全 文 ：CRTER
沈阳1200邮政信箱 110004 kf23385083@sina.com www.zglckf.com
0 引言
雪灵芝是世界上海拔最高的绿色开花植
物之一,其中甘肃雪灵芝、卵瓣雪灵芝 的药用
价值被《藏药志》、《中药大辞典》、《中华人民共
和国卫生部药品标准·藏药》(1995版)等多部
医药典籍记载:雪灵芝全草入药,性味甘寒,对
胃肠溃疡、流感、肺炎、风湿、癌症、淋病、淋巴
结核、黄疸、肾结石等有治疗作用[1]。本实验观
察雪灵芝对二乙基亚硝胺诱导的大鼠肝脏肿
瘤的预防及抑制作用。
广西壮族自治区疾
病预防控制中心,广
西壮族自治区南宁
市 530021
赵 鹏★,男,1965
年生,广西壮族自治
区天等人,壮族,
1993年毕业于广西
医科大学,硕士,主
任医师,主要从事保
健食品功能学方面
的研究。
pengzhao006@
yahoo.com.cn
中图分类号:R735.7
文献标识码:B
文章编号:1673-8225
(2007)38-07553-03
收稿日期:2006-07-27
修回日期:2007-04-19
(06-50-7-5871/SHM·Y)
ZhaoPeng,YaoSi-yu,WangYan-wu,Li
Bin, HeWei-tao, LiuRong-zhen, Li
Feng-wen,HeQi-jun,YangJun-feng,HeLi
EfectofA.kansuensisoninhibitinglivercancerinducedbydiethylnitrosamineinrats
Abstract
AIM:ToexploretheefectofA.kansuensisoninhibitingratslivercancer.
METHODS: TheexperimentwascariedoutintheSPF-gradeAnimalLaboratoryofGuangxiCenterforDisease
PreventionandControlfromSeptember2003toAugust2004.Atotalof160SDadultratswererandomlydividedinto
fivegroupsaccordingtobodyweight:blankcontrolgroup,modelgroupandthreedosagegroups,eachcontaining32
rats.TheconcentratedextractionofA.kansuensiswasgivenbyintragastricinjectionindosagesasdiferentas2.500,
1.250and0.625mL/kgfor60days,thentheratsweretreatedwithdiethylnitrosamine(DENA)for30days.Whilethe
modelgroupwasinjectedwithdistiledwaterandDENAsolutionrespectively.Ninetydayslater,halfofratswerekiled
(ofeithergender)todetectthehematologicalindexes,serumbiochemicalindexesandthemorphologyandcancerization
ofmainvisceraorgans.Oneweeklater,theratswereadministratedwithA.kansuensis(excludingDENA).Sevenweeks
later,halfoftheremainingratswereexecutedforthesameoperations.Eightweekslater,altheremainingratswere
kiledandmanagedidenticalywiththeabove.
RESULTS:Among160includedrats,therewere145onesinvolvingintheresultanalysisexcept15lost.①Pathological
sectionexamination: Cancerizationorprecancerouslesionoflivertissuesappearedinalthegroupsexceptcontrol
group;Theoccuringrateofprecancerouslesionindosagegroupswasclosetothatofmodelgroup(P>0.05),butthe
occuringrateoflivercancerwassignificantlylowerthanthatofmodelgroup (P<0.05or0.01).②Grosssample
observation:Liverindexeshadnoabnormalchangeincontrolgroup,whilethereweremanypathologicalchangesfound
inothergroups,suchasparticlesofroughsurface.Thepositiverateofpathologicalchangesappearedinmodelgroup
wassignificantlyhigherthanthatofdosagegroups(P<0.05).Theoccuringratesoflivercancer,whichwasobserved
bynakedeye,reachedthepeakinmodelgroup.③Organexamination:Tworatmodelswerefoundforthepulmonary
metastasisoflivercancer.
CONCLUSION:ThemodeloflivercancerinratscanbereproducedbygivingDENAcontinualywithgreaterdosagefor
30days.TheA.kansuensishasasignificantinhibitingefectforpreventingandinhibitinglivercancerinratsinducedby
DENA.
ZhaoP,YaoSY,WangYW,LiB,HeWT,LiuRZ,LiFW,HeQJ,YangJF,HeL.EfectofA.kansuensisoninhibitinglivercancerinduced
bydiethylnitrosamineinrats.ZhongguoZuzhiGongchengYanjiuyuLinchuangKangfu2007;11(38):7553-7555(China)
[www.zglckf.com/zglckf/ejournal/upfiles/07-38/38k-7553(ps).pdf]
摘要
目的:验证雪灵芝是否具有抑制大鼠肝癌的功效。
方法:实验于2003-09/2004-08在广西疾病预防控制中心SPF级动物实验室完成。选用健康成年SD大鼠160只。按体质量
分层随机分为5组:空白对照组、模型组、雪灵芝高剂量组、雪灵芝中剂量组和雪灵芝低剂量组,每组32只。雪灵芝高、中、低剂
量组大鼠分别灌胃2.500,1.250,0.625mL/kg雪灵芝溶液,阴性对照组和模型组灌胃等量蒸馏水,1次/d,连续60d。第61天
开始雪灵芝高、中、低剂量组和模型组灌胃二乙基亚硝胺溶液,对照组灌胃等量的生理盐水。于停止灌胃90d后各组处死一半
受试大鼠(雌雄各半),检测血常规及血清主要生化指标,观察各脏器大体形态改变、脏器的癌变程度。1周后给剩余大鼠灌胃雪
灵芝溶液(不含二乙基亚硝胺)。7周后处死余下的一半雄性大鼠,进行相同操作。8周后处死余下的全部大鼠,操作及检测方法
同前。
结果:纳入的160只SD大鼠,145只进入结果分析,15只脱落。①病理切片检查结果:除阴性对照组,其他各组大鼠肝组织均
发生癌变或癌前病变。雪灵芝高、中、低剂量组的癌前病变发生率与模型组相近(P>0.05);癌变的发生率均低于模型组,差
异有显著性意义(P<0.05,0.01)。②大体标本检查结果:阴性对照组大鼠肝脏的大体标本均无异常改变,其他各组大鼠的肝
脏有些可见表面粗糙等病理改变。模型组大体标本病理改变的阳性率高于雪灵芝高、中、低剂量组,差异有显著性意义(P<
0.05)。肉眼观模型组癌变发生率高于其他各组。③其他脏器检查结果:模型组2只大鼠有肝癌肺转移。
结论:以较大剂量的二乙基亚硝胺连续灌胃30d可以复制大鼠肝癌模型;雪灵芝对二乙基亚硝胺诱导的大鼠肝癌具有预防和
抑制的作用。
关键词:雪灵芝;二乙基亚硝胺;肝癌模型;抑制作用
赵鹏,姚思宇,王彦武,李彬,何为涛,刘荣珍,李风文,何启君,杨俊峰,何励.雪灵芝对二乙基亚硝胺诱导大鼠肝癌组织细胞的抑制作用[J].中国组
织工程研究与临床康复,2007,11(38):7553-7555 [www.zglckf.com/zglckf/ejournal/upfiles/07-38/38k-7553(ps).pdf]
雪灵芝对二乙基亚硝胺诱导大鼠肝癌组织细胞的抑制作用★
赵 鹏,姚思宇,王彦武,李 彬,何为涛,刘荣珍,李风文,何启君,杨俊峰,何 励
基础医学
Guangxi Center for
Disease Prevention
andControl,Nanning
530021, Guangxi
Zhuang Autonomous
Region,China
ZhaoPeng★,Master,
Chief physician,
Guangxi Center for
Disease Prevention
andControl,Nanning
530021, Guangxi
Zhuang Autonomous
Region,China
pengzhao006@
yahoo.com.cn
Received:2006-07-27
Accepted:2007-04-19
中国组织工程研究与临床康复 第11卷 第38期 2007-09-23出版
JournalofClinicalRehabilitativeTissueEngineeringResearch September23,2007 Vol.11,No.38
7553
CRTER
P.O.Box1200,Shenyang 110004 kf23385083@sina.com www.zglckf.com
1 材料和方法
设计:对比观察的动物实验。
单位:广西疾病预防控制中心卫生毒理与功能检
验科。
材料:实验于2003-09/2004-08在广西疾病预防
控制中心SPF级动物实验室 (桂医动字第23003号)
内喂养观察。选用健康成年SD大鼠160只,SPF级,
雌雄各半,由广西医科大学医学实验动物中心提供(桂
动许字(2000)第001号)。将所有大鼠在本中心SPF
级动物实验室内喂养检疫、适应7d,观察其进食、生长
情况,未见异常后称质量。按体质量分层随机分为 5
组:空白对照组、模型组、雪灵芝高剂量组、雪灵芝中剂
量组和雪灵芝低剂量组,每组32只,雌雄各半。
主要试剂和仪器:雪灵芝浓缩液(西藏阿仲嘎保生
物制品有限责任公司提供,批号:20030828),棕色液
体,人体推荐用量为成人1次/d,5mL/次。按60kg
体质量折算为83.3mg/kg(样品比重约为 1.0)。二乙
基亚硝胺 (DENA)(由中国科学院南京土壤研究所提
供);半自动生化分析仪(日本日立KY2000);全自动血
细胞分析仪(美国贝克曼公司)。
设计、实施和评估者:由第一作者设计和评估;全
部作者共同实施。
方法:根据人体推荐用量,雪灵芝高、中、低剂量
组给药剂量分别为2.500,1.250,0.625mL/kg。用蒸馏
水将样品原液分别稀释4,8和16倍得到相应溶液,以
0.01mL/g容量灌胃。阴性对照组和模型组灌胃等量蒸
馏水,1次/d,连续60d。实验的第61天开始给阳性物
DENA以复制肿瘤模型,雪灵芝高、中、低剂量组均按
10mg/kg将DENA加入3个组的受试溶液中,使各组
溶液含DENA浓度均为1g/L,模型组将DENA加入
蒸馏水中,各组均按0.01mL/g容积灌胃,对照组灌
胃等量的生理盐水,1次 /d,连续 30d。于停止灌胃
90d后 (即实验至第180天)各组处死一半受试大鼠
(雌雄各半)。应用550伏交流电电击使大鼠短暂昏迷,
从中线剪开腹部皮肤,取血检测血常规及主要生化指
标,解剖取出心、肺、肝、脾、肾、睾丸(卵巢)、胃、肠等脏
器,观察各脏器大体形态改变,并对胃、肠以外脏器称
质量,然后将各个脏器以100g/L甲醛固定,石蜡包埋,
苏木精-伊红染色,制成组织病理切片,光学显微镜下
(10×10,10×40倍)观察各脏器的癌变程度。1周后开始
灌胃给受试样品(不含DENA)。7周后(实验第228天)
处死余下的一半雄性大鼠,操作及检测方法同前。又8
周后(实验至第286天)处死余下的全部大鼠,操作及检
测方法同前。实验过程中前60d每周称质量1次,60d
后每2周称质量1次,并依体质量调整灌胃总量。
主要观察指标:DENA对大鼠肝脏的影响。
统计学分析:由第一作者应用 SPSS11.5及
PEMS软件完成。差异比较采用方差分析和t检验。
2 结果
2.1 实验动物数量分析 实验共纳入 SD大鼠 160
只,过程中有15只先后因感冒等病死且被其他同笼大
鼠咬吃而脱落,145只进入结果分析。
2.2 DENA对各组大鼠肝脏的影响 见表1～4,见图
1～5。
2.3 其他脏器的病理组织检查结果 模型组 2只大
鼠发现有肝癌肺转移,各组均发现有肺炎症反应或肺
脓肿,其中模型组尤为严重,其他各组大鼠未发现有肺
肿瘤。各组大鼠的心、脾、肾、睾丸、卵巢、胃、肠等脏器
均未发现有肿瘤及癌前病变。
-:未见特殊改变;+:可见肝细胞组织癌前病变(肝细胞组织癌前病变是指肝脏在
致癌因素作用下肝细胞丧失分化能力而停留在幼稚细胞阶段。病理特征主要表现
为肝小叶肝细胞索排列紊乱,有炎细胞浸润等。)!:可见肝细胞组织癌变;:可
见多发性混合性肿瘤病灶;#:其他器官有肝癌转移灶。肉眼观评分!以上认为有
癌变发生
表1 各组大鼠肝组织病理切片光学显微镜下观察结果
组别 n - + ! #
1
4
1
32
0
38
14
11
13
0
6
44
雪灵芝高剂量组
雪灵芝中剂量组
雪灵芝低剂量组
阴性对照组
模型组
合计
15
11
13
0
17
56
0
0
0
0
5
5
0
0
0
0
2
2
30
26
27
32
30
145
表2 光学显微镜下观察各组大鼠肝细胞癌变比较结果
组别 n 发生癌前病变(n/%) 发生癌变(n/%) χ2 P
30
26
27
32
30
145
29/96.7
22/84.6
26/96.3
0/0
30/100.0
107/73.8
雪灵芝高剂量组
雪灵芝中剂量组
雪灵芝低剂量组
阴性对照组
模型组
合计
15/50.0
11/42.3
13/48.2
0/0
24/80.0
63/43.5
4.6886
6.9115
5.0087
36.7361
—
0.0302
0.0085
0.0251
0.0000
—
-:未见特殊改变;+:表面粗糙或可见针尖样大小病灶;!:可见大小不等的小结节
或有较大结节(0.5cm×0.5cm)但不超过 2个;:可见多个较大结节(同上)或单
个以上大结节(大于 1.0cm×1.0cm);#:肝癌转移至其他器官;肉眼观评分!以
上认为有癌变发生
表3 肉眼观察肝脏大体病理改变结果
组别 n - + ! #
11
11
10
32
3
67
7
7
5
0
11
30
雪灵芝高剂量组
雪灵芝中剂量组
雪灵芝低剂量组
阴性对照组
模型组
合计
7
8
12
0
9
36
5
0
0
0
5
10
0
0
0
0
2
2
30
26
27
32
30
145
ISSN1673-8225 CN21-1539/R
www.zglckf.com kf23385083@sina.com赵 鹏,等.雪灵芝对二乙基亚硝胺诱导大鼠肝癌组织细胞的抑制作用
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CRTER
沈阳1200邮政信箱 110004 kf23385083@sina.com www.zglckf.com
3 讨论
用DENA诱发大鼠肝癌模型是当前应用最为广泛
的研究人类肝癌的一种理想动物模型,给药途径有自
由饮水法、灌胃法及两者交替法,还有腹腔注射法与自
由饮水结合法,许多研究者在复制模型时使用小剂量
长时间饮水法或与灌胃交替法,此法成功造模所需给
药的时间较长,通常需要3～8个月,且自由饮水法容易
使DENA分解,摄入量不易准确确定,还使实验者长时
间的接触强致癌物质[2-5]。本实验独创性的使用较大剂
量(10mg/kg)的 DENA1次 /d连续 30d给予大鼠灌
胃,实验结果表明造模成功,此法给药量准确,给药时
间时间短,从初次给药到模型出现的时间也较短,简便
易行,且缩短了实验者接触阳性物的时间。
本实验结果显示,样品各剂量组大鼠肝脏病理组
织切片镜下观察及肝脏大体肉眼观察所见的癌变阳性
率均低于模型对照组,其中病理组织切片所见癌变阳
性率差异有显著性,表明雪灵芝具有降低DENA诱导
的大鼠肝癌的发生率和抑制癌变进展的作用。迄今的
化学研究结果表明,雪灵芝所属的蚤缀属植物含皂甙、
黄酮类、生物碱(β-咔波啉)、类固醇类、三萜类、阿魏
酸、环肽、香豆素、氨基酸、糖类以及维生素等多种化学
成分。现代药理研究表明,三萜皂甙、β-咔波啉及阿魏
酸及环肽具有抗肿瘤作用,其药理作用可能主要包括
5个方面:抑制肿瘤细胞的有丝分裂、引起癌细胞程序
性死亡、抑制酶活性、清除自由基及免疫调节作用[1,6]。
4 参考文献
图2 肝细胞变性
图3 肝癌组织
图4 肝假小叶
表4 肉眼观察各组肝脏可见病理改变发生率比较结果
组别 n 有异常(n/%) 发生癌变(n/%) P
30
26
27
32
30
145
19/63.3
15/57.7
17/63.0
0/0
27/90.0
78/52.7
雪灵芝高剂量组
雪灵芝中剂量组
雪灵芝低剂量组
阴性对照组
模型组
合计
12/40.0
8/30.8
12/44.4
0/0
16/53.3
48/33.1
0.0325
0.0133
0.0345
0.0000
—
图1 正常肝组织
图5 肝淋巴管瘤
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1
2
3
4
5
6
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www.zglckf.com kf23385083@sina.com 赵 鹏,等.雪灵芝对二乙基亚硝胺诱导大鼠肝癌组织细胞的抑制作用
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