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Effects of Eisenia foetida and Amynthas morrisi on the chemical and biological properties of soil amended with the paper mill sludge

赤子爱胜蚓和毛利远盲蚓对添加造纸污泥土壤的化学和生物学特征的影响



全 文 :
摇 摇 摇 摇 摇 生 态 学 报
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摇 摇 第 猿源卷 第 缘期摇 摇 圆园员源年 猿月摇 渊半月刊冤
目摇 摇 次
前沿理论与学科综述
干旱指标研究进展 李柏贞袁周广胜 渊员园源猿冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
气候变化对作物矿质元素利用率影响研究进展 李垄清袁吴正云袁张摇 强袁等 渊员园缘猿冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
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土地利用和环境因子对表层土壤有机碳影响的尺度效应要要要以陕北黄土丘陵沟壑区为例
赵明月袁赵文武袁钟莉娜 渊员员园缘冤
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赤子爱胜蚓和毛利远盲蚓对添加造纸污泥土壤的化学和生物学特征的影响
陈旭飞袁张摇 池袁戴摇 军袁等 渊员员员源冤
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期刊基本参数院悦晕 员员鄄圆园猿员 辕 匝鄢员怨愿员鄢皂鄢员远鄢圆愿圆鄢扎澡鄢孕鄢 预 怨园郾 园园鄢员缘员园鄢猿园鄢圆园员源鄄园猿
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封面图说院 插秧季节的桂西要要要圆园园怨要圆园员员年袁我国广西尧云南尧贵州尧四川尧重庆等西南地区遭受了百年不遇的特大旱灾袁其中
广西西北部尧云南大部尧贵州西部等石漠化地区最为严重袁农作物大面积绝收袁千百万人和大牲畜饮水困难袁这种危
害是巨大的尧现实的遥 从对 圆园园怨要圆园员员年我国西南地区旱灾程度及其对植被净初级生产力影响结果显示院圆园园怨要
圆园员员年西南地区年均降水量和湿润指数明显低于 员怨愿园要圆园园愿年均值袁植被净初级生产力低于 圆园园员要圆园园愿年均值袁
造成的碳损失约占我国总碳汇的 苑援怨员豫遥 全球气候变暖给大气环流提供了动力袁也造成了许多极端灾害天气袁因此
如何应对气候变化形势显得更加紧迫遥
彩图及图说提供院 陈建伟教授摇 北京林业大学摇 耘鄄皂葬蚤造院 糟蚤贼藻泽援糟澡藻灶躁憎岳 员远猿援糟燥皂
第 34 卷第 5 期
2014年 3月
生 态 学 报
ACTA ECOLOGICA SINICA
Vol.34,No.5
Mar.,2014
http: / / www.ecologica.cn
基金项目:国家自然科学基金青年科学基金项目(41201305); 广东省自然科学基金博士启动项目(S2012040007806);中国博士后科学基金资助
项目(2012M511819);广东省教育部产学研结合项目(2011A09020003)
收稿日期:2013⁃06⁃09;     修订日期:2013⁃09⁃26
∗通讯作者 Corresponding author.E⁃mail: zhangchi121@ 163.com
DOI: 10.5846 / stxb201306091524
陈旭飞,张池,戴军,郭彦彪,刘婷.赤子爱胜蚓和毛利远盲蚓对添加造纸污泥土壤的化学和生物学特征的影响.生态学报,2014,34( 5):
1114⁃1125.
Chen X F, Zhang C, Dai J,Guo Y B,Liu T.Effects of Eisenia foetida and Amynthas morrisi on the chemical and biological properties of soil amended with
the paper mill sludge.Acta Ecologica Sinica,2014,34(5):1114⁃1125.
赤子爱胜蚓和毛利远盲蚓对添加造纸污泥土壤的
化学和生物学特征的影响
陈旭飞1,张  池1,∗,戴  军1,郭彦彪1,刘  婷1, 2
(1. 华南农业大学资源环境学院 /农业部华南耕地保育重点实验室, 广州  510642; 2. 广东省生态环境与土壤研究所, 广州  510650)
摘要:将赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)和毛利远盲蚓(Amynthas morrisi)接种于混合 15%造纸污泥的旱地土和水稻土中,研究不同
蚯蚓对不同混合污泥土壤的化学和生物学性状的作用。 主成分分析结果显示蚯蚓对混合污泥土壤化学和生物学性质影响与土
壤类型和蚯蚓种间差异密切相关(P<0.05)。 方差分析结果显示:(1)在混合污泥旱地土处理中,与对照相比,E. foetida 处理的
混合污泥土壤 pH和 Eh分别显著降低了 0.22和 13个单位(P<0.05),有机碳和微生物量碳含量,以及过氧化氢酶、N⁃乙酰⁃氨基
葡萄糖苷酶、脲酶和酸性磷酸酶活性分别降低了 22.8%、43.8%、12.4%、48.4%、44.0%和 40.7%(P<0.05),而荧光素二乙酸酯酶
活性增加了 57.4%(P<0.05);A. morrisi处理的混合污泥土壤碱解氮含量、过氧化氢酶、N⁃乙酰⁃氨基葡萄糖苷酶和脲酶活性分别
明显下降了 16.5%,12.4%、33.9%和 45.5%(P<0.05)。 另外,两种蚯蚓相比较,E. foetida活动后混合污泥旱地土壤 pH和 Eh值、
有机碳含量和碳氮比分别比 A. morrisi活动后土壤降低 0.17和 10个单位、24.9%和 2.26个单位,而代谢熵和荧光素二乙酸酯酶
活性显著增高(P<0.05)。 (2)在混合污泥水稻土处理中,与对照相比,E. foetida处理的混合土壤有机碳含量和碳氮比显著提高
20.9%和 1.02个单位(P<0.05),全钾含量和呼吸速率明显降低 6.11%和 33.8%(P<0.05);而与对照相比,A. morrisi处理的混合
土壤的速效钾含量和过氧化氢酶活性显著提高 13.2%和 10.8%(P<0.05),但 β⁃葡萄糖苷酶和荧光素二乙酸酯酶活性分别下降
46.7%和 34.4%(P<0.05)。 两种蚯蚓相比较,E. foetida 处理后混合污泥水稻土的有机碳含量比 A. morrisi 处理显著增加了
15􀆰 7%,碳氮比增加 0.84个单位,速效钾、呼吸速率和过氧化氢酶活性减少 11.4%、36.5% 和 5.51%(P<0.05)。 综上所述,蚯蚓
能显著影响混合造纸污泥土壤的化学和生物学特征。 蚯蚓在高有机碳和低粘粒含量旱地土壤中活动,能够加速有机碳的分解
和释放,降低与土壤有机质分解和养分转化相关的酶活性和微生物量,但增加微生物总体活性;而蚯蚓在低有机碳和高粘粒含
量水稻土壤中活动,则能够有助于土壤有机碳储存,对养分和微生物活性的影响相对较小。 与 A. morrisi相比较,E. foetida对混
合污泥旱地土有机碳的分解和释放、微生物活性的提高,以及混合污泥水稻土有机碳的储存等方面的能力均较强,而对混合污
泥水稻土钾素转化能力相对较弱。 由于造纸污泥具有高有机碳和低养分含量特征,因此污泥农用仍需考虑按一定比例配施高
养分含量有机物料。 同时,进一步根据土壤类型和选择适宜的蚯蚓品种进行较长期的小区和大田试验,将能够为污泥农用提供
更多科学参考。
关键词:蚯蚓; 造纸污泥; 土壤; 化学和生物学性质
Effects of Eisenia foetida and Amynthas morrisi on the chemical and biological
properties of soil amended with the paper mill sludge
CHEN Xufei1, ZHANG Chi1,∗, DAI Jun1,GUO Yanbiao1,LIU Ting1, 2
1 College of Natural Resources and Environment, South China Agricultural University / Key Laboratory of Arable Land Conservation (South China) of Ministry
of Agriculture, Guangzhou 510642, China
http: / / www.ecologica.cn
2 Guangdong Institute of Eco⁃environment and Soil Sciences, Guangzhou 510650, China
Abstract: Two earthworm species (Eisenia foetida and Amynthas morrisi) were inoculated in dryland and paddy soil mixed
with 15% paper mill sludge for 30 days. Effects of earthworm on soil chemical and biological properties were evaluated,
which included pH and Eh value, contents of organic carbon and dissolved organic carbon, contents of total nitrogen,
phosphorus and potassium and their available contents, the ratio of C and N, contents of microbial biomass carbon, soil
respiration rate, metabolic quotient, microbial quotient, and activities of catalase, urease, invertase, acid and alkaline
phosphatase, β⁃glucosidase, N⁃acetyl⁃glucosaminidase and fluorescein diacetate ( FDA) hydrolysis. PCA results showed
that: effects of earthworms on the chemical and biological properties of soil mixed with paper mill sludge depend on soil
types and earthworm special species (P<0.05). ANOVA results showed that: (1) in dry land treatments, compared with
the control, 0.22 and 13 units of soil pH and Eh values and 22.8% contents of organic carbon were reduced by E. foetida
significantly, respectively (P<0.05). In the meantime, E. foetida reduced contents of microbial biomass carbon, activities
of catalase, N⁃acetyl⁃glucosaminidase, urease and acid phosphatase by 43. 8%, 12. 4%, 48. 4%, 44. 0% and 40. 7%,
respectively, but increased FDA hydrolysis by 57.4% as well (P<0.05). Compared with the control, 16.5% reduction of
available N contents and 12.4%, 33.9% and 45.5% reduction of activities of catalase, N⁃acetyl⁃glucosaminidase and urease
were shown by A. morrisi (P<0.05). In addition, compared to A. morrisi, reductions of 0.17 and 10 units, 24.9% and 2.26
ratio of soil pH and Eh values, organic carbon content and the ratio of carbon to nitrogen were observed significantly by E.
foetida, respectively (P<0.05). Higher of soil metabolic quotient and FDA hydrolysis were shown in E. foetida than A.
morrisi treatments. (2) in paddy soil, compared with the control, 20.9% and 1.02 units increase of soil organic carbon and
C ∶N ratio were shown in E. foetida treatments significantly, but 6.11% and 33.8% decreases of total K contents and soil
respiration rate were observed as well(P<0.05). For A. morrisi treatments, 13.2% and 10.8% increases of soil available K
contents and catalase activities was observed significantly (P<0.05), but 46.7% and 34.4% decreases of β⁃glucosidase
activities and FDA hydrolysis were observed as well. Moreover, in paddy soil treatments, 15.7% and 0.84 units increase of
organic carbon contents and C ∶N ratio were shown in E. foetida than A. morrisi treatments, but 11.4%, 36.5% and 5.51%
decrease of total K contents, respiration rate and catalase activities were observed as well ( P < 0. 05). In summary,
earthworm had significant effects on the chemical and biological properties in soil amended with the paper mill sludge. In dry
land soil with higher contents of organic matter and lower contents of clay, earthworm accelerated organic matter
decomposition, released organic carbon, reduced microbial biomass and the related enzyme activities in organic matter
decomposition and nutrient transformation, but increased the potential overall microbial activity. In paddy soil with lower
contents of organic matter and higher contents of clay, earthworm contributed to soil organic carbon storage, but had less
effect on soil nutrient contents and microbial characteristics. To compare with A. morrisi, E. foetida had stronger abilities on
accelerating soil organic matter decomposition, releasing organic carbon and enhancing microbial activities in dry land soil,
but increasing organic carbon storage in paddy soil. A. morrisi had stronger ability on potassium cycling than E. foetida in
paddy soil. The paper mill sludge was rich in organic matter and poor in nutrient contents in our study. According to
proportion, other organic matters rich in nutrient contents should be chose and used together with sludge in the further
agricultural application. It is recommended that more studies should be performed in plot and field experiment according to
soil types and earthworm species as well.
Key Words: earthworm; the paper mill sludge; soil; chemical and biological properties
    造纸污泥产量大、含水量高、成分复杂,处理难
度大。 常见的污泥焚烧和填埋等处置方法不仅带来
巨大的资源浪费,也容易引起严重的环境污染。 由
于造纸污泥含有丰富的有机质、养分和微量元
素[1⁃3],而且其较低的重金属含量也不会导致污染风
险[3⁃4],因此造纸污泥作为一种良好的资源逐渐应用
5111  5期       陈旭飞  等:赤子爱胜蚓和毛利远盲蚓对添加造纸污泥土壤的化学和生物学特征的影响  
http: / / www.ecologica.cn
于农业生产。
近些年,国内外研究学者已通过蚯蚓对造纸污
泥进行生物处理、生产优质有机肥[5⁃9]。 这些研究主
要以赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)为研究对象,通过
设置蚯蚓堆制处理,探讨其吞食污泥或污泥与其他
有机废物的混合物形成的有机肥料的特征。 由于造
纸污泥能促进土壤良性结构形成[10⁃11],降低土壤酸
化和提供作物和微生物养分[12⁃13];而蚯蚓作为土壤
中“生态工程师”,对土壤结构的形成、通气和透水
性、有机物质的分解、养分转化以及微生物种群结构
和活性的变化都有重要作用[14]。 因此,将适宜种类
蚯蚓和造纸污泥直接施用于土壤具有一定的可行
性,但是目前很少研究将二者联合添加到自然土壤、
观察蚯蚓对混合污泥土壤的作用。
本研究选取华南地区典型旱地土和水稻土,并
分别混合 15%造纸污泥、在短时间内接种赤子爱胜
蚓(Eisenia foetida)和毛利远盲蚓(Amynthas morrisi)
于土壤中,进行常规室内培养。 通过研究蚯蚓活动
后土壤有机碳、全量氮磷钾养分及其速效养分、微生
物碳含量、土壤呼吸速率、微生物熵和代谢熵,过氧
化氢酶、转化酶、β⁃葡萄糖苷酶、N⁃乙酰⁃氨基葡萄糖
苷酶、脲酶、酸性和碱性磷酸酶以及荧光素二乙酸酯
酶活性的变化,探讨不同蚯蚓对不同混合造纸污泥
土壤的化学和生物学特征的影响,为进一步造纸污
泥农用提供科学参考。
1  材料与方法
1.1  供试材料
供试蚯蚓为赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)和毛利
远盲蚓(Amynthas morrisi),前者购自广州某养殖场,
后者采自广州市郊区农田土壤。 所有蚯蚓在实验室
稳定培养一周后,挑选鲜重分别约 0.3 和 0.5 g /条、
具有成熟环的健壮赤子爱胜蚓和毛利远盲蚓进行
试验。
造纸污泥取自广州造纸集团有限公司无氯漂白
污泥,两种供试土壤(旱地土和水稻土)采自广州郊
区华南农业大学教学农场。 污泥和土壤均在自然风
干后,分别研磨过 0􀆰 15mm 和 2 mm 筛备用。 过
0􀆰 15mm筛的污泥和土壤样品主要用于分析土壤基
本理化性状中总有机碳、全量氮磷钾和金属等指标。
过 2mm 筛的污泥和土壤一部分用来分析样品 pH、
Eh、速效养分等样品的基本理化性状,另一部分则用
于布置盆钵试验。
另外,造纸污泥、旱地土和水稻土的基本理化性
状如表 1所示。 其中,污泥的金属铜、锌、铅、镉含量
分别为 45.1、152、29.7 和 2.83mg / kg,低于国家农用
污泥污染物控制标准(GB 4284—84)中重金属的限
制含量 1000、200、1000和 20 mg / kg(pH>6.5土壤)。
表 1  供试造纸污泥和土壤的基本理化性质
Table 1  Basic physicochemical properties of the paper mill sludge and the parent soil
pH
粘粒含量
Clay
/ %
有机质
Organic
matter
/ (g / kg)
全氮
Total N
/ (g / kg)
全磷
Total P
/ (g / kg)
全钾
Total K
/ (g / kg)
速效磷
Available P
/ (mg / kg)
速效钾
Available K
/ (mg / kg)
造纸污泥 Paper mill sludge 7.39 261 1.35 1.68 5.09 2.62 168
旱地土 Dry land 7.87 24.0 21.1 1.79 1.53 9.33 12.6 81.0
水稻土 Paddy soil 7.10 38.7 10.4 0.887 2.06 6.85 31.9 65.0
1.2  研究方法
根据预试验结果,15%污泥添加入土壤较适宜
蚯蚓生长。 因此本研究试验共设置 6个处理:(1)混
合 15%污泥的旱地土壤对照(简写为 DL);(2)混合
15%污泥的旱地土壤+毛利远盲蚓(简写为 DL+A);
(3)混合 15%污泥的旱地土壤+赤子爱胜蚓(简写为
DL+E);(4)混合 15%污泥的水稻土壤对照(简写为
PS);(5)混合 15%污泥的水稻土壤+毛利远盲蚓(简
写为 PS+A);(6)混合 15%污泥的水稻土壤+赤子爱
胜蚓(简写为 PS+E)。 每个处理 5次重复。
称取过 2 mm 筛的造纸污泥 ( 150g) 和土壤
(850g),将二者充分混匀,装于 2 L 的塑料盆中(盆
高 20 cm,底直径 10 cm)。 调节混合土壤水分至
60%的饱和含水量。 稳定 24 h 后,根据处理布置要
求向每盆接种 6 g蚯蚓,每 3 d采用称重法调节土壤
水分含量。 整个培养试验持续时间为 30 d,培养结
束后将混合污泥土壤进行风干、过 2 mm筛、备测。
6111   生  态  学  报      34卷 
http: / / www.ecologica.cn
1.3  土壤样品的测定方法
土壤 pH和 Eh值的测定用 pH / Eh计电位法(水
土比 2.5∶1);有机质、全量和速效氮磷钾养分以及重
金属全量测定采用土壤农化常规分析法[15];土壤溶
解性碳的测定采用 K2 SO4浸提,重铬酸钾消化法
测定[16]。
土壤微生物量碳采用氯仿熏蒸⁃硫酸钾浸提
法[17]。 10g样品调至 60%田间持水量并稳定 24 h
后,在 28℃黑暗条件下培养 7 d。 用无酒精氯仿
28℃黑暗真空条件下熏蒸 24 h,与不熏蒸的对照样
品同时用 0.5mol / L K2SO4、按质量与体积比 1∶4 土液
比振荡浸提 30 min(200 r / min),5100 g 力下离心 10
min 后过滤,浸提液中的有机碳采用重铬酸钾消化
法测定。 土壤微生物量碳(Bc)按下列公式计算:Bc
= Ec / 0.38 其中,Ec 为熏蒸和不熏蒸样品的浸提液
中有机碳的差值[18]。 微生物熵通过微生物量碳与
有机碳的百分比来确定。 土壤呼吸测定采用 NaOH
吸收法,测定标准条件下微生物碳源矿化过程中
CO2的产生量[19]。 15 g样品(干重)调至 60%田间持
水量并稳定 24 h 后,在 28℃黑暗条件下 1 L 玻璃瓶
中密封培养,用 NaOH 吸收瓶中产生的 CO2,在 7 d
后用过量 1 mol / L BaCl2沉淀碱吸收瓶中的 CO2

3 ,用
标准酸滴定剩余的 NaOH 以计算 CO2产生量。 呼吸
速率为单位时间内单位有机碳含量的呼吸量;另外,
微生物代谢熵( qCO2)以单位微生物量碳每天产生
的 CO2量来确定[20⁃21]。
土壤过氧化氢酶采用 KMnO4容量法测定,酶活
性以每克土壤消耗的 KMnO4(0.02 mol / L)毫升数表
示;脲酶采用苯酚钠比色法,在 578 nm 波长处比色
测定,酶活性以 37℃恒温培养 24 h 后 1 g 土壤中
NH3⁃N的毫克数表示(NH3⁃N mg / g 土壤, 37℃, 24
h)。 转化酶采用滴定法测定,酶活性以 37℃恒温培
养 24 h后 1 g土壤消耗的 Na2S2O3(0.1 mol / L)毫升
数表示[22]。 另外,酸性和碱性磷酸酶、β⁃葡萄糖苷
酶、N⁃乙酰⁃氨基葡萄糖苷酶和荧光素二乙酸酯酶均
利用各自酶促反应试剂、采用比色法进行测定[23⁃24]:
称取 2 g样品调至 60%田间持水量并稳定 48 h,加入
3 ml蒸馏水混匀,获得样品溶液。 酸性和碱性磷酸
酶测定采用对硝基苯酚磷酸盐为酶底物,pH 5 柠檬
酸盐(酸性磷酸酶)或 pH 9 硼酸盐(碱性磷酸酶)为
缓冲液,测定在标准环境下单位土壤每小时释放对
硝基苯酚的量(μg pNP g-1 soil h-1)。 β⁃葡萄糖苷酶
和 N⁃乙酰⁃氨基葡萄糖苷酶,则分别使用 β⁃葡萄糖
苷⁃苯二酚和 N⁃乙酰⁃氨基葡萄糖苷-苯二酚作为酶
底物,以及磷酸缓冲液 (pH 5)测定对硝基苯酚的释
放量( μg pNP g-1土壤 h-1 )。 荧光素二乙酸酯酶
(FDA)利用磷酸缓冲液(pH 7.0)、在波长 490 nm 处
比色、测定荧光素的量,其酶活性单位为单位土壤每
小时产生荧光素的量(μg 荧光素-1 h-1)。
1.4  数据分析方法
试验数据均采用平均值±标准差,并利用 SAS 统
计软件 ( SAS 8. 0 Software, SAS Institute Inc.)和 R
(ADE⁃4)多元数据分析软件[25⁃26]进行分析。 其中,T
检验、方差分析和多重比较(DMRT)用于比较培养
前后蚯蚓数量和生物量变化以及不同处理间土壤各
化学和生物学指标的差异,显著性水平用 P= 0.05 表
示。 主成分分析通过在 R中导入 ADE⁃ 4软件包,将
各处理中相互关联的多个变量合成少数独立而又能
反映总体信息的指标,并应用置换检验比较不同处
理间土壤化学和生物性质综合特征的差异;多元数
据分析结果利用二维空间载荷图和得分图直观而形
象的进行反映,处理间的差异显著性水平用 P = 0.05
表示。
2  结果与分析
2.1  蚯蚓生长状况
如表 2所示,在混合污泥的旱地土和水稻土中,
蚯蚓接种 30 d 后,A. morrisi 数量分别减少 1. 67%
(P>0.05)和 11.7%(P<0.05),E. foetida 数量则分别
显著增加 19.0%和 15.0%(P<0.05)。 另外,在接种
30 d 后,在混合污泥的旱地土壤中 A. morrisi 和 E.
foetida生物量均显著增加(P<0.05);而在混合污泥
的水稻土壤中则情况相反,两种蚯蚓生物量均呈下
降趋势,特别是 A. morrisi 生物量下降达到显著水平
(P<0.05)。
2.2  蚯蚓活动后土壤化学和生物学性质分析
各处理土壤性质的主成分分析结果如图 1 所
示,第一主成分(PC1)和第二主成分(PC2)的累计方
差贡献率达到 59.4%。 主成分载荷图显示:第一主
成分(PC1)的方差贡献率为 46.3%,其分别与大多数
碳氮磷钾养分含量、呼吸速率、微生物熵、过氧化氢
酶、脲酶、N⁃乙酰⁃氨基葡萄糖苷酶、β⁃葡萄糖苷酶、
7111  5期       陈旭飞  等:赤子爱胜蚓和毛利远盲蚓对添加造纸污泥土壤的化学和生物学特征的影响  
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荧光素二乙酸酯酶活性密切相关。 第二主成分的方
差贡献率为 13.1%,其主要与微生物量碳、碱性磷酸
酶、转化酶、脲酶、N⁃乙酰⁃氨基葡萄糖苷酶、β⁃葡萄
糖苷酶活性有关。 主成分得分图显示:各处理之间
的差异达到极显著水平(P<0.001)。 两种土壤的化
学和生物学综合性质差异主要体现在第一主成分相
关指标上:PS 土壤具有较高的 Eh 值、全磷、全钾和
碱解氮含量、呼吸速率、微生物熵、N⁃乙酰⁃氨基葡萄
糖苷酶和过氧化氢酶活性,而 DL 土壤则具有较高
pH值、丰富的有机碳、全氮、速效钾含量、碳氮比、β⁃
葡萄糖苷酶、荧光素二乙酸酯酶和脲酶活性。 另外,
蚯蚓与对照处理土壤差异则主要体现在第二主成分
相关指标上:PS土壤中 E. foetida处理显著区别于对
照土壤和 A. morrisi处理;DL 土壤中 E. foetida 和 A.
morrisi处理的土壤特征差异不明显,但 A. morrisi 与
对照土壤差异较为显著(P<0.001)。
表 2  混合污泥土壤中蚯蚓的生物量和数量变化
Table 2  Variations of earthworm biomass and quantity in soil amended with the paper mill sludge
处理
Treatments
蚯蚓数量 Earthworm quantity
旱地土 /水稻土
DL / PS
(条 /盆)
0 d
旱地土
DL
(条 /盆)
30 d P
水稻土
PS
(条 /盆)
30 d P
蚯蚓生物量 Earthworm biomass
旱地土
DL
(g条 / kg土)
0 d 30 d P
水稻土
PS
(g条 / kg土)
0 d 30 d P
毛利远盲蚓 A.morrisi 12±0.00 11.8±0.447 0.374 10.6±0.894 0.025 6.29±0.114 8.27±0.363 0.000 6.17±0.250 5.36±0.451 0.034
赤子爱胜蚓 E.foetida 20±0.00 23.8±1.92 0.012 23.0±2.35 0.046 6.16±0.164 7.52±0.231 0.002 6.08±0.077 5.93±0.248 0.263
    平均值±标准差,n=5
图 1  各处理土壤化学和生物学性质的主成分分析
Fig.1  Principal Component analysis of soil chemical and biological properties in treatments
2.2.1  蚯蚓对两种添加污泥土壤化学性质的影响
在混合污泥的旱地土壤中,各处理间土壤的 pH
和 Eh值、有机碳和碱解氮含量、碳氮比差异显著(表
3)。 与对照土壤相比,E. foetida 处理的 pH 显著降
低了 0.22 个单位和 Eh 显著增加了 13 个单位,有机
碳含量降低了 22􀆰 8%;A. morrisi 处理土壤的碱解氮
含量明显降低了 16.5%。 与对照土壤相比,两种蚯
蚓处理的全氮、速效钾含量有一定程度的降低,全磷
和全钾含量有微弱上升,但这些指标处理间差异未
达到显著水平(P>0.05)。 另外,两种蚯蚓相比较,E.
foetida处理的 pH和 Eh 值、有机碳含量和碳氮比均
显著低于A.morrisi处理 0.17 和 10 个单位、24.9%和
2.26个单位(P<0.05)。
在混合污泥的水稻土壤中,各处理间土壤的有
机碳、全钾和速效钾含量、碳氮比差异显著(表 4)。
与对照土壤相比,E. foetida处理的有机碳含量显著
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3 













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3 

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21
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±1
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2.
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.2
07

8.
28
±0
.3
81
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0.
99
4±
0.
58
9a
6.
28
±0
.3
19

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28
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19
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.5
±1
.8
6a
19
2±
42
.0

DL
+ A
7.
86
±0
.1
05

- 6
1±
6a
22
.5
±2
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7a
2.
41
±0
.4
13

9.
45
±1
.4
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1.
73
±0
.2
13

6.
47
±0
.2
69

21
2±
35
.5

14
7±
18
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25
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±2
.6
6a
15
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27
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DL
+ E
7.
69
±0
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76

- 5
1±
5b
16
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36
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.1
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7.
19
±0
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87

1.
38
±0
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6.
38
±0
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22
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±2
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12
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1.
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1.
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3.
10
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0.
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2.
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.0
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9.
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+ A
7.
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4a
9.
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±0
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18

1.
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±0
.0
25

6.
44
±0
.5
11

2.
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±0
.0
63

9.
07
±0
.2
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23
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11
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18
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±2
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7a
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8a
PS
+ E
7.
30
±0
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1±
3a
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±0
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1.
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±0
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60

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±0
.5
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.2
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54
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16
.5

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±9
.0
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±2
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10
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4.
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0.
68

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0.
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0.
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0.
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0.
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0.
34

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±标


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,表























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提高 20.9%,碳氮比提高 1.02个单位,全钾含量降低
6.11%;A. morrisi处理的速效钾含量显著提高 13.2%
(P<0.05)。 与对照土壤相比,两种蚯蚓处理的全氮
和全磷含量有一定程度的提高,可溶性碳、速效磷和
碱解氮含量有微弱下降,但这些指标处理间差异未
达到显著水平(P>0.05)。 另外,两种蚯蚓相比较,E.
foetida处理的有机碳含量显著高于 A. morrisi 处理
15.7%,碳氮比高 0.84个单位,速效钾含量则显著低
于其 11.4%(P<0.05)。
2.2.2  蚯蚓对两种添加污泥土壤生物学性状的影响
在混合污泥的旱地土壤中,各处理间土壤的微
生物量碳含量、代谢熵、过氧化氢酶、N⁃乙酰⁃氨基葡
萄糖苷酶、脲酶、酸性磷酸酶和荧光素二乙酸酯酶活
性差异显著(表 5)。 与对照土壤相比,E. foetida 处
理的土壤微生物量碳含量显著降低了 43.8%,过氧
化氢酶、N⁃乙酰⁃氨基葡萄糖苷酶、脲酶和酸性磷酸
酶活性分别降低了 12.4%、48.4%、44.0%和 40.7%,
荧光素二乙酸酯酶活性增加了 57.4%;A. morrisi 处
理的土壤过氧化氢酶、N⁃乙酰⁃氨基葡萄糖苷酶和脲
酶活性分别显著降低了 12.4%、33.9%和 45.5%。 与
对照土壤相比,两种蚯蚓处理后的土壤微生物熵和
转化酶活性有一定程度的降低,但这些指标处理间
差异未达到显著水平(P>0.05)。 另外,两种蚯蚓相
比较,E. foetida处理土壤的代谢熵和荧光素二乙酸
酯酶活性显著高于 A. morrisi处理(P<0.05)。
在混合污泥的水稻土壤中,各处理之间土壤的
呼吸速率、过氧化氢酶、β⁃葡萄糖苷酶和荧光素二乙
酸酯酶活性差异显著(表 6)。 与对照土壤相比,E.
foetida处理的呼吸速率显著降低了 33.8%;A. morrisi
处理的过氧化氢酶活性显著提高 10.8%,但 β⁃葡萄
糖苷酶和荧光素二乙酸酯酶活性分别下降了 46.7%
和 34.4%(P<0.05)。 与对照土壤相比,两种蚯蚓处
理的土壤微生物量碳含量、微生物熵、代谢熵、N⁃乙
酰⁃氨基葡萄糖苷酶和酸性磷酸酶活性均有一定程
度的下降,但这些指标处理间差异未达到显著水平
(P>0.05)。 另外,两种蚯蚓相比较,E. foetida 处理
的土壤呼吸速率和过氧化氢酶活性显著低于 A.
morrisi处理 36.5%和 5.51%,而 β⁃葡萄糖苷酶活性
明显较高(P<0.05)。
3  讨论
3.1  不同土壤类型影响蚯蚓对混合污泥土壤的化
学和生物学特征的作用
本研究结果表明土壤类型是影响蚯蚓改变土壤
化学和生物学性状的决定性因素之一 (图 1,P <
0􀆰 05)。 本研究所用旱地土为高有机碳、低粘粒含量
土壤,水稻土则为低有机碳、高粘粒含量土壤。 两种
蚯蚓对混合污泥的旱地土壤化学和生物学特征的影
响均明显大于水稻土壤。 其中,与对照相比, E.
foetida活动后旱地土壤的 pH、Eh、有机碳和微生物
量碳含量、过氧化氢酶和 N⁃乙酰⁃氨基葡萄糖苷酶、
荧光素二乙酸酯酶活性等 7 个指标均有显著影响;
而在水稻土壤中,其仅对有机碳含量、碳氮比、全钾
含量和呼吸速率等 4 个指标有显著作用。 同时,与
对照相比,A. morrisi在旱地土壤中活动后,土壤碱解
氮含量、过氧化氢酶、N⁃乙酰⁃氨基葡萄糖苷酶、脲酶
活性、荧光素二乙酸酯酶活性均发生显著变化,而水
稻土壤中,该蚯蚓活动后土壤中只有速效钾含量、过
氧化氢酶活性、β⁃葡萄糖苷酶和荧光素二乙酸酯酶
活性 4个指标显著变化。 具体分析如下:
本研究结果显示蚯蚓在混合污泥的水稻土中对
pH的作用并不明显;而在混合污泥的旱地土壤中 E.
foetida活动后的 pH 降低(表 3 和表 4)。 与水稻土
相比,旱地土壤有机碳含量相对较高(表 1),蚯蚓分
解有机物质形成较多有机酸可能是造成这一现象的
原因之一[27]。 另外,目前较少研究显示蚯蚓作用后
土壤的氧化还原电位变化情况。 本研究结果显示:
与对照相比,蚯蚓活动后混合污泥的旱地土的氧化
还原电位显著降低,特别是 E. foetida 处理达到显著
水平;而在水稻土壤中这种现象并未发现。 由于氧
化还原电位与土壤通气性密切相关[28]。 本研究中
旱地土壤粘粒含量相对较少、土质疏松,土壤通气性
较好。 由于蚯蚓具有将原本疏松或紧实的土壤,通
过自身吞食和挖掘行为将其变为中间状态的能
力[29]。 因此,原本疏松的、通气性较好的旱地土壤
经蚯蚓活动后可能变的相对紧实、通气性降低,从而
使其氧化还原电位随之下降。
本研究将 E. foetida接种于土壤中发现:在原本
高有机碳含量的混合污泥旱地土壤中,该蚯蚓活动
显著降低了有机碳含量;而在相对较低有机碳含量
的混合污泥水稻土壤中,蚯蚓活动则促进了土壤有
机碳含量的升高(表 3 和表 4)。 结合前人研究:蚯
蚓在普通土壤中活动能够明显提高其有机碳含
量[30⁃31]; 但是,在蚯蚓接种于有机废弃物后,物料有
机碳含量并未升高、 反而呈现显著降低的趋
0211   生  态  学  报      34卷 
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势[6, 27, 32⁃35]。 因此,本研究得出蚯蚓可能也具有一
种能力:其在有机碳较低的基质中,能选择性吞食有
机物颗粒,提高基质中碳素的储备;但是在丰富有机
碳物质中,蚯蚓则与大量微生物联合作用,将有机物
快速分解并以 CO2形式将其释放[32, 34, 36⁃37],从而降
低其有机碳含量。 已有研究结果显示蚯蚓处理污泥
后,污泥的全氮、磷含量明显增加[6, 27, 33, 38⁃39]。 本研
究结果显示两种污泥混合土壤接种蚯蚓后其全氮和
全磷含量的变化与对照相比并不显著,两种土壤和
污泥本身较低的氮和磷含量可能是造成这种现象的
重要原因。 较多研究结果显示蚯蚓处理后的污泥全
钾含量显著增加[6, 27, 33, 38⁃39]。 而本研究结果显示蚯
蚓处理的混合污泥旱地土壤全钾变化不明显、水稻
土全钾含量显著降低。 造成这种现象的原因可能是
蚯蚓生理代谢对钾素的利用[40],Vig 等[34]也曾研究
发现 E. foetida 处理的污泥和牛粪混合物全钾含量
显著下降的现象。 前人研究结果显示经蚯蚓处理后
的污泥或有机物料的碱解氮、速效磷和速效钾含量
明显增高[9, 33, 35 ]。 而王小利等[38]和刘鸿雁等[39]研
究显示蚯蚓处理后污泥的碱解氮、速效磷、速效钾含
量呈下降趋势。 本研究结果显示两种蚯蚓处理的混
合污泥土壤碱解氮含量均呈现下降趋势,特别是旱
地土壤的碱解氮降低量达显著水平。 由于本研究所
用造纸污泥为富含大量有机质、未经腐解的物料,在
蚯蚓活动过程中,有机质的好氧分解很可能加大了
物料温度升高幅度,促进了其氨氮挥发率和硝化速
度,因此混合污泥土壤的碱解氮含量呈现下降趋
势[39]。 本研究结果显示蚯蚓对两种混合污泥土壤
的速效磷含量影响不大,而对速效钾含量的影响主
要体现在混合污泥的水稻土壤中:与对照相比,A.
morrisi处理后水稻土的速效钾含量显著增加表明了
该种蚯蚓活动促进土壤全钾向有效钾的转化能力。
Yadav 和 Garg[27]、Vig 等[34]和 Garg 等[35]研究显示
E. foetida堆制处理污泥和不同有机废弃物混合物
后,物料的碳氮比显著降低。 本研究结果显示 E.
foetida在混合污泥的旱地土壤中显著降低其碳氮
比,但是在混合污泥水稻土壤中显著增加碳氮比;而
A. morrisi则在两种土壤混合物中均有增加物料碳氮
比的趋势。 在混合物料中,蚯蚓和微生物协同作用
对有机质分解造成的碳富集或损失、氮含量降低或
增加,以及蚯蚓作用后物料的熟化度变化都可能是
造成这种现象的重要原因[34]。
与对照相比,本研究结果总体显示:蚯蚓处理两
种混合污泥土壤后,土壤微生物碳量、呼吸速率、微
生物熵和代谢熵呈下降趋势(表 5 和表 6);特别是
E. foetida处理在旱地土和水稻土中显著降低微生物
量碳含量和呼吸速率 ( P < 0. 05)。 这与 Gómez⁃
Brandón等[41]和郭瑞华等[9]研究发现 E. andrei或 E.
foetida处理的有机物料和污泥后,物料的微生物量
减少、土壤呼吸释放 CO2量显著减弱的结果相一致。
由于土壤微生物量碳和呼吸速率分别是反映微生物
量大小和微生物活性的重要指标。 因此,本研究中
较低的微生物量碳和呼吸速率可能是蚯蚓在混合污
泥土壤中吞食某些有害微生物种群而造成的[9]。
酶是土壤生物化学反应的重要参与者,它不仅
能够对土壤微生物活性有较为敏感的反应,而且能
够反映土壤碳氮磷等养分的转化和利用状况。 已有
研究结果显示,蚯蚓在土壤或有机物料中活动后土
壤酶活性呈显著增加的趋势[9,42⁃44]。 而本研究结果
显示蚯蚓处理不同类型土壤后,不同种类酶活性变
化差异较大。 在混合污泥的水稻土中,两种蚯蚓活
动均能提高过氧化氢酶活性;而在混合污泥的旱地
土中,则呈现相反的趋势(表 5 和表 6)。 由于过氧
化氢酶对不同农田土壤的有机碳和养分含量变化较
为敏感[45],因此本研究中两种土壤有机碳和养分含
量差异可能是造成过氧化氢酶活性差异的重要原
因。 β⁃葡萄糖苷酶和转化酶分别是降解纤维素和水
解蔗糖成为葡萄糖和果糖的重要酶。 在混合污泥旱
地土壤中,本研究结果显示蚯蚓对这两种酶活性的
影响与其对过氧化氢酶活性影响一致。 但是,在混
合污泥的水稻土壤中,蚯蚓的作用并没有一定的规
律,不同蚯蚓取食特性的差异很可能是造成这种现
象的原因之一。 由于过氧化氢酶、β⁃葡萄糖苷酶和
转化酶与土壤的腐殖质形成、有机质含量紧密相关,
因此上述研究结果也进一步说明蚯蚓对不同类型土
壤的碳素转化有不同作用。 N⁃乙酰⁃氨基葡萄糖苷
酶是降解几丁质和肽聚糖、水解氨基葡萄糖的酶类,
而脲酶是催化尿素水解的酶,二者均是参与土壤氮
循环的重要物质。 磷酸酶在土壤有机磷化合物水解
中起重要作用,是参与土壤磷素循环的关键酶类。
在本研究中,蚯蚓处理旱地土后,显著降低的土壤 N⁃
乙酰⁃氨基葡萄糖苷酶、脲酶、酸性磷酸酶活性可能
1211  5期       陈旭飞  等:赤子爱胜蚓和毛利远盲蚓对添加造纸污泥土壤的化学和生物学特征的影响  
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1 )








FD

/(
μg



g-

h-
1 )
DL
3.
49
±1
.18

53
6±
10
1a
2.
47
±0
.55
1a
1.
07
±0
.45
8a

1.
78
±0
.16
9a
93
.1
±2
1.
3a
4.
40
±1
.51

11
7±
22
.1

0.
33
4±
0.
05
1a
34
.5
±1
9.
4a
24
8±
58
.9

11
5±
18
.8

DL
+ A
2.
35
±0
.83
3a
45
3±
15
8a

2.
09
±0
.99
4a
0.
82
1±
0.
11
75

1.
56
±0
.10
0b
80
.5
±1
2.
1a
2.
58
±0
.93
7a
77
.3
±1
2.
1b
0.
18
2±
0.
06
7b
23
.3
±1
1.
6a
17
9±
34
.6
ab
13
6±
13
.7

DL
+ E
3.
58
±0
.36
5a
30
1±
10
3b
1.
79
±0
.59
4a
1.
53
±0
.50
9a
1.
56
±0
.11
9b
76
.0
±1
8.
4a
3.
02
±1
.78

60
.4
±1
2.
6b
0.
18
7±
0.
12
6b
43
.1
±1
0.
2a
14
7±
63
.9

18
1±
29
.7


3.
21
4.
62
1.
06
3.
93
4.
40
1.
25
2.
15
16
.1
4.
89
2.
40
4.
62
11
.9

0.
07

0.
03

0.
37

0.
04

0.
03

0.
32

0.
16

0.
00

0.
02

0.
13

0.
03

0.
00

 
 



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(n
= 5
),
























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1 )








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μg



g-

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1 )
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7.
37
±1
.05

58
9±
24
6a
6.
86
±3
.18

0.
91
1±
0.
47
5a
2.
13
±0
.04
3b
18
0±
34
.2

2.
26
±0
.72
1a
75
.0
±1
5.
3a
0.
11
5±
0.
02
5a
24
.4
±1
7.
5a
18
2±
78
.3

22
7±
43
.1

PS
+ A
7.
69
±1
.93

56
0±
13
1a
6.
19
±1
.65

0.
88
3±
0.
12
6a
2.
36
±0
.11
8a
96
.0
±2
7.
4b
2.
63
±1
.39

47
.3
±9
.49

0.
14
7±
0.
09
6a
50
.2
±2
6.
1a
15
9±
70
.3

14
9±
26
.8

PS
+ E
4.
88
±1
.10

42
3±
13
6a
4.
01
±1
.30

0.
83
7±
0.
28
5a
2.
23
±0
.07
0b
19
6±
33
.2

1.
16
±0
.47
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.2
±2
2.
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0.
07
1±
0.
02
3a
37
.6
±1
5.
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34
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18
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ab

5.
88
1.
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2.
29
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23
14
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0.
11

2.
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0.
44
7.
55

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01

0.
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0.
14

0.
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0.
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0.
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0.
07

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0.
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0.
17

0.
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0.
00

 
 



±标


(n
= 5
),
























(D
MR


)于
0.
05








2211   生  态  学  报      34卷 
http: / / www.ecologica.cn
与处理中下降的碱解氮和速效磷养分含量有一定的
关系;在水稻土壤中也呈现相似的结果,但均未达到
显著水平。 由于酶活性变化与土壤有效养分特征密
切相关[46],旱地土和水稻土中较为相似的氮磷含量
可能是造成蚯蚓处理后两种土壤氮磷转化相关的酶
类变化趋于一致的原因之一。 另外,荧光素二乙酸
酯水解酶是通过土壤中蛋白酶、脂肪酶及酯酶等水
解产生的荧光素二乙酸活性来评价微生物的总体活
性的重要酶类。 本研究结果显示两种蚯蚓在不同混
合污泥土壤中荧光素二乙酸酯水解酶活性明显不
同:在旱地土壤中,蚯蚓活动能显著增加荧光素二乙
酸酯酶活性,而在水稻土壤中则呈现相反的结果。
两种土壤有机碳和养分含量差异、微生物种群特征
差异可能是造成这种现象的重要原因,更多的相关
研究需深入进行。
3.2  蚯蚓种间差异是影响蚯蚓对混合污泥土壤化
学和生物学特征作用的重要原因
E. foetida 是一种人工养殖的表层种蚯蚓,对有
机物料的分解能力较强,也具有较高的繁殖率和较
短的代际时期,对环境的忍耐力强,适用范围较广,
因此其被广泛的应用于污泥、食物、农业废弃物的生
物处理[47]。 目前,大多数研究结果显示 E. foetida 在
处理纯污泥进程中的积极作用[5-9],但对其他种类蚯
蚓的研究则较为少见。 本研究首次引入本地种 A.
morrisi和常规人工养殖蚯蚓 E. foetida于混合造纸污
泥的土壤中进行研究。 由于 A. morrisi 是一种华南
地区本地自然生长的表-内层种蚯蚓,其主要以有机
物和土壤为主要食源。 因此,当高有机碳含量的造
纸污泥混入两种土壤中,A. morrisi 与 E. foetida 的食
性不同及在土壤中取食行为的差异成为蚯蚓影响混
合污泥土壤化学性质和生物学特征的重要原因。 在
高有机碳含量的旱地土壤中,和 A. morrisi 相比,E.
foetida处理的土壤 pH、Eh、有机碳和碳氮比较低(表
3),这种现象一定程度上再次证实了该种蚯蚓较强
的有机质吞食和分解能力,较多的有机酸生成、有机
碳以 CO2释放的形式损失是上述指标值或含量较低
的重要原因。 另外,在旱地土壤中,E. foetida 处理的
土壤的微生物代谢熵和荧光素二乙酸酯酶活性较高
(表 5),一定程度上也显示了该种蚯蚓活动对于该
土壤微生物种群,特别是年轻微生物群落活性的提
高有一定的积极作用[48]。 同样,在水稻土壤中,有
机碳含量、碳氮比、速效钾含量、呼吸速率、过氧化氢
酶和 β⁃葡萄糖苷酶活性特征变化是造成 A. morrisi
和 E. foetida 处理的混合土壤化学和生物学性质差
异的重要因素(表 4和表 6)。 E. foetida 处理相对较
高的有机碳含量、碳氮比、β⁃葡萄糖苷酶活性和较低
的呼吸速率一定程度上凸显了该蚯蚓在低有机碳含
量的水稻土中具有较强的储备有机碳能力;而 A.
morrisi 处理土壤具有较高的速效钾含量,这些现象
则表明了该蚯蚓在混合污泥水稻土壤中具有一定的
钾素养分转化能力。
4  结论
(1)蚯蚓对混合污泥土壤化学和生物学性质影
响与土壤类型密切相关。 具有高有机碳和低粘粒含
量的旱地土壤混合 15%的造纸污泥后,蚯蚓活动能
够显著降低土壤 pH 和 Eh、加速有机碳分解和减少
碳含量、减小微生物量、以及降低与土壤有机质分解
和养分转化相关的酶活性,提高微生物总体活性。
而具有低有机碳和高粘粒含量水稻土壤混合 15%造
纸污泥后,蚯蚓活动则主要作用于土壤有机碳的储
存、对养分和微生物活性的影响相对较小。
(2)本研究使用的造纸污泥为高有机碳和低养
分含量的有机物料,在土壤中添加后蚯蚓对混合污
泥土壤的作用显示:在混合污泥的高有机碳和低粘
粒含量旱地土壤中,E. foetida 对土壤有机碳分解能
力和微生物活性提高的能力显著高于 A. morrisi。 在
混合污泥的低有机碳和高粘粒含量的水稻土壤中,
E. foetida 对土壤有机碳的储存能力则显著高于 A.
morrisi,而 A. morrisi对钾素的转换能力相对较强。
综上所述,蚯蚓能显著影响混合 15%造纸污泥
土壤化学和生物学特征。 由于造纸污泥具有高有机
碳和低养分含量特征,该污泥农用仍需按一定比例
配合施用高养分有机物料。 进一步根据土壤类型、
选择适宜蚯蚓品种,进行长期小区和大田试验将更
具参考价值。
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5211  5期       陈旭飞  等:赤子爱胜蚓和毛利远盲蚓对添加造纸污泥土壤的化学和生物学特征的影响  
粤悦栽粤 耘悦韵蕴韵郧陨悦粤 杂陨晕陨悦粤 灾燥造援猿源袁晕燥援缘 酝葬则援袁圆园员源渊杂藻皂蚤皂燥灶贼澡造赠冤
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远圆猿员 摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 猿源卷摇
叶生态学报曳圆园员源年征订启事
叶生态学报曳是由中国科学技术协会主管袁中国生态学学会尧中国科学院生态环境研究中心主办的生态学
高级专业学术期刊袁创刊于 员怨愿员年袁报道生态学领域前沿理论和原始创新性研究成果遥 坚持野百花齐放袁百家
争鸣冶的方针袁依靠和团结广大生态学科研工作者袁探索生态学奥秘袁为生态学基础理论研究搭建交流平台袁
促进生态学研究深入发展袁为我国培养和造就生态学科研人才和知识创新服务尧为国民经济建设和发展服务遥
叶生态学报曳主要报道生态学及各分支学科的重要基础理论和应用研究的原始创新性科研成果遥 特别欢
迎能反映现代生态学发展方向的优秀综述性文章曰研究简报曰生态学新理论尧新方法尧新技术介绍曰新书评价和
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叶生态学报曳为半月刊袁大 员远开本袁圆愿园页袁国内定价 怨园元 辕册袁全年定价 圆员远园元遥
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渊杂匀耘晕郧栽粤陨摇 载哉耘月粤韵冤
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第 猿源卷摇 第 缘期摇 渊圆园员源年 猿月冤
粤悦栽粤 耘悦韵蕴韵郧陨悦粤 杂陨晕陨悦粤

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