全 文 ：第 １１ 卷第 ４ 期
２０１３ 年 ７ 月
生　 物　 加　 工　 过　 程
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ． １１ Ｎｏ． ４
Ｊｕｌ． ２０１３
ｄｏｉ：１０． ３９６９ ／ ｊ． ｉｓｓｎ． １６７２ － ３６７８． ２０１３． ０４． ０１３
收稿日期：２０１２ － ０９ － １１
基金项目：广东省工业技术研究院生物工程研究所科技基金（Ｂ２０１３０１）
作者简介：周正雄（１９８６—），男，湖北公安人，助理工程师，研究方向：丝状真菌代谢工程改造及发酵过程优化；陈骏佳（联系人），教授，Ｅ⁃ｍａｉｌ：
ｇｚｃｓｉｒｃｊｊ＠ １６３． ｃｏｍ
微生物发酵法生产花生四烯酸油脂的研究进展
周正雄１，卢英华２，班　 甲１，陈骏佳１
（１． 广州甘蔗糖业研究所 广东省甘蔗改良与生物炼制重点实验室，广州 ５１０３１６；
２． 厦门大学 化学化工学院 化学工程与生物工程系， 厦门 ３６１００５）
摘　 要：花生四烯酸（ＡＲＡ）是一种重要的脂肪酸，现在主要由生物法生产，本文综述了高山被孢霉发酵生产花生四
烯酸油脂的菌落形态控制及其代谢途径，以期为相关的研究者提供参考。
关键词：花生四烯酸油脂；高山被孢霉；形态优化；限速步骤；苹果酸酶
中图分类号：ＴＳ２０１；Ｑ８１５　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２ － ３６７８（２０１３）０４ － ００７２ － ０７
Ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｏｉｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
ＺＨＯＵ Ｚｈｅｎｇｘｉｏｎｇ１，ＬＵ Ｙｉｎｇｈｕａ２， ＢＡＮ Ｊｉａ１，ＣＨＥＮ Ｊｕｎｊｉａ１
（１． Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｋｅｙ Ｌａｂ ｏｆ Ｓｕｇａｒｃａｎｅ Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ａｎｄ Ｂｉｏｒｅｆｉｎｅｒｙ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｓｕｇａｒｃａｎｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，
Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０３１６， Ｃｈｉｎａ； ２． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，
Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｘｉａｍｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｘｉａｍｅｎ ３６１００５， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ （ＡＲＡ） ｉｓ ａ ｖｅｒｙ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ， ａｎｄ ｍａｉｎｌｙ ｐｒｏｕｄｃｅｄ ｂｙ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ｍｅｔｈｏｄ． Ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ， ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＡＲＡ ｂｙ Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｐａｔｈｗａｙｓ
ｗｅｒｅ ｒｅｖｉｅｗｅｄ， ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ ｆｏｒ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｏｉｌ； Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ； ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ； ｒａｔｅ⁃ｌｉｍｉｔｉｎｇ ｓｔｅｐ；
ｍａｌｉｃ ｅｎｚｙｍｅ
　 　 目前花生四烯酸 （ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ，ＡＲＡ） 油脂
主要从动物肝脏、猪肾上腺、沙丁鱼中提取获得。
然而动物组织中 ＡＲＡ的含量基本都低于 ５％ ，细胞
干质量中 ＡＲＡ 的质量甚至低于 ０􀆰 ２％ ［１］。 由于
ＡＲＡ为细胞膜磷脂的重要组成成分，因此，自从 ２０
世纪 ８０ 年代，研究者开始寻求通过微生物发酵法生
产 ＡＲＡ，并发现丝状真菌高山被孢霉具有大量积累
花生四烯酸油脂的能力［２ － ３］。
以往的研究热点主要集中于高产 ＡＲＡ 高山被
孢霉的菌株筛选、高山被孢霉发酵生产花生四烯酸
油脂的发酵工艺等方面［４ － ５］。 而本文主要综述高山
被孢霉深层培养过程中菌丝形态的控制及高山被
孢霉合成 ＡＲＡ的代谢通路、限速步骤及将来的研究
方向。
１　 花生四烯酸的性质及其应用
花生四烯酸，系统命名为全顺 Δ ５，８，１１，１４
二十碳四烯酸，其碳链中具有 ４ 个顺式双键。 由于
第一个双键位于羧基端的第六个碳原子处，所以
ＡＲＡ属于 ω ６ 型不饱和脂肪酸。 鉴于其特殊的生
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物学性质，ＡＲＡ 被广泛应用于食品、医药、制药、化
妆品及农业等行业中［６ － ７］。
ＡＲＡ是人体中前列腺素、前列环素、血栓烷、白
三烯等一系列重要的二十碳酸的前体物质，适量摄取
有助于婴幼儿大脑细胞及神经系统发育［７］。 因此
ＡＲＡ在婴幼儿奶粉中具有不可替代的强化营养的作
用。 ２０１２年，卫生部正式发文批准 ＡＲＡ可用于儿童
用乳粉及婴幼儿谷类辅助食品，规定使用量必须分别
低于总脂肪酸含量的 １％和 ２ ３００ ｍｇ ／ ｋｇ［８］。
作为大脑及眼睛中重要的脂肪酸组成成分，
ＡＲＡ具有传递神经信号的作用，可提高婴幼儿的
感光及认知能力［７］ 。 ＡＲＡ亦可作为一种经济型化
妆品添加剂，具有调节细胞膜渗透性、保湿肌肤等
功能［９］ ，因此它常作为改善皮肤的护肤用品。 除
此之外，ＡＲＡ还可以添加到护发素等洗发产品中，
能够促进头发生长，改善发质［１０］ 。 ＡＲＡ 还具有降
低机体内胆固醇含量的功效［１１］ ，因此，它也是一种
饲料添加剂，可用于改善银狐皮毛光滑度及舒
适度［１２］ 。
２　 传统工艺制备花生四烯酸油脂
花生四烯酸油脂广泛存在于猪肝脏、猪肾上
腺、蛋、牛脑、鱼油等组织中。 目前，主要通过尿素
包合法从动物组织中提取，而此方法仅能得到粗
品，花生四烯酸油脂的含量仅为 ５０％ ，且其中还有
大量的二十碳五烯酸（ ｅｉｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ，ＥＰＡ）
油脂。 而婴幼儿乳品中如存在过量的 ＥＰＡ，会抑制
ＡＲＡ的吸收和合成，从而降低细胞中 ＡＲＡ 水平，导
致婴幼儿大脑发育不成熟，甚至性早熟［１３］。 因此，
传统工艺生产 ＡＲＡ不宜再进行工业化生产；微生物
法生产 ＡＲＡ的研究则更有必要开展。
３　 微生物发酵法制备花生四烯酸油脂
鉴于动物组织来源的 ＡＲＡ 产品中含有大量的
ＥＰＡ，而 ＥＰＡ含量超标又会给婴幼儿身体健康带来
隐患。 因此，从 ２０ 世纪 ８０ 年代起，研究者开始利用
微生物发酵法生产 ＡＲＡ，相关生产菌株及生产技术
的专利由此先后问世。 例如，Ｂａｒｃｌａｙ 等［１］为采用复
杂 Ｎ源培养 Ｍ． ｓｅｃｔ． ｓｃｈｍｕｃｋｅｒｉ生产 ＡＲＡ的常规培
养方式申请了专利。 Ａｋｉｍｏｔｏ等［１４］就降低 ω ３ 脱饱
和酶活性提高 ＡＲＡ 积累量的发酵方法申请专利。
自 １９８３ 年 Ａｈｅｒｎ 等［１５］ 发现红藻 （ Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ
ｃｒｕｅｎｔｕｍ）具有合成 ＡＲＡ 的能力后，一大批微生物
也被发现能够合成 ＡＲＡ，主要集中在被孢霉属与耳
霉属。 表 １ 列出了几种菌株的 ＡＲＡ积累情况，其中
高山被孢霉积累 ＡＲＡ的能力最强。 此外，有研究发
现，通过在高产油脂的解脂亚洛酵母中过量表达
ＡＲＡ合成的 Δ６ 脱饱和酶 ／ Δ６ 延长酶及 Δ９ 延长酶 ／
Δ８ 脱饱和酶途径中的关键酶，可实现 ＡＲＡ 的大量
积累［３０］。
表 １　 不同菌株积累花生四烯酸油脂的能力比较
Ｔａｂｌｅ １　 Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ ｄａｔａ ｏｎ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｏｉｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ
菌株 发酵规模 底物 产量 ／（ｇ·Ｌ － １）
ＡＲＡ占总油脂
百分比 ／ ％ 发酵周期 ／ ｄ 文献
Ｍ． ａｌｐｉｎａ ＭＥ １ 机械搅拌罐 葡萄糖、乙醇 １９． ８０ ７５． ０ １１ ［１６］
Ｍ． ａｌｌｉａｃｅａ ＹＮ １５ ５０ Ｌ罐 葡萄糖 ７． １０ ３６． ４ ７ ［１７］
Ｍ． ａｌｐｉｎａ ＬＰＭ ３０１ １００ Ｌ罐 葡萄糖 ４． ５０ ６０． ４ ８ ［１８］
Ｍ． ａｌｐｉｎａ ＭＥ １ ５ Ｌ罐 葡萄糖、乙醇 １９． ０２ — ５． ６ ［１９］
Ｍ． ａｌｐｉｎａ 摇瓶 葡萄糖 ７． ７４ — — ［２０］
Ｍ． ａｌｐｉｎａ １２ Ｌ罐 葡萄糖 １８． ８０ — １２． ５ ［２１］
Ｍ． ａｌｐｉｎａ Ｍ６ 摇瓶 葡萄糖 ４． ８２ ７２． ３ ８ ～ １４ ［２２］
Ｍ． ａｌｐｉｎａ ＩＳ ４ 摇瓶 葡萄糖 ０． ４１ — １０ ［２３］
Ｍ． ａｌｐｉｎａ 摇瓶 玉米淀粉水解液 １． ８７ １７． ３ ７ ［２４］
Ｍ． ａｌｐｉｎａ ＣＣＦ 固体发酵 大米、小麦等 ０． ２４ — ７ ［２５］
Ｍ． ａｌｐｉｎａ ＬＰＭ ３０１ 机械搅拌罐 葡萄糖 ４． ５０ ６０． ４ ８ ［２６］
Ｍ． ｓｃｈｍｕｃｋｅｒｉ 摇瓶 葡萄糖 ２． ３０ ２０． ０ — ［１］
Ｍ． ａｌｐｉｎａ Ｉ４９ Ｎ１８ 摇瓶 葡萄糖 ４． ５５ ７０． ２ １０ ～ １３ ［２７］
Ａｕｒｅｉｓｐｉｒａ ｍａｒｉｔｉｍａ 摇瓶 葡萄糖 ０． ０４ — ３ ［２８］
Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｎａｎｏｄｅｓ 摇瓶 葡萄糖 ２． ５５ １６． ０ — ［２９］
３７　 第 ４ 期 周正雄等：微生物发酵法生产花生四烯酸油脂的研究进展
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　 　 笔者从以下几个方面对发酵法生产 ＡＲＡ 进行
综述。
３． １　 微生物发酵所需营养物质及发酵工艺
目前，高山被孢霉发酵 ＡＲＡ可以利用的 Ｃ源包
括葡萄糖、淀粉及大豆油等，而葡萄糖是利用最广
泛的 Ｃ源。 以 ＮＨ４ＮＯ３、ＮａＮＯ３、ＮＨ４ＡＣ、（ＮＨ４） ２ＳＯ４
等无机氮为 Ｎ源时，菌体生长量偏低，因此，高山被
孢霉应以蛋白质、氨基酸等有机氮为 Ｎ源［３１ － ３２］。
作为多种酶类的辅因子， Ｍｇ２ ＋ 、 Ｆｅ２ ＋ 、 Ｚｎ２ ＋ 、
Ｃｕ２ ＋和 ＰＯ３ －３ 等离子的添加，极大地促进了 ＡＲＡ 的
积累［３３ － ３４］。 溶氧是影响高山被孢霉菌体生长、产物
积累的重要因素之一，Ｐｅｎｇ 等［３５］通过两阶段控制
溶氧，最终将 ＡＲＡ的积累量提高了 ５０􀆰 ３％ 。
实验室规模，高山被孢霉积累 ＡＲＡ的发酵及提
取工艺流程如图 １ 所示。 由图 １ 可知，发酵结束后，
经真空过滤、离心收集菌体；之后经过氯仿、甲醇抽
提可得到 ＡＲＡ。 工业化规模，发酵结束后，菌体经
真空过滤、去离子水清洗后，１０５ ℃干燥至恒质量，
之后菌体经甲醇盐酸溶液处理、ｎ 己烷萃取可得
到 ＡＲＡ。
３． ２　 菌丝形态对 ＡＲＡ积累的影响
丝状真菌培养过程中，溶氧不足是目标产物
大量积累的主要瓶颈之一。 目前针对此问题的解
决方案有：①在培养基中添加氧载体；②通入高浓
度氧的空气；③控制菌丝形态增加菌体与氧气的
接触面积。 前两种方案在成本上都比较昂贵，无
法适用于大规模的发酵生产。 此外，研究表明对
于一定浓度、黏度的发酵液，发酵液中氧气浓度达
到饱和时，菌体颗粒内部某点的溶氧即降低至零，
即菌体内部氧气浓度随菌体直径增大而迅速降
低［３６］ ，Ｓｈｕ等［３７］研究裂褶菌时同样也发现颗粒内
部溶氧传质困难。 因此，目前解决丝状真菌深层
培养过程中溶氧问题较为行之有效的方法为控制
菌丝形态。
其次，菌丝形态还能影响发酵液的流体性能。
研究表明，在氧气充足的条件下，土曲霉发酵液怜
指数（ ｆｌｏｗ ｉｎｄｅｘ）与稠度系数的影响因素之一为颗
粒直径大小，其中怜指数随颗粒直径增加而降低，
而稠度系数随颗粒直径增大而增大［３８］ 。 Ｔｅｎｇ
等［３９］通过控制培养基中的接种量控制菌体形态，
并测定发酵液中的怜指数及稠度系数，计算得到
团状菌体的发酵液流体表观黏度大于颗粒状菌体
发酵液流体表观黏度。 而表观黏度越大，流体中
的物质交换、溶氧传递越困难，由此可以得知，颗
粒状菌体发酵液中的物质交换、溶氧传质较团状
发酵液容易。
图 １　 高山被孢霉发酵及提取 ＡＲＡ的工艺流程
Ｆｉｇ． １　 Ｆｌｏｗ⁃ｓｈｅｅｔ ｆｏｒ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｖｉａ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｙ Ｍ． ａｌｐｉｎａ
　 　 Ｐａｒｋ 等［４０］ 研究发现，表面非光滑颗粒积累
ＡＲＡ的量是光滑颗粒表面的 ２ 倍，达到菌体干质量
的 １４％ 。 Ｈｉｇａｓｈｉｙａｍａ 等［４１］研究表明，菌体形态由
丝状转变成团状时，营养物质及代谢废物在细胞与
发酵液间传递难度增大，ＡＲＡ 积累量下降。 Ｚｈｏｕ
等［４２］研究表明，颗粒状德氏根霉积累延胡索酸能力
最强，且其积累能力随颗粒直径变小而增大。 Ｆｅｎｇ
等［４３］研究金龟子绿僵菌发酵生产腐败菌素 Ｂ 时发
现，腐败菌素 Ｂ的积累量随金龟子绿僵菌颗粒直径
增大而降低。 Ｓｉｔａｎｇｇａｎｇ等［４４］研究曲霉发酵生产葡
４７ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １１ 卷　
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糖胺时也得到相似的结论。 Ｓｈｕ 等［３７］研究裂褶菌
生产抗肿瘤多糖裂裥菌素时同样也发现，颗粒直径
越小，目的产物积累量越高。 对高山被孢霉而言，
Ｈｉｇａｓｈｉｙａｍａ等［４５］将发酵液中的菌体分成丝状部分
和颗粒部分，并发现丝状部分积累的 ＡＲＡ 含量偏
低。 同时，Ｃｈｕｎｇ等［４６］利用抗体间接荧光染色分析
粗糙链孢霉（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）中转化酶活性位点，
得出对数生长后期转化酶活性位点位于年轻菌丝
细胞膜（顶端细胞）上的结论。
换言之，从微观角度来说：同等质量的菌体，顶
端细胞越多，合成目标产物的能力越强；从宏观角
度来说：比表面积越大，菌体合成目标产物的能力
越强。 由此可以推断，对高山被孢霉而言颗粒直径
较小，目标产物的积累量越大。
目前，丝状真菌形态主要包括丝状、团状、颗粒
状 ３ 种。 影响菌丝形态的主要因素包括 Ｃ源、Ｎ源、
无机盐、ｐＨ、表面活性剂等培养基组分以及剪切力、
温度、接种量等培养方式。 对于不同的丝状真菌，
显著影响其形态的因素也不一样。
对高山被孢霉而言，在培养基中仅添加ＫＨ２ＰＯ４
一种无机离子 （盐）时，菌体成丝状；同时添加
Ｎａ２ＳＯ４、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２３种无机离子（盐）时，菌体主要
呈现大颗粒状（２ ～３ ｍｍ）；而同时添加以上 ４ 种无机
离子（盐）时，菌体主要呈现小颗粒状（１ ～ ２ ｍｍ） ［４７］。
Ｃ ／ Ｎ比作为重要的影响因素，可以直接影响菌体颗粒
直径的大小。 Ｃ ／ Ｎ比 ＞２０时，颗粒直径大小随着Ｃ ／ Ｎ
比升高而增加；Ｃ ／ Ｎ比 ＜２０ 时，颗粒直径几乎不发生
改变［４８］。 同时，不同溶氧条件下，高山被孢霉呈现的
形态也有所不同。 溶氧浓度控制在（２􀆰 ０ ～５􀆰 ０） ×
１０ －７时，随溶氧浓度升高，菌体形态由丝状逐渐向颗
粒状转变；溶氧浓度控制在（１􀆰 ５ ～ ２􀆰 ０） × １０ －７时，菌
体形态几乎不发生改变［４９］。 此外，Ｐａｒｋ 等［４０］研究表
明，以酵母粉、谷朊、玉米浆为 Ｎ源时，深层培养过程
中Ｍ． ａｌｐｉｎａ呈颗粒状；而以 Ｐｈａｒｍａｍｅｄｉａ、鱼粉、大豆
粉为 Ｎ源时，菌体呈丝状。 与此同时，研究表明，高浓
度的葡萄糖溶液不仅抑制菌体生长，而且可以诱导高
山被孢霉形成丝状菌体［５０］。
３． ３　 ＡＲＡ代谢途径
如图 ２ 所示，ＡＲＡ合成途径主要包括糖酵解途
径、ＴＣＡ 循环途径、丙酮酸 ／苹果酸循环、脂肪酸合
成途径等。 其中，葡萄糖经糖酵解途径合成丙酮
酸，丙酮酸一部分进入线粒体中的三羧酸循环，另
一部分留在胞液中进入丙酮酸 ／苹果酸循环；三羧
酸循环过程中产生的柠檬酸穿过线粒体膜进入胞
液中，并在 ＡＴＰ 柠檬酸裂解酶作用下形成乙酰
ＣｏＡ；在乙酰 ＣｏＡ 羧化酶作用下，合成丙二酰
ＣｏＡ；之后在一系列酶的催化作用下得到棕榈酰
ＣｏＡ（图 ３）。 棕榈酰 ＣｏＡ与乙酰 ＣｏＡ相互作用后
得到硬脂酰 ＣｏＡ，Δ９ 脱饱和酶作用于硬脂酰 ＣｏＡ
得到不饱和的油酸酰 ＣｏＡ，在脂肪酸中引入第一个
双键；接着在一系列脂肪酸延长酶、脂肪酸脱饱和
酶作用下得到 ＡＲＡ。
图 ２　 高山被孢霉细胞中花生四烯酸合成的代谢流
Ｆｉｇ． ２　 Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ
ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｂｙ Ｍ． ａｌｐｉｎａ
ＣＨ３ＣＯＳＣｏＡ ＋ ＣＯ２ ＋ ＡＴＰ 􀜩􀜨􀜑 ＨＯＯＣＣＨ２ＣＯＳＣｏＡ ＋ ＡＤＰ ＋ Ｐｉ （１）
Ａｃｅｔｙｌ⁃ＣｏＡ ＋ ７ｍａｌｏｎｙｌ⁃ＣｏＡ ＋ １４ＮＡＤＰＨ ＋２０Ｈ ＋ 􀜩􀜨􀜑
Ｐａｌｍｉｔｙｌ⁃ＣｏＡ ＋ ７ＣｏＡ ＋ １４ＮＡＤＰ ＋ ７ＣＯ２ ＋ ６Ｈ２Ｏ （２）
图 ３　 棕榈酰 ＣｏＡ的合成反应
Ｆｉｇ． ３　 Ｔｈｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｐａｌｍｉｔｙｌ⁃ＣｏＡ
　 　 在 ＡＲＡ的合成过程中，ＴＣＡ循环提供耗能代谢
过程中所需的 ＡＴＰ及柠檬酸。 而柠檬酸在 ＡＴＰ 柠
檬酸裂解酶作用下分解成供脂肪酸合成所需的乙
酰 ＣｏＡ。 丙酮酸 ／苹果酸循环提供胞内脂肪酸合成
所需的还原力 ＮＡＤＰＨ。 降低此过程中的苹果酸酶
活性能，会显著降低 ＡＲＡ的积累量［５１］。 因此，丙酮
酸 ／苹果酸循环被认为是最重要的 ＮＡＤＰＨ 供体。
Ｚｈａｎｇ 等［５２］推断苹果酸酶是脂肪酸积累的限速酶，
丙酮酸 ／苹果酸循环是脂肪酸积累的限速步骤，过
量表达苹果酸酶后，卷枝毛霉中脂肪酸的积累量增
５７　 第 ４ 期 周正雄等：微生物发酵法生产花生四烯酸油脂的研究进展
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加了 ２􀆰 ５ 倍。
Ｓｏｎｇ等［５３］研究表明，产油丝状真菌卷枝毛霉中
发现苹果酸酶存在 ６ 种亚型，并且也只有一种亚型
（亚型 ４）与脂肪酸的积累有关，其他亚型均在厌氧
条件下而非 Ｎ源耗尽条件下发挥作用（除亚型 ３ 以
外），亚型 ３ 为组成型，在菌体生长时具有较高的活
性。 在高山被孢霉中，苹果酸酶存在 ７ 种亚型（Ａ ～
Ｇ），通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其中特定
酶活性，在培养基中 Ｎ 源耗尽即脂肪酸积累时，发
现仅有苹果酸酶 Ｅ 具有活性，而苹果酸酶 Ａ、Ｂ、Ｃ、
Ｆ、Ｇ则是溶氧关联型［５４］。
Ｗｙｎｎ 等［５５］ 分别以葡萄糖和吐温 ２０、吐
温 ４０、吐温 ８０ 为 Ｃ 源 （主要成分分别为 Ｃ１４、
Ｃ１６、Ｃ１８ 等）时，发现 ＡＲＡ的积累量具有差异性；以
吐温为 Ｃ源时，Ｃ１８∶ ２、Ｃ１８∶ ３积累量相较于以葡萄
糖为底物时偏多，而 Ｃ２０∶ ３、Ｃ２０∶ ４的含量却没有区
别；这可以解释为 Δ１２ 脱饱和酶作用于 Ｃ１８∶ １生成
Ｃ１８∶ ２及 Δ６ 脱饱和酶作用于 Ｃ１８∶ ２生成 Ｃ１８∶ ３的产
量，随着底物中 Ｃ１８∶ １或者 Ｃ１８∶ ２含量的增加，产物
积累量也增加；而转化 Ｃ１８∶ ３成 Ｃ２０∶ ３的反应速度
较慢，且为脂肪酸合成过程中的限速步骤，所以
ＡＲＡ的积累量没有明显变化。 另外，在产油型酵母
解脂亚洛酵母中表达植物来源的 β 酮酰基合成酶
基因的研究表明，β 酮酰基合成酶催化 Ｃ４ 至 Ｃ１４
化合物加乙酰基延长碳链。 延长超过 １８ 个碳的脂
肪酸碳链时，需要脂肪酸延长酶催化 ４ 个酶反应，因
此，以 Ｃ１６ 和 Ｃ１８ 为底物时，与合成 Ｃ２０ 的速率基
本一致［５６］。 因此，可以推论脂肪酸延长酶催化 γ
亚油酸酰 ＣｏＡ合成双高 γ 亚油酸酰 ＣｏＡ 是 ＡＲＡ
积累过程中的限速步骤，这为进一步提高 ＡＲＡ的产
量提供了可行的代谢工程改造方案。
４　 结论与展望
由于动物组织中 ＡＲＡ 的含量偏低，因此，研究
者期待以微生物发酵法生产 ＡＲＡ，得到更可能应用
于工业化的 ＡＲＡ 生产方法。 从已有的研究成果可
知，高山被孢霉积累 ＡＲＡ的能力最强。 高山被孢霉
胞内可以经过糖酵解途径、丙酮酸 ／苹果酸循环、脂
肪酸合成途径等步骤积累 ＡＲＡ；且对丝状真菌而
言，优化深层培养过程中的菌丝形态有助于提高菌
体与发酵液中的物质及气体交换，进而提高 ＡＲＡ产
量；通过代谢工程的手段，提高苹果酸酶、脂肪酸延
长酶活性也不失为一种有效的方法。
参考文献：
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［ ５ ］ 　 Ｄｅｄｙｕｋｈｉｎａ Ｅ Ｇ， Ｃｈｉｓｔｙａｋｏｖａ Ｔ Ｉ， Ｋａｍｚｏｌｏｖａ Ｓ Ｖ， ｅｔ ａｌ．
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ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｎｄ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ：ａ ｒｅｖｉｅｗ
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ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓ：
ＵＳ，５３９７５９１［Ｐ］． １９９５⁃０３⁃１４．
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ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ⁃ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｌｉｐｉｄ ａｎｄ ｄｉｈｏｍｏ⁃ｇａｍｍａ⁃ｌｉｎｏｌｅｎｉｃ
ａｃｉｄ⁃ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｌｉｐｉｄ：ＥＰ，１０３５２１１［Ｐ］． １９９９⁃０８⁃２７．
［１５］ 　 Ａｈｅｒｎ Ｔ Ｊ，Ｋａｔｏｈ Ｓ，Ｓａｄａ Ｅ． Ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｔｈｅ
ｒｅｄ ａｌｇａ Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ ｃｒｕｅｎｔｕｍ［Ｊ］ ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ，１９８３，２５
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［１６］ 　 Ｊｉｎ Ｍ Ｊ，Ｈｕａｎｇ Ｈ，Ｘｉａｏ Ａ Ｈ，ｅｔ ａｌ． Ａ ｎｏｖｅｌ ｔｗｏ⁃ｓｔｅｐ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
６７ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １１ 卷　
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ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ
ａｌｐｉｎａ ［Ｊ］ ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｌｅｔｔ，２００８，３０（６）：１０８７⁃１０９１．
［１７］ 　 Ａｋｉ Ｔ，Ｎａｇａｈａｔａ Ｙ，Ｉｓｈｉｈａｒａ Ｋ，ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ
ａｃｉｄ ｂｙ ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ ｆｕｎｇｕｓ，Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｌｉａｃｅａ ｓｔｒａｉｎ ＹＮ⁃１５［Ｊ］ ．
Ｊ Ａｍ Ｏｉｌ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ，２００１，７８（６）：５９９⁃６０４．
［１８］ 　 Ｅｒｏｓｈｉｎ Ｖ，Ｓａｔｒｏｕｔｄｉｎｏｖ Ａ，Ｄｅｄｙｕｋｈｉｎａ Ｅ，ｅｔ ａｌ． Ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ ｗｉｔｈ ｇｒｏｗｔｈ⁃ｃｏｕｐｌｅｄ ｌｉｐｉｄ
ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］ ． Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２０００，３５（１０）：１１７１⁃１１７５．
［１９］ 　 Ｊｉｎ Ｍ Ｊ，Ｈｕａｎｇ Ｈ，Ｘｉａｏ Ａ Ｈ，ｅｔ ａｌ． Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ ＭＥ⁃１ ｕｓｉｎｇ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｍｙｃｅｌｉｕｍ
ａｇｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ［ Ｊ ］ ． Ｂｉｏｐｒｏｃ Ｂｉｏｓｙｓ Ｅｎｇ， ２００９， ３２ （ １ ）：
１１７⁃１２２．
［２０］ 　 Ｚｈｕ Ｍ，Ｙｕ Ｌ Ｊ， Ｌｉ Ｗ， ｅｔ ａｌ． Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｆｅｄ⁃ｂａｔｃｈ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ ｂａｓｅｄ ｏｎ
ｄｙｎａｍｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ［ Ｊ］ ． Ｅｎｚｙｍｅ Ｍｉｃｒｏｂ Ｔｅｃｈｎｏｌ，２００６，３８ （６ ）：
７３５⁃７４０．
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ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｂｙ ｆｅｄ⁃ｂａｔｃｈ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ ｕｓｉｎｇ
ＮＨ４ＯＨ ａｓ ａ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｓｏｕｒｃｅ ａｎｄ ｐＨ ｃｏｎｔｒｏｌ［Ｊ］ ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｌｅｔｔ，
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［２２］ 　 Ｚｈｕ Ｍ，Ｙｕ ＬＪ，Ｌｉｕ Ｚ，ｅｔ ａｌ． Ｉｓｏｌａｔｉｎｇ Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ
ｈｉｇｈ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ［ Ｊ］ ． Ｌｅｔｔ Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００４，３９
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［２３］ 　 Ｃｅｒｔｉｋ Ｍ，Ｓｈｉｍｉｚｕ Ｓ． Ｋｉｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｏｉｌ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｂｙ ａｎ
ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ⁃ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｆｕｎｇｕｓ，Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ １Ｓ⁃４ ［ Ｊ］ ．
Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０００，５４（２）：２２４⁃２３０．
［２４］ 　 Ｚｈｕ Ｍ，Ｙｕ Ｌ Ｊ，Ｗｕ Ｙ Ｘ． Ａｎ ｉｎｅｘｐｅｎｓｉｖｅ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ｏｆ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｂｙ Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ ［ Ｊ］ ． Ｊ Ｉｎｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００３，３０（１）：７５⁃７９．
［２５］ 　 Ｓｈｉｎｍｅｎ Ｙ， Ｙａｍａｄａ Ｈ， Ｓｈｉｍｉｚｕ Ｓ． Ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ
ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ：ＵＳ，５２０４２５０［Ｐ］． １９９３⁃０４⁃２０．
［２６］ 　 Ｅｒｏｓｈｉｎ Ｖ，Ｓａｔｒｏｕｔｄｉｎｏｖ Ａ，Ｄｅｄｙｕｋｈｉｎａ Ｅ Ｇ，ｅｔ ａｌ． Ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ
ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ ｗｉｔｈ ｇｒｏｗｔｈ⁃ｃｏｕｐｌｅｄ ｌｉｐｉｄ
ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］ ． Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２０００，３５（１０）：１１７１⁃１１７５．
［２７］ 　 Ｙｕａｎ Ｃ，Ｗａｎｇ Ｊ，Ｓｈａｎｇ Ｙ，ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ
ｂｙ Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ Ｉ４９ ⁃Ｎ１８［Ｊ］ ． Ｆｏｏｄ Ｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈ，２００２，４０
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［２８］ 　 Ｓａｅｌａｏ Ｓ，Ｋａｎｊａｎａ⁃Ｏｐａｓ Ａ，Ｋａｅｗｓｕｗａｎ Ｓ． Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｍａｓｓ
ａｎｄ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ Ａｕｒｅｉｓｐｉｒａ ｍａｒｉｔｉｍａ ｕｓｉｎｇ
ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ［Ｊ］ ． Ｊ Ａｍ Ｏｉｌ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ，２０１１，８８
（５）：６１９⁃６２９．
［２９］ 　 Ｋｅｎｄｒｉｃｋ Ａ， Ｒａｔｌｅｄｇｅ Ｃ． Ｌｉｐｉｄｓ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｍｏｌｄｓ ｇｒｏｗｎ ｆｏｒ
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎ⁃３ ａｎｄ ｎ⁃６ ｐｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ［Ｊ］ ． Ｌｉｐｉｄｓ，
１９９２，２７（１）：１５⁃２０．
［３０］ 　 Ｄａｍｕｄｅ Ｈ Ｇ，Ｇｉｌｌｉｅｓ Ｐ Ｊ，Ｍａｃｏｏｌ Ｄ Ｊ，ｅｔ ａｌ． Ｈｉｇｈ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ
ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ：ＵＳ，７５８８９３１，Ｂ２ ［ Ｐ］．
２００９⁃０９⁃１５．
［３１］ 　 Ａｋｉ Ｔ，Ｎａｇａｈａｔａ Ｙ，Ｉｓｈｉｈａｒａ Ｋ，ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ
ａｃｉｄ ｂｙ ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ ｆｕｎｇｕｓ，Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｌｉａｃｅａ ｓｔｒａｉｎ ＹＮ⁃１５［Ｊ］ ．
Ｊ Ａｍ Ｏｉｌ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ，２００１，７８（６）：５９９⁃６０４．
［３２］ 　 Ｓｈｉｎｍｅｎ Ｙ， Ｓｈｉｍｉｚｕ Ｓ， Ａｋｉｍｏｔｏ Ｋ， ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ
ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｂｙ Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｆｕｎｇｉ： ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｐｏｔｅｎｔ
ｐｒｏｄｕｃｅｒ ａｎｄ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｌａｒｇｅ⁃ｓｃａｌｅ
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］ ． Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，１９８９，３１：１１⁃１６．
［３３］ 　 Šａｊｂｉｄｏｒ Ｊ，Ｋｏžｅｌｏｕｈｏｖ′ａ Ｄ，Ĉｅｒｔ′ ｉｋ Ｍ． Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｓｏｍｅ ｍｅｔａｌ
ｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ ｌｉｐｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ａｎｄ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ
Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｓｐ［Ｊ］ ． Ｆｏｌｉａ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９２，３７（６）：４０４⁃４０６．
［３４］ 　 Ｋｙｌｅ Ｄ Ｊ． Ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ
ｕｓｅ ｔｈｅｒｅｏｆ：ＥＰ，１８０１２２６［Ｐ］． ２０１１⁃０５⁃１８．
［３５］ 　 Ｐｅｎｇ Ｃ， Ｈｕａｎｇ Ｈ， Ｊｉ Ｘ， ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｎ⁃ｈｅｘａｄｅｃａｎｅ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａ ｔｗｏ⁃ｓｔａｇｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｕｐｐｌｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｏｎ
ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ Ａｌｐｉｎａ ＭＥ⁃１ ［ Ｊ］ ．
Ｃｈｅｍ Ｅｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌ，２０１０，３３（４）：６９２⁃６９７．
［３６］ 　 Ｈｕａｎｇ Ｍ Ｙ． Ｍｉｃｒｏｐｒｏｂｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ ｏｆ ｏｘｙｇｅｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
ｉｎ ｍｙｃｅｌｉａｌ ｐｅｌｌｅｔｓ ［ Ｊ ］ ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ， １９７３， １５ （ ６ ）：
１１９３⁃１１９７．
［３７］ 　 Ｓｈｕ Ｃ Ｈ，Ｃｈｏｕ Ｐ Ｆ，Ｈｓｕ Ｉ． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｏｘｙｇｅｎ
ｓｕｐｐｌｙ ｏｎ ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌａｎ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｂｙ Ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌｕｍ ｃｏｍｍｕｎｅ
ｕｓｉｎｇ ａ ｐｅｌｌｅｔ ｓｉｚｅ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ ［ Ｊ］ ． Ｊ Ｃｈｅｍ Ｔｅｃｈｎｏｌ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００５，８０（１２）：１３８３⁃１３８８．
［３８］ 　 Ｒｏｄｒíｇｕｅｚ Ｐｏｒｃｅｌ Ｅ Ｍ，Ｃａｓａｓ Ｌóｐｅｚ Ｊ Ｌ，Ｓáｎｃｈｅｚ Ｐéｒｅｚ Ｊ Ａ，ｅｔ ａｌ．
Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐｅｌｌｅｔ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｎ ｂｒｏｔｈ ｒｈｅｏｌｏｇｙ ｉｎ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｓ ｏｆ
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ［Ｊ］ ． Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｅｎｇ Ｊ，２００５，２６（２）：１３９⁃１４４．
［３９］ 　 Ｔｅｎｇ Ｙ， Ｘｕ Ｙ， Ｗａｎｇ Ｄ． Ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｐｕｓ
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ ｉｎ ｓｕｂｍｅｒｇｅｄ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ｏｆ ｍｙｃｅｌｉｕｍ⁃ｂｏｕｎｄ ｌｉｐａｓｅ ［ Ｊ］ ． Ｂｉｏｐｒｏｃ Ｂｉｏｓｙｓｔ Ｅｎｇ， ２００９， ３２
（３）：３９７⁃４０５．
［４０］　 Ｐａｒｋ Ｅ Ｙ，Ｋｏｉｋｅ Ｙ，Ｈｉｇａｓｈｉｙａｍａ Ｋ，ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｓｏｕｒｃｅ
ｏｎ ｍｙｃｅｌｉａｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅｓ
ｏｆ Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ［Ｊ］． Ｊ Ｂｉｏｓｃｉ Ｂｉｏｅｎｇ，１９９９，８８（１）：６１⁃６７．
［４１］ 　 Ｈｉｇａｓｈｉｙａｍａ Ｋ， Ｍｕｒａｋａｍｉ Ｋ， Ｔｓｕｊｉｍｕｒａ Ｈ， ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ
ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ ｏｘｙｇｅｎ ｏｎ ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ａｎ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ １Ｓ⁃４ ［ Ｊ］ ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ，
２０００，６３（４）：４４２⁃４４８．
［４２］ 　 Ｚｈｏｕ Ｚ， Ｄｕ Ｇ， Ｈｕａ Ｚ， ｅｔ ａｌ． Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｕｍａｒｉｃ ａｃｉｄ
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｄｅｌｅｍａｒ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ
ｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］ ． Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒ Ｔｅｃｈｎｏｌ，２０１１，１０２（２１）：９３４５⁃９３４９．
［４３］ 　 Ｆｅｎｇ Ｋ Ｃ，Ｒｏｕ Ｔ Ｍ，Ｌｉｕ Ｂ Ｌ，ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｆｕｎｇａｌ ｐｅｌｌｅｔ ｓｉｚｅ ｏｎ
ｔｈｅ ｈｉｇｈ ｙｉｅｌｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｓｔｒｕｘｉｎ Ｂ ｂｙ Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ
［Ｊ］ ． Ｅｎｚｙｍｅ Ｍｉｃｒｏｂ Ｔｅｃｈ，２００４，３４（１）：２２⁃２５．
［４４］ 　 Ｓｉｔａｎｇｇａｎｇ Ａ Ｂ，Ｗｕ Ｈ Ｓ，Ｗａｎｇ Ｓ Ｓ，ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐｅｌｌｅｔ ｓｉｚｅ ａｎｄ
ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ｏｎ ｔｈｅ ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｓｐ． ＢＣＲＣ３１７４２［Ｊ］ ． Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒ Ｔｅｃｈｎｏｌ， ２０１０， １０１ （ １０ ）：
３５９５⁃３６０１．
［４５］ 　 Ｈｉｇａｓｈｉｙａｍａ Ｋ，Ｆｕｊｉｋａｗａ Ｓ，Ｐａｒｋ Ｅ Ｙ，ｅｔ ａｌ． Ｉｍａｇｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ
ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅ ｄｕｒｉｎｇ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ
７７　 第 ４ 期 周正雄等：微生物发酵法生产花生四烯酸油脂的研究进展
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Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ １Ｓ⁃４ ［ Ｊ ］ ． Ｊ Ｂｉｏｓｃｉ Ｂｉｏｅｎｇ， １９９９， ８７（４）：
４８９⁃４９４．
［４６］ 　 Ｃｈｕｎｇ Ｐ Ｌ Ｙ， Ｔｒｅｖｉｔｈｉｃｋ Ｊ Ｒ． Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｖｅｒｔａｓｅ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ ｄｕｒｉｎｇ ｃｏｎｉｄｉａｌ
ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｈｙｐｈａｌ ｇｒｏｗｔｈ［ Ｊ］ ． Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ，１９７０，１０２ （２）：
４２３⁃４２９．
［４７］ 　 Ｈｉｇａｓｈｉｙａｍａ Ｋ，Ｙａｇｕｃｈｉ Ｔ，Ａｋｉｍｏｔｏ Ｋ，ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｉｎｅｒａｌ
ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ａｎｄ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ １Ｓ⁃４［ Ｊ］ ． Ｊ Ａｍ Ｏｉｌ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ，
１９９８，７５（１２）：１８１５⁃１８１９．
［４８］ 　 Ｋｏｉｋｅ Ｙ， Ｊｉｅ Ｃａｉ Ｈ，Ｈｉｇａｓｈｉｙａｍａ Ｋ， ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｏｎｓｕｍｅｄ
ｃａｒｂｏｎ ｔｏ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｍｙｃｅｌｉａｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ
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８７ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １１ 卷　
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