全 文 ：作者简介:董林毅,男 ,博士研究生　　研究方向:应用化学　　＊通讯作者:侯媛媛 ,女 ,博士 ,讲师　　研究方向:复方药物分析及作用机制研
究　　Tel:(022)23506930　　E-mail:houyy@nankai.edu.cn
RP-HPLC同时测定华山参滴丸中 3种有效成分的含量
董林毅 1, 2b,张韻慧 1 ,李若洁 2a,侯媛媛 2b＊(1.天津大学药物科学与技术学院 ,天津 300072;2.南开大学 , a.生命科学学院;b.药学
院 ,天津 300071)
摘要:目的　建立反相高效液相色谱法同时测定华山参滴丸中 3种有效成分的含量。方法　采用 PhenomenexLunaC18色谱柱
(4.6mm×250 mm, 5 μm), 流动相为 20 mmol· L-1醋酸铵水溶液-甲醇(70∶30),流速为 1.0 mL· min-1 , 检测波长 215 nm, 进
样量 20 μL。结果　硫酸阿托品 、氢溴酸东莨菪碱和消旋山莨菪碱的线性范围分别为 1.444 ～ 28.88 μg(r=0.999 9), 0.891 ～
17.82 μg(r=0.999 9), 2.196 ～ 43.92 μg(r=0.999 9);平均回收率(n=6)分别为 101.82%(RSD =2.89%)、 100.17%
(RSD=2.49%)、98.68%(RSD=2.33%)。结论　所建立的 RP-HPLC方法简便 、准确 、快速 、重复性好 , 可用于华山参滴丸中
硫酸阿托品 、氢溴酸东莨菪碱和消旋山莨菪碱 3个有效成分的含量测定。
关键词:华山参滴丸;硫酸阿托品;氢溴酸东莨菪碱;消旋山莨菪碱;反相高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:R917　　　文献标志码:A　　　文章编号:1001-2494(2011)05-0385-03
DeterminationofThreeActiveComponentsinHuashanshenDrippingPilsbyRP-HPLC
DONGLin-yi1, 2b, ZHANGYun-hui1 , LIRuo-jie2a, HOUYuan-yuan2b＊(1.SchoolofPharmaceuticalScienceandTechnolo-
gy, TianjinUniversity, Tianjin300072, China;2.NankaiUniversity, a.ColegeofLifeSciences;b.ColegeofPharmaceuticalSciences,
Tianjin300071, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　TodevelopaRP-HPLCmethodfordeterminationofthreecomponents(atropinesulfate, scopolamine
hydrobromideandraceanisodamine)inHuashanshendrippingpills.METHODS　TheanalysiswasperformedonaPhenomenexLuna
C18 column(4.6 mm×250 mm, 5 μm)withthemixtureofmethanoland20 mmol· L-1ammoniumacetatebufersolution(30∶70)as
mobilephase, andtheflowratewas1.0 mL· min-1.Thedetectionwavelengthwas215nm.Thecolumntemperaturewasroomtem-
perature(25 ℃).RESULTS　Thecalibrationcurvesofatropinesulfate, scopolaminehydrobromideandraceanisodaminewerelinear
intherangesof1.444-28.88μg(r=0.999 9), 0.891-17.82 μg(r=0.999 9), 2.196 -43.92 μg(r=0.999 9), respectively.
Theaveragerecoveries(n=6)ofthethreecomponentsinsampleswere101.82%(RSD=2.89%), 100.17%(RSD=2.49%),
98.68%(RSD=2.33%), respectively.CONCLUSION　Thismethodwassimple, accurateandreliabletodeterminethecontentsof
atropinesulfate, scopolaminehydrobromideandraceanisodamineinHuashanshendrippingpilsforthequalitycontrol.
KEYWORDS:Huashanshendrippingpils;atropinesulfate;scopolaminehydrobromide;raceanisodamine;RP-HPLC;contentdeter-
mination
　　华山参滴丸是在原制剂 “华山参片 ”基础上改
进的新剂型 ,具有定喘 , 止咳 ,祛痰等功效 [ 1] ,主治
慢性支气管炎 ,喘息性气管炎 ,临床上取得了良好的
治疗效果 。其中含有的主要活性成分为阿托品 、山
莨菪碱 、东莨菪碱等托烷类生物碱。 《中国药典 》
(2010年版)一部收载有华山参 、华山参片 [ 2] ,含量
测定项均采用以硫酸阿托品为对照的紫外-可见分
光光度法 。华山参滴丸如采用同样方法 ,取样量较
大 ,且灵敏度较差。近年来 ,随着 HPLC的广泛应
用 ,用 HPLC测定华山参制剂含量的报道[ 3-6]日趋增
多 ,但山莨菪碱和东莨菪碱也是其中的主要有效成
分 ,因此宜采用简便 、准确的方法同时加以控制 。为
了提高检测速度及更好地控制华山参滴丸的质量 ,
本实验建立了一种 RP-HPLC用来同时测定华山参
滴丸中主要有效成分(阿托品 、山莨菪碱 、东莨菪
碱)的含量 ,本方法具有准确 、快速 、精密度高 、重现
性好等特点 ,为该制剂的质量控制提供了一种简单
可行的定量方法 。
1　仪器与试药
SHIMADZU高效液相色谱仪:LC-20AT泵 ,
SIL-20A自动进样器 , SPD-20A紫外可见光检测
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器 , LC-solution色谱工作站(日本岛津);Milipore
纯水仪 , MetlerAB104型电子分析天平(上海 Met-
ler-Toledo有限公司), KQ3200型超声波清洗机(昆
山市超声仪器有限公司), MIKRO220R高速离心机
(德国 Hetich-Zentrifugen有限公司)。
对照品:硫酸阿托品 (纯度 >99%, 批号
100040-200510)、氢溴酸东莨菪碱(纯度 >99%,批
号 100049-200308)、消旋山莨菪碱(纯度 >99%,批
号 100249-199501)均购于中国药品生物制品检定
所;甲醇为色谱纯 ,其余试剂均为分析纯 。华山参滴
丸(天津中新药业股份有限公司第六中药厂提供 ,
每丸重约 20mg)。
2　方法与结果
2.1　色谱条件与系统适用性实验
色谱柱:PhenomenexLunaC18 (4.6 mm×250
mm, 5 μm);流动相为 20mmol· L-1醋酸铵水溶液 -
甲醇(70∶30);流速:1.0 mL· min-1;检测波长:215
nm;柱温:室温(25 ℃);进样量:20 μL;理论塔板数
按硫酸阿托品峰计算应不低于 4 000。
2.2　溶液的制备
2.2.1　混合对照品溶液的制备　精密称取对照品
硫酸阿托品 、氢溴酸东莨菪碱 、消旋山莨菪碱适量 ,
加甲醇溶解 ,制成每 1 mL含硫酸阿托品 72.2 mg、
氢溴酸东莨菪碱 44.6 mg、消旋山莨菪碱 109.8 mg
的混合溶液 ,即得。
2.2.2　供试品溶液的制备　取本品 10丸 ,精密称
定 ,计算平均丸重 ,研磨成粉末 ,取约 0.1 g,精密称
定 ,置于 1.5 mL离心管中 ,精密加入甲醇溶液 0.5
mL,再加入 10 μL浓氨水(pH值调为 9.0),密塞 ,
称定质量 ,超声处理 30min(超声频率 40 kHz,功率
150 W),放置至室温 ,再称定质量 ,用甲醇补足失去
质量 ,摇匀 , 12 000 r· min-1离心 5 min后 ,取上清
液经 0.22μm过滤膜过滤 ,即得。
2.2.3　阴性样品溶液的制备　按处方工艺制备不
含华山参浸膏的辅料滴丸阴性样品 ,按 “ 2.2.2”项
下方法操作 ,即得。
2.3　专属性实验
分别精密吸取混合对照品溶液 、供试品溶液及
阴性样品溶液各 20 μL,按 “ 2.1”项下色谱条件 ,注
入液相色谱仪 ,记录色谱图。阴性样品在硫酸阿托
品 、氢溴酸东莨菪碱 、消旋山莨菪碱 (215 nm)出峰
处无干扰(图 1),表明处方中的其他成分对测定结
果无影响 。
图 1　混合对照品(A)、供试品(B)、阴性样品(C)的高效液
相色谱图
Fig.1　HPLCChromatogramsofreferencesubstances(A),
sample(B)andnegativesample(C)
2.4　线性关系考察
精密量取 “2.2.1”项下混合对照品溶液 0.01,
0.02, 0.04, 0.05, 0.08, 0.1 , 0.2mL,分别置 7个 10
mL量瓶中 ,加甲醇定容至刻度 ,制成系列浓度对照
品混合溶液 ,分别吸取 20 μL,按 “2.1”项下色谱条
件进样测定 。以进样量(μg)为横坐标 ,峰面积为纵
坐标绘制标准曲线。硫酸阿托品 、氢溴酸东莨菪碱 、
消旋山莨菪碱回归方程分别为:Y=308 253X-
3 894.7(r=0.999 9);Y=184 160X-467.48(r=
0.999 9);Y=565 386X+40 477(r=0.999 9)。结
果表明 ,硫酸阿托品进样量在 1.444 ～ 28.88 μg,氢
溴酸东莨菪碱进样量在 0.891 ～ 17.82μg,消旋山莨
菪碱进样量在 2.196 ～ 43.92μg内与峰面积呈良好
的线性关系 。
2.5　精密度实验
精密吸取混合对照品溶液 20 μL,重复进样 6
次 ,依法测定 ,计算硫酸阿托品 、氢溴酸东莨菪碱 、消
旋山莨菪碱的峰面积的相对标准偏差(RSD)分别为
2.06%, 1.52%, 1.97%。结果表明精密度良好 。
2.6　重复性实验
精密称取华山参滴丸粉末 0.1 g, 共 6份(批号
100214),按 “ 2.2.2”项下方法制备供试品溶液 ,依
“2.1”项下色谱条件进行测定 ,测得硫酸阿托品 、氢
溴酸东莨菪碱 、消旋山莨菪碱的含量平均值分别为
4.296, 1.985, 4.093 mg· g-1 , RSD分别为 1.86%,
1.64%, 2.40%。
2.7　稳定性实验
精密吸取同一份供试品溶液(批号 100214)20
μL,分别于 0, 2, 4, 6 , 8, 10 , 12, 24 h进样测定。结果
表明 ,供试品溶液在 24 h内基本稳定 ,硫酸阿托品 、
氢溴酸东莨菪碱 、消旋山莨菪碱的峰面积的 RSD
(n=8)分别为 2.58%, 2.32%, 2.28%。
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2.8　加样回收率实验
取已知含量的供试品(批号 100214)粉末约 0.1
g,共 6份 ,精密称定 ,每份样品分别精密加入对照品
溶液 5 μL(硫酸阿托品 0.361mg、氢溴酸东莨菪碱
0.223 mg和消旋山莨菪碱 0.549 mg),按 “2.2.2”项
下方法制备溶液 ,分别进样测定 ,结果见表 1。
2.9　样品含量测定
分别取华山参滴丸 3批样品 ,按 “ 2.2.2”项下
方法分别制备供试品溶液 ,按 “ 2.1”项下色谱条件
分别测定 ,用外标法计算含量 ,结果见表 2。
3　讨　论
3.1　测定方法的选择
经文献查阅 ,目前尚未见用高效液相色谱法同
时测定中药华山参及其制剂中阿托品 、东莨菪碱和
山莨菪碱这 3种主要有效成分的报道 ,并且所建立
的含量测定方法与药典收载的紫外分光光度法相比
较 ,具有准确 、快速 、样品用量少 、精密度高等优点;
与文献[ 7-9]所报道的同属植物及含有相关成分的制
剂含量测定方法相比较 ,具有样品处理方法简便 、重
现性好和切实可行等特点 ,因此此含量测定方法为
药品生产中质量控制提供了重要的参考依据 。
3.2　流动相的选择
消旋山莨菪碱为消旋体 ,它是左旋体和右旋体
的混合物 。本实验中通过控制流动相中甲醇的比
例 ,使得山莨菪碱左右消旋体能够完全分离 ,并且以
左右消旋体保留面积的总和计算消旋山莨菪碱的含
　　
表 1　华山参滴丸样品加样回收率结果 .mg·g-1 , n=6, x±s
Tab.1　Returns-ratioinHuashanshendrippingpills.mg·
g-1 , n=6, x±s
Compound Quantityinsample Addedquantity
Determined
quantity
Recovery
/%
Atropinesulfate 0.430±0.015 0.361±0.002 0.805±0.023 101.82±2.89
Scopolamine
hydrobromide
0.199±0.019 0.223±0.002 0.423±0.011 100.17±2.47
Raceanisodamine 0.409±0.024 0.549±0.002 0.945±0.022 98.68±2.33
表 2　华山参滴丸样品含量测定结果.mg· g-1 , n=6, x±s
Tab.2　Determinationresultsofatropinesulfate, scopolamine
hydrobromideandraceanisodamineinHuashanshendripping
pils.mg· g-1 , n=6, x±s
LotNo. Atropinesulfate Scopolaminehydrobromide Raceanisodamine
091223 4.312±0.018 1.817±0.020 4.031±0.017
100214 4.296±0.021 1.985±0.017 4.093±0.026
100107 4.193±0.028 1.907±0.024 4.095±0.028
量 。在实验过程中发现 ,随着甲醇比例的变化 ,在左
右消旋体色谱峰间有一个小的干扰杂质峰使分离不
太理想 ,最终在甲醇与醋酸铵水溶液比例在 30∶70
时 ,获得了较满意的分离 ,保留时间也在合适范围。
3.3　样品前处理方法的选择
在供试品溶液制备方法考察时 ,本实验对比了
用三氯甲烷[ 9] 、乙醚 [ 7] 、醋酸乙酯 、0.02 mmol· L-1
HCl水溶液[ 10]和甲醇等多种提取处理方法 ,其中三
氯甲烷 、乙醚 、醋酸乙酯萃取样品杂质峰较少 ,但提
取回收率较低 ,且平行实验误差较大 ,重现性不好;
用 0.02mmol· L-1 HCl水溶液提取的样品杂质峰
过大 ,严重影响了样品峰出峰的效果 ,尤其影响了山
莨菪碱左右消旋体的分离 ,对含量测定造成了困难 。
经过多次选择 ,用甲醇溶解 ,再经浓氨水调节 pH、超
声 、离心 ,取上清液过滤进样的效果最好 ,提取较完
全 。其中 pH值调为 9.0,超声提取时间为 30 min
提取效果最佳。
REFERENCES
[ 1 ] 　ZHANGQS, XUEL, XIECX.Clinicalobservationoncuring
bronchialasthmabythedrippingpillsofPhysochlainainfundibu-
larisKuang[ J] .TianjinPharm(天津药学), 2001, 13(3):61-
62.
[ 2 ] 　Ch.P2005.VolⅠ (中国药典 2005年版.一部)[ S] .2005:
94.
[ 3 ] 　LIUCX, HUYX, LINN, etal.Isolationofscopoletinfrom
PhysochlainainfundibularisKuangbyhigh-speedcounter-current
chromatography[ J] .ChemRes(化学研究), 2009, 20(2):
101-103.
[ 4 ] 　LISW, ZHAOYR, QINGWX, etal.Researchdevelopment
ofPhysochlainainfundibularisKuang[ J] .JJiyuanCollProf
Tech(济源职业技术学院学报), 2005, 4(2):8-10.
[ 5 ] 　LISW, QINGWX, WANGWL, etal.Analysisofessential
oilfromPhysochlaineinfundibularisKuangbyGC/MS[ J].J
HenanUniv(河南大学学报), 2005, 35(3):34-36.
[ 6 ] 　WANGY, QINGWX, LISW, etal.Determinationofscopole-
tininPhysochlaineinfundibularisKuangbyTLCS[ J] .Cent
SouthPharm(中南药学), 2005, 3(5):42-45.
[ 7 ] 　JINBF, YANGXJ, BISL.Analysisofthreeactiveconstitu-
entsinthepreparationsofBeladonnaandHyoscyanmusbyIon-
pairHPLC[ J] .ChinJPharmAnal(药物分析杂志), 1995, 15
(4):26-28.
[ 8 ] 　ZHANGN, GUOXH, ZHANGZZ.Determinationofthree
maincomponentsinBeladonnaTabletsbyRP-HPLC[ J] .JMed
Forum(医药论坛杂志), 2005, 26(19):21-23.
[ 9 ] 　WANGH, SHENJW, ZHANGXF.Researchontherelation-
shipofelevationandfouralkaloidscontentofAnisodustanguticus
[J] .JChinMatMed(中国中药杂志), 2002, 27(2):151-
152.
[ 10] 　LIXY, FENGZ, WUYH, etal.Determinationofscopolamine
intheChuanpingDrippingpilsbyRP-HPLC[J].LishizhenMed
MaterMedRes(时珍国医国药), 2009, 20(6):1377-1378.
(收稿日期:2010-05-07)
·387·中国药学杂志 2011年 3月第 46卷第 5期　　　　　　　　　　　　　　 ChinPharmJ, 2011 March, Vol.46No.5