全 文 ：基金项目:国家自然基金-新疆联合基金重点项目(U1130303) ;国家自然科学基金资助项目(81173119) ;国家“重大新药创制”科技重大专项
(2012ZX0910320-051) ;上海市优秀学术带头人计划(13XD1403500) ;国家药典委员会 2010 药典标准提高项目(508)
作者简介:杨雅迪，女，硕士研究生 研究方向:药物分析及中药质量标准研究 * 通讯作者:程雪梅，女，副研究员，硕士生导师 研究
方向:药物分析及中药质量标准研究 Tel /Fax: (021)50805522-3037 E-mail:chengxuemei1963@ 163. com;王长虹，男，研究员，博士生导
师 研究方向:中药新制剂与体内过程研究 Tel /Fax:(021)51322511 E-mail:wchcxm@ 163. com
维药骆驼蓬子药材质量标准研究
杨雅迪1，程雪梅1* ，王长虹1* ，郑立明2，李岩3，李晓静1，张磊1，温方方1，王峥涛1(1. 上海中医药大学中药研究
所，上海中药标准化研究中心，上海 201203;2. 新疆医科大学第五附属医院，乌鲁木齐 830011;3. 新疆医科大学药学院药剂物化教研室，乌
鲁木齐 830011)
摘要:目的 建立骆驼蓬子药材的质量标准。方法 参照 2010 年版《中国药典》附录相关方法，对骆驼蓬子水分、总灰分、酸
不溶性灰分、50%乙醇浸出物和重金属进行检测。采用硅胶 HSGF254薄层板，以乙酸乙酯-甲醇-氨水( 10∶ 1. 5∶ 0. 5) 为展开剂，
分别采用置紫外光( 254、365 nm) 下检视、碘化铋钾显色及乙酰胆碱酯酶生物自显影技术对骆驼蓬子进行鉴别。采用 C18色谱
柱，以乙腈-醋酸铵缓冲盐( 19∶ 81) 为流动相，检测波长为 330 nm，建立骆驼蓬子中去氢骆驼蓬碱( HAＲ) 和骆驼蓬碱( HAL) 的
定量分析方法; 以相同流动相梯度洗脱，检测波长为 280 nm，流速为 0. 7 mL·min －1，建立骆驼蓬子药材特征图谱。结果 采
用紫外光( 254、365 nm) 下检视、碘化铋钾显色及生物自显影技术联合分析可鉴别骆驼蓬子中的活性生物碱类成分。骆驼蓬
碱和去氢骆驼蓬碱分别在 1. 97 ～ 198. 68 和 1. 70 ～ 345. 30 μg·mL －1内呈良好的线性关系，平均回收率分别为 99. 69% ( ＲSD
为 1. 89% ) 和 100. 66% ( ＲSD为 1. 78% ) 。11 批骆驼蓬子药材中去氢骆驼蓬碱和骆驼蓬碱平均含量分别为 3. 76%和 3. 23%。
在特征图谱中确定了 4 个峰为特征峰。结论 药材中水分、总灰分、酸不溶性灰分、体积分数 50%乙醇浸出物分别不得过
9. 0%、8. 0%、1. 0%和 22. 0%。重金属铅、镉、砷、汞、铜分别不得过 5 × 10 －6、3 × 10 －6、2 × 10 －6、2 × 10 －6和 20 × 10 －6。骆驼蓬
碱和去氢骆驼蓬碱的含量总和限度不得低于 5. 5%。以骆驼蓬碱为参照物峰，特征图谱中 4 个特征峰的相对保留时间应在各
规定值的 ± 5%之内。建立的定性和定量方法可用于骆驼蓬子药材的质量控制。
关键词:骆驼蓬子;骆驼蓬碱;去氢骆驼蓬碱;鸭嘴花碱; 高效液相色谱法;特征图谱;薄层色谱-生物自显影法;乙酰胆碱酯酶抑
制剂; 质量标准
doi: 10. 11669 /cpj. 2014. 02. 004 中图分类号:Ｒ284 文献标志码:A 文章编号:1001 － 2494(2014)02 － 0106 － 07
Ｒesearch on Quality Specification of the Seeds of Peganum harmala L. of A Uygur Traditional Medicine
YANG Ya-di1，CHENG Xue-mei1* ，WANG Chang-hong1* ，ZHENG Li-ming2，LI Yan3，LI Xiao-jing1，ZHANG
Lei1，WEN Fang-fang1，WANG Zheng-tao1(1. Institute of Chinese Materia Medica，Shanghai University of Traditional Chinese
Medicine，Shanghai 201203，China;2. The Fifth Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China;
3. Department of Pharmaceutics，College of Pharmacy，Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China)
ABSTＲACT:OBJECTIVE To develop the quality specification of seeds of Peganum harmala. METHODS According to the Chi-
nese Pharmacopoeia (2010 Version，Volume 1)and its appendix method，the water，total ash，acid insoluble ash，50% ethanol ex-
tractives，and heavy metal were analyzed for seeds of P. harmala. TLC method was used to separate harmaline (HAL) ，harmine
(HAＲ)and vasicine (VAS)in seed samples using mixture of ethyl acetate-methanol-ammonia water (10∶ 1. 5∶ 0. 5)as a developing
solvent on high performance silica G pre-coated plate with 254 nm fluorescent (GF254)and to identify them inspected under UV 366
nm，254 nm，visualized by spraying with both Dragendorff reagent and by bioautographic assay. In the HPLC method，HAL and HAＲ
were separated on a C18 column with acetonitrile-ammonium acetate water (19∶ 81)as the mobile phase and detected at 330 nm. The
HPLC fingerprints were performed on the same C18 column and eluted by using a linear gradient of acetonitrile (A)and 0. 1 mmol·
L －1 ammonium acetate buffer under the flow rate at 0. 7 mL·min －1 and detected at 280 nm. ＲESULTS In the TLC procedures，254
and 366 nm fluorescent，Dragendorff reagent，and bioautographic assay for the detection of acetylcholinesterase inhibitor can be used
for qualitative identification of the active ingredients. For the HPLC quantitative method，the calibration curve of HAＲ displayed ideal
linearity over the range of 1. 97 － 198. 68 μg·mL －1with average recovery of 99. 69% (ＲSD of 1. 89%). HAL displayed ideal lineari-
ty over the range of 1. 70 － 345. 30 μg·mL －1with average recovery of 100. 66% (ＲSD of 1. 78%). The contents of HAL and HAＲ in
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11 batches of seeds of P. harmala were 3. 234% and 3. 755%. In the characteristic fingerprints of seeds of P. harmala，four common
peaks were identified. CONCLUSION The results indicated that the water，total ash，acid insoluble ash，and 50% ethanol extrac-
tives were not more than 9. 0%，8. 0%，1. 0%，and 22. 0%，respectively. The heavy metal of plumbum，cadmium，arsenic，mercu-
ry，and copper were not more than 5 × 10 －6，3 × 10 －6，2 × 10 －6，2 × 10 －6 and 20 × 10 －6，respectively. The content limit of the sum
of HAL and HAＲ was not lower than 5. 5% ． With the peak of HAL as reference peak，the variance of relative retention time of the four
common peaks，in the characteristic fingerprints of seeds of P. harmala，should be fluctuated in the range of 5% of the specified val-
ue. The qualitative and quantitative method established was suitable for the quality evaluation and assessment of seeds of P. harmala.
KEY WOＲDS:Peganum harmala seed;harmaline;harmine;vasicine;HPLC;characteristic fingerprint;TLC-bioautograph;acetyl-
cholinesterase inhibitor;quality standard
骆驼蓬子为骆驼蓬属(Peganum)植物骆驼蓬
(Peganum harmala Linn)的干燥成熟种子，收载于
中华人民共和国药品标准维吾尔药分册(1999 版)
中，具有坚固经脉、助阳暖阴和消散寒湿之气的作
用［1］。骆驼蓬种子中的化学成分主要为 β-咔啉类
和喹唑啉类生物碱类成分，如去氢骆驼蓬碱
(harmine，HAＲ)、骆驼蓬碱(harmaline，HAL)、鸭嘴
花碱(vasicine，VAS)等 29 种生物碱［2］。现代药理
学表明，HAL、HAＲ 具有抗菌、消炎、止痒、抗原虫及
中枢神经系统、心血管系统和对肌肉离子通道及抑
制单胺氧化酶和乙酰胆碱酯酶活性等多方面药理
作用［2］。
在骆驼蓬药材标准中仅有性状及显微特征描
述［1］。近年来课题组围绕骆驼蓬子的品质评价开
展了一系列相关研究，如在 TLC-生物自显影技术指
导下，从骆驼蓬属植物骆驼蒿种子中发现了包括
HAＲ、HAL和 VAS在内的一系列活性生物碱，并建
立了 TLC指纹图谱用于 4 种骆驼蓬属植物种子的
鉴别研究［3-4］;采用 HPLC-UV 对新疆不同产地骆驼
蓬不同药用部位中生物碱的含量及动态累积规律进
行了测定和研究［5-6］;建立了骆驼蓬子中 HAＲ 和
HAL 的 HPLC-FD 分析方法［7］;Cheng 等［8］建立了
HPLC-UV指纹图谱分析方法，并结合聚类分析、主
成分分析及判别分析成功地对 4 种骆驼蓬属植物种
子进行鉴别分析;在骆驼蓬属植物形态和种皮纹饰
电镜观察的基础上，采用基于叶绿体 trnL-F 和 ps-
bA-trnH基因片段对骆驼蓬属植物进行了分子标记
研究，首次采用分子生物学技术-分子标记技术对骆
驼蓬属植物进行了鉴别分析［9］。同时，对骆驼蓬草
的质量标准进行了研究与标准制定［10］。以上研究
工作为骆驼蓬子的质量标准研究与制定奠定了良好
的基础。
虽然文献［11］曾对骆驼蓬子的定性检定进行
研究，但尚不全面。作为 2010 年版药典标准提高项
目研究任务之一，本实验在前期研究基础上，对维药
骆驼蓬子药材进行系统研究，制定了比较完善的质
量标准。
1 仪器与材料
1. 1 仪器
Agilent 1100 高效液相色谱仪(四元泵、在线真
空脱气机、自动进样器、柱恒温箱、DAD 检测器和
Agilent 化学工作站，美国 Agilent Technologies) ;
Linomat-Ⅵ薄层色谱自动点样器(瑞士 CAMAG 公
司) ;Ｒeprostar 3 薄层色谱摄像仪(瑞士 CAMAG 公
司) ;BT － 124S 电子分析天平(Sartorius 公司) ;
KQ －250DB数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有
限公司) ;Agilent 7500ce 电感耦合等离子体质谱仪
(美国 Agilent Technologies公司)。
1. 2 药材与试剂
VAS、HAL、HAＲ对照品由上海中药标准化研究
中心提供(HPLC 面积归一化法计算其纯度大于
98%) ;11 批骆驼蓬子药材均采自新疆，由上海中医
药大学王长虹研究员鉴定为骆驼蓬(P. harmala
L. )的干燥成熟种子，凭证标本存放于上海中药标
准化研究中心，样品信息见表 1。硅胶预制板(烟台
化学工业研究所 HSGF254 200 × 100，批号 110408)。乙
腈和冰醋酸为色谱纯，甲醇和醋酸铵等试剂为分析
纯，水为超纯水。牛血清蛋白(Ｒoclu 公司) ，乙酰
胆碱酯酶(Sigma 公司，St. Louis，MO，USA;prod-
uct no. C 3389) ，α-乙酸萘酯(Sigma 公司) ，Fast
Blue B Salt (Sigma公司)。
2 方法与结果
2. 1 显微鉴别
横切面:外种皮的表皮细胞 1 层为巨细胞层，黄
棕色，切线向延长，细胞壁较厚，可见内壁有小刺突
起，外被角质层，下皮薄壁细胞为 3 ～ 4 列，类圆形、
多角形或不规则形，一端可见维管束 1 个，内层为 1
列栅状细胞，黄棕色，内种皮细胞 1 层，黄棕色，可见
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导管，外胚乳细胞颓废，1-2 列，不含色素。内胚乳
为 5 ～ 6 层细胞，子叶细胞径向延长，内侧细胞底多
角形、类圆形。胚乳细胞和子叶细胞含众多脂肪酸
油滴和糊粉粒。见图 1。
粉末:黄棕色，巨细胞黄棕色，长 170 ～ 270 nm，宽
130 ～170 nm。胚乳细胞多角形，内含众多油滴。内种
皮细胞长方形或多角形，细胞壁不均匀增厚。见图 1。
2. 2 检查
2. 2. 1 水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物的测定
参照《中国药典》2010 年版一部附录方法对骆驼
蓬子药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物进
行测定，结果见表 1。根据测定结果，确定水分不得
过 9. 0%，总灰分和酸不溶性灰分别为不得过 8. 0%
和 1. 0%，50%乙醇浸出物不得少于 22. 0%。
2. 2. 2 重金属 采用电感耦合等离子体质谱法，参
照《中国药典》2010 年版一部(附录Ⅸ B)铅、镉、砷、
汞、铜测定法中第二法的方法进行测定。结果见表
1。根据测定结果并参考《中国药典》2010 年版一部
中相关品种项下重金属及有害元素的限度，确定铅
不得过 5 × 10 －6，镉不得过 3 × 10 －6，砷 2 × 10 －6，汞
2 × 10 －6，铜不得过 20 × 10 －6。
2. 3 薄层色谱定性鉴别
2. 3. 1 对照品溶液的制备 取 VAS、HAL、HAＲ 对
照品适量，加甲醇分别制成每 1 mL 各含 1 mg 的溶
液，作为对照品溶液。
2. 3. 2 供试品溶液的制备 取本品粉末 1 g，加甲
醇 10 mL，超声 20 min，滤液蒸干，残渣加甲醇 2 mL
使溶解，滤过，作为供试品溶液。
2. 3. 3 点样、展开 吸取“2. 3. 1”和“2. 3. 2”对照
品和供试品溶液各 5 μL，分别点于同一硅胶 HS-
GF254薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-氨水(10 ∶ 1. 5 ∶
0. 5)为展开剂。
2. 3. 4 不同显色方法的比较 荧光观察与碘化铋
钾显色:将展开后的薄层板首先置紫外灯(254、365
nm)下检视，再喷以碘化铋钾试液，置 105 ℃加热至斑
点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位
置上，显相同颜色的斑点，分别见图 2A、2B和 2C。
乙酰胆碱酯酶生物自显影:以 α-乙酸萘酯为底
物与乙酰胆碱酯酶孵育，在酶的作用下发生水解反
应生成 α-萘酚，然后与 Fast Blue B Salt 进一步反
应，生成一种紫色的重氮类化合物而使薄层板显紫
色背景。当有乙酰胆碱酯酶抑制剂存在时，以上化
学反应将无法进行，紫色背景上出现白色斑点，说明
该化合物对乙酰胆碱酯酶有抑制作用［3-4，11］。
分别吸取“2. 3. 1”项下的对照品溶液 1 mL 和
“2. 3. 2”项下的供试品溶液各 1 mL置不同的 10 mL
量瓶中，加甲醇至刻度，作为对照品溶液和供试品溶
图 1 骆驼蓬子横切面图(A)和巨细胞(B)，内胚乳细胞
(C)，内种皮细胞(D)的粉末显微图
Fig. 1 Cross-section micrograph (A)and powder micrographs
of giant cells(B)，endosperm cells(C)，endotesta cells(C)for
seeds of P. harmala
表 1 骆驼蓬子药材信息、检查、重金属及含量测定结果
Tab. 1 Information，examination，and heavy metals content determination results for seeds of P. harmala
Sources
Collecting
time
Examination /% Content of heavy metals /mg·kg － 1 Content /%
Water Total ash Acid insoluble ash 50% ethanol extractives Cu As Cd Hg Pb HAL HAＲ
Changji，Xinjiang 2009. 08. 05 7. 10 5. 32 0. 35 26. 80 5. 766 ＜ 0. 043 ＜ 0. 031 ＜ 0. 010 0. 104 3. 066 3. 363
Changji，Xinjiang 2006. 08. 16 6. 83 5. 41 0. 37 28. 71 6. 522 ＜ 0. 043 ＜ 0. 031 ＜ 0. 010 0. 129 3. 164 3. 823
Changji，Xinjiang 2010. 08. 27 6. 38 6. 79 0. 44 29. 42 6. 241 ＜ 0. 043 ＜ 0. 031 ＜ 0. 010 0. 116 3. 766 3. 467
Yining，Xinjiang 2010. 08. 10 7. 10 6. 97 0. 45 31. 59 5. 138 ＜ 0. 043 ＜ 0. 031 ＜ 0. 010 0. 076 3. 195 3. 779
Urumqi，Xinjiang 2006. 08. 09 6. 37 6. 83 0. 51 31. 69 5. 917 ＜ 0. 043 ＜ 0. 031 0. 021 0. 057 3. 516 4. 070
Urumqi，Xinjiang 2010. 08. 26 6. 23 6. 80 0. 41 28. 91 8. 340 ＜ 0. 043 ＜ 0. 031 ＜ 0. 010 0. 096 2. 957 3. 241
Urumqi，Xinjiang 2009. 08. 10 6. 55 5. 42 0. 55 25. 16 5. 746 0. 117 ＜ 0. 031 ＜ 0. 010 0. 316 3. 318 3. 500
Urumqi，Xinjiang 2009. 07. 20 7. 34 5. 15 0. 74 23. 87 6. 125 0. 071 ＜ 0. 031 0. 03 0. 206 2. 667 3. 243
Kashgar，Xinjiang 2006. 07. 30 6. 61 7. 04 0. 89 29. 81 9. 314 0. 112 ＜ 0. 031 0. 075 0. 289 3. 500 4. 707
Atushi，Xinjiang 2006. 07. 30 6. 80 9. 50 2. 49 28. 78 9. 367 0. 243 ＜ 0. 031 ＜ 0. 010 0. 803 2. 871 3. 856
Fukang，Xinjiang 2007. 07. 24 6. 73 6. 45 0. 44 24. 46 6. 676 ＜ 0. 043 ＜ 0. 031 0. 019 0. 176 3. 553 4. 251
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液。吸取上述溶液各 1 μL，分别点于同一硅胶 HS-
GF254薄层板上，同“2. 3. 3”项下方法展开，挥干溶剂
后在 0. 05 moL·L －1的 Tris-HCl 酶缓冲液中浸板，
取出，于 37 ℃水浴蒸汽中温孵 20 min，再在 α-乙酸
萘酯与 Fast Blue B Salt的混合溶液中浸板，取出，检
视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，
显相同颜色的白色斑点，见图 2D。
从图 2 结果可以看出，4 种薄层显色方法相比
较，常规薄层色谱显色方法中，在 365 nm条件下，仅
HAL和 HAＲ 斑点清晰;在 254 nm 条件下，VAS 斑
点更加清晰;碘化铋钾试液显色后，生物碱斑点均能
明显显现;生物自显影薄层板中与其他显色方法的
点样量相差 50 倍，但经生物自显影后均清晰可见具
有乙酰胆碱酯酶抑制活性的斑点(图 1D) ，与图 1-C
比较，说明这些活性斑点主要为 3个生物碱(a，b，c)。
结果表明，薄层色谱-生物自显影法的灵敏度远高于常
规薄层色谱显色方法，且能反映化合物的活性，将鉴别
与活性筛选相结合，是一种有效的定性鉴别方法。
2. 4 HPLC含量测定
2. 4. 1 对照品溶液的制备 取 HAL、HAＲ 对照品
适量，精密称定，加甲醇溶解，分别制成每 1 mL 含
HAL 0. 993 4 mg、HAＲ 0. 863 0 mg 的溶液作为贮
备液。
2. 4. 2 供试品溶液的制备 取样品粗粉约 0. 4 g，
精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50 mL，
密塞，称定重量，超声处理(功率 250 W，频率 30
kHz)25 min，放冷，再用甲醇补足减失的重量，取 5
mL到 25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，0. 45
μm微孔淲膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
图 2 骆驼蓬子 TLC图
A －365 nm;B －254 nm;C －碘化铋钾试液;D －乙酰胆碱酯酶-生物自显影;
S1 －自上而下分别为去氢骆驼蓬碱(HAＲ) (a)与骆驼蓬碱(HAL) (b) ;S2 －
鸭嘴花碱(VAS) (c) ;1 ～ 11 －骆驼蓬子药材
Fig. 2 TLC chromatography for seeds of P. harmala
A －365 nm;B －254 nm;C － dragendorff reagent;D － acetyl cholinesterase -bioau-
tographic assay;S1 － From top to bottom are HAＲ(a)and HAL (b) ，respective-
ly;S2 － VAS(c) ;1 － 11 － seeds of Peganum harmala
2. 4. 3 色谱条件与系统适应性实验 以 Symmetrix
ODS-AQ(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)为色谱柱;以乙
腈-醋酸铵缓冲盐(19∶ 81)为流动相(醋酸铵缓冲盐
的配制:取醋酸铵 3. 4 g加水适量溶解，再加入冰醋
酸溶液 3 mL，加水至 500 mL，摇匀，即得) ;检测波
长为 330 nm;柱温为 30 ℃;流速为 1 mL·min －1，进
样量为 10 μL。对照品及供试品溶液的 HPLC 图谱
见图 3。
2. 4. 4 标准曲线的制备及线性范围 分别精密吸
取 HAL、HAＲ对照品储备溶液适量，依次用甲醇稀
释 HAL 质量浓度为 198. 68、99. 34、39. 74、19. 87、
1. 99 μg·mL －1，HAＲ 质量浓度为 345. 30、259. 00、
172. 60、86. 30、55. 40、34. 50、17. 30、1. 70、1. 00 μg·
mL －1的系列对照品溶液。分别进样 10 μL，注入
HPLC仪进行测定。以对照品溶液的进样质量浓度
(ρ)为横坐标，峰面积积分值(Y)为纵坐标，进行线
性回归得 HAL 标准曲线方程为 Y = 15. 277ρ －
4. 864 1，r = 1. 000 0;HAＲ 标准曲线方程为 Y =
40. 76ρ － 44. 759，r = 0. 999 9。结果表明，HAL 和
HAＲ 分别在 1. 99 ～ 198. 68 μg·mL －1及 1. 00 ～
345. 30 μg·mL －1内线性关系良好。
2. 4. 5 定量限 取对照品溶液，采用逐步稀释方
法，按“2. 4. 3”色谱条件测定，进样 10 μL，测得信噪
比为 10∶ 1 时，HAL定量限为 1. 99 μg·mL －1;HAＲ
定量限为 1. 00 μg·mL －1。
2. 4. 6 检测限 取对照品溶液，采用逐步稀释方
法，按“2. 4. 3”色谱条件测定，进样 10 μL，测得信噪
比为 3 ∶ 1 时，HAL 检测限为 1. 0 μg·mL －1;HAＲ
检测限为 0. 50 μg·mL －1。
2. 4. 7 精密度实验 分别取质量浓度为 99. 34
μg·mL －1的 HAL和 55. 4 μg·mL －1HAＲ的对照品
图 3 骆驼蓬子的 HPLC图
A －对照品;B －样品;1 － HAL;2 － HAＲ
Fig. 3 HPLC of seeds of P. harmala
A － references;B － samples;1 － HAL;2 － HAＲ
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溶液，分别在同 1 d重复进样 5 次及连续 5 d 进样，
每天 1 次，测定峰面积，计算，求得 HAL 日内、日间
的 ＲSD分别为 0. 38%和 1. 48%，HAＲ日内、日间的
ＲSD分别为 0. 91%和 0. 76%。结果表明，精密度
良好。
2. 4. 8 重复性实验 取本品，按“2. 4. 2”项下方法
平行制备 6 份供试品溶液，按“2. 4. 3”色谱条件进
行 HPLC分析，进样体积 10 μL，计算百分含量，测
得 HAL的平均含量为 3. 50%，ＲSD为 2. 82%;HAＲ
的平均含量为 4. 71%，ＲSD为 1. 24%。
2. 4. 9 稳定性实验 取本品按“2. 4. 1”项下方法
制备供试品溶液，分别在 0，4，8，12，24，48，96 h 进
样测定，结果表明，HAL和 HAＲ的峰面积的 ＲSD分
别为 1. 60%和 1. 27%，样品在 96 h内稳定。
2. 4. 10 耐用性实验 采用 Boston 公司的 Symme-
trix ODS-AQ (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱柱，当
柱温为 30 ℃时，分别在流速为 0. 8、1 和 1. 2 mL·
min －1采集色谱图(图 4A) ;当流速为 1 mL·min －1
时，分别在 20 、30 和 40 ℃时采集色谱图(图 4B)。
从图 5 可以看出，不同流速和柱温对 HAL 和 HAＲ
的分离度和对称性等均无影响，说明方法的耐用性
较好。
2. 4. 11 加样回收率实验 分别称取 HAL、HAＲ对
照品适量，精密称定，加甲醇分别制成含 HAL 为
1. 403 4 mg·mL －1、含 HAＲ为 1. 576 6 mg·mL －1的
贮备液。
取已准确进行含量测定的本品粉末约 0. 2 g，精
密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入 80%、100%、
120%不同浓度的 2 种对照品溶液，按“2. 4. 2”项下
操作，进样测定，计算，HAL平均回收率为 99. 69%，
ＲSD 为 1. 89%。HAＲ 的平均回收率为 100. 66%，
ＲSD为 1. 78%。结果见表 2。
2. 4. 12 样品测定 取本品 0. 4 g，精密称定，按
“2. 4. 2”项下进行制备，按“2. 4. 3”色谱条件进行
HPLC分析，进样体积 10 μL，计算百分含量，骆驼蓬
子药材含量测定结果(按干燥品计算)测定结果见
表 1。
2. 4. 13 含量限度的制定 骆驼蓬碱按干燥品计
算，11 批药材中 HAL 平均含量为 3. 234%，按下浮
20%计算为 2. 59%，HAＲ 按干燥品计算 11 批的平
均含量为 3. 76%，按下浮 20%计算为 3. 00%，暂定
HAL和 HAＲ的总和不得低于 5. 55%。
2. 5 骆驼蓬子 HPLC特征图谱的建立
参考前期对骆驼蓬(P. harmala Linn)、多裂骆
图 4 不同流速(A)和不同柱温(B)对骆驼蓬子样品中指标
成分 HAL(1)和 HAＲ(2)分离效果的影响色谱图
a － 0. 8 mL·min － 1;b － 1. 0 mL·min － 1;c － 1. 2 mL·min － 1;d － 20 ℃;
e － 30 ℃;f － 40 ℃
Fig. 4 HPLC chromatograms of HAL (1)and HAＲ (2)in
sample of seeds from P. harmala separated at different flow rats
(A)and at different temperatures (B)
a － 0. 8 mL·min － 1;b － 1. 0 mL·min － 1;c － 1. 2 mL·min － 1;d － 20 ℃;
e － 30 ℃;f － 40 ℃
驼蓬［P. multisectum (Maxim)Bobr］、骆驼蒿(P.
nigellastrum Bunge)及一个骆驼蓬变种(P. variety)
等 4 种骆驼蓬属植物种子 HPLC指纹图谱的研究结
果［8］，制定了骆驼蓬子药材的特征图谱。
2. 5. 1 色谱条件 以 Symmetrix ODS-AQ(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm)色谱柱;在 70 min 数据采集时间内，
流动相乙腈(A)从 4%线性变为 30%;流动相醋酸
铵缓冲盐(B)从 96%线性变为 70%进行梯度洗脱;
检测波长为 280 nm;柱温为 30 ℃;流速 为
0. 7 mL·min －1。
2. 5. 2 参照物溶液的制备 取 HAL 对照品适量，
加甲醇制成含 70 μg·min －1溶液，作为参照物
溶液。
2. 5. 3 供试品溶液的制备 取本品粗粉约 0. 4 g，
·011· Chin Pharm J，2014 January，Vol. 49 No. 2 中国药学杂志 2014 年 1 月第 49 卷第 2 期
表 2 HAL和 HAＲ的加样回收率测定 . n = 9
Tab. 2 Ｒecovery of HAL and HAＲ from sample. n = 9
HAL HAＲ
m(Background)
/mg
m(Added)
/mg
m(Found)
/mg
Ｒecovery
/%
Average
recovery /%
ＲSD
/%
m(Background)
/mg
m(Added)
/mg
m(Found)
/mg
Ｒecovery
/%
Average
recovery /%
ＲSD
/%
6. 432 3 5. 613 6 12. 093 0 100. 96 7. 624 6. 306 4 14. 132 103. 20
6. 428 2 5. 613 6 12. 093 100. 96 7. 619 6. 306 4 13. 880 99. 28
6. 413 2 5. 613 6 11. 889 97. 32 7. 602 6. 306 4 13. 841 98. 93
6. 424 4 7. 017 0 13. 604 102. 30 7. 615 7. 883 0 15. 733 102. 98
6. 429 2 7. 017 0 13. 452 100. 13 99. 74 1. 72 7. 620 7. 883 0 15. 504 101. 01 100. 77 1. 76
6. 423 1 7. 017 0 13. 378 99. 08 7. 613 7. 883 0 15. 419 99. 02
6. 386 1 8. 420 4 14. 560 96. 60 7. 569 9. 459 6 16. 958 99. 25
6. 416 1 8. 420 4 14. 747 98. 82 7. 605 9. 459 6 17. 123 100. 62
6. 441 9 8. 420 4 14. 934 101. 04 7. 636 9. 459 6 17. 343 102. 62
图 5 骆驼蓬子的 HPLC特征图谱
Fig. 5 HPLC characteristic fingerprint of seeds of P. harmala
精密称定，置 100 mL具塞锥形瓶中，精密加入体积
分数 20%甲醇 50 mL，超声 25 min，取出，放冷，滤
过，即得。
2. 5. 4 测定与结果 分别吸取参照物溶液和供试
品溶液各 10 μL，注入液相色谱仪，测定，记录 70
min的色谱图。采用国家药典委员会颁布的“中药
色谱指纹图谱相似度评价系统”(2004 版)软件，生
成对照特征指纹图谱(图 5) ，并确定了药材指纹图
谱中的 4 个峰为特征色谱峰。其中参照物峰相对应
的峰为 S 峰(峰 3，HAL)为参比，峰 2 为 VAS;峰 4
为 HAＲ。相对保留时间规定值为 0. 37(峰 1)、0. 41
(峰 2)、1. 00 峰 3(S)、1. 05(峰 4) ，其相对保留时间
偏差应在规定值的 ± 5%之内。
3 讨 论
3. 1 相比原标准比较，增加了检查、薄层鉴别、含
量测定和特征图谱等内容，检查项目包括水分、总灰
分、酸不溶性灰分、50% 乙醇浸出物、重金属等项
目［1］。与文献［11］相比，本实验内容中的检查项目
更全面。
3. 2 建立的薄层鉴别方法，经过耐用性实验表明，
不同类型的预制薄层板、展开温度和湿度对展开效
果的影响均较小，说明方法的耐用性较强。薄层板
展开后，即可分别直接在 254 和 366 nm紫外灯下检
视荧光斑点，方法简便，也可采用生物碱类成分的专
属性碘化铋钾试剂进行鉴别，但其灵敏度稍低。乙
酰胆碱酯酶-生物自显影的显色结果具有一定的专
属性，且灵敏度大大提高，并在发挥薄层色谱定性鉴
别作用的同时，也能反映出指标成分的药理活性，是
一种值得推广的生物鉴定法。
3. 3 骆驼蓬属植物主要含有生物碱类、黄酮类化合
物等成分［2］。骆驼蓬种子中以 β-咔啉类生物碱类
成分为主，以 HAL 和 HAＲ 为代表的生物碱类成分
含量较高，以 VAS 为代表的喹唑啉类成分含量较
低，且两类生物碱成分均具有较强的抗乙酰胆碱酯
酶活性［3-4］。针对骆驼蓬子提取物和制剂学的相关
研究也主要以这些生物碱类成分为指标［12-13］。因
此，选择 HAL和 HAＲ 为指标成分建立骆驼蓬子的
定量分析方法，以 VAS、HAL 和 HAＲ 为指标进行定
性鉴别。
3. 4 指纹图谱已成为国际公认的控制中药或天然
药物质量的最有效手段［14］。其中，高效液相指纹图
谱具有分离效能高、分析速度快、得到的化学信息丰
富等特点，并能结合化学计量学等方法对数据进行
综合分析，因此研究最为广泛［15］。我们前期建立的
HPLC 指纹图谱与聚类分析、主成分分析及判别分
析等化学计量学方法相结合，可以将骆驼蓬与其他
不同种的骆驼蓬属植物种子进行有效的区分和鉴
别［8］。本实验选择的 4 个特征峰与参照峰(S)的相
对保留时间比较稳定(ＲSD = 0. 29% ～ 1. 10%) ，因
此规定了相对保留时间分别为 0. 37(峰 1)、0. 41
(峰 2)、1. 00 峰 3(S)、1. 05(峰 4) ，其相对保留时间
偏差应在规定值的 ± 5%之内。
·111·
中国药学杂志 2014 年 1 月第 49 卷第 2 期 Chin Pharm J，2014 January，Vol. 49 No. 2
致谢:本实验中重金属含量的电感耦合等离子质谱法测定得
到上海食品药品检验所中药室季申主任和王欣美主管药师
的技术支持、显微鉴别得到上海中医药大学中药学院生药教
研室张红梅讲师的技术支持。
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(收稿日期:2013-03-06)
《中国药学杂志》2014 年征订启事
《中国药学杂志》是我国药学界创刊最早、发行量较大、反映我国药学各学科进展和动态的最具权威性和影响的综合性学
术核心期刊之一。读者群为高、中级药学工作者以及其他医药卫生人员。内容包括药学各学科，辟有院士笔谈、专家笔谈、综
述、论著(内容包括:重大新药创制、生物技术、中药及天然药物、药理、药剂、临床药学、药品质量及检验、药物化学)、药物与临
床、新药述评、药学史、药学人物、药事管理、学术讨论等栏目。
本刊曾被美国工程索引(Ei)收录;现被美国《化学文摘(网络版)》(CA)、荷兰《医学文摘》(EM)、美国《国际药学文摘》
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刊全文数据库(CJFD)、中国学术期刊综合评价数据库(CAJCED)统计刊源、《中国学术期刊文摘》、《中国生物文摘》和中国生
物学文献数据库及《中国生物医学文献数据库》收录;为中国科技核心期刊、中国科技论文统计源期刊、《中文核心期刊要目总
览》药学类核心期刊、中国科学引文数据库来源期刊及统计源、《中国科学引文数据库》来源期刊、中国生物医学核心期刊、中
国学术期刊文摘源期刊等;在 2011 年《中文核心期刊要目总览》中排药学类期刊第二名。
创刊 60 年来在医药卫生界享有很高声誉。连续三次荣获国家期刊奖，三次荣获中国科协优秀科技期刊一等奖，获“百种
杰出学术期刊”称号。获“2012 中国国际影响力优秀学术期刊”称号。“2012 年中国国际影响力优秀学术期刊”称号。连续 8
年获得中国科协精品期刊工程项目资助(2006 ～ 2013 年)。欢迎广大医药工作者积极订阅。
doi:10. 11669 /cpj. 2014. 02. 005
［本刊讯］
·211· Chin Pharm J，2014 January，Vol. 49 No. 2 中国药学杂志 2014 年 1 月第 49 卷第 2 期