
雪灵芝对小鼠免疫功能的影响。
1 材料和方法
1.1 实验材料和实验环境 受试物(雪灵芝浓缩液)为深棕色
液体 ,由西藏雪域生物制品有限责任公司提供 。实验动物由广
西医科大学医学实验动物中心【桂动许字(2000)第 001 号】繁
殖的清洁级(Ⅱ级)健康成年昆明种小鼠 420 只 , 体重为 18 ～
22g ,雌 、雄性别兼用 ,分为 7 批 ,每批(同一性别)60只。 本中心
实验动物房合格证号:桂医动字第 23003 号。 动物室温度:22
～ 25℃,相对湿度:55～ 70%。
1.2 主要仪器与试剂 仪器:全自动酶标仪 、754 紫外可见光
分光光度计 、冷冻离心机 、二氧化碳培养箱 、微量血凝试验板 、
电子分析天平 、显微镜 、打孔器 、恒温培养箱 、微量注射器等。
试剂:NaCl、ConA、MTT、2-ME 、异丙醇 、青霉素 、链霉素 、盐酸 、
SRBC、补体 、Hank s 液 、PBS 缓冲液 、SA 缓冲液 、琼脂糖 、
Na2CO3 、RPMI1640 细胞培养粉 、丙酮 、甲醇 、DNFB 、硫化钡 、印度
墨汁 、乳酸锂 、硝酸氯化四氮唑 、吩嗪二甲酯硫酸盐 、氧化型辅
酶ⅠYAC-1 细胞等。等。
1.3 实验方法 参照卫生部《保健食品检验与评价技术规范
-2003》中增强免疫力功能检验方法和操作规程进行。 实验设
0.21、0.42、0.63ml/kg·bw 3 个剂量组和 1 个阴性对照组 , 每组
15 只小鼠。实验前将受试物用蒸馏水配成试验所需浓度的溶
液。每天以 0.2ml/ 10g·bw 的容量给小鼠灌胃不同剂量的受试
物 ,阴性对照组给予等量蒸馏水。每天 1 次 , 连续灌 30 ～ 35d。
末次给受试物 1h 后进行各项免疫指标的测定。
1.4 实验数据统计 应用 SPSS 统计软件进行方差分析统计
处理。
1.5 结果判定 在细胞免疫功能 、体液免疫功能 、单核-巨噬
细胞功能 、NK细胞活性四方面任两个方面结果阳性 ,可判定该
1999中国热带医学 2007年第 7卷第 11期 CHINA TROPICAL MEDICINE Vol.7 No.11 November 2007
作者单位:广西壮族自治区疾病预防控制中心 , 广西 南宁 530021.
作者简介:李凤文(1954～ ),女 ,主任医师 ,主要从事寄生虫病防治研究及卫生毒理.
受试样品具有增强免疫力功能作用。
2 结果
2.1 受试物对小鼠体重的影响 免疫Ⅰ ～ Ⅶ 组的小鼠初始体
重均数为 18.30±0.46 ～ 20.7±0.49 之间 , 与阴性对照组的
18.3±0.46～ 20.7±0.48 比较 , 差异均无显著性(P >0.05),
即小鼠的初始体重在各组间较为均衡。 实验结束时 , 免疫 I～
Ⅶ 组的受试物各剂量组的小鼠体重及体重增长量均数在 29.8
±0.94～ 35.9±1.55 之间 , 与阴性对照组的 29.4±1.35 ～ 35.7
±1.68 之间比较 , 差异均无显著性(P >0.05),表明该受试物
对小鼠的体重增长无不良影响。
2.2 受试物对小鼠脏器/体重比值的影响 由表 1 可见 , 受试
物各剂量组的胸腺/体重比值均大于阴性对照组 ,其中免疫 I(1
～ 3 剂量)组 、免疫Ⅱ(1 ～ 2 剂量)组 、免疫 Ⅲ(2 剂量)组和免疫
Ⅳ(2～ 3剂量)组 、免疫 Ⅶ (1～ 3)组与阴性对照组比较差异有显
著性(P <0.01和 P <0.05)。免疫Ⅴ 、Ⅵ 组与阴性对照组比无
差异。结果提示该样品具有促进小鼠的胸腺发育的作用趋势。
由表 2可见 , 受试物各剂量组的脾脏/体重比值与阴性对
照组比较 ,均无显著性差异(P >0.05)
表 1 各组小鼠胸腺/体重比值结果(x ±s)
剂量组
(ml/kg·BW)
免疫Ⅰ组
动物
数
(只)
胸腺/体重
(%) P值
免疫Ⅱ组
动物
数
(只)
胸腺/体重
(%) P值
免疫Ⅲ组
动物
数
(只)
胸腺/体重
(%) P值
免疫Ⅳ组
动物
数
(只)
胸腺/体重
(%) P值
免疫Ⅴ组
动物
数
(只)
胸腺/体重
(%) P值
免疫Ⅵ组
动物
数
(只)
胸腺/体重
(%) P值
免疫 Ⅶ 组
动物
数
(只)
胸腺/体重
(%) P值
0.63 15 0.31±0.006 <0.01 15 0.26±0.021 <0.05 15 0.25±0.024 >0.05 15 0.25±0.013 >0.05 15 0.22±0.036 >0.05 15 0.27±0.091 >0.05 15 0.27±0.12 <0.01
0.42 15 0.30±0.010 <0.01 15 0.26±0.013 <0.05 15 0.28±0.090 <0.05 15 0.26±0.016 <0.01 15 0.21±0.039 >0.05 15 0.26±0.032 >0.05 15 0.27±0.14 <0.01
0.21 15 0.29±0.008 <0.01 15 0.25±0.011 >0.05 15 0.26±0.013 >0.05 15 0.26±0.015 <0.01 15 0.21±0.049 >0.05 15 0.27±0.064 >0.05 15 0.27±0.14 <0.01
阴性对照 15 0.26±0.011 - 15 0.24±0.013 - 15 0.23±0.014 - 15 0.24±0.013 - 15 0.19±0.029 - 15 0.22±0.040 - 15 0.25±0.16 -
表 2 各组小鼠脾脏/体重比值结果(x ±s)
剂量组
(ml/kg·BW)
免疫Ⅰ组
动物
数
(只)
脾/体重
(%) P值
免疫Ⅱ组
动物
数
(只)
脾/体重
(%) P值
免疫Ⅲ组
动物
数
(只)
脾/体重
(%) P值
免疫Ⅳ组
动物
数
(只)
脾/体重
(%) P值
免疫Ⅴ组
动物
数
(只)
脾/体重
(%) P值
免疫Ⅵ组
动物
数
(只)
脾/体重
(%) P值
免疫 Ⅶ 组
动物
数
(只)
脾/体重
(%) P值
0.63 15 0.39±0.003 >0.05 15 0.47±0.011 >0.05 15 0.33±0.011 >0.01 15 0.47±0.008 >0.05 15 0.37±0.018 >0.05 15 0.42±0.045 >0.05 15 0.36±0.012 >0.05
0.42 15 0.38±0.003 >0.05 15 0.47±0.001 >0.05 15 0.32±0.011 >0.01 15 0.46±0.010 >0.05 15 0.36±0.025 >0.05 15 0.43±0.023 >0.01 15 0.35±0.115 >0.05
0.21 15 0.39±0.040 >0.05 15 0.47±0.007 >0.05 15 0.33±0.003 >0.01 15 0.47±0.023 >0.05 15 0.36±0.012 >0.05 15 0.43±0.033 >0.05 15 0.36±0.283 >0.05
阴性对照 15 0.36±0.011 - 15 0.47±0.020 - 15 0.31±0.010 - 15 0.46±0.009 - 15 0.37±0.011 - 15 0.44±0.028 - 15 0.35±0.222 -
2.3 受试物对 ConA 诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力和迟发
型变态反应的影响 从表 3可见 ,受试物各剂量组的 OD 差值
均大于阴性对照组 , 其中低剂量组与阴对照组差异有显著性
(P <0.01),表明该受试物具有刺激脾淋巴细胞增值 、转化的
作用。受试物各剂量组小鼠的左右耳重量差值均大于阴性对
照组 , 且差异均具有非常显著性(P <0.01), 表明该受试物能
显著提高 DNFB 诱导的小鼠耳肿胀程度 , 即具有促进迟发型变
态反应的作用。
表 3 ConA诱导的脾淋巴细胞转化和
迟发型变态反应实验结果(x ±s)
剂量组
(ml/kg·BW)
动物数(只)
加ConA与
未加 ConA
OD差值
P 值
左右耳
重量差值(mg) P 值
0.63 15 0.0509±0.0488 0.742 15.61±4.15 0.001
0.42 15 0.0738±0.0494 0.110 15.04±3.81 0.003
0.21 15 0.0926±0.0712 0.009 15.90±3.48 0.000
阴性对照 15 0.0353±0.0233 - 9.97±4.60 -
2.4 受试物对小鼠抗体生成细胞数和血清溶血素的影响 从
表 4可见 , 受试物各剂量组小鼠的抗体生成细胞数均值均高于
阴性对照组 ,高 、中剂量组与对照组的比较 ,差异有非常显著性
(P <0.01), 表明该受试物具有促进抗体生成细胞增值的作
用。受试物各剂量组小鼠的抗体积数均值均高于阴性对照组 ,
中 、低剂量组与对照组的差异具有显著性(P <0.05 和 P <
0.01), 表明该受试物具有增强小鼠血清溶血素水平的作用。
表 4 抗体生成细胞和血清溶血素的检测实验结果(x ±s)
剂量组
(ml/kg·BW)
动物数(只) 空斑数(个) P 值均值 抗体积数 P 值
0.63 15 48.00±30.50 0.001 14.60±10.80 0.097
0.42 15 39.93±36.85 0.007 17.73±13.48 0.015
0.21 15 14.93±13.94 0.942 20.47±13.20 0.002
阴性对照 15 10.73±9.98 - 6.07±3.47 -
2.5 受试物对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清功能和腹腔巨噬细
胞吞噬鸡红细胞的影响 从表 5 可见 ,受试物中 、低剂量组的
吞噬指数(a)与阴性对照组的差异有显著性(P <0.01和 P <
0.05), 表明该受试物具有促进小鼠的单核-巨噬细胞碳廓清
功能的作用。受试物各剂量组小鼠的腹腔巨噬细胞对鸡红细胞
的吞噬率及吞噬指数均高于阴性对照组 , 且与阴性对照组的
差异均有显著性(P <0.01),表明该受试物具有促进小鼠的单
核-巨噬细胞吞噬功能的作用。
2.9 受试物对小鼠 NK 细胞活性的影响 从表 6可见 , 受试物
高 、中剂量组小鼠的 NK 细胞活性高于阴性对照组 , 但与阴性
对照组比较 , 差异均无显著性(P >0.05),表明该受试物对小
鼠NK细胞活性功能无明显影响作用。 (下转第 2020页)
2000 CHINA TROPICAL MEDICINE Vol.7 No.11 November 2007 中国热带医学 2007年第 7卷第 11期
2.2 不同时间中间宿主溪蟹的感染度 经调查解剖蟹体囊蚴
感染情况 ,结果表明蟹的感染度时高时低 , 找不出明显规律(表
2)。
表 2 不同时间中间宿主溪蟹的感染度
调查时间 解剖数(只) 囊蚴数(个) 感染率(个/只)
1979 年 11月 15 196 13.07
1980 年 4月 20 50 2.50
6月 4 80 20.00
7月 18 121 6.72
1999 年 11月 12 187 15.58
2000 年 4月 18 183 10.17
6月 19 133 7.00
9月 14 49 3.50
3 讨论
湖北十堰地区是斯氏肺吸病流行区 ,全区自然环境基本相
同 ,经调查发现中间宿主拟钉螺与溪蟹孳生在清澈 , 氧气充足
的溪水岩石下 ,温度直接影响到中间宿主的生长 、发育和繁殖 。
当水温在 14 ～ 24℃时 , 螺 、蟹的密度最高 , 水温在 10℃以下密
度降低 ,水温 0℃时则难找到螺与蟹 , 雨量可影响水深 , 流速 ,
对密度大小也有直接影响 , 螺 、蟹栖息在水流缓慢或相对静止
的水体中 ,螺与蟹孳生离不开岩石 , 螺贴附在岩石下 ,蟹栖息在
水中岩石下或石缝内 ,在新开的沟渠岩石下以及岗从山上滚到
溪沟内的岩石下都找不到螺及蟹。调查发现人类的行为活动 ,
植被破坏 ,使得溪段缩短 , 干枯季节水量减少 ,直接影响中间宿
主的孳生。本地植被基本完好 ,溪沟纵横交错自然环境构成了
野生动物的生存空间 ,种类繁多的野生动物作为保虫宿主对肺
吸虫病的流行具有重要意义。保虫宿主可能为中小型猫科动
物 ,本地区常见的猫科动物 , 如果子狸等。
但直到目前尚未确定保虫宿主的种类。调查当地居民的
家猫 、家犬有一定的感染率 , 并在体内检查到成虫 ,本地植被基
本保存完好 ,溪沟纵横交错的自然环境构成了野生动物的生存
条件 ,种类繁多的野生动物作为保虫宿主和自然感染的家猫 、
家犬对肺吸虫病的流行具有实际意义。十堰市作为南水北调
中线工程的水源地 ,国家为保护水源地的水质及生态环境实施
退耕还林 ,大规模植树造林 , 防止水土流失 ,生态环境将得到进
一步改善 ,作为斯氏肺吸虫病流行区 , 将会长期存在 ,今后还须
继续普及防病知识 ,开展人们的健康教育 , 提高群众的自我防
病能力。
参考文献:
[ 1] 单亚丽 ,王绍基 ,张光玉.十堰市肺吸虫病病原的研究[ J] .寄生虫
学与寄生虫病杂志 , 1983 , 1(4):35.
[ 2] 单亚丽 ,王绍基 ,张光玉 ,等.拟钉螺做为十堰市斯氏肺吸虫第一
中间宿主的首次报告[ J] .武医郧阳医学院附属医院郧阳地区人民
医院资料汇编(医学), 1980 , 1:201.
[ 3] 张光玉 ,郭鄂平.十堰地区肺吸虫病区域分布及流行病学[ J] .郧
阳医学院学报 , 1997 , 16(1):22.
收稿日期:2007-06-21
(上接第 2000页)
表 5 小鼠碳廓清和腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验结果(x ±s)
剂量组(ml/kg·BW) 动物数(只) 吞噬指数(a) P 值 吞噬率(%) 数据转换(X) P 值 吞噬指数(a) P 值
0.63 15 10.34±0.76 0.944 57.6±12.61 0.86±0.13 0.000 1.80±0.65 0.000
0.42 15 11.08±0.55 0.003 52.3±9.66 0.81±0.10 0.000 1.68±0.61 0.000
0.21 15 10.86±0.41 0.035 49.9±12.15 0.78±0.12 0.000 1.46±0.54 0.000
阴性对照 15 10.23±0.87 - 0.54±0.07 - 0.60±0.33 -
表 6 小鼠 NK细胞活性实验结果(x ±s)
剂量组(ml/ kg·BW) 动物数(只) NK细胞活性(%) 数据转换(X) P 值
0.63 15 56.4±26.95 0.87±0.33 0.204
0.42 15 57.4±23.42 0.88±0.27 0.191
0.21 15 39.1±27.60 0.68±0.31 0.999
阴性对照 15 41.0±26.22 0.68±0.30 -
3 小结
雪灵芝是一种传统藏药 , 以全草入药 , 性味甘寒 , 清热解
毒 ,止咳 ,降血压 、滋阴养血益肾壮骨补[ 1] ;主治肺炎等 , 其还具
有抗缺氧功效和对酒精性肝损伤有保护作用[ 1 , 4] 。雪灵芝是
藏中的一支奇葩 ,具有重要的开发利用价值。 1995 年卫生部批
准为新资源食品;1998 年国家卫生部正式批准为具有免疫调
节 、抑制肿瘤功效的保健食品;雪灵芝不论是水提液还是醇提
液均有抗炎 、抗免疫作用[ 2] 。本实验研究结果表明 , 雪灵芝在
小鼠免疫系统中起着重要作用;在细胞免疫功能 、体液免疫功
能 、单核-巨噬细胞功能三项都具有增强作用 , 这也许与该植
物含有生物活性成分有关。至于哪种成分起主导作用有待进
一步研究。
参考文献:
[ 1] 苏红卫 ,维光 ,刘军 ,等.雪灵芝的抗缺氧作用[ J] .泸医学院学报 ,
2002 , 25(5):371～ 374.
[ 2] 雪灵芝开发研究[ J] .医疗保健器具, 2001 , 6:68～ 69.
[ 3] 王红梅 ,马玲 ,姚小曼.小鼠廓清实验方法的比较[ J] .中国食品卫
志 ,2000 , 12(3):3～ 5.
[ 4] 赵鹏 ,李彬 ,姚思宇 ,等.雪灵芝对酒精性肝损伤保护作用的实验研
究[ J] .中华中西医杂志 ,2004 , 5(17):1901～ 1.
收稿日期:2007-03-10
2020 CHINA TROPICAL MEDICINE Vol.7 No.11 November 2007 中国热带医学 2007年第 7卷第 11期