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生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2014年第6期
脂肪酶，又称三酰甘油酯水解酶（Triacylglycerol
lipase，EC3.1.1.3），能有效地催化各种底物的酯解
反应。作为一种非水相酶，脂肪酶在各种有机体系
（无水体系或微水体系）中，还能高效催化醇解反应、
氨解反应及转酯反应等多种反应。作为一种重要的
工业生物催化剂，脂肪酶已被广泛应用于食品工业、
收稿日期 ： 2014-02-12
基金项目 ：国家自然科学基金项目（31370802），福建省科技厅重点项目（2013H0021），福建省自然科学基金杰青项目（2009J06013）
作者简介 ： 徐丽香，女，研究方向 ：酶工程 ；E-mail ：897787452@qq.com ；王作镇同为本文第一作者
通讯作者 ： 舒正玉，男，博士，副教授，研究方向 ：酶工程 ；E-mail ：shuzhengyu@gmail.com
黄建忠，男，博士，教授，研究方向 ：工业生物技术 ；E-mail ：hjz@fjnu.edu.cn
细菌脂肪酶在大肠杆菌细胞表面的功能性展示
徐丽香  王作镇  舒正玉  武海龙  刘艳如  李欣  黄建忠
（1. 福建师范大学工业微生物发酵技术国家地方联合工程研究中心，福州 350108 ；2. 福建师范大学教育部工业微生物工程中心，
福州 350108 ；3. 福建师范大学生命科学学院，福州 350108）
摘 要： 细胞表面展示技术已广泛应用于突变文库的高通量筛选，有力地促进了蛋白质工程的发展。以来自于铜绿假单胞菌
的自转运蛋白 Est A 的羧基端结构域作为锚定区，构建脂肪酶 LipA 与 EstA 羧基端结构域的融合基因，并将融合基因插入到改造后
的 pACYC-Duet 表达载体中，获得表面展示载体 pBCCB-X1。将载体 pBCCB-X1 分别导入到大肠杆菌 JK321 和大肠杆菌 UT5600 菌株中，
以 IPTG 诱导融合基因的表达。分别用三丁酸甘油酯定性检测和 pNPO 定量检测诱导表达后的全细胞脂肪酶的水解活性。试验结
果表明，脂肪酶 LipA 在大肠杆菌 JK321 和大肠杆菌 UT5600 细胞表面均得到功能性展示，水解活性分别为（2.8±0.1）U/OD 和
（2.6±0.06）U/OD。脂肪酶 LipA 在大肠杆菌细胞表面的功能性展示，为后续高通量筛选 LipA 突变基因文库，奠定了坚实的基础。
关键词 ： 大肠杆菌 细胞表面展示 脂肪酶 A 枯草芽胞杆菌
Display of Functionally Active Lipases on the Escherichia coli Cell
Surface
Xu Lixiang Wang Zuozhen Shu Zhengyu Wu Hailong Liu Yanru Li Xin Huang Jianzhong
（1. National & Local United Engineering Research Center of Industrial Microbiology and Fermentation Technology，Ministry of Education，
Fujian Normal University，Fuzhou 350108 ；2. Engineering Research Center of Industrial Microbiology，Ministry of Education，Fujian
Normal University，Fuzhou 350108 ；3. College of Life Sciences，Fujian Normal University，Fuzhou 350108）
Abstract:  Cell-surface display technology was used widely in the filed of high throughput screening of a mutant library, which promoted
the development of protein engineering. The carboxyl terminal domain of the EstA from Pseudomonas aeruginosa was used as carrier protein
and the lipA gene was fused to the estA’ gene by overlap extension PCR. The fusion gene lipA-estA’ was then inserted the genetically modified
plasmid pACYC-Duet, which promoter was changed into lacZ promoter. The resulting plasmid pBCMB-X1 was transformed into E. coli JK321
and E. coli UT5600, respectively. The lipA gene was induced expression by IPTG and the recombinant LipA was functionally displayed on the
cell surface of E. coli JK321 and E. coli.UT5600, respectively. The hydrolysis activity of the LipA was（2.8±0.1）U/OD and（2.6±0.06）U/
OD, respectively.
Key words:  Escherichia coli Cell surface display Lipase A Bacillus subtilis
去污剂、油脂深加工、手性药物合成等领域［1，2］。
在已知的各种脂肪酶资源中，来自于枯草芽胞
杆菌（Bacillus subtilis）的脂肪酶 LipA 具有独特的
结构特点和催化活性，已引起学界和业界的广泛关
注。该脂肪酶的 3D 结构不具有大多数微生物脂肪
酶结构所具有的盖子结构域（Lid domain），因此并
2014年第6期 193徐丽香等 ：细菌脂肪酶在大肠杆菌细胞表面的功能性展示
不表现出大多数脂肪酶所具有的界面激活（Interfacial
activation）的催化特性［3］；在其 3D 结构中，也没有
二硫键，因此耐受各类氧化剂的能力较其他脂肪酶
更高。近年来，尽管利用蛋白质工程技术改造枯草
芽胞杆菌脂肪酶 LipA 已获得巨大的成功［4］，但依
然存在许多技术性障碍。例如，如何建立枯草芽胞
杆菌的高效转化体系［5，6］，如何对突变基因文库实
现高通量筛选等问题，制约了对该脂肪酶的进一步
深入分子改造。
细胞表面展示技术（Cell surface display）是利
用运载蛋白，将靶蛋白展示在宿主细胞表面的蛋白
质技术。基于细胞表面展示技术发展出的荧光激
活 细 胞 分 选 法（Fluorescence-activated cell sorting，
FACS）等超高通量筛选技术，已成功应用于对酶分
子定向突变进化文库的筛选工作，并取得良好的效
果［7，8］。在已发展出的各种细胞表面展示系统中，
大肠杆菌（Escherichia coli）细胞表面展示系统，因
其遗传背景清晰，遗传操作简单，因此成为各种靶
蛋白展示的首选展示系统。到目前为止，来自于荧
光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）脂肪酶、芽
胞 杆 菌 属（Bacillus sp.） 脂 肪 酶、 南 极 假 丝 酵 母
（Candida antarctica）脂肪酶 B 等已在大肠杆菌细胞
表面实现功能性展示［9-11］。如何实现具有较大分子
量的酶分子的高效功能性展示及共展示不同酶分子，
获得具有多种催化活性的全细胞催化剂，从而将多
步催化反应偶联起来，是大肠杆菌细胞表面展示系
统研究的热点［12-14］。本研究以来自于铜绿假单胞菌
（Pseudomonas aeruginosa）的自转运蛋白 Est A 作为
运载蛋白，成功地将枯草芽胞杆菌脂肪酶 LipA 展示
到大肠杆菌细胞的表面，为后续利用蛋白质工程技
术改造在脂肪酶 LipA 奠定了基础。
1 材料与方法
1.1 材料
本试验中使用及构建的质粒及菌株见表 1。质
粒 pMD18-T simple、各种限制性内切酶、T4 DNA 连
接酶、DNA marker 及 LA Taq DNA 聚合酶等购自大
连 TaKaRa 宝生物公司 ；SanPrep 质粒小量抽提试剂
盒购自生工生物工程（上海）股份有限公司 ；琼脂
糖凝胶回收试剂盒购自天根生化科技（北京）有限
公司 ；各类抗生素购自鼎国昌盛生物技术有限责任
公司（福州），其使用浓度分别为 ：氨苄青霉素，40
μg/mL ；氯霉素，50 μg/mL ；三丁酸甘油酯购自国药
公司 ；对硝基苯酚辛酸酯（4-Nitrophenyl octanoate，
pNPO）购自 Sigma 公司 ；其他常规试剂均为市售分
表 1 本试验使用的菌株及质粒
菌株或质粒 特性 来源
E. coli UT5600 azi-6 fhuA23 lacY1 leu-6 mtl-1 proC14 purE42 rpsL109 thi-I trpE38 tsx-67 D（ompT-fepC） ［15］
E. coli JK321 UT5600 zih∷Tn10 dsbA∷kan 19 ［15］
E. coli DH5α fhuA2 lac（del）U169 phoA glnV44 Φ80 lacZ（del）M15 gyrA96 recA1 relA1 endA1 thi-1 hsdR17 Preserved in our own lab
P. aeruginosa AFU01 Wild-type strain，cloning of the estA gene from this strain Preserved in our own lab
B. subtilis YU01 Wild-type strain，cloning of the lipA gene from this strain Preserved in our own lab
pUC19 Ampicillin resistance，lacZ promoter，pMB1 replicon，2.7 kb Preserved in our own lab
pACYCDuet Chloramphenicol resistance，T7 promoter，P15A replicon，4.0 kb Preserved in our own lab
pMD18-T-lipA Ampicillin resistance，pMD18-T simple derivative harboring the lipA gene，3.3 kb This study
pBCMB-W1 Chloramphenicol resistance，pACYC-Duet derivative harboring the lacZ promoter，4.1 kb This study
pBCMB-X1 Chloramphenicol resistance，pBCCB-W1 derivative harboring the lipA-estA fusion gene，5.7 kb This study
析纯。
1.2 方法
1.2.1 细胞表面展示质粒 pBCMB-X1 的构建 用于
大肠杆菌细胞表面功能性展示枯草芽胞杆菌胞外脂
肪酶 LipA 的重组质粒 pBCMB-X1 的构建流程，如图
1。构建该重组质粒使用的引物、引物的 Tm 值及其
携带的限制性内切酶识别位点，见表 2。试验过程中，
PCR 扩增反应使用的引物、模板、PCR 扩增条件及
其扩增产物大小，见表 3。具体构建过程如下 ：以
质粒 pUC19 为模板，以 lacZ PF 和 lacZ PR 为引物对，
PCR 扩增 lacZ 的启动子。PCR 扩增条件及扩增产物
大小，见表 3。PCR 扩增产物和质粒 pACYCDuet 分
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2014年第6期194
别用限制性内切酶 Eco N Ⅰ和 Nco Ⅰ酶切。酶切产
物纯化后，用 T4DNA 连接酶连接 ；连接产物转化 E.
coli DH5α ；以氯霉素抗性平板筛选转化子，抽提并
酶切验证重组质粒 pBCMB-W1。验证后的重组质粒，
送交生工生物工程（上海）股份有限公司测序，进
一步验证该质粒的正确性。
pBCMB-W1
P15A
ori
MCS2
MCS1
lacZ promoter
lacZ੟ࣘᆀ
Eco NI Eco I
P15A
ori
pACYCDuet
MCS2
MCS1
T7promoter
lacZ
Operon
Promoter
oripMB1
pUC19
lipA
Hind IIIBamH I
Hind IIIBamH I
pBCMB-X1MCS2
estA˃
lipA-estA˃
estA˃
lipA
lipZ promoter
P15A
ori
CmR
CmR
CmR
AmpR
䬌㔯ٷঅ㜎㧼AFU01สഐ㓴DNAᷟ㥹㣭㜎ᵶ㧼YU01สഐ㓴DNA
图 1 细胞表面展示质粒 pBCMB-X1 构建流程图
表 2 本试验中使用的 PCR 引物
引物名称 引物序列（从 5 - 3） 熔点温度（℃） 限制性内切酶
lacZ PF ACTCCTGCATTAGGGTTGGCCGATTCATTAATGCAG 67.6 EcoN I
lacZ PR CATGCCATGGACATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTG 66.6 Nco I
lipA CF ATGAAATTTGTAAAAAGAAGGATC 52.1
lipA CR TTAATTCGTATTCTGGC 47.3
lipA EF CGGGATCCTATGAAATTTGTAAAAAGAAGGATC 62.0 BamH I
lipA ER CAGGCTAGCATTCGTATTCTGGCCCCC 68.1
estA EF AATGCTAGCCTGATCGCCGACTACACCTA 66.3
estA ER CGCAAGCTTTTAGAAGTCCAGGCTCAGC 66.4 Hind III
表 3 本试验 PCR 扩增条件及其产物
引物对 模板 退火温度（℃） PCR 产物名称 PCR 产物大小（bp）
lacZ PF / lacZ PR 质粒 pUC19 57.5 lacZP 211
lipA CF / lipA CR 枯草芽胞杆菌 YU01 菌株基因组 DNA 52 lipA 639
estA EF / estA ER 铜绿假单胞菌 AFU01 菌株基因组 DNA 52 estA 999
lipA EF / lipA ER 枯草芽胞杆菌 YU01 菌株基因组 DNA 52 lipA 653
lipA EF / estA ER PCR 扩增产物 lipA 和 estA 的混合物 53 lipA-estA 1640
2014年第6期 195徐丽香等 ：细菌脂肪酶在大肠杆菌细胞表面的功能性展示
以枯草芽胞杆菌的基因组为模板，以 lipA CF 和
lipA CR 为引物对，PCR 扩增 lipA 基因。PCR 扩增
条件及扩增产物大小，见表 3。PCR 扩增产物纯化
后，克隆到 pMD18-T Simple 中，转化 E. coli DH5α。
以氨苄青霉素筛选转化子，抽提并 PCR 验证重组质
粒 pMD18-T-lipA。验证后的重组质粒，送交生工生
物工程（上海）股份有限公司测序。
本课题组先前已克隆完整的铜绿假单胞菌自
转运蛋白 EstA 编码基因（NCBI 核酸数据库登录号
为 JN601114）。以铜绿假单胞菌 AFU01 菌株基因组
DNA 为模板，以 estA EF / estA ER 为引物对，PCR
扩增 estA 基因片段。PCR 扩增条件及扩增产物大小，
见表 3。
先以枯草芽胞杆菌的基因组为模板，以 lipA EF
和 lipA ER 为引物对，PCR 扩增 lipA 基因。PCR 扩
增条件及扩增产物大小，见表 3。纯化后的 PCR 扩
增产物 lipA 与 estA 片段按照一定的比例混合，并
以此混合物为模板，以 lipA EF / estA ER 为引物对，
PCR 扩增 lipA-estA 融合基因片段。PCR 扩增条件及
扩增产物大小，见表 3。
分 别 用 限 制 性 内 切 酶 BamH Ⅰ 和 Hind III 对
lipA-estA 融合基因片段及质粒 pBCMB-W1 进行酶
切。纯化后的酶切产物再按一定的比例混合，用 T4
DNA 连接酶连接。连接产物转化 E. coli DH5α。以
氯霉素抗性平板筛选转化子，抽提并酶切验证、
PCR 验证重组质粒 pBCMB-X1。验证后的重组质粒
pBCMB-X1 进一步送交生工生物工程（上海）股份
有限公司测序验证。
1.2.2 脂肪酶 lipA 的诱导表达 将测序验证正确的
重组质粒 pBCMB-X1 和 pBCMB-W1 分别转化到大肠
杆菌 E. coli JK321 和 E.coli UT5600 菌株中，氯霉素
抗性平板筛选转化子。37℃过夜培养，从平板上分
别挑取单菌落接种于含有 50 μg/mL 的氯霉素的 LB
液体培养基中，37℃ 220 r/min 振荡培养。当培养物
菌体密度 OD600 达到 0.6 时，向培养基中加入 IPTG
至终浓度为 1 mmol/L。30℃ 200 r/min 诱导 lipA 基因
表达。12 h 后 4 000 r/min 离心培养物，去掉上清，
收集菌体。菌体再用 20 mmol/L 的磷酸缓冲液（pH7.4）
洗涤 2 次，并重悬在相同的缓冲溶液中，4℃保存。
1.2.3 细胞表面展示脂肪酶酶活的定性与定量测
定 细胞表面展示脂肪酶酶活的平板定性检测方法
参照 Hiol 等［16］的平板检测方法并略作修改。用于
定性检测的 LB 固体培养基中同时添加有 1 mmol/L
IPTG，50 μg/mL 氯霉素和 3%（V/W）的三丁酸甘油
酯乳化液。分别将 4 种转化子 E. coli JK321-pBCMB-
X1、E. coli JK321-pBCMB-W1、E. coli UT5600-
pBCMB-W1、E. coli UT5600-pBCMB-X1 的单菌落点接
到定性检测平板上，37℃培养 2 d 后观察水解圈的
产生情况。
细胞表面展示脂肪酶酶活的定量测定采用比色
法，参照 Kordel 等［17］的检测方法，并略作修改。
首先分别测定材料与方法 1.2.2 部分收集的菌悬液
的 OD600 值。然后取 150 μL 菌悬液加入到 2 820 μL
20 mmol/L pH7.4 的磷酸缓冲液中，同时向反应体系
中加入 30 μL 2.5 mmol/L 的对硝基苯辛酸酯。37℃反
应 5 min 后，离心收集上清液，测定其 OD410 值。酶
活单位定义为 ：在该反应条件下，每分钟释放出 1
μmol 对硝基苯酚所需要的酶量（OD600）作为 1 个酶
活单位（U/OD600）。
2 结果
2.1 枯草芽胞杆菌脂肪酶基因的克隆与序列分析
从枯草芽胞杆菌 YU01 菌株克隆出的脂肪酶
lipA 基 因， 已 提 交 NCBI 核 酸 数 据 库， 登 录 号 为
JX048066。该基因全长为 639 bp，编码 212 个氨基
酸残基。与其他已得到功能验证或结构解析的枯草
芽 胞 杆 菌 脂 肪 酶 LipA（ 如 图 2 中 1I6W，2QXT 和
1T4M 等）具有高度的同源性。比对结果（图 2）表
明，Ser108、Asp164 和 His187 构成了 LipA 的催化三联体，
并且 Ser108 位于保守五肽（Ala-His-Ser-Met-Gly）中。
2.2 枯草芽胞杆菌脂肪酶表面展示载体的构建
构建完成后的细胞表面展示载体 pBCMB-X1 质
粒结构，如图 3-A。较初始质粒 pACYCDuet 而言，
pBCMB-X1 质粒的启动子变更为 lacZ 启动子，同时
在其多克隆位点 MCS1 处插入了 lipA 与 estA 的融合
基因。启动子调控区、靶蛋白、运载蛋白编码区测
序结果， 如图3-B。 测序结果表明， 编码区序列正确。
2.3 细胞表面展示脂肪酶酶活的测定
细胞表面展示脂肪酶定性检测结果，如图 4-A。
携 带 有 融 合 基 因 的 E. coli UT5600-pBCMB-X1（ 菌
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2014年第6期196
落 3）和 E. coli JK321-pBCMB-X1（菌落 4）较对照菌
株 E. coli UT5600-pBCMB-W1（菌落 1）和 E. coli JK-
321-pBCMB-W1（菌落 2）而言，菌落周围有明显
的水解圈，表明该菌株能产生具有活性的脂肪酶。
进一步利用对硝基苯酚辛酸酯作为底物进行定性
测 定 结 果 表 明，E. coli JK321-pBCMB-X1 和 E. coli
UT5600-pBCMB-X1 的酶活分别为（2.8±0.1）U/OD
和（2.6±0.06）U/OD。
210200190180170
90 100 110 120 130 140 150 160
8070605040302010
B. subtilisAFN11641
B. subtilisAFN22574
B. subtilis1I6W
B. subtilis2QXT
B. subtilis1T4M
B. subtilisAFN11641
B. subtilisAFN22574
B. subtilis1I6W
B. subtilis2QXT
B. subtilis1T4M
B. subtilisAFN11641
B. subtilisAFN22574
B. subtilis1I6W
B. subtilis2QXT
B. subtilis1T4M
标有三角形的氨基酸残基组成了 LipA 活性中心的催化三联体 ；标有圆圈的氨基酸残基为组成氧阴离子洞的氨基酸残基 ；
下划线的氨基酸残基为保守五肽，组成催化三联体之一的丝氨酸残基位于保守五肽中
图 2 枯草芽胞杆菌脂肪酶 LipA 的氨基酸序列与其他 LipA 的氨基酸序列比对
B 中 黑色加粗并有下划线（单线）的碱基分别为限制性内切酶 Eco N Ⅰ和 Nco Ⅰ识别的碱基，二者之间的碱基序列为置换的启动子序列 ；
黑色加粗并有下划线（双线）的碱基分别为限制性内切酶 BamH Ⅰ和 Hind III 识别的碱基，二者之间的碱基序列为 lipA 基因及 estA 基因
的融合基因，其中碱基序列有下划线（直线）的碱基为 LipA 编码区，而下划线（波浪线）的碱基为 EstA 编码区
图 3 细胞表面展示载体 pBCMB-X1 结构示意图（A）及其序列分析图（B）
lacZ promoter MCS1 T7 promoter MCS2 CmR P15A ori
Hind IIIBamH I
MKFVKR GGQNTN ASLIAD ALSLDF
EstA˃LipA
Eco NI Eco I
A
B
2014年第6期 197徐丽香等 ：细菌脂肪酶在大肠杆菌细胞表面的功能性展示
3 讨论
本研究通过改造低拷贝数质粒 pACYCDuet 成
功实现枯草芽胞杆菌脂肪酶 LipA 在大肠杆菌细胞表
面的功能性展示。在前期试验中，我们曾尝试利用
pHSG398 功能性展示 LipA，但试验未能成功，推测
pHSG398 为 pMB1 复制子，该质粒为高拷贝数质粒，
而外源靶蛋白的大量表达对受体菌的生长可能具有
一定的消极影响，从而导致表面展示试验的失败［18］。
在后续试验中，我们选用低拷贝数的 pACYCDuet 质
粒（复制子为 P15A）作为原始出发质粒，构建细胞
表面展示载体。然而，pACYCDuet 质粒使用 T7 启
动子，为强诱导型启动子，因此在展示靶蛋白 LipA
之前，先将 pACYCDuet 质粒第一个多克隆位点的启
动子置换为 lacZ 启动子。试验结果表明，通过降低
质粒拷贝数，启用弱启动子等途径降低靶蛋白的表
达量，从而实现靶蛋白功能性展示的工作是必要的。
运载蛋白也是影响靶蛋白功能性展示的一个重
要因子。本研究选用来自于铜绿假单胞菌的 EstA
蛋白的羧基端结构域作为锚定靶蛋白的运载蛋白。
EstA 是定位于细胞外膜并有部分结构域伸展到胞外
的自转运蛋白（Autotransporter），其羧基末端具有
12 个 β-折叠形成的 β-桶状结构，插入到细胞膜的外
膜，形成一个分泌通道［19，20］。基于 EstA 蛋白的羧
基端结构域作为锚定蛋白构建的细胞表面展示系统，
已有诸多成功报道［14，21，22］。本试验正是基于这些
成功实验结果，直接选用羧基端的 β1-β8 作为锚定
区，实现了 LipA 的高效功能性表面展示［21］。
受体菌是影响靶蛋白功能性展示的另一个重要
因子。本研究比较了 E. coli UT5600 和 E. coli JK321
对靶蛋白实现功能性表面展示的影响。试验结果表
明，上述两个受体菌展示的 LipA 的水解活性，未见
显著性差异。受体菌 E. coli UT5600 和 E. coli JK321
两者之间的唯一差异在于 ：在 E. coli JK321 菌株中，
影响蛋白质二硫键形成的 dsbA 基因因插入失活［15］。
而本试验被展示的靶蛋白 LipA 三级结构中，不存在
二硫键，推测这是两个受体菌水解活性没有显著性
差异的主要原因。
本 研 究 首 次 报 道 利 用 改 造 后 的 共 展 示 载 体
pACYCDuet，在其第一个多克隆位点（MCS1），插
入脂肪酶编码基因与自转运蛋白 EstA 羧基端编码区
的融合基因，成功实现脂肪酶 A 在大肠杆菌细胞表
面的功能性展示。为后续在载体的第 2 个多克隆位
点（MCS2）插入其他酶基因（如 Amidase，氨解酶）
并实现脂肪酶与氨解酶共展示，从而将酯解和氨解
两个过程偶联起来，提高手性铵对映体的拆分。
4 结论
本研究以 E. coli JK321 和 E. coli UT5600 作为受
体菌株，以自转运蛋白 Est A 的羧基端结构域作为锚
定区，利用脂肪酶 LipA 自身的信号肽介导融合蛋白
（脂肪酶与 Est A 羧基端融合）的分泌，成功地将枯
草芽胞杆菌的脂肪酶 LipA 功能性地展示到受体菌株
的表面。展示有脂肪酶 LipA 的全细胞 E. coli JK321
和 E. coli UT5600 对底物对硝基苯酚辛酸酯的水解活
性分别为（2.8±0.1）U/OD 和 （2.6±0.06）U/OD。
致谢 ：
感谢西班牙国家生物技术中心的 de Lorenzo Víc-
3.5
2.5
1.5
H
yd
ro
ly
si
s a
ct
iv
ity
U/O
D

0.5
0
1 2 3 4
Strains
1.0
2.0
3.0
A
1 2
43
B
（A）1 ：E. coli UT5600-pBCMB-W1 ；2 ：E. coli JK321-pBCMB-W1 ；
3 ：E. coli UT5600-pBCMB-X1 ；4 ：E. coli JK321-pBCMB-X1。（B）1 ：
E. coli JK321-pBCMB-X1 ；2 ：E. coli JK321-pBCMB-W1 ；3 ：E. coli
UT5600-pBCMB-X1 ；4 ：E. coli UT5600-pBCMB-W1
图 4 细胞表面展示脂肪酶酶活的定性分析（A）及定量
测定（B）
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2014年第6期198
tor 教授及 Fernández Luis Angel博士慷慨馈赠本试验
使用的 E. coli UT5600和 E. coli JK321菌株。
参 考 文 献
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（责任编辑 李楠）