全 文 ：两种獐牙菜属植物中两种苦苷的含量分析
丁　兰 1, 2 ,谭桂山 2 ,李福双 2 ,谭健兵 2 , 申　健 2 ,刘建锋2 ,徐康平 2＊
(1.长沙市第一医院 ,湖南长沙 410005;2.中南大学药学院 ,湖南长沙 410013)
　　摘要　目的 :建立同时测定川东獐牙菜 、显脉獐牙菜中獐牙菜苦苷和龙胆苦苷含量的高效液相色谱方法。方
法 :采用 HYPERSILBDSC18色谱柱(4.6mm×200mm, 5 μm),流动相为甲醇-水梯度洗脱(MeOH%:0min15% ,
40 min45%), 流速为 1.0 ml/min,检测波长为 240 nm,柱温为 25℃。结果 :獐牙菜苦苷和龙胆苦苷分别在 1.04
～ 31.20 μg和 0.22 ～ 6.50 μg范围内线性关系良好 , r分别为 0.99992和 0.99996 , 平均回收率分别为 97.34%和
96.30%, RSD均小于 3% (n=6)。结论:本方法操作简便 ,分离效果好 , 灵敏度高 ,重现性好 ,为控制川东獐牙菜和
显脉獐牙菜质量提供参考。
关键词　獐牙菜苦苷;龙胆苦苷;川东獐牙菜;显脉獐牙菜;高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)04-0533-03
基金项目:湖南省自然科学基金(02JJY2046);湖南省卫生厅科研基金重点项目(A2003-002)作者简介:丁兰 ,女 ,主管药师 ,主要从事医院药学和天然药物分析工作;Tel:0731-4667631。＊通讯作者:徐康平 ,男 ,讲师 ,主要从事天然药物分析和新药研发工作;Tel:0731-2650449, E-mail:xukp376@yahoo.com.cn。
　　川东獐牙菜(SwertiadavidiFranch.)和显脉獐
牙菜 (Swertianervosa(G.Don)Wal.)均为龙胆科
(Gentianaceae)獐牙菜属植物 , 2000年收入湖南省
中药材标准 。民间又将其二者分别称为鱼胆草 、水
黄连 、水灵芝和青鱼草 、四棱草等。性寒 ,味极苦 ,具
清热解毒 ,利胆健胃等功效 。獐牙菜属植物主要活
性成分之一为环烯醚萜苷类 ,主要包括獐牙菜苦苷
(Swertiamarin)、龙胆苦苷(Gentiopicroside)等 。现
代药理学研究表明〔1〕 , 獐牙菜苦苷有提高肌肤机
能 、促进毛发生长 、抑制中枢神经 、镇痛和抗炎等作
用 ,龙胆苦苷有促进胃液分泌 、抗原虫和抗炎等作
用 。本文建立了一种高效液相色谱法 ,可同时测定
两种环烯醚萜苷。该法稳定 、快速 、重现性好 ,可为
川东獐牙菜 、显脉獐牙菜药材的质量控制提供实验
依据。
1 　仪器与试药
1.1 　仪器　Agilent1100型高效液相色谱仪(低压
四元泵 ,自动进样器 , 柱温箱 , VWD检测器 , Chem-
Stations色谱工作站;美国安捷伦科技有限公司);
BP211D电子天平(0.00001g,德国塞多利斯公司)。
1.2 　试剂　甲醇为色谱纯;水为纯净水并经 0.45
μm水系微孔滤膜过滤;其余试剂均为分析纯 。
1.3 　对照品　獐牙菜苦苷(Swertiamarin),自行提
取精制 ,经 UV、IR、1HNMR, 13C-NMR及 MS鉴定结
构 〔2〕 , HPLC检测纯度大于 98.5%(归一化法);龙
胆苦苷(Gentiopicroside),含量测定用 ,由中国药品
生物制品检定所提供 ,批号为 110770-200409。
1.4 　药材　川东獐牙菜(人工种植)于 2003年采
自湖南湘西保靖县 , 显脉獐牙菜(野生)于 2006年
采自湖南湘西桑植县 ,经本院李劲平副教授鉴定为
S.davidiFranch.和 S.nervosa(G.Don)Wal.的
全草 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件与系统适应性 〔3-5〕　色谱柱为大连
依利特公司 HYPERSILBDSC18柱(4.6 mm×200
mm, 5 μm),流动相为甲醇-水梯度洗脱(MeOH%:0
min15%, 40 min45%),流速为 1.0 mL/min,检测
波长为 240 nm,柱温为 25℃。采用外标峰面积法计
算含量 ,理论塔板数均大于 5000 ,对称因子分别为
0.92和 0.97,与相邻杂质峰的分离度均大于 1.5。
2.2　溶液制备
2.2.1 　对照品溶液的制备:精密称取獐牙菜苦苷
10.41 mg、龙胆苦苷 10.83 mg分别置 10 ml、50 ml
容量瓶中 ,甲醇超声溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,滤过 ,
即得 。色谱图见图 1。
图 1　对照品色谱图
A.獐牙菜苦苷　B.龙胆苦苷
·533·中药材　JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 4期 2008年 4月DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.04.065
2.2.2　供试品溶液的制备:取干燥药材粗粉约
2.0g,精密称定 ,加甲醇 20 ml/次 ,超声提取 2次 ,
每次 30 min,滤过 ,滤液合并 ,转移至 50 ml容量瓶
中 ,甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,滤过 ,即得 。色谱图见图
2和图 3。
图 2　川东獐牙菜色谱图
图 3　显脉獐牙菜色谱图
2.2.3　测定法:精密吸取供试品溶液和两种对照
品溶液各 10 μl,注入液相色谱仪。按外标法以峰面
积计算供试品中獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的含量 。
2.3 　线性关系的考察　分别精密吸取对照品溶液
1、2、5、10、20、30 μl进样 。按上述色谱条件测定峰
面积积分值 , 以峰面积积分值为纵坐标 ,以对照品
进样量为横坐标 ,经线性回归处理得獐牙菜苦苷和
龙胆苦苷的标准曲线 ,分别为:Y=1223.4209X+
159.7964(r=0.99992)线性范围为 1.04 ～ 31.20
μg;Y=984.0371X-4.2193(r=0.99996),线性范
围为 0.22 ～ 6.50 μg。结果表明 , 两种化合物的线
性关系良好 , 符合测定要求。
2.4 　检测限与定量限　在上述色谱条件下 ,当信
噪比 S/N=3时 ,对两组分检测限进行测定 ,结果表
明 ,獐牙菜苦苷和龙胆苦苷检测限分别为 4.8、8.0
ng;当信噪比 S/N=10时 ,对两组分定量限进行测
定 ,结果表明 ,獐牙菜苦苷和龙胆苦苷定量限分别为
16.0、26.8ng。
2.5 　稳定性试验　精密吸取显脉獐牙菜供试品溶
液 10μL分别于配制后 0, 2, 4, 8, 12, 24, 36, 48 h测
定峰面积 ,测得两种成分峰面积积分值 ,计算 RSD
分别为 1.14%, 1.83%,表明供试品溶液在 48 h内
稳定。
2.6 　精密度试验　精密吸取显脉獐牙菜供试品溶
液 10μl连续进样 6次 ,测定峰面积积分值 ,两种成
分的 RSD分别为:獐牙菜苦苷 0.66%, 龙胆苦苷
0.87%。表明仪器精密度良好。
2.7 　重复性试验　取同一批显脉獐牙菜药材粗粉
5份 ,精密称定 ,按含量测定方法重复测定 ,计算得
两成分的 RSD分别为:獐牙菜苦苷 1.75%,龙胆苦
苷 2.39%。表明该方法的重复性良好 。
2.8　加样回收率试验　精密称定已测定含量的显
脉獐牙菜药材粗粉 6份 ,每份 1.0g,精密称定 ,分别
加入獐牙菜苦苷对照品溶液(C=1.041 mg/ml)6.0
ml(相当獐牙菜苦苷对照品 6.25 mg)、龙胆苦苷对
照品溶液(C=0.2166 mg/ml)6.0 ml(相当龙胆苦
苷对照品 1.30mg),按供试品制备方法和色谱条件
测定峰面积积分值。两成分的平均回收率和 RSD
分别为:獐牙菜苦苷 97.34%和 1.78%,龙胆苦苷
96.30%和 2.07%。
2.9　样品的测定　取川东獐牙菜 、显脉獐牙菜干
燥粗粉各 3份 ,精密称定约 2.0 g,按上述供试品制
备方法和色谱条件测定峰面积积分值。外标法计算
得到川东獐牙菜和显脉獐牙菜中獐牙菜苦苷和龙胆
苦苷的含量 , 结果见表 1。
　表 1　　　　　样品中獐牙菜苦苷和龙胆苦苷
的含量测定结果(n=3)
样品 獐牙菜苦苷(%) 龙胆苦苷(%)
川东獐牙菜 3.34 0.23
显脉獐牙菜 0.64 0.12
3　讨论
3.1　运用紫外分光光度计在 190 ～ 400 nm内 ,分
别对獐牙菜苦苷和龙胆苦苷对照品溶液进行扫描 ,
结果表明獐牙菜苦苷在 240nm处有最大吸收 、龙胆
苦苷在 276 nm处有最大吸收 ,但龙胆苦苷在 240
nm处也有较强吸收 ,故检测波长选定为 240nm。
3.2　本实验对提取方法(回流提取 、索氏提取 、超
声提取), 提取溶媒 (水 、甲醇 、50%甲醇),粉碎度
(药材切片后过 30目筛的粗粉 、过 80目筛的细粉)
等影响因素进行了比较分析 ,结果表明以甲醇经超
声提取粗粉效果最好。超声提取 3次与超声提取 2
次比较 ,獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的含量未见增加 ,说
明已提取完全。故确定最佳提取条件为:MeOH超
声提取药材粗粉 2次 , 30 min/次。
3.3　獐牙菜苦苷和龙胆苦苷是存在于獐牙菜属植
物中的主要活性成分之一 ,中国药典 2005版收载有
同科同属植物青叶胆 ,以齐墩果酸和獐牙菜苦苷为
对照品进行薄层鉴别 ,未列含量测定项〔6〕。本实验
用 HPLC法同时测定川东獐牙菜 、显脉獐牙菜中獐
牙菜苦苷和龙胆苦苷含量 ,尚未见报道 。本方法不
仅可为川东獐牙菜 、显脉獐牙菜替代同科同属药用
植物的研究提供参考 ,而且可为獐牙菜植物中苦苷
类有效成分的分析检测提供科学依据 ,为湖南湘西
·534· 中药材　JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 4期 2008年 4月
獐牙菜属药用植物人工栽培和资源综合开发利用奠
定实验基础 。
致谢:湖南湘西民族医药研究所田华咏提供显脉獐牙菜药材 ,湖
南湘西保靖县杨丁明提供川东獐牙菜药材。
参 考 文 献
[ 1] 孙文基 ,绳金房 .天然活性成分简明手册 .北京:中国
医药科技出版社 , 1985:539, 256, 367.
[ 2] 曾光尧 , 谭桂山 ,徐康平 , 等.川东獐牙菜水溶性化学成
分 .药学学报 , 2004, 39(5):351-353.
[ 3] 徐康平 , 李福双 ,谭健兵 , 等 .川东獐牙菜药材的 HPLC
指纹图谱初步研究 .中南药学 , 2003, 2(1):10-13.
[ 4] 李福双 ,徐康平 , 谭健兵 ,等 .高效液相色谱法测定川东
獐牙菜中獐牙菜苦苷和去甲当药苷的含量 .中南药
学 , 2003, 1(3):141-143.
[ 5] 徐康平 ,李福双 , 谭健兵 ,等 .高效液相色谱法测定川东
獐牙菜中多种成分的含量 .药物分析杂志 , 2005, 25
(1):14-16.
[ 6] 国家药典委员会.中华人民共和国药典 .一部.北京:
化学工业出版社 , 2005:136.
(2007-09-19收稿)
双水相萃取三七中三七皂苷的研究
谢　涛1, 2 ,廖安平 2 ,易元龙 1 ,吴如春 2
(1.广西大学化学化工学院 ,广西南宁 530004;2.广西民族大学化学与生态工程学院 ,广西南宁 530006)
　　摘要　目的:研究利用双水相萃取分离提取三七浸液中的三七总皂苷。 方法:以 PEG/K2HPO4为双水相萃取
体系 , 研究聚乙二醇(PEG)分子量 、PH值 、萃取剂等因素对萃取效果的影响。结果:萃取工艺条件是 PEG分子量为
4000, pH=4.2 ～ 5.0, 浸液与萃取剂为 1∶2, PEG与 K2HPO4质量比为 1∶1时 , 三七总皂苷在上两相的分配系数为
14.2,回收率为 96%。结论:该方法工艺简单 ,成本低 , 耗时少。
关键词　三七总皂苷;双水相;PEG/K2HPO4
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)04-0535-03
基金项目:广西青年科学基金(0135029);广西自然科学基金项目(0575003)作者简介:谢涛 (1972-),女 ,壮族 ,广西南宁人 ,讲师 ,主要研究化工反应与分离方法;Tel:0771-3262683, E-mail:xietao816@sina.com。
　　三七又名田七 ,主产于云南 、广西 ,具有散瘀止
血 、消肿止痛的功效 ,常用于咯血 、吐血 、外伤出血 、
跌打肿痛等症 ,效果十分显著 。三七皂苷部分是活
血化瘀功效的物质基础 ,是三七主要的有效成分 。
三七总皂苷含有人参皂苷 Rb1 、Rb2 、Rc、Rd、Re、Rf、
Rg1 、Rg2 、Rh1 ,三七皂苷 R1 、R2 、R3 、R4 、R6等 20余
种皂苷成分 ,其皂苷类含量达 12%,它们大多是以
人参二醇为苷元的系列皂苷。三七的独特功效使其
在医疗保健领域和日用化工领域的应用十分广泛 ,
科学提取其有效成分并将它们应用到牙膏 、香皂 、漱
口水 、洗发水等日用化工产品中已取得了丰硕的成
果 〔1〕。
双水相萃取技术(Aqueoustwo-phaseextraction,
ATPS)是指亲水性聚合物水溶液在一定条件下可以
形成双水相 ,利用被分离物在两相中分配的不同而
实现分离的技术 。双水相萃取技术以其萃取条件温
和 、分相快速 、处理容量大 、回收率高 、能耗低 、萃取
后处理简便 、设备投资费用少 、操作简单 ,且不存在
有机溶剂残留问题等优点 ,目前已在生物化学 ,细胞
生物学和生物化工等领域得以广泛应用 〔2、3〕。
用双水相提取三七中的三七总皂苷目前未见报
道 ,本文研究了以聚乙二醇 (polyethyleneglycol,
PEG)和 K2HPO4构成的双水相萃取体系用于三七
浸提液中三七皂苷的提取分离 ,获得较好的实验结
果。
1　仪器与材料
1.1　试剂和材料　人参皂苷对照品(中国药品生
物制品检定所),三七(购于药店),聚乙二醇(化学
纯),其它试剂均为分析纯。
1.2　仪器　回流冷凝装置 、916型紫外 -可见分光
光度计(澳大利亚 JBC公司 );FZ102植物粉碎机
(天津市泰斯特仪器有限公司);DGSY电热恒温水
浴锅(北京长源实验设备厂);800型离心沉淀器(上
海浦东物理光学仪器厂)。
2　方法
2.1　三七皂苷的分析方法　采用香草醛-高氯酸
·535·中药材　JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 4期 2008年 4月