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生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2013年第10期
根据世界卫生组织的评估，全世界大约每 7 对
夫妇中就有 1 对存在生殖障碍。我国不孕症患者大
约占已婚夫妇总数的 10%-12%。造成不孕不育的原
因有很多，而由于生殖系统或生殖发育问题导致的
不孕占其中很大一部分。探索生殖细胞发育的分子
基础，对于有效治疗不孕症、提高体外受精成功率
具有重要作用，同时也可以更好地理解人类胚胎发
育的早期机制。
目前对于人类生殖细胞及胚胎早期发育机制的
研究，主要基于小鼠模型。但是，小鼠和人类在早
期胚胎发育机理方面存在一些差异。例如，DAZ 家
族基因在男性生育中是必需的，却只出现在雄性灵
长类动物的 Y 染色体上［1-4］；女性需要两个 X 染色
体才能产生卵子，而小鼠只需要一个 X 染色体［5，6］。
由于小鼠和人类存在的这些差异，我们不能完
收稿日期 ： 2013-05-10
基金项目 ：清华大学自主科研计划（2010THZ03）
作者简介 ：胡旭林，男，硕士研究生，研究方向 ：发育生物学 ；E-mail ：huxulin@139.com
通讯作者 ：纪家葵，男，博士，教授，研究方向 ：发育生物学 ；E-mail ：kkee@mail.tsinghua.edu.cn
在人胚胎干细胞中高效表达 PELO 蛋白
胡旭林  纪家葵
（清华大学医学院干细胞与再生医学中心，北京 100084）
摘 要 ： 以 PELO 全长 cDNA 为模板，采用 TOPO 克隆的方法，将人的 PELO 基因克隆到 pENTR-D-TOPO 载体上，形成
pENTR-D-PELO 克隆载体。然后通过同源重组将含有 EF1α 启动子的 pENTR-5’-EF1α 和 pENTR-D-PELO 重组到表达载体 p2k7 上，
形成 EF1α-PELO-p2k7 表达载体。将构建好的 PELO 高表达载体在 293FT 细胞中制备成相应的慢病毒表达载体，并用慢病毒侵染人
胚胎干细胞，最终成功实现在人胚胎干细胞中稳定且高效地表达 PELO 蛋白。
关键词 ： PELO 高表达 胚胎干细胞 慢病毒 同源重组
The Overexpression of PELO in Human Embryonic Stem Cells
Hu Xulin Kee Kehkooi
（Center for Stem Cell Biology and Regenerative Medicine，School of Medicine，Tsinghua University，Beijing 100084）
Abstract:  Using full length human PELO cDNA as template, TOPO cloned PELO gene to pENTR-D-TOPO vector to form the pENTR-D-
PELO vector, then performed the MultiSite Gateway LR recombination reaction between pENTR-5’-EF1α and pENTR-D-PELO to get the EF1α-
PELO-p2k7 expression vector. PELO overexpression lentivirus was produced in 293FT cells and ransducing human embryonic stem cells to
overexpress PELO.
Key words:  PELO Overexpression Embryonic stem cells Lentivirus Homologus recombinant
全用小鼠模型代替人类。直接研究人类生殖细胞的
发育，取样又存在极大困难。建立一套体外分化为
人类原生殖细胞的系统可以在一定程度上解决这一
难题。Kee 等人［7，8］创建了一套定向分化人类胚胎
干细胞为原生殖细胞的系统，为进一步研究人类生
殖发育提供了新的平台。
研究表明，小鼠及人类 PGCs 的形成是由细胞
内在因子和外在因子共同决定的。生长激素 BMP4
是已知的刺激 hESCs 分化为 PGCs 的主要外在因子，
BMP 能直接抑制促分化基因的转录，从而维持生殖
干细胞的自我更新及抑制体细胞分化［9］；而内在因
子多为 RNA 结合蛋白或转录调控因子。
PELO 是一个 RNA 结合蛋白，其在进化上非常
保守，序列比对试验显示古细菌、酵母、果蝇及小
鼠的 PELO 与人 PELO 相比，同源性分别为 24%、
2013年第10期 171胡旭林等 ：在人胚胎干细胞中高效表达 PELO 蛋白
38%、74 和 95%。这些 PELO 都包含有一个保守的
核定位信号（PRKRK）以及一个位于 C 端的 eEF1α
类似结构域［9］。
PELO 广泛地在人体和小鼠各种组织中表达，
在胚胎发育过程中也具有高表达［10-12］。PELO 在生
殖细胞有丝分裂和减数分裂过程中起着重要作用。
PELO 敲除的小鼠胚胎只能发育到 E7.5，随后胚胎
发育停滞并导致死亡。在 PELO 基因敲除的囊胚中，
具有有丝分裂活性的内细胞团在体外培养 4 d 后会
死亡，但同时，无有丝分裂活性的滋养层细胞却能
存活，这表明胚胎致死是由于细胞发育进程受限导
致的［12］。
PELO 在精子发生和生殖干细胞的维持方面也
起着重要作用。在果蝇中，在 PELO 雄性突变体中，
精子发生的进程在 4 细胞有丝分裂时期发育正常，
但是在 16 细胞精母细胞阶段受到阻滞。在雄性果蝇
中，PELO 突变体是低温敏感、不孕且半致死的。在
PELO 突变体中，生殖干细胞会随着分化的进行而逐
渐减少，BMP 信号活性会下调，但是 BAM 的表达
依然受到抑制。在果蝇中，PELO 是 BMP 下游因子，
其通过抑制 Bam 非依赖的分化途径来调控生殖干细
胞的自我更新［13］。
基 于 Kee 创 建 的 体 外 分 化 系 统， 旨 在 研 究
PELO 在人胚胎干细胞定向分化为原生殖细胞过程中
所起的作用，首先需要构建 PELO 的高效表达载体。
本研究拟通过构建含有 EF1α 启动子的 PELO 高表达
质粒，将其制备相应的慢病毒表达载体，利用慢病
毒感染人胚胎干细胞，在人胚胎干细胞中高效表达
目的蛋白 PELO。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 载体，菌株和细胞 PELO cDNA 购买自 Or-
iGene。pENTR-D-TOPO 和 pENTR-5’-TOPO 载 体，
TOP10 和 Stbl3 感受态均购买自 Life technologies 公司。
表达载体 p2k7 为本实验室保藏。293FT 细胞购买自
协和，人胚胎干细胞来源自斯坦福大学。
1.1.2 主要酶和试剂 DNA 聚合酶购买自 Life tech-
nologies，各种限制性内切酶和连接酶购买自 NEB，
DNA 胶回收试剂盒，质粒提取试剂盒购买自 QIA-
GEN，RNA 反转录酶和 qPCR 试剂盒购买自 Bio-Rad。
细胞培养所需的各种培养基均购买自 Life technolo-
gies 公司。BCA 蛋白检测试剂盒购买自 Thermo 公司。
ECL 化学发光试剂购买自 Millipore 公司。
1.2 方法
1.2.1 PELO 过表达载体的构建 PELO 引物设计 ：
本试验中需要采用 Life technologies 公司 TOPO 直接
克隆技术，且要求所构建的质粒在哺乳动物细胞中
表达，所以需要在正向引物 5 端起始密码子 ATG
前加上一段 Kozak 翻译起始序列（CACC 序列）。本
试验中设计的正向引物为 ：5-CACCATGAAGCT CG-
TGAGGAAGAACATCGAGA-AG-3 ；反向引物为 ：5-
TTAATCCTCTTCAGAACTGGA ATCACCCTCTTG-3。
PELO 基因克隆 ：以从 OriGene 公司购买的质
粒 pCMV6-XL4-PELO 为模板进行 PCR。PCR 的反应
程序为 ：95℃ 5 min ；95℃ 30 s，60/65℃ 30 s，72℃
60 s（35 个循环）；72℃ 10 min。PCR 反应体系如表
1 所示。
表 1 PCR 反应体系
试剂 用量（μL）
ddH2O 39
10×PCR 缓冲液（无 Mg2+） 5
MgCl2（50 mmol/L） 1.5
Primer Mix（5 μmol/L） 2
pCMV6-XL4-PELO 模板（100 ng/μL） 1
dNTP Mix（50 mmol/L） 1
Platinum Taq DNA 聚合酶（5 U/μL） 0.5
总体积 50
TOPO 克隆反应 ：PCR 产物经 1% 的琼脂糖凝
胶电泳后，用 QIAGEN 公司 QIAquick 胶回收试剂盒
进行回收，操作流程按照试剂盒的说明手册进行。
回收后的 PCR 产物用 Thermo 公司的紫外分光光度
计 NanoDrop 进行浓度测定，经 TOPO 克隆反应后形
成 pENTR-D-PELO 质粒。
TOPO 克隆反应的体系为 ：ddH2O 3 μL，盐溶液
（1.2 mol/L NaCl，0.06 mol/L MgCl2）1 μL，新鲜 PCR
产物（25 ng/μL）1 μL，D-TOPO 载体（20 ng/μL）1
μL，总体积 6 μL。
转化大肠杆菌感受态 ：TOPO 克隆反应在室温
进行 10 min 后，将所有 6 μL 反应液加入冰上融化
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第10期172
的 TOP10 感受态细菌中，轻轻混匀，冰上放置 30
min，随后 42℃热激 45 s，迅速置于冰上。2 min 后，
向其中加入 250 μL S.O.C 培养基，37℃下 200 r/min
水平震荡培养 1 h。取适量培养后的菌液涂布含 100
μg/mL 卡那霉素的 LB 固体培养基，37℃过夜培养。
pENTR-D-PELO 质粒的验证 ：挑取阳性单克隆，
15 mL 离心管震荡培养后用 QIAGEN 公司 QIAprep
质粒小提试剂盒提取质粒。操作流程安装试剂盒的
说明手册进行。37℃下，采用 Asc I 和 Not I 双酶切 1
h，验证 TOPO 克隆反应是否成功。
双酶切反应的体系为 ：ddH2O 11.5 μL，NE Bu-
ffer 4 2.5 μL，pENTR-D-PELO 质粒（1 μg/μL）5 μL，
100×BSA 0.25 μL，Asc I（10 000 U/mL）0.5 μL，Not
I（20 000 U/mL）0.25 μL，总体积 20 μL。
待酶切反应后，酶切产物采用 1% 的琼脂糖凝
胶电泳检验其条带大小是否正确。选取条带大小正
确的质粒，送测序公司进行测序。
同源重组反应 ：测序验证正确后，进行同源重
组反应，将启动子 EF1α 和 PELO 基因共同重组到表
达载体 p2k7 上，形成 EF1α-PELO-p2k7 质粒。
同源重组的反应体系为 ：TE 缓冲液 5 μL，pEN-
TR-D-PELO 质 粒（62 ng/μL）1 μL，pENTR-5-EF1α
质粒（64 ng/μL）1 μL，p2k7（290 ng/μL）1 μL，LR
Clonase Plus enzyme 2 μL，总体积 10 μL。
转化大肠杆菌感受态 ：同源重组反应在 25℃进
行 16 h 后，加入 1 μL 蛋白酶 K，37℃温育 10 min，
终止同源重组反应。将所有 10 μL 反应液加入冰上
融化的 Stbl3 感受态细菌中，轻轻混匀，冰上放置
30 min，随后 42℃热激 45 s，迅速置于冰上。2 min
后，向其中加入 250 μL S.O.C 培养基，37℃下 200 r/min
水平震荡培养 1 h。取适量培养后的菌液涂布含 100
μg/mL 青霉素的 LB 固体培养基，37℃过夜培养。
EF1α-PELO-p2k7 质 粒 的 验 证 ：挑 取 阳 性 单
克 隆，15 mL 离 心 管 震 荡 培 养 后 用 QIAGEN 公 司
QIAprep 质粒小提试剂盒提取质粒。操作流程按照
试剂盒的说明手册进行。37℃下，采用 Not I 单酶切
1 h，验证同源重组反应是否成功。酶切反应的体系
为 ：ddH2O 12 μL，NE Buffer 4 2.5 μL，EF1α-PELO-
p2k7 质粒（1 μg/μL）5 μL，100× BSA 0.25 μL，Not I
（20 000 U/mL）0.25 μL，总体积 20 μL。待酶切反应后，
酶切产物采用 1% 的琼脂糖凝胶电泳检验其条带大
小是否正确。选取条带大小正确的质粒，送测序公
司进行测序。
1.2.2 细胞培养 293FT 保存于液氮中，培养时，
从液氮中取出，迅速在 37℃水浴中融化。用培养
基重悬后，于 6 孔板上培养。培养基配方为 ：90%
DMEM，10% FBS，0.1 mmol/L NEAA，6 mmol/L
Glutamax，1 mmol/L Sodium Pyruvate，1% Pen-Strep。
293FT 细胞每天换液，按 1∶3 比例进行传代。
培养干细胞之前，需要先准备滋养层细胞。孕
鼠见栓 13.5 d 后被解剖，取出胚胎。去除头和四肢
后，仅保留躯干的成纤维细胞。将躯干用小刀切碎
后用胰酶充分消化，直至成单细胞。将这些细胞培
养于 T75 培养瓶中。培养基配方为 ：90% DMEM，
10% FBS，0.1 mmol/L NEAA，6 mmol/L Glutamax，1%
Pen-Strep。这些培养的原代成纤维细胞经传代 3 次
后，用胰酶消化，收集细胞并计数。将细胞稀释至
合适浓度后，采用 70 G 的 X 射线进行辐照，使细
胞不再增殖。然后按每管 250 万细胞冻存于液氮中。
这些冻存的细胞将会作为培养干细胞的滋养层细胞。
将一管冻存的滋养层细胞解冻，铺于 6 孔板中，
培养 1 d 后即可接种人胚胎干细胞。本研究中使用
的胚胎干细胞系是 H9，为雌性细胞系。胚胎干细胞
的培养基为 ：80% Knockout DMEM，20% KSR，0.1
mmol/L NEAA，6 mmol/L Glutamax，1% Pen-Strep，
10 ng/mL hbFGF。培养干细胞时须每天换液，并每
天观察细胞形态。
1.2.3 慢病毒制备 当 PELO 高表达载体构建好后，
需要将其包装慢病毒。293FT 细胞培养于 T175 培养
瓶中，当细胞密度达到 80% 时可以进行转染。对于
每个转染，需要准备两种混合液。A 液 ：120 μL 脂
质体和 5 mL Opt-MEM 混合液 ；B 液 ：10 μg pVSVG
质粒，15 μg pCMV ∆R8.91 质粒和 10 μg PELO 高表
达质粒。A 液、B 液分别室温静置 5 min 后，将 A 液
和 B 液混合，涡旋混匀后，室温放置 30 min。随后
将 10 mL 的混合液轻轻加入含有 293FT 细胞的 T175
培养瓶中。37℃培养 6 h 后换液，随后再 37oC 培养
72 h，收获慢病毒。收获慢病毒时，需将含有慢病
毒的培养基用 0.45 μm 的滤膜进行过滤。收获的慢
病毒需要进行滴度测试，以确定慢病毒的感染效率。
2013年第10期 173胡旭林等 ：在人胚胎干细胞中高效表达 PELO 蛋白
滴度测试按照 Life technologies 公司的说明手册进行。
1.2.4 蛋白印迹试验 慢病毒制备好后，需要用慢
病毒感染胚胎干细胞 H9。H9 培养于 6 孔板上，当
密 度 达 到 80% 时 进 行 感 染 试 验。 每 孔 加 入 1 mL
PELO 慢病毒表达载体，感染 6 h 后换液，然后继续
培养 48 h 后提取细胞总蛋白。将细胞从 6 孔板中刮
下，用预冷的含有蛋白酶抑制剂的 RIPA 裂解液对
细胞进行裂解，用 4℃离心机高速离心，去除细胞
核和细胞器等。收集上清液，用 BCA 蛋白检测试剂
盒检测上清液中总蛋白的浓度。将各个样品的总蛋
白浓度调到一致，加入蛋白上样缓冲液，95℃煮 10
min。煮好的样品随后用来做蛋白印迹试验。
配制 10% 的分离胶和 5% 的浓缩胶，每孔上
样量为 30 μg 总蛋白。随后用 80V 电泳 30 min，接
着用 120 V 电泳 60 min。电泳完毕后，用 120 V 转
膜 60 min。转印后的 PVDF 膜用 5% 的脱脂牛奶封
闭 60 min，随后按 1∶1 000 加入一抗，室温孵育 60
min，用 PBST 洗膜 3 次，再 1∶1 000 加入相应二抗，
孵育 60 min 后再次洗膜 3 次。随后加入 ECL 化学发
光试剂，用凝胶成像系统进行拍照。
2 结果
2.1 PELO基因的克隆及酶切鉴定
以购买的 PELO cDNA 为模板，60℃或者 65℃
为 退 火 温 度 进 行 PCR。PCR 产 物 用 1% 的 琼 脂 糖
凝 胶 电 泳 进 行 检 测， 在 1 000 bp 与 1 500 bp 之 间
可见一条特异的条带（图 1），与预期的条带大小
（1 158 bp）一致。
感受态 TOP10 后涂布在含卡那霉素抗性的 LB 固体
培养基上，挑取 3 个单克隆，摇菌后小提质粒，进
行双酶切鉴定。3 个独立的样本中，在 2 000 bp 与
3 000 bp 之间均可见一条特异的条带，这与 pENTR-
D-TOPO 的大小（2 580 bp）一致 ；同时在 1 000 bp
与 1 500 bp 之间可见被酶切下来的 PELO（图 2）。
将样品 2 送去测序，将测序结果与 NCBI 中的 PELO
序列做比对，发现相似性为 100%（图 3）。PELO 基
5000
bp
M 1 2
3000
2000
1500
1000
M ：DNA Marker ；1 ：60℃为退火温度时的 PCR 产物条带 ；2 ：65℃为退火
温度时的 PCR 产物条带
图 1 PELO 基因的 PCR 产物琼脂糖凝胶电泳
用胶回收试剂盒回收琼脂糖凝胶上的 PCR 产
物， 然 后 与 克 隆 载 体 pENTR-D-TOPO 连 接， 转 化
5000
bp
M 1 2 3
3000
2000
1500
1000
M ：DNA Marker ；1，2，3 ：Asc I 和 Not I 双酶切后的产物条带
图 2 pENTR-D-PELO 质粒的双酶切鉴定
图 3 pENTR-D-PELO 质粒测序结果
因连入 pENTR-D-TOPO 成功。
将测序验证正确的 pENTR-D-PELO，pENTR-5-
EF1α 和表达载体 p2k7 进行同源重组，取适量反应
液转化感受态 Stbl3 后涂布在含青霉素抗性的 LB 固
体培养基上，挑取 2 个阳性单克隆，摇菌后小提质
粒，用 Not I 进行单酶切验证。两个独立的样本中，
在 5 000 bp 之上均可见一条特异的条带，这与 p2k7
空载体的大小（约 7 kb）一致 ；同时在 2 000 bp 与
3 000 bp 之间可见被酶切下来的 EF1α 和 PELO 的融
合基因（约 2.5 kb）（图 4）。将样品 1 送测序，测序
结果（图 5）显示启动子 EF1α 和 PELO 基因的大小
和位置均正确。EF1α-PELO-p2k7 表达载体构建成功。
2.2 慢病毒制备和滴度测试
由于胚胎干细胞体积非常小，用脂质体转染的
方法很难将表达载体转入，选择用慢病毒侵染的方
法来将 PELO 高表达载体转入胚胎干细胞。将目的载
体 EF1α-PELO-p2k7、pVSVG 和 pCMV ∆R8.91 三 种
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第10期174
质粒共转染 293FT 细胞，72 h 后收取含慢病毒的上
清液，用滤膜过滤后依次进行 10 倍稀释，选取 5 个
梯度（10-2、10-3、10-4、10-5、10-6）的慢病毒溶液
进行滴度测试。结果显示，对于 EF1α-PELO-p2k7，
其慢病毒的滴度为（11×106+24×105+63×104）/3=
4×106（图 6）。PELO 高表达载体慢病毒滴度在 106
以上，说明制备的慢病毒感染效率很高，可以用于
侵染胚胎干细胞。
2.3 PELO蛋白在H9中的高表达
H9 培养在含有滋养层细胞的六孔板中，其形
态表现为细胞体积较小，大量细胞紧密聚集在一起，
且与周围的滋养层细胞具有明显的分界线（图 7）。
在培养的 H9 中，PELO 有一定量的本底表达 ；当转
入 PELO 高表达载体后，PELO 的表达量明显上升（图
8）。与对照组相比，当用 PELO 慢病毒载体侵染人
胚胎干细胞 H9 后，PELO 蛋白的表达水平上升了 3
倍以上（图 9）。表明本研究构建的 PELO 慢病毒载
体能够显著地在 H9 中过表达 PELO 蛋白。
5000
bp
M 1 2
3000
2000
1500
1000
M ：DNA Marker ；1，2 ：Not I 酶切后的产物条带
图 4 EF1α-PELO-p2k7 表达载体的单酶切鉴定
上图 ：对 EF1α-PELO-p2k7 表达质粒中的 EF1α 启动子进行测序 ；
下图 ：对 EF1α-PELO-p2k7 表达质粒中的 PELO 基因进行测序
图 5 EF1α-PELO-p2k7 表达质粒测序结果
10-2 10-3 10-4
10-5 10-6 Mock
Mock ：阴性对照 ；10-2 和 10-3 ：因太满未计数 ；10-4 ：63 个克隆 ；10-5 ：24
个克隆 ；10-6 ：11 个克隆
图 6 慢病毒滴度测试
图 7 H9 生长形态
PELO
1 2
GAPDH
1：对照组，未转染任何质粒；2：H9 中转入 PELO 慢病毒表达载体；
GAPDH 作为内参
图 8 免疫印迹试验结果
4
3
2
1
0
NC Lentivirus
PE
LO
㳻ⲭ
⴨ሩ
㺘䗮
≤ᒣ
NC ：PELO 在 H9 中 的 内 源 表 达 水 平 ；Lentivirus ：当 H9 中 转 入
PELO 慢病毒表达载体后 PELO 的表达水平
图 9 PELO 蛋白表达水平变化
3 讨论
生殖细胞的发育是发育生物学中的重要课题。
2013年第10期 175胡旭林等 ：在人胚胎干细胞中高效表达 PELO 蛋白
随着体外分化系统的建立，我们已经可以在体外定
向将人胚胎干细胞分化为原生殖细胞甚至单倍体细
胞［8］。人胚胎干细胞的自我更新及分化需要内在因
子和外在因子共同作用。当前的研究发现，生长激
素 BMP 是刺激人胚胎干细胞分化为原生殖细胞的主
要外在因子，而内在因子主要为 RNA 结合蛋白和翻
译调控因子。
本研究采用 TOPO 克隆的方式，先构建含有
PELO 基因的进入载体 pENTR-D-PELO 和含有通用
启动子 EF1α 的进入载体 pENTR-5-EF1α。然后将
pENTR-D-PELO、pENTR-5-EF1α 和 载 体 p2k7 进 行
同源重组反应，最终形成目的表达载体 EF1α-PELO-
p2k7。然后将 PELO 高表达载体 EF1α-PELO-p2k7 与
pVSVG 质粒、pCMV∆R8.91 质粒共同转染 393FT 细
胞，制备成相应的慢病毒表达载体。将慢病毒表达
载体侵染人胚胎干细胞后，成功地实现了在胚胎干
细胞中高表达 PELO 蛋白。
我们已经构建了 PELO 的慢病毒表达载体，要
想进一步研究 PELO 在生殖发育过程的功能，需要
检查 PELO 在人体胚胎发育过程中表达的时间和位
置。为了确定 PELO 的表达时间，需要收集不同胚
胎发育时期的生殖器官的 cDNA 和蛋白，进行定量
PCR 和免疫印迹试验 ；为了确定 PELO 的表达位置，
需要对不同发育时期的生殖器官做组织切片，进行
免疫组织化学试验。当确认了 PELO 的表达时间和
位置后，还需要进行体外分化试验。如果 PELO 参
与了生殖细胞的发育，当在胚胎干细胞中过表达
PELO 时，可能会促进胚胎干细胞向生殖细胞方向的
分化（如生殖细胞形成的数量增多或者胚胎干细胞
向生殖细胞分化的进程加快）。
当 mRNA 的翻译在延伸过程中受到阻滞，此时，
核酸内切酶将识别并结合到阻滞的 mRNA 上，将其
切开，切开的 mRNA 随后会被降解，这一过程被称
为 mRNA 的 No-Go 降解途径［14］。当翻译过程中核
糖体的延伸受到稳定的 RNA 二级结构、稀有密码子
或者 mRNA 脱嘌呤作用的阻滞时，No-Go 降解途径
将会发生［14-17］。PELO 的同系物，DOM34，能特异
地与 HBS1 相互作用形成 DOM34 ：HBS1 复合物去
参与 mRNA No-Go 降解途径［18］。DOM34 ：HBS1 复
合物能够进入核糖体的 A 位点，促进核糖体大小亚
基的解离从而在 mRNA 茎环结构的 3 端将受到阻滞
的核糖体释放出来，同时，DOM34∶HBS1 复合物
对于 mRNA 的核酸内切酶降解也是必需的［17，19-21］。
在人体中，PELO 蛋白可能与另一种或另一些蛋白相
互作用，参与生殖细胞形成。为了验证我们的假说，
我们计划采用免疫共沉淀试验来研究若干个可能与
PELO 有相互作用的蛋白，对相关的分子机理做初步
的探讨。
4 结论
构建了 PELO 的高表达载体，并且将其制备相
应的慢病毒表达载体，进而侵染人胚胎干细胞，成
功实现了在胚胎干细胞中高效表达 PELO 蛋白的目
的，为下一步研究 PELO 的功能奠定了基础。
参 考 文 献
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（责任编辑 李楠）