全 文 ：`月粼粱泌消一用指黯续蒯荡树琳甜雳渐澎姗翎祖ō翔ù鬃拟蒸绷测ō州啼黝蹦铡耀训燕烈渊熟洲粥漏溯瀚胭剔撅潮揣缘淤缎颧塑撇镯舍黔胰玺麟劫滞珊ē涅幽
中南药学23 0 0年8 月第 1卷第3 期Ce nt ra lS out h Pha r me a y .Aug u st 2 0 03 , V o l . 1 N o . 3
- 月卜- R
一王J一 T
t。 、 采用非参数检验 ( W il co xo n 方法 ) , 结果表 明其有显
著性差异 (尸 < 0 . 0 5 ) 。 故可认为普通片和缓释制剂 口服后
吸收程度等效 , 吸收速度不等效 (缓 释制剂的 tma 、 明显
延长 ) 。
八曰5nU
:
`
今、ù,山ú
百
0 5 10 1 5 2 0 2 5 3 0
t ( d )
图 3 受试者多剂量 口服两种制剂后血浆中二甲双肌平均
浓度一时间曲线
用双单侧 l 检验分析 , 结果显示两者稳态时的 C 溯 x 、 A U C
均生物等效 。 tam x 采用非参数检验中的 Wi lco xo n 方法检验 ,
5 一 7< 50
. 。 5 ( 17 ) 一 35 , 尸 < 0 . 0 5 , 受试制剂与参 比制剂有
显著性差异 。 受试制剂与参比制剂多剂量 口服时生物利用度
等效 , 吸收速度不等效 。
3 讨论
3
.
1 盐酸二甲双肌极性大 , 在血样中呈离子状态 , 故有人
将二甲双肌衍生化后用有机溶剂提取田 , 我们曾采用乙酸乙
醋 、 乙酸乙醋 /正丁醇提取二甲双肌与 5 1) S 的结合物 , 或将
血样碱化后用有机溶剂提取 , 但操作麻烦 , 回收率也不高 ,
有关文献报道 amC x 较大 , 一般在 2 峪 · m L 一 `左右 l[ 一 5〕 , 故
我们采用直接沉淀蛋白法 , 其样品处理简单 , 无杂峰干扰测
定 , 相对回收率在 97 %以上 。
3
.
2 盐酸二 甲双肌因极性大 , 有人用 C E 法困 , 或在酸性
流动相 ( p H 一 3 . 5) 条件下 , 用阳离子交换柱叫 、 C N 柱困
分析 , 或在中性 流动相 ( p H 一 7) 条件下 , 用反相柱分
析囚 , 像二甲双肌这种能解离的极性化合物用常规的 H PI 尤
法分离时 , 常因保留行为差导致出峰太快 , 使得药物峰与血
浆中杂质难以分开 , 或者药物的色谱峰对称性差 (峰拖尾 )
和保留时间不稳定等问题 。 故在酸性 ( p H 一 4 . 0) 流动相中
加人离子对试剂 , 并用 0 . 5% T E A 改善色谱峰形 。
3
.
3 无论是单剂量还是多剂量实验 , 受试者 口服二甲双肌
2 种制剂后其估算的药动学参数 A U OC 一 r经双单侧 t 检验分
析 , 结果均显示参比制剂和受试制剂的 A U公一 : 生物等效 ,
参考文献
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p h o t o m e t r i e d e t e e t i o n 巨J】. J o f hC or m B , 2 0 0 1 , 7 6 2 : 5 1
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高效液相色谱法测定川东嶂牙菜中嶂牙菜苦昔
和去甲当药昔的含量
李福双 , 徐康平 , 谭健兵 , 曾光尧 , 黄朝辉 , 颜冬兰 ` , 胡高云 , 谭桂 山 “ (中南大学药学院药物化学
系 , 长沙 4 10 0 1 3 )
摘要 : 目的 建立测定川 东掉牙莱中璋牙菜苦苍和 去 甲当药等含量 的高效液相 色谱方法 。 方法
P H 一 3 . 0 ) ,
结果
H Y P E R Sl l
才
131) S
梯度洗脱
掉牙菜苦
0
.
9 9 9 8 8
,
已lC 。 (4 · 6 ~ 只 20 。 ~ , 5 拌m ) 色谱柱 , 流动相为 乙睛 一磷酸二氢钠 (0 · 03 mo 卜
( A C N %
; 0 m in s%
,
2 0 m in 15% )
, 流速为 0 . 8 m L · nr in 一 ’ , 检测波长为 2 5 0 n m , 柱温为 2 5 oC 。
普和去 甲当药普分别在 .1 528 一 n . 4 6 拜g , 85 · 4一 8 54 gn 范 围内线性 良好 , 相关 系数 r 分 别为 .0 9 9 9 9 2 、
基金项目 : 湖南省自然科学基金 ( O ZJ Y ZO4 6)
( 0 7 3 1 ) 26 5 0 4 4 2 -E m
a i l
: t g s 3 9 5@ y a h o o
.
` 中南大学药学院 20 0 3 届实习生 “ 通讯作者 : T e l : ( 0 7 3 1 ) 2 65 0 3 9 5 ,
C O l l l C n
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u t h P h ar m
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.
A u g u s t 20 0 3
,
v o l
.
1 N o
.
3 中南药学 2 0 0 3 年 6 月第 l 卷第 3 期
平均回收率分别为 9 . 1%和 101 . 8% , R DS 均 < 1% (n 一 5 ) 。 结论 本方法操作简便 , 分离效果好 , 灵敏度高 , 重
现性好 , 为控制 川东璋牙菜质量提供参考 。
关键词 : 律牙菜苦普 ; 去甲 当药普 ; 高效液相色谱法 ; 川东璋牙菜 ; 含量测 定
中图分类号 : R 284 . 1 , 9 27 . 2 文献标识码 : A 文章编号 : 167 2一 2 98 1 ( 20 0 3 ) 0 3一 0 14 1一 0 3
D e t e r r n i n a t i o n o f s w e r t i a r n a r i n a n d n o r s w e r t i a n o l i n i n S w e r t i a d 叮 v id i F r a n c h 。
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、
i F让 s h u a昭 , X u K a n g 一 p in g , T a n J ia -n b in g , Z e雌 G u a n g一 y a o , H u a n g Z h a o 一 h u i , Y a n 肠 11 g es la n ` , H u G a 于 y u n ,
T a n G u i- s h a n
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( S c h o o l o f P h
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e i e n c e s
,
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月略 T RA〔 1 , : 0 助 E C T I 、下 T o e s t a b li s h a m e t h o d t o d e t e rm in e s w e r t i aam r in a n d no r s w e r t ia n o li n s姗rt i a d a v id i
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.
M E T H O璐 T h e H Y p E R S l l J B I ) S C ,、 ( 4 . 6 nr 只 ZOO mnr , 5 拌nt ) w a s u s e d
.
T h e mo b il
e p h a s e e o n s i s t e d
o f A C降N a H Z P以 ( 0 . 0 3 m o l 一厂 ` , p H ~ 3 . 0 ) , a n d g r a d ie n t e l u t i o n ( A CN % : 0 m in s% , 2 0 m in 15 % ) . T h e
f lo w r a t e w a s 0
.
8 m l
·
m i n 一 ’ , a n d t h e U V d e t e e t io n w a v e le n g t h w a s 2 5 0 叽 R ES t 几T S T ll e e a li bar t io n e u vr e s of
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.
9 9 9 85 )
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, s e n s it i
v e , a e e u r a t e a n d r e p r o d u e i b l e a n d e a n b e u s e d t o e o n t r o l t h e q u a li t y o f s姗 r t i a da v i d i F ar n e h .
K E Y 硒D R 】粥 : s w e r t ia am r in ; n o r s w e r t ia n o l in ; H P I JC ; S姗 r t i a d a v 艺d 班F ar n ch . ; d e t e mr in a t io n
进行峰纯度检测 , 表明均为单一成分峰 。
m A U
40 0
35 0
30 0
25 0
20 0
15 0
10 0
5 0
0
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In A U
100 0
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60 0
4 00
2 00
24 26 2 8 m i n20 A,`
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ǎ汽,一6气`2 24B02
O八6
川东璋牙菜是龙胆科 ( G e n it a an c e a e) 璋 牙菜属植物
S二 irt a da vi id F ar cn h . 的全草 , 民间又称鱼胆草 、 水黄
连 、 水灵芝等 。 性寒 , 味极苦 , 具清热解毒 、 利胆健胃等功
效 。 临床应用川东璋牙菜制剂治疗急性菌痢有较好疗效川 。
姜德健等研究表明去甲基雏菊叶龙胆酮等咄酮类化合物对小
鼠心肌缺血 一再灌注损伤具有保护作用 〔2一 3〕 口 本实验建立了
高效液相色谱法同时测定川东璋牙菜中 2 种主要成分的含
量 , 为控制川东璋牙菜药材质量提供参考 。
1 仪器与试药
1
.
1 仪器
美国 纯 il ent 110 型高效液相色谱仪 (低压四元泵 , 自
动进样器 , 柱温箱 , 二极管阵列检测器 , Che m st at io ns 色谱
工作站 ) 。
1
.
2 试剂
乙睛和甲醇均为色谱纯 ; 水为双蒸水并经 0 . 45 拜m 水
系滤膜过滤 ; 磷酸为分析纯 。 对照品 : 2 种成分均为 自行提
取精 制 , 经 U V 、 IR 、 ` H N M R 、 ` 3 CN M R 鉴 定 结 构 , 经
H P L C 检测 , 1% 自身对照法计算纯度均大于 98 . 5 % 。
1
.
3 药材
川东璋牙菜采自湖南湘西保靖县 , 经本院曾嵘副教授鉴
定为 s we rt ia da 饭id F ar cn h . 。
2 色谱条件与系统适应性
色谱柱为大连依利特公 司 H Y P E R SI L 131〕S CI : ( .4 6
~
X 20 O m m
,
5 拜m ) , 流动相为乙睛一磷酸二氢钠 (0 . 03
mo 卜 L一 , , H 3 P以 调 p H 一 3 . 0) , 梯度洗脱 ( A C N % : o
m i n s%
,
2 0 m i n 1 5%
,
3 0 m in 15% )
, 流速 为 0 . 5 m L ·
m in 一 ’ , 检测波长为 2 50 nr , 柱温为 25 ℃ , 采用外标峰面
积法计算含量 , 理论塔板数均 > 10 魂 , 对称因子均在 。 . 95 一
1
.
05 范围内 , 与相邻杂质峰的分离度均 > 2 . 0 , 且经 D A D
图 1 对照品 ( A ) 与样品 ( )B 色谱图
1
. 璋牙菜苦昔 ( 18 . 5 ~ ) 2
. 去甲当药昔 ( 27 . 5 ~ )
3 溶液制备
3
.
1 对照 品溶液的制备
精密称取樟牙菜苦昔 76 . 4 gm , 去甲当药昔 17
.
08 m g
置 10 0 m L 容量瓶中 , 甲醇超声溶解并稀释至刻度 , 摇匀制
得混合对照品溶液 。
3
.
2 供试品溶液的制备
取川东璋牙菜干燥粗粉 (过 30 目筛 ) 约 5 . 0 9 , 精密称
定 , 加入 50 %甲醇 4 50 m L , 索氏提取 10 h , 溶液浓缩至干
浸膏 , 甲醇超声溶解 , 转移至 50 m L 容量瓶中 , 并稀释至
刻度 , 摇匀即得 。
中南药学 2 0 0 3年 6月第 l卷第 3期 C e n ta r lS o ut h P ha rm a ey . A ug s u r2 0 0 3, V o l . 1 N o . 3
ù剔熙黔翻粼洲黝晰渊娜端张哟绷蒙鲡秘蒸耀翔抓酬烈蕊澎茹姗骂ō拼脚徽就海棘翅黯翼滩熟趣巍咨裸摧珊摆独器赚鬓母导龚爵搏券ō臻谍邻侄那部髓瓣渤一鳃并挂潞越婆跳礴油褪潍终场ù膝封胜路戮映任徐ù
4 线性关系的考察
分别精密吸取混合对照品溶液 2 川 、 .2 5 砂八 5 川 、
10 醉 、 15 讨 、 20 川 进样 。 按 H PI 一条件测定峰面积积分
值 , 以峰面积积分值为纵坐标 , 以对照品进样量为横坐标 ,
经线性回归处理得嶂牙菜苦昔和去甲当药昔的标准曲线 , 分
别为 :
Y = 1 18 9
.
4 5 0 9X 一 2 6 . 3 26 5 r = 0 . 9 99 9 2
线性范围为 1 . 52 8一 n · 46 6 拌g ,
Y = 4
.
3 7 0 3X 一 11 . 8 3 9 5 厂一 0 . 9 9 9 8 8
线性范围为 8 5· 4一 85 4 n g 。
5 稳定性试验
5
.
1 对照品稳定性试验
精密吸取混合对照品溶液 5 刃 分别于配制后 。 、 2 、 4 、
6
、
8
、
1 2
、
24
、
3 6
、
4 8 h 测定峰面积 , 测得 2 种成分峰面积
积分值 , 计算 R sD 分别为 : 。 . 6 % , 。 . 89 % , 表明对照品
溶液在 48 h 内稳定 。
5
.
2 供试品稳定性试验
精密吸取供试品溶液 5 醉才分别于配制后 。 、 2 、 4 、 6 、
8
、
12
、
24
、
36
、
48 h 测定峰面积 , 测得 2 种成分峰面积积
分值 , 计算 R S D 分别为 : 1 . 7% 、 1 . 9% , 表明供试品溶液
在 48 h 内稳定 。
6 精密度试验
6
.
1 对照品精密度试验
精密吸取混合对照品溶液 5 川 连续进样 5 次 , 测定峰
面积积分值 , 2 种成分 R s D 分别为 : 璋牙菜苦昔 。. 28 % ,
去甲当药昔 。 . 23 % 。
6
.
2 供试 品精密度试验
精密吸取供试品溶液 10 砰J 连续进样 5 次 , 测定峰面积
积分值 , 2 种成分的 R SD 分别为 : 璋牙菜苦昔 0 . 32 % , 去
甲当药昔 。 . 42 % 。
7 重现性试验
取同一批川东璋牙菜药材粗粉 5 份 , 精密称定 , 按含量
测定方法重复测定 , 计算得两成分的 RDS 分别为 : 璋牙菜
苦昔 1. 6% , 去甲当药昔 1 . 9 % 。
8 回收率试验
精密称定已测定含量的川东璋牙菜干燥药材粗粉 5 份 ,
每份 5 . 0 9 , 分别加人璋牙菜苦昔 40 m g , 去甲当药昔 2 . 5
m g
, 精密称定 , 按供试品制备方法和色谱条件测定峰面积
积分值 。 两成分的平均回收率和 R DS 分别为 : 璋牙菜苦昔
9 9
.
1%和 1 . 05 % , 去甲当药昔 101 . 8%和 1 . 14 % 。
9 样品含量测定
取 20 0 2 0 9一1 , 20 0 1 21 1 8 , 20 0 0 1 0 0 7 批川东璋牙菜干燥粗
粉各 2 份 , 精密称定约 5. 0 9 , 按上述供试品制备方法和色谱
条件测定峰面积积分值 。 2 种成分的平均含量结果见表 1。
表 l 三批川东璋牙菜含 t 测定结果
应用二极管阵列检测器在 1 90一 760 二范围内对璋牙菜
苦昔和去甲当药昔的色谱峰进行扫描 , 其中去甲当药普在
25 O nm 处为最大吸收 , 璋牙菜苦昔最大吸收峰为 2 3 8 nr , 但
在 2 50 二处也有较强的吸收 , 故检测波长选择为 250二 。
1 0
.
2 流动相与色谱柱的选择
本试验曾比较过多种流动相 : M e O H 一 H 2 0 系统 、 A C-N
H : O 系统 、 离子对 试剂 十二烷 基磺 酸钠 ( SDS ) 系统 、
A C件N a H Z P以 、 A C N 一 H A C 等 。 A C -N H Z O 系统比 M e ( ) H -
H ZO 系统分离度好 , 柱效高 ; 在未调节 p H 值的 A C N 一 H 2 0
系统情况下分离度不好 , 峰形脱尾 , 调节 p H ~ 3 . 。 时峰形
和分离度得到有效改善 ; 应用 N a H Z P低 或离子对试剂 DS S
后 , 柱效显著提高 , 峰形与分离度达到最佳 , 且两者并无明
显差别 ; 采用等度洗脱时去甲当药昔出峰拖后且峰展宽 , 故
考虑应用梯度洗脱 ; 另外考虑到 N a H Z P以 成本相对较低 ,
故最终确定以 A C N 一 N a H : P O 、 ( 0 . 0 3 m o l · xJ 一 ’ , p H ~ 3 . 0 )
为流动相进行梯度洗脱 。 我们还对下列色谱柱 K or m as il
( )D S一 C ] 8 ( 4 . 6
nr
又 2 0 0 m nr , 5 了* m ) 、 I J i e h r o s p h e r C z s
( 4
.
6
m
火 2 5 0
~
,
5 拜m ) 和 E e lip s x D B C 1 8 ( 4 . 6 m m 只
1 5 0 m m
,
5 拼m ) 进行了 比较 , 以 H Y p E R S l l J E BD S一 C 18
(4
·
6
~
火 20 。 ~
,
5 拌m ) 柱峰形最佳 , 分离度好 , 柱效
高 , 故最终选用 H Y P E R S l l E B l〕S 一 C 18 ( 4 . 6 m m 又 2 0 0
mnI
,
5 拜m ) 。
1 0
.
3 提取条件的选择
对川东璋牙菜干燥药材设计正交试验考察提取条件 , 考
察项目包括提取溶媒 (水 、 甲醇 、 乙醇 ) , 粉碎度 (药材切
片 , 过 30 目筛的粗粉 , 过 0S 目筛的细粉 ) , 提取方法 (回
流提取 、 索氏提取 、 超声提取 ) , 结果表明以甲醇经索氏提
取粗粉效果最好 。 又考察了甲醇浓度及提取时间对提取效率
的影响 : 当甲醇浓度为 50 %时 , 两者均能得到较完全的提
取 ; 提取时间分别进行了 s h 、 10 h 和 12 h 的考察 , 10 h 和
12 h 所测得 2 种成分的含量己无差别 , 说明已提取完全 。 故
确定最佳提取条件为 50 % M e 0 H 抽提 10 h 。
10
.
4 中国药典 2 0 0 0 版收载有同科植物青叶胆 , 以齐墩果
酸和璋牙菜苦昔为对照品进行薄层鉴别 , 未列含量测定
项川 。 本方法不仅可为川东璋牙菜的质量控制提供参考 , 而
且可为川东璋牙菜替代 同科 同属药用 植物 的研究 提供
依据 。
璋牙菜苦昔
去甲当药昔
2 0 0 2 0 9 1 1
8
.
8 8 0%
0
.
5 2 0%
2 0 0 1 1 1 18
9
.
2 0 0%
0
.
5 1 9%
2 0 0 0 10 0 7
9
.
6 4 ( )%
0
.
5 8 8%
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乞3己 J i a n g D o i i a n , T a n G u i一 、 h a n , Zho u Z h补ho n g , e 艺 a Z. P r o t e v -
t i v e E ff e e t s o f D e m e th y lb e ll id i fo lin o n M y o e a r d l a l I s e h e m i a
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R e p e r fu s i o n I nj u r y in R a t S [ J口. P l a n t a M七d . , 2 0 0 2 , 6 8 : 7 1 0
冲口 中国药典 . 2 0 0 . 一部 [ S〕. 15
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