全 文 ：收稿日期:2014-08-09; 修订日期:2014-12-16
基金项目:四川省科技支撑计划项目(No． 2013SZ0115)
作者简介:蒋运斌(1990-)，男(汉族)，四川遂宁人，成都中医药大学在读博士
研究生，从事中药品种、质量及资源开发工作．
* 通讯作者简介:马逾英(1958-)，女(汉族)，重庆人，成都中医药大学教授，博
士研究生导师，学士学位，主要从事中药品种、质量及资源开发工作．
野生山莨菪根的生物碱类成分分析
蒋运斌1，苟 琰2，马逾英1* ，周 娟2，伍丕娥2，张 敏1
(1．成都中医药大学药学院，
中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 611137;
2．四川省食品药品检验检测院，四川 成都 610079)
摘要:目的 测定野生山莨菪根中生物碱类成分的含量，探讨产地生态环境等因素对野生山莨菪根质量的影响。方法 采用
HPLC －DAD测定野生山莨菪根中樟柳碱、东莨菪碱和阿托品含量;紫外分光光度法测定野生山莨菪根中总生物碱含量。结果
18批野生山莨菪根中樟柳碱、东莨菪碱、阿托品和总生物碱的含量差异较大。结论 不同产地生态环境对山莨菪根的樟柳碱、东
莨菪碱、阿托品及总生物碱含量有影响，为野生山莨菪根的质量评价及资源利用提供了科学依据。
关键词:山莨菪根; 生物碱; 含量测定; HPLC －DAD; 紫外分光光度法
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 05． 087
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)05-1243-02
山莨菪 Anisodus tanguticus (Maxim．)Pascher为茄科山莨菪属植
物。四川的野生山莨菪资源极为丰富，主要分布在甘孜州和阿坝
州［1］，藏医以根和种子入药，其根的藏药名为“唐冲那保”、“唐冲纳
波”，已收入 2014年版《四川省藏药材标准》，其具有镇静镇惊、止痛
解痉、止咳平喘等功效。据报道，山莨菪根以生物碱为有效成分群，
其中樟柳碱、东莨菪碱和阿托品是生物碱中具有广泛药理活性和代
表性的化学成分［2 ～4］。山莨菪根除药用外，也是提取莨菪烷类生物
碱的重要资源植物［5］。
目前虽有一些关于山莨菪植物中的生物碱成分分析的报
道［6 ～10］，但野生山莨菪由于其产地生态环境的不同是否会造成生物
碱类成分含量的差异，从而影响到药材质量，相关研究鲜见报道。本
文采用 HPLC －DAD、紫外分光光度法，通过测定山莨菪根中樟柳碱、
东莨菪碱、阿托品及总生物碱含量，探讨产地生态环境等因素对山莨
菪根质量的影响，为其质量评价及资源利用提供科学依据。
1 仪器与材料
SHIMADZU LC －20AT高效液相色谱仪(日本岛津)，TU － 1901
双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)，
Milli － Q Advantage A10 (Millipore Crop．，MA，USA)超纯水机。
乙腈，四氢呋喃为色谱纯(Fisher)，其他试剂试药为分析纯。氢
溴酸樟柳碱对照品(批号:100399 －200601，含测时以 100%计)，氢溴
酸东莨菪碱对照品(批号:100049 －201009，含测时以 91． 7%计)，硫酸
阿托品对照品(批号:100399 －200601，含测时以 96． 5%计)均购于中
国药品生物制品检定所。
实验所用的 18批山莨菪根样品信息见表 1。
以上样品经成都中医药大学马逾英教授鉴定为茄科植物山莨
菪 Anisodus tanguticus (Maxim．)Pascher．。
2 方法与结果
2． 1 HPLC －DAD测定樟柳碱、东莨菪碱和阿托品含量
2． 1． 1 色谱条件 色谱柱为 Inertsil ODS － SP C18(5 μm ，4． 6 mm ×
250 mm)，流动相为乙腈 －30 mmol /L醋酸钠缓冲液(含 0． 02%三乙
胺、0． 3%四氢呋喃，用冰醋酸调节 pH 值至 6． 0)(9 ∶ 91)，流速
1 ml·min －1，进样量 2 ～10 μl，检测波长 210 nm，柱温:35 ℃，检测时
间:60 min。色谱图见图 1。
表1 18批野生山莨菪根样品信息
编号 产地 经纬度(N，E) 海拔/m
1 四川甘孜州德格县错阿乡 31°4848． 76″，99°2512． 84″ 3715
2 四川甘孜州德格县柯洛洞乡 31°5824． 29″，98°4059． 36″ 3600
3 四川甘孜州德格县马尼干戈乡 31°5539． 78″，99°127． 85″ 3867
4 四川甘孜州石渠县蒙宜乡 33°0117． 07″，98°0918． 10″ 4106
5 四川甘孜州石渠县蒙沙乡 33°0155． 02″，98°167． 93″ 4151
6 四川甘孜州白玉县安孜乡 31°0727． 37″，99°2153． 85″ 3899
7 四川甘孜州理塘县喇嘛垭乡 29°4952． 30″，99°4915． 05″ 3947
8 四川甘孜州理塘县章纳乡 29°4449． 30″，99°482． 41″ 3623
9 四川甘孜州理塘县村戈乡 29°5917． 19″，100°1316． 74″ 3959
10 四川甘孜州理塘县禾尼乡 30°1319． 10″，99°4921． 77″ 4181
11 四川甘孜州炉霍县新都镇 31°2337． 27″，100°4049． 06″ 3220
12 四川甘孜州炉霍县上罗柯马乡 31°3458． 40″，100°4516． 33″ 3620
13 四川甘孜州色达县旭日乡 31°5929． 78″，100°4049． 54″ 3473
14 四川甘孜州色达县霍西乡 32°0129． 42″，100°3051． 42″ 3655
15 四川甘孜州康定县塔公乡 30°199． 12″，101°3122． 83″ 3736
16 四川阿坝州阿坝县洛尔达乡 32°4923． 34″，101°5057． 51″ 3259
17 四川阿坝州若尔盖县唐克乡 33°2438． 00″，102°283． 44″ 3440
18 四川阿坝州红原县阿木乡 32°5457． 98″，102°3812． 14″ 3487
图1 对照品和样品的HPLC色谱图
2． 1． 2 对照品溶液的制备 取氢溴酸樟柳碱、氢溴酸东莨菪碱和硫
酸阿托品对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含 0． 8 mg (樟柳
碱)、0． 01 mg (东莨菪碱)、0． 08 mg(阿托品)的混合溶液，摇匀，即得
(樟柳碱重量 =氢溴酸樟柳碱重量 ×0． 7978;东莨菪碱重量 =氢溴酸
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 5 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 5 期
东莨菪碱重量 ×0． 7894;阿托品重量 =硫酸阿托品重量 ×0． 8551)。
2． 1． 3 供试品溶液的制备 取样品粉末(过 3号筛)2． 0 g，精密称定，
置具塞锥形瓶中，加入 4 ml氨水使湿润，精密加入三氯甲烷 100 ml，
密塞，称定重量，静置 1 h，加热回流 2 h，放冷，再称定重量，用三氯甲
烷补足减失的重量，摇匀，滤过;精密量取续滤液 50 ml，蒸干，残渣加
甲醇溶解并转移至 5 ml 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续
滤液，即得。
2． 1． 4 精密度试验 取“2． 1． 2”项下的混合对照品溶液，进样体积为
10 μl，连续进样 6次，按“2． 1． 1”项下色谱条件进行测定。计算樟柳
碱、东莨菪碱和阿托品峰面积的 ＲSD 分别为 0． 34%、1． 38%和
1． 68%。表明仪器精密度良好。
2． 1． 5 重复性试验 精密称取同一样品 6份，按“2． 1． 3”项下的方法
制备供试品溶液，进样体积为 10 μl，按“2． 1． 1”项下色谱条件进行测
定。计算樟柳碱、东莨菪碱和阿托品峰面积的 ＲSD分别为 0． 19%、
0． 43%和 0． 47%。表明方法重复性良好。
2． 1． 6 稳定性试验 取“2． 1． 2”项下的混合对照品溶液和按“2． 1． 3”
项下的方法制得供试品溶液，置室温下放置，分别在 0，2，4，8，16，24，
36 h进样 10 μl，按“2． 1． 1”项下色谱条件进行测定。结果表明对照
品在 36 h内其稳定性良好，樟柳碱、东莨菪碱和阿托品峰面积的
ＲSD分别为 1． 38%、1． 20%和 1． 75%;样品在 36h内其稳定性良好，
樟柳碱、东莨菪碱和阿托品峰面积的 ＲSD分别为 0． 24%、0． 56%和
0． 11%。
2． 1． 7 标准曲线的绘制 精密称取氢溴酸樟柳碱、氢溴酸东莨菪碱
和硫酸阿托品对照品适量，加甲醇分别制成樟柳碱 1． 7485，0． 6994，
0． 3497，0． 1748，0． 0699，0． 0350，0． 0175，0． 0070，0． 0035 mg·ml －1;东莨
菪碱 0． 4578，0． 2289，0． 1144，0． 0458，0． 0229，0． 0114，0． 0046，
0． 0023 mg·ml －1;阿托品 0． 7063，0． 3532，0． 1766，0． 0706，0． 0353，
0． 0177，0． 0071 mg·ml －1的溶液。进样体积为 10 μl，按“2． 1． 1”项下
色谱条件进行测定。以峰面积为纵坐标(Y)，对照品进样量(μg)为
横坐标(X)，绘制标准曲线，进行线性回归。樟柳碱、东莨菪碱和阿
托品的回归方程及线性范围见表 2。结果表明各对照品在进样量的
范围内与峰面积具有良好的线性关系。
表2 线性关系考察结果
成分 回归方程 Ｒ2 线性范围 /μg
樟柳碱 Y =614109 X +102284 0． 9995 0． 035 ～17． 485
东莨菪碱 Y =756449 X －8043 0． 9999 0． 023 ～4． 578
阿托品 Y =775803X +15728 0． 9999 0． 071 ～7． 063
n =6
2． 1． 8 加样回收率试验 取已知含量的样品(2号样品)1． 0 g，精密
称定，共 6份。分别加入樟柳碱、东莨菪碱和阿托品对照品适量，按
“2． 1． 3”项下的方法制备供试品溶液，按“2． 1． 1”项下色谱条件进行
测定。结果表明樟柳碱、东莨菪碱和阿托品的平均回收率分别为
95． 14%、91． 64%和 99． 07%，回收率实验的 ＲSD 分别为 1． 48%、1．
97%和 0． 94%。表明方法的回收率良好。
2． 1． 9 耐用性试验 此方法在不同品牌色谱柱和仪器考察结果表
明，樟柳碱、东莨菪碱和阿托品在仪器 SHIMADZU LC －20AT、Agilent
1200、Waters E2695和色谱柱 Inertsil ODS － SP C18(5 μm，4． 6 mm ×
250 mm)、AQ Welch C18(5 μm，4． 6 mm × 250 mm)、Kr C18(5 μm，4． 6
mm × 250 mm)上测得的含量的 ＲSD均小于 2%。表明方法的耐用
性良好。
2． 1． 10 检测限 三种物质的检测限(信噪比 3∶ 1)分别为 0． 022 μg，
0． 033 μg，0． 112 μg。
2． 1． 11 样品测定 分别精密吸取不同供试品溶液 2 ～10 μl，注入液
相色谱仪进行测定，采用外标一点法计算山莨菪根样品中樟柳碱、东
莨菪碱和阿托品的含量。结果见表 3。
2． 2 紫外分光光光度法测定总生物碱含量
2． 2． 1 对照品溶液的制备 取硫酸阿托品对照品适量，精密称定，加
水制成每毫升含 0． 65 mg的对照品溶液，即得。
2． 2． 2 供试品溶液的制备 取本品粉末(过三号筛)约 0． 1 g，精密称
定，置具塞锥形瓶中，加入 10 ml 30%乙醇，密塞，称定重量，回流处理
30 min，放冷，再称定重量，用 30%乙醇补足减失的重量，摇匀，离心，
取上清液 3 mL置蒸发皿中，蒸干，用 0． 036% HCl溶解残渣，转移至
10 ml量瓶中，定容，摇匀。取定容溶液 3 ml置预先精密加入三氯甲
烷 10 ml和0． 05%溴甲酚绿缓冲液1． 0 ml的分液漏斗中，剧烈振摇2
min，在 35 ℃下，放置 50 min，取三氯甲烷液，用干燥滤纸过滤，即得。
2． 2． 3 精密度试验 取同一对照品溶液 1． 0 ml，按“2． 2． 2”项下的方
法操作，连续测定 6次吸光度(A)值，计算 ＲSD为 0． 46%，表明仪器
精密度良好。
2． 2． 4 重复性试验 取同一供试品，按“2． 2． 2”项下方法平行制备 6
份供试品溶液，测定 6份供试品溶液的 A值，计算 ＲSD为 1． 08%，表
明此法重复性较好。
2． 2． 5 稳定性试验 取同一供试品，按“2． 2． 2”项下方法制得供试品
溶液，分别在 0，1，2，3，4和 5 h时测定 A值，5 h内 6次测定结果的
ＲSD为 1． 16%，表明供试品溶液在 5 h内具有良好的稳定性。
2． 2． 6 标准曲线的绘制 分别精密量取一定体积的“2． 2． 1”对照品
溶液稀释得到浓度分别为45． 69，65． 27，97． 91，117． 49，130． 55，150． 12，
163． 18 μg·ml －1的标准液，精密量取这 7种标准液 1． 0 ml置预先精
密加入三氯甲烷 10 ml和 0． 05%溴甲酚绿缓冲液 1． 0 ml的分液漏斗
中，剧烈振摇2 min，在35 ℃下，放置50 min，取三氯甲烷液，用干燥滤
纸过滤，在 419 nm波长下测定 A值。以对照品浓度(C，μg·ml －1)
为横坐标，以 A值为纵坐标，对 7个不同浓度的标准品进行线性回
归。回归曲线为:C =0． 0435A + 0． 0138 (Ｒ2 = 0． 9995)。可见此法在
4． 57 ～16． 32 μg·ml －1的范围内吸光度与硫酸阿托品浓度的线性良
好。
2． 2． 7 加样回收率试验 取已经测定总生物含碱量的样品 6份，每
份约 0． 05 g，精密称定，精密加入适量硫酸阿托品对照品。按“2． 2．
2”项下方法制备供试品溶液，测定 A 值，计算，结果平均回收率为
93． 79%，ＲSD为 0． 71%。表明方法的回收率良好。
2． 2． 8 样品的测定 按照“2． 2． 2”的方法制备供试品溶液，在 419 nm
下测定A值，依据标准曲线计算山莨菪根总生物碱的含量，测定的总
生物碱以阿托品计。结果见表 3。
从表 3可知，18批野生山莨菪根样品中樟柳碱、东莨菪碱和阿
托品的含量范围分别为 0． 052% ～ 0． 496%、0． 003% ～ 0． 378%、
0． 014% ～0． 743%，三种生物碱的最高含量分别是最低含量的 9． 5、
126和 53倍;总生物碱的含量范围为 1． 58% ～5． 16%，其最高含量是
最低含量的 3． 26倍。结果表明，18批野生山莨菪根样品中樟柳碱、
东莨菪碱、阿托品和总生物碱的含量差异较大。
3 讨论
本文在现有的研究基础上［6 ～12］，根据样品的性质，对 HPLC －
DAD测定樟柳碱、东莨菪碱、阿托品含量的方法中的关键因素(检测
波长、流动相、提取方法、提取溶剂、氨水加入量、提取溶剂量)进行了
考察;对紫外分光光度法测定总生物碱含量中的关键因素(检测波
长、提取方法、提取溶剂、溶剂浓度、提取时间、溶剂量、显色剂用量、
显色时间、显色温度)进行了考察。建立的方法简单快捷、可操作性
强，结果准确可靠。
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 5 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 5
表3 18批野生山莨菪根样品的含量测定结果
样品编号 樟柳碱 /% 东莨菪碱 /% 阿托品 /% 总生物碱 /% 样品编号 樟柳碱 /% 东莨菪碱 /% 阿托品 /% 总生物碱/%
1 0． 323 0． 003 0． 033 2． 02 10 0． 186 0． 078 0． 162 4． 73
2 0． 254 0． 019 0． 107 1． 58 11 0． 268 0． 116 0． 184 4． 74
3 0． 218 0． 043 0． 129 3． 98 12 0． 133 0． 145 0． 453 2． 70
4 0． 208 0． 037 0． 054 2． 17 13 0． 384 0． 030 0． 071 3． 66
5 0． 083 0． 033 0． 014 2． 09 14 0． 496 0． 068 0． 214 3． 63
6 0． 113 0． 024 0． 095 2． 01 15 0． 068 0． 080 0． 743 3． 86
7 0． 130 0． 071 0． 256 3． 58 16 0． 052 0． 042 0． 057 3． 90
8 0． 188 0． 077 0． 165 5． 16 17 0． 328 0． 092 0． 208 4． 76
9 0． 152 0． 079 0． 217 3． 03 18 0． 341 0． 378 0． 326 4． 41
n =3
通过对 18批野生山莨菪根样品的测定，结果表明，三种生物碱
和总生物碱含量差异较大。分析原因，可能与产地生态环境(如海拔
高度、光照、土壤因子和伴生植物等)及生长周期等因素有关。故应
加强野生药材生态因子、生长周期等与品质的相关性研究，以保障野
生药材质量的稳定可控，使用的安全有效。
参考文献:
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收稿日期:2014-08-11; 修订日期:2014-12-01
基金项目:河北省中医药管理局科研项目(No． 2014005);
河北省现代农业产业技术体系中药材创新团队建设任务
(No． 2014553962)
作者简介:宋军娜(1982-)，女(汉族)，河北石家庄人，河北中医学院讲师，硕士
学位，主要从事中药资源与中药鉴定研究工作．
* 通讯作者简介:郑玉光(1973-)，男(汉族)，河北石家庄人，河北中医学院教
授，硕士学位，主要从事中药材鉴定及活性成分研究工作．
安国道地药材祁白芷不同播种时间
和不同采收时间指标成分含量变化
宋军娜1，牛立云2，侯芳洁1，王晓娜3，郑玉光1*
(1．河北中医学院 药学院，河北 石家庄 050200; 2．河北医科大学 中医学院，河北 石家庄 050091;
3．河北中医学院 实验中心，河北 石家庄 050200)
摘要:目的 研究不同播种时间和不同采收时间的安国道地药材祁白芷药材质量差异，确定适宜种植生长周期和采收时间。方
法 采用高效液相色谱法对不同播种时间和不同采收时间的安国道地药材祁白芷的指标成分欧前胡素进行分析测定，并采用
SPSS法对其进行差异分析。结果 不同播种时间，不同采收时间，祁白芷指标成分含量有明显差异。采收标本前胡素质量分数
为 0． 00226% ～1． 18755%。秋天播种，次年秋天采收祁白芷欧前胡素含量为最高;春天播种，当年秋天采收祁白芷欧前胡素含量
最低。结论 秋天播种，次年秋天打籽之前采收，祁白芷药材欧前胡素含量最高，为最佳采收期。为祁白芷的全程质量监控和科
学合理采收利用提供了理论支撑。
关键词:祁白芷; 高效液相色谱法; 欧前胡素; 成分含量; 药材质量
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 05． 088
中图分类号:Ｒ284． 2;S567 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)05-1245-02
中药材白芷为伞形科植物白芷 Angelica dahurica(Fisch． ex
Hoffm)Benth． et Hook． f或杭白芷 Angelica dahurica(Fisch． ex． Hoffm)
Benth． et Hook． f． Var． formosana (Boiss)Shan et Yuan的干燥根。全
国商品白芷［1］主要有祁白芷、禹白芷、杭白芷、川白芷。祁白芷主产
于河北安国，味辛、性温，其具有散风除湿、通窍止痛、排脓消肿之功
效，主治感冒头痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻渊、牙痛、白带、疮疡肿痛等。
祁白芷所含香豆素类成分中欧前胡素［2］是其质量的标定检测成分，
也是白芷镇痛［3］的活性成分之一，有明显的解痉作用。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 5 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 5 期