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Ultrasonic extraction and determination of polysaccharides from Aralia chinensis L. root

中国楤木根皮多糖超声提取工艺及含量测定



全 文 :第 13卷第 2期
2015年 3月
生  物  加  工  过  程
Chinese Journal of Bioprocess Engineering
Vol􀆰 13 No􀆰 2
Mar􀆰 2015
doi:10􀆰 3969 / j􀆰 issn􀆰 1672-3678􀆰 2015􀆰 02􀆰 004
收稿日期:2014-10-08
基金项目:甘肃省自然科学基金(1208RJZA 126);兰州市科技局技术支撑项目(2013 4 89)
作者简介:侯宏红(1989—),女,甘肃天水人,硕士研究生,研究方向:植物化学;王一峰(联系人),教授,E⁃mail:wangyifeng6481@ aliyun.com
中国楤木根皮多糖超声提取工艺及含量测定
侯宏红,王一峰,赵  博,靳  洁,曹家豪,李筱姣
(西北师范大学 生命科学学院,甘肃 兰州 730070)
摘  要:为了筛选超声提取中国楤木根皮粗多糖的工艺,以中国楤木根皮多糖得率为衡量指标,采用水提醇沉法,
对中国楤木根皮粗多糖超声提取工艺中提取时间、提取温度、超声功率、料液比 4个因素用正交设计法进行优化研
究。 结果表明:中国楤木根皮粗多糖超声提取最佳工艺为温度 70 ℃,料液比 1 ∶ 30 (g / mL),提取时间 80 min,超声
功率 100 W,此工艺下多糖得率为 11􀆰 13%。 该方法提取的多糖测得稳定性、重现性均良好。 所得到的优化提取工
艺准确可靠,保证了中国楤木根皮多糖的有效提取。
关键词:超声提取;中国楤木;多糖;正交试验
中图分类号:R286        文献标志码:A        文章编号:1672-3678(2015)02-0019-00
Ultrasonic extraction and determination of polysaccharides from
Aralia chinensis L. root
HOU Honghong,WANG Yifeng,ZHAO Bo,JIN Jie,CAO Jiahao,LI Xiaojiao
(College of Life Sciences,Northwest Normal University,Lanzhou 730070,China)
Abstract:To optimize ultrasonic extraction of polysaccharides from the root of Aralia chinensis L.. The
polysaccharide yield of the root bark of A. chinensis was used to measure the extraction efficacy. Water
extraction was followed by alcohol precipitation. Four factors including time, temperature, ultrasonic
power and solid⁃liquid ratio were optimized by orthogonal design method. The yield of A. chinensis L. root
polysaccharides was 11􀆰 13% under the optimum extracting conditions: ratio of solid to liquid 1 ∶ 30
(g / mL),80 min,70 ℃,ultrasonic power 100 W. The polysaccharides extracted was stable. And the
method is accurate,reliable and reproducible. The developed extraction process under optimized condition
makes effective extraction of polysaccharide from the root bark of Aralia chinensis feasible.
Keywords:ultrasonic extraction;Aralia chinensis;polysaccharides;orthogonal experiment
    中国楤木(Aralia chinensis L.),五加科(Aralia)植
物,又名鹊不踏、虎阳刺、海桐皮、鸟不宿等[1],药食两
用,野生资源丰富,分布比较广泛,黄淮流域、东南及
西南地区都有发现[1]。 中国楤木具有悠久的药用和
食用历史,以根皮和茎皮入药,具祛风解毒、活血止
痛、补气安神的功效。 研究表明,植物多糖在调节免
疫、抑制肿瘤、降血糖、降血脂、抗病毒、抗衰老、抗氧
化作用等方面均有显著活性[2]。 楤木属植物可用于
治疗急慢性肝炎、糖尿病、风湿腰腿痛、跌打损伤、无
名肿毒、风湿性关节炎、胃炎等病症[3-5]。
近年来,楤木属植物的化学成分和药理活性研
究取得很大进展,其化学成分主要有:多糖类、皂苷
类、黄酮类、挥发油类、醌类、生物碱类、香豆素类
等[6],对其多糖提取工艺研究报道甚少。 宁德利
等[7]用紫外分光光度法对长白楤木根、茎、叶中多
糖的含量做了测定,测得三年生植株含糖量
9􀆰 09%。 刘艳等[8]测得四川楤木 3 批根皮、茎皮、
叶、嫩芽中多糖平均含量分别为 2􀆰 93%、1􀆰 90%、
0􀆰 41%和 2􀆰 01%;蔡静等[9]通过对飞天蜈蚣七(太
白楤木)多糖热水提取工艺路线系统研究,在最佳
条件下,多糖提取率为 3􀆰 16%。
笔者拟采用超声波水提醇沉法,建立正交试验模
型优 化 中 国 楤 木 根 皮 多 糖 ( Aralia chinensis
polysaccharide,ACP)提取工艺,筛选出 ACP 最优的提
取条件。 利用超声波所产生强烈的振动匀化效果及
空化作用将植物细胞壁打破,通过加强植物细胞内的
多糖分子传质作用,来加速多糖溶于溶剂中的速率,
预期缩短提取时间、降低提取温度,为更好地开发利
用中国楤木根皮多糖提供一定的理论依据。
1  材料与方法
1􀆰 1  材料与仪器
中国楤木根皮,采自甘肃徽县;60 g / mL 的苯酚
(AR,用 80%现配),天津市大茂化学试剂厂;无水
乙醇(AR),天津市福晨化学试剂厂;无水葡萄糖标
准品(AR),上海广诺化学科技有限公司;浓硫酸
(AR),兰州万科玻化仪器有限公司。
KQ 250DE型台式数控超声提取仪,昆山超声
仪器厂;JJ 1型增力电动搅拌器、JAR 6 型数显磁
力搅拌水浴锅,金坛市杰瑞尔电器有限公司;Allegra
64R型台式高速冷冻离心机,普瑞麦迪实验室技术
有限公司;WGL 230B 型电热鼓风干燥箱,天津市
泰斯特仪器有限公司;BS223S 型电子精密天平,北
京塞多利斯仪器系统有限公司;U 2000 型分光光
度计,优尼科仪器有限公司; RE 52AA 型旋转蒸
发仪,上海亚荣生化仪器厂;SHB Ⅲ型循环水式真
空泵,上海比朗仪器有限公司;LGJ 18S 型冷冻干
燥机,北京松源华兴科技发展有限公司。
1􀆰 2  实验方法
1􀆰 2􀆰 1  中国楤木根皮多糖的提取
水提醇沉多糖:将中国楤木根皮置于 40 ℃烘箱
中烘 24 h,在粉碎机中粉碎,称取 10􀆰 00 g(共 9份),
分别放于烧杯中并加入一定量的蒸馏水浸泡 1 h后
补入蒸馏水,在超声波中,用不同温度、不同功率、
不同时间提取 2次。 提取过程辅以机械搅拌,过滤,
将 2次滤液合并进行减压浓缩至一定体积,浓缩液
中加入无水乙醇,使乙醇体积分数达 80%,放置 24
h,4 000 r / min离心,将所得沉淀在冷冻干燥机中真
空冷冻干燥,即得中国楤木根皮粗多糖。
1􀆰 2􀆰 2  葡萄糖标准曲线绘制
精密称取无水葡萄糖标准品 0􀆰 020 g,用蒸馏水
溶解,定容至 250 mL 容量瓶中,摇匀,分别吸取
0􀆰 2、0􀆰 3、0􀆰 4、0􀆰 5、0􀆰 6、0􀆰 7、0􀆰 8和 0􀆰 9 mL于 10 mL
的带塞试管中,各以蒸馏水补至 1􀆰 0 mL,然后加入
0􀆰 5 mL苯酚(60 g / L)及 5􀆰 0 mL浓 H2SO4,混匀,在
80 ℃水浴中加热 30 min,然后置于冷水浴中冷却至
室温,以 1􀆰 0 mL 蒸馏水按同样显色操作做空白对
照,在 490 nm 处测吸光度[10-11],以吸光度 A490为纵
坐标,葡萄糖质量浓度 ρ 为横坐标,绘制标准曲线,
并做线性回归,得回归方程。
1􀆰 2􀆰 3  多糖含量的测定
精确称取干燥至恒质量的各种工艺制备的中
国楤木根皮粗多糖 25 mg,置于 250 mL 的容量瓶
中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度,摇匀,制得 0􀆰 1
mg / mL的多糖样品液,精密移取各样品液 1􀆰 0 mL,
按照 1􀆰 2􀆰 2项下的操作方法测定中国楤木根皮多糖
的吸光度,代入回归方程,计算多糖含量,并计算多
糖提取得率。 多糖提取得率计算见式(1)。
多糖得率 =多糖含量 /中国楤木根皮干质量×
100% (1)
1􀆰 2􀆰 4  正交设计表
根据单因素试验,影响中国楤木根皮超声水提
醇沉多糖提取率的主要因素有提取时间、提取温
度、超声功率、料液比等。 试验中不考虑因子间的
交互作用,以 L9(34)正交表进行试验设计,见表
1[12]。 并以粗多糖得率作为衡量提取效率的客观指
标,优选最佳提取工艺。
1􀆰 2􀆰 5  超声法提取多糖的稳定性试验和精密度
试验
用移液枪吸取质量浓度为 0􀆰 1 mg / mL 最优工
艺条件下提取所得的多糖样品溶液 1 mL,按照
1􀆰 2􀆰 2项下的操作方法,每 15 min测 1次吸光度,持
续 2 h,检验方法的稳定性;连续测 5次吸光度,检验
此方法的精密度。
2  结果与讨论
2􀆰 1  葡萄糖标准曲线的绘制
按照 1􀆰 2􀆰 2的操作,以葡萄糖标准溶液的质量
02 生  物  加  工  过  程    第 13卷 
浓度 ρ(μg∕mL)为横坐标,吸光度 A490为纵坐标,绘
制葡萄糖标准曲线,得回归方程为 A490 = 0􀆰 004ρ+
0􀆰 147,R2 = 0􀆰 989。 这表明在 16 ~ 72 μg / mL 浓度
范围内,葡萄糖标准曲线线性关系良好,可用于样
品液的测定。
2􀆰 2  单因素实验结果
2􀆰 2􀆰 1  料液比对多糖提取得率的影响
精确称取烘干粉碎后的中国楤木根皮各 10􀆰 00
g于烧杯中,加入蒸馏水,使料液比分别达1 ∶ 20、1 ∶
30、1 ∶ 40、1 ∶ 50 和 1 ∶ 60 g / mL,在超声功率为 100
W,温度为 80 ℃条件下按照 1􀆰 2􀆰 1的提取方法各浸
提 60 min,然后按照 1􀆰 2􀆰 2 项下标准曲线绘制的操
作方法,测其吸光度,并代入回归方程计算多糖得
率,结果见图 1。
图 1  料液比对中国楤木根皮多糖提取得率的影响
Fig􀆰 1  Effects of ratio of material on polysaccharide
yield of the root bark from Aralia chinensis
由图 1可知:随料液比的增加,中国楤木多糖得
率呈现先增加后减小的趋势。 料液比为 1 ∶ 40 g / mL
时,多糖得率达到最大值。 说明适量的水溶剂有利于
多糖的溶出,但溶剂过多或过少均不利于多糖的溶
出。 这是因为,料液比低时,多糖溶解不充分,得率较
低;随着料液比的增加,多糖充分溶胀,有利于多糖的
溶出,使得率增加,但是,料液比过大,加大了后续提
取过程中的浓缩困难程度,使浓缩时间增加,必然使
多糖在浓缩过程中有较多损失,反而使多糖得率下
降[13]。 因此,选 1 ∶ 40 g / mL为最佳料液比。
2􀆰 2􀆰 2  提取时间对多糖提取率的影响
精确称取烘干粉碎后的中国楤木根皮各 10􀆰 00 g
于烧杯中,加入蒸馏水,使各自料液比达 1 ∶ 40 g / mL,
在功率为 100 W、80 ℃条件下,按照 1􀆰 2􀆰 1 的提取方
法分别浸提 20、35、50、65和 80 min。 按照 1􀆰 2􀆰 2项下
标准曲线绘制的操作方法,测其吸光度,并代入回归
方程计算多糖得率,结果见图 2。
图 2  提取时间对中国楤木根皮多糖提取得率的影响
Fig􀆰 2  Effects of extraction times on polysaccharide yield
of the root bark from Aralia chinensis
由图 2可知:随着提取时间的增加,多糖得率也
在增加,在 20~35 min时,多糖得率增加缓慢,在 35~
65 min时,多糖得率增加显著,说明在此范围多糖溶
出较多。 但在 65~80 min时,多糖得率不再改变。 多
糖的溶出需要一定的时间,随着时间的增加,多糖的
溶出量也增加,当达到一个最佳时间后,多糖已完全
溶出,不再随时间的增加而增加。 因此,选最佳提取
时间为 65 min。
2􀆰 2􀆰 3  温度对多糖提取率的影响
精确称取烘干粉碎后的中国楤木根皮各 10􀆰 00
g于烧杯中,加入蒸馏水,使各自料液比达 1 ∶ 40
g / mL,在功率为 100 W,温度分别为 40、50、60、70和
80 ℃条件下按照 1􀆰 2􀆰 1 的提取方法各浸提 65 min。
按照 1􀆰 2􀆰 2项下标准曲线绘制的操作方法,测其吸
光度,并代入回归方程计算多糖得率,结果见图 3。
图 3  提取温度对中国楤木根皮多糖提取得率的影响
Fig􀆰 3  Effects of extraction temperature on polysaccharide
yield of the root bark from Aralia chinensis
由图 3 可知:多糖得率随着提取温度的增加而
增加。 在 50~70 ℃时,多糖得率增长明显;在 70 ~
80 ℃时,多糖得率基本保持不变;在 80~90 ℃时,多
糖得率稍有下降。 这是由于温度升高,分子运动加
强,有利于多糖溶出,但是温度过高可能对多糖的
12  第 2期 侯宏红等:中国楤木根皮多糖超声提取工艺及含量测定
结构有所损伤,导致多糖得率反而下降。 为了节省
能源和延长超声提取仪的使用寿命,所以选 70 ℃为
最佳提取温度。
2􀆰 2􀆰 4  功率对多糖提取率的影响
精确称取烘干粉碎后的中国楤木根皮各 10􀆰 00 g
于烧杯中,加入蒸馏水,使各自料液比达 1 ∶ 40 g / mL,
在温度为 70 ℃,功率分别为 60、70、80、90 和 100 W
条件下,按照 1􀆰 2􀆰 1的提取方法各浸提 65 min。 按照
1􀆰 2􀆰 2项下标准曲线绘制的操作方法,测其吸光度,并
代入回归方程计算多糖得率,结果见图 4。
图 4  超声功率对中国楤木根皮多糖提取得率的影响
Fig􀆰 4  Effects of ultrasonic power on polysaccharide
yield of the root bark from Aralia chinensis
由图 4可知:随着超声提取功率的增加,多糖得
率也在增加,在 60 ~ 90 W 增加较明显,90 ~ 100 W
增加较平缓。 考虑本实验所用超声提取仪最大功
率为 100 W,为了减少对超声提取仪的损耗,选 90
W为最佳提取超声功率。
2􀆰 3  正交试验结果与分析
以多糖提取率为响应值,以提取时间、提取温
度、超声功率、料液比这 4 个因素进行的 L9(34)正
交试验设计及结果见表 1,极差分析和方差分析见
表 2和表 3。
由表 2和表 3可知,在不考虑交互作用情况下,
各因素对提取率的影响顺序(从大到小)依次为提
取时间、提取温度、超声功率、料液比。 以多糖得率
为衡量指标,由表 1 分析可知:最优工艺组合为
A3B2C1D3,即提取时间为 80 min,提取温度为 70
℃,料液比为1 ∶ 30 g / mL,超声功率 100 W,在此条件
下,多糖得率为 11􀆰 194%。 由表 3方差分析可知:楤
木根皮多糖超声提取法的因素对结果均有一定影
响,时间和温度影响较大,具有显著差异性。
在最优工艺条件下做 3 次平行验证试验,取多
糖得率平均值,结果见表 4。
表 1  正交试验设计及结果
Table 1  The orthogonal experiment designs and results
试验号
因素
A提取
时间 / min
B提取
温度 / ℃
C料液比 /
(g·mL-1)
D超声
功率 / W
多糖
得率 / %
1 1(50) 1(55) 1(1 ∶ 30) 1(80) 8􀆰 979
2 1 2(70) 2(1 ∶ 40) 2(90) 9􀆰 712
3 1 3(85) 3(1 ∶ 50) 3(100) 9􀆰 760
4 2(65) 1 2 3 9􀆰 664
5 2 2 3 1 9􀆰 993
6 2 3 1 2 10􀆰 215
7 3(80) 1 3 2 10􀆰 616
8 3 2 1 3 11􀆰 194
9 3 3 2 1 10􀆰 810
表 2  极差分析
Table 2  The range analysis
误差源 A B C D
K1 9􀆰 484 9􀆰 753 10􀆰 129 9􀆰 927
K2 9􀆰 957 10􀆰 300 10􀆰 062 10􀆰 181
K3 10􀆰 873 10􀆰 262 10􀆰 123 10􀆰 206
R(极值) 1􀆰 389 0􀆰 547 0􀆰 067 0􀆰 279
表 3  方差分析
Table 3  The variance analysis
因素 偏差平方和 自由度 F比 F比临界值 显著性
时间 2􀆰 995 2 39􀆰 669 6􀆰 940 ∗
温度 0􀆰 559 2 7􀆰 404 6􀆰 940 ∗
料液比 0􀆰 008 2 0􀆰 106 6􀆰 940
功率 0􀆰 143 2 1􀆰 894 6􀆰 940
误差 3􀆰 550 4
表 4  平行试验结果
Table 4  Results of parallel test
实验序号 1 2 3 平均值
多糖得率 / % 11􀆰 19 10􀆰 99 11􀆰 22 11􀆰 13
由表 4可知,在最优工艺条件下,多糖得率平均
值为 11􀆰 13%。
2􀆰 4  超声提取多糖的稳定性和精密度的测定
超声提取中国楤木根皮多糖的稳定性试验结
果如表 5所示,精密度测定如表 6所示。
22 生  物  加  工  过  程    第 13卷 
表 5  稳定性试验结果(n=6)
Table 5  Results of the stability test (n=6)
实验序号 1 2 3 4 5 6 平均值 标准偏差 / %
多糖得率 / % 11􀆰 468 11􀆰 512 11􀆰 435 11􀆰 396 11􀆰 163 11􀆰 163 11􀆰 440 1􀆰 433
表 6  精密度试验结果(n=5)
Table 6  Results of the precision test (n= 5)
实验序号 1 2 3 4 5 平均值 标准偏差 / %
多糖得率 / % 11􀆰 319 11􀆰 319 11􀆰 278 11􀆰 319 11􀆰 243 11􀆰 296 0􀆰 304
    由表 5 的标准偏差(RSD)为 1􀆰 433%(n = 6),
可以推断此方法的稳定性较好。
由表 6 的标准偏差(RSD)为 0􀆰 304%( n = 5),
可以确定此方法的精密度较高。
3  结论
以中国楤木根皮多糖得率为衡量指标,采用水
提醇沉法,在单因素试验的基础上,选择提取时间、
提取温度、超声功率、料液比为影响因素,用正交设
计法进行优化研究。 结果表明,超声法提取中国楤
木根皮多糖的最佳工艺为提取时间为 80 min,提取
温度为 70 ℃,料液比为 1 ∶ 30 ( g / mL),超声功率
100 W。 按最佳工艺提取中国楤木根皮多糖平均得
率为 11􀆰 13%,此工艺条件下,提取的中国楤木多糖
的稳定性、重现性均良好。 利用此方法提取多糖的
工艺简单,多糖得率较高,可为中国楤木资源的进
一步开发和利用提供一定的科学依据。
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(责任编辑  荀志金)
32  第 2期 侯宏红等:中国楤木根皮多糖超声提取工艺及含量测定