全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员猿袁圆苑渊源冤院园源员愿 耀 园源圆源允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员猿冤园源鄄园源员愿鄄园苑
盐藻 悦阅孕运基因的克隆与生物信息学分析
张晓琳摇 柴晓杰摇 张摇 婷摇 余祝君摇 薛摇 飞
渊大连海洋大学 辕辽宁省海洋生物资源恢复与生境修复重点实验室 辕农业部北方海水增养殖重点实验室袁辽宁 大连摇 员员远园圆猿冤
摘摇 要院为了研究 悦阅孕运基因的结构和功能袁应用 砸栽鄄孕悦砸 和 砸粤悦耘 方法从盐藻 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 泽葬造蚤灶葬 中克隆
得到 悦阅孕运基因渊郧藻灶月葬灶噪登录号为 允匝怨远源员员猿冤袁并对其进行生物信息学分析遥 结果表明院盐藻 悦阅孕运
基因的 糟阅晕粤全长 猿 园缘圆遭责遥 缘忆鄄哉栽砸 长 苑园遭责曰开放阅读框长 员远缘园遭责袁编码 缘源怨 个氨基酸曰猿忆鄄哉栽砸 长 员
猿猿圆遭责遥 蛋白表现为弱酸性袁且稳定尧亲水袁二级结构中以无规则卷曲和 琢 原螺旋为主袁三级结构同源建
模成功遥 亚细胞定位于叶绿体和细胞核中袁无跨膜结构域袁无信号肽遥 蛋白序列中存在 源 个丝氨酸磷酸
化位点尧源 个苏氨酸磷酸化位点和 猿 个酪氨酸磷酸化位点袁蛋白激酶结构域在 缘猿 耀 猿猿员 位氨基酸处袁蛋
白激酶 粤栽孕结合域在 缘怨 耀 愿圆 位氨基酸处袁丝氨酸 辕苏氨酸蛋白激酶活性域在 员苑猿 耀 员愿缘 位氨基酸处袁源
个 耘云鄄澡葬灶凿钙结合域分别在 猿缘苑 耀 猿愿缘尧猿怨猿 耀 源圆员尧源圆怨 耀 源缘苑尧源远缘 耀 源怨猿 位氨基酸处遥 进化分析结果表
明袁克隆的 悦阅孕运基因与团藻尧衣藻尧盐藻 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 贼藻则贼蚤燥造藻糟贼葬 的 悦阅孕运 亲缘关系最近遥 为进一步研究
悦阅孕运基因的功能及探究盐藻耐盐机制的信号转导途径奠定了分子基础遥
关键词院盐藻曰钙依赖蛋白激酶渊悦阅孕运泽冤曰糟阅晕粤全长曰生物信息学分析
收稿日期院圆园员圆鄄园苑鄄园远摇 接受日期院圆园员圆鄄员员鄄圆猿
基金项目院国家自然科学基金渊猿园怨苑圆圆源园冤袁辽宁省教育厅科学技术研究项目 渊圆园园愿栽园圆猿冤
作者简介院张晓琳渊员怨愿远鄄冤袁女袁山东青岛人袁硕士研究生袁主要从事海洋生物分子生物学研究遥 栽藻造院园源员员鄄愿源苑远猿苑园怨曰耘鄄皂葬蚤造院扎曾造愿远缘苑岳 员圆远援 糟燥皂
通讯作者院柴晓杰渊员怨远猿鄄冤袁女袁吉林长春人袁博士袁教授袁主要从事海洋生物分子生物学研究遥 栽藻造院园源员员鄄愿源苑远猿苑园怨曰耘 原 皂葬蚤造院糟曾躁远猿岳 员圆远援 糟燥皂
悦造燥灶蚤灶早 葬灶凿 月蚤燥蚤灶枣燥则皂葬贼蚤糟 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 悦阅孕运 郧藻灶藻 燥枣 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 泽葬造蚤灶葬
在匀粤晕郧 载蚤葬燥鄄造蚤灶摇 悦匀粤陨 载蚤葬燥鄄躁蚤藻摇 在匀粤晕郧 栽蚤灶早摇 再哉 在澡怎鄄躁怎灶摇 载哉耘 云藻蚤
渊阅葬造蚤葬灶 韵糟藻葬灶 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠 辕 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 酝葬则蚤灶藻 月蚤燥鄄则藻泽燥怎则糟藻泽 砸藻泽贼燥则葬贼蚤燥灶 葬灶凿 匀葬遭蚤贼葬贼 砸藻责葬则葬贼蚤燥灶 蚤灶 蕴蚤葬燥灶蚤灶早
孕则燥增蚤灶糟藻 辕 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 酝葬则蚤糟怎造贼怎则藻 驭 杂贼燥糟噪 耘灶澡葬灶糟藻皂藻灶贼 蚤灶 晕燥则贼澡 悦澡蚤灶葬爷 泽 杂藻葬袁 酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻袁 阅葬造蚤葬灶袁 蕴蚤葬燥灶蚤灶早摇 员员远园圆猿冤
粤遭泽贼则葬糟贼院阅怎灶葬造蚤藻造造葬 泽葬造蚤灶葬 悦阅孕运 早藻灶藻 渊郧藻灶月葬灶噪 粤糟糟藻泽泽蚤燥灶 晕怎皂遭藻则院允匝怨远源员员猿冤 憎葬泽 糟造燥灶藻凿 遭赠 砸栽鄄孕悦砸 葬灶凿 砸粤悦耘
贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁 葬灶凿 枣怎则贼澡藻则 葬灶葬造赠扎藻凿 憎蚤贼澡 遭蚤燥蚤灶枣燥则皂葬贼蚤糟泽 葬责责则燥葬糟澡藻泽援 栽澡藻 则藻泽怎造贼 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 枣怎造造 造藻灶早贼澡 燥枣 糟阅晕粤 枣燥则
悦阅孕运 憎葬泽 猿 园缘圆遭责袁 憎澡蚤糟澡 糟燥灶贼葬蚤灶藻凿 葬 苑园遭责 缘忆 原 哉栽砸袁 葬 员 远缘园遭责 糟燥皂责造藻贼藻 燥责藻灶 则藻葬凿蚤灶早 枣则葬皂藻 藻灶糟燥凿蚤灶早 缘源怨 葬皂蚤灶燥
葬糟蚤凿泽袁 葬灶凿 葬 猿忆 原 哉栽砸 燥枣 员 猿猿圆遭责援 栽澡藻 糟燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶 憎葬泽 泽贼葬遭造藻袁 澡赠凿则燥责澡蚤造蚤糟 葬灶凿 皂蚤造凿造赠 葬糟蚤凿蚤糟袁 憎蚤贼澡 则葬灶凿燥皂
糟燥蚤造 葬灶凿 琢鄄澡藻造蚤曾 葬泽 皂葬蚤灶 糟燥皂责燥灶藻灶贼泽 蚤灶 泽藻糟燥灶凿葬则赠 泽贼则怎糟贼怎则藻袁 葬灶凿 贼澡藻 猿阅 皂燥凿藻造 憎葬泽 泽怎糟糟藻泽泽枣怎造造赠 糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿援 栽澡藻 责则燥贼藻蚤灶
造燥糟葬贼藻凿 蚤灶 糟澡造燥则燥责造葬泽贼泽 葬灶凿 灶怎糟造藻蚤 憎蚤贼澡燥怎贼 贼则葬灶泽皂藻皂遭则葬灶藻 则藻早蚤燥灶 葬灶凿 泽蚤早灶葬造 责藻责贼蚤凿藻援 栽澡藻 泽藻择怎藻灶糟藻 燥枣 责则燥贼藻蚤灶 蚤灶糟造怎凿藻凿
枣燥怎则 泽藻则蚤灶藻 责澡燥泽责澡燥则赠造葬贼蚤燥灶 泽蚤贼藻泽袁 枣燥怎则 贼澡则藻燥灶蚤灶藻 责澡燥泽责澡燥则赠造葬贼蚤燥灶 泽蚤贼藻泽 葬灶凿 贼澡则藻藻 贼赠则燥泽蚤灶藻 责澡燥泽责澡燥则赠造葬贼蚤燥灶 泽蚤贼藻泽援 粤灶凿 贼澡藻则藻
憎葬泽 葬 责则燥贼藻蚤灶 噪蚤灶葬泽藻 则藻早蚤燥灶 泽蚤贼贼蚤灶早 葬贼 缘猿则凿 贼燥 猿猿员则凿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿泽袁 葬 责则燥贼藻蚤灶 噪蚤灶葬泽藻泽 粤栽孕鄄遭蚤灶凿蚤灶早 则藻早蚤燥灶 泽责葬灶蚤灶早 枣则燥皂 缘怨则凿
贼燥 愿圆则凿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿泽袁 葬 杂藻则蚤灶藻 辕 栽澡则藻燥灶蚤灶藻 责则燥贼藻蚤灶 噪蚤灶葬泽藻泽 葬糟贼蚤增藻鄄泽蚤贼藻 糟燥灶泽蚤泽贼蚤灶早 燥枣 员苑猿则凿 贼燥 员愿缘则凿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿泽袁 葬灶凿 枣燥怎则
耘云鄄澡葬灶凿 则藻早蚤燥灶泽 凿蚤泽贼则蚤遭怎贼藻凿 蚤灶 猿缘苑则凿 贼燥 猿愿缘则凿袁 猿怨猿则凿 贼燥 源圆员则凿袁 源圆怨则凿 贼燥 源缘苑则凿袁 源远缘则凿 贼燥 源怨猿则凿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿泽援 云怎则贼澡藻则
责澡赠造燥早藻灶蚤糟 葬灶葬造赠泽蚤泽 凿蚤泽责造葬赠藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 责则燥贼藻蚤灶 澡葬凿 贼澡藻 皂燥泽贼 糟造燥泽藻泽贼 早藻灶藻贼蚤糟 则藻造葬贼蚤燥灶泽澡蚤责 憎蚤贼澡 贼澡燥泽藻 悦阅孕运 燥枣 灾燥造增燥曾 糟葬则贼藻则蚤
枣援 灶葬早葬则蚤藻灶泽蚤泽袁 悦澡造葬皂赠凿燥皂燥灶葬泽 则藻蚤灶澡葬则凿贼蚤蚤 葬灶凿 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 贼藻则贼蚤燥造藻糟贼葬援 栽澡藻 则藻泽藻葬则糟澡 造葬蚤凿 葬 枣燥怎灶凿葬贼蚤燥灶 贼燥 枣怎则贼澡藻则 泽贼怎凿赠 贼澡藻
悦阅孕运 枣怎灶糟贼蚤燥灶 葬灶凿 贼澡藻 泽蚤早灶葬造 贼则葬灶泽凿怎糟贼蚤燥灶 责葬贼澡憎葬赠 燥枣 泽葬造贼 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂 蚤灶 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 泽葬造蚤灶葬援
愿员源
摇 源 期 盐藻 悦阅孕运基因的克隆与生物信息学分析
运藻赠 憎燥则凿泽院阅怎灶葬造蚤藻造造葬 泽葬造蚤灶葬曰 悦阅孕运曰 云怎造造 蕴藻灶早贼澡 燥枣 糟阅晕粤曰 月蚤燥蚤灶枣燥则皂葬贼蚤糟 粤灶葬造赠泽蚤泽
摇 摇 盐藻 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 泽葬造蚤灶葬是一种单细胞真核绿藻袁能
够在 园援 园缘 耀 缘援 缘 皂燥造窑蕴 原员 晕葬悦造 的培养液中生存咱员暂 袁是
研究植物耐盐机制最理想的模式生物遥 近年来对盐藻
耐盐机制的研究主要集中在离子稳态咱圆 原 源暂 尧甘油调节
途径咱缘 原 愿暂及耐盐相关基因尧蛋白质的研究咱怨 原 员猿暂等方
面袁取得了一定的研究成果袁但盐藻耐盐的分子机制和
信号转导途径仍未明确咱员源暂 遥
钙依 赖 蛋 白 激 酶 渊 糟葬造糟蚤怎皂鄄凿藻责藻灶凿藻灶贼 责则燥贼藻蚤灶
噪蚤灶葬泽藻 辕 糟葬造皂燥凿怎造蚤灶鄄造蚤噪藻 凿燥皂葬蚤灶 责则燥贼藻蚤灶 噪蚤灶葬泽藻袁 悦阅孕运泽冤
是一类丝氨酸 辕苏氨酸蛋白激酶袁存在于植物尧藻类和
一些原生动物中咱员缘暂 遥 在植物的抗逆性信号转导过程
中袁悦葬圆 垣是细胞内重要的第二信使袁而钙依赖蛋白激酶
是与 悦葬圆 垣结合的蛋白激酶中非常重要的一类遥 钙依
赖蛋白激酶自 员怨愿圆 年在豌豆中发现至今袁其理化性质
和结构已基本明确遥 近年来又在拟南芥咱员远 原 员愿暂 尧普通烟
草咱员怨暂 尧龙血树咱圆园暂 尧短芒大麦咱圆员暂 尧草莓咱圆圆暂等作物中相继
克隆出 悦阅孕运基因袁对其功能的研究也逐渐深入遥 研
究表明袁悦阅孕运泽参与了逆境胁迫应答尧碳氮代谢过程尧
细胞膜系统的物质运输尧植物细胞肌动蛋白张力的调
节尧气孔开放和生长发育调节等多种 悦葬圆 垣信号转导通
路中信号的介导袁尤其是在植物对光尧温度尧触摸尧水分
胁迫和氧化胁迫等信号转导途径中起关键作用咱圆猿 原 圆缘暂 遥
因此袁研究盐藻 悦阅孕运 基因对于阐明盐藻耐盐的分子
机制和信号转导途径有重要科学价值遥
本研究从盐藻 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 泽葬造蚤灶葬中克隆得到 悦阅孕运
基因袁并对 悦阅孕运基因的序列进行生物信息学分析袁为
研究盐藻的耐盐机制和信号转导途径奠定分子生物学
基础遥
员摇 材料与方法
员援 员摇 试验材料
供试盐藻藻种由大连海洋大学水生生物学实验室
提供袁用康威试液渊晕葬悦造浓度为 猿 皂燥造窑蕴 原员冤培养曰供试
大肠杆菌渊耘援 糟燥造蚤冤菌株 阅匀缘琢由大连海洋大学海洋生
物资源恢复与生境修复重点实验室培养曰试验用
砸晕粤蚤泽燥 孕造怎泽尧责酝阅员愿 原 栽 增藻糟贼燥则尧质粒提取试剂盒尧限制
性内切酶渊月葬皂匀玉尧匀蚤灶凿 睾冤尧栽葬择 酶尧阅蕴 原 圆园园园 阅晕粤
酝葬则噪藻则等由 栽葬运葬砸葬公司提供曰粤曾赠孕则藻责 凝胶回收试剂
盒由爱思进生物技术有限公司提供曰杂酝粤砸栽栽酝 砸粤悦耘
糟阅晕粤 粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤灶 运蚤贼由 悦造燥灶贼藻糟澡公司提供遥
员援 圆摇 试验方法
员援 圆援 员摇 盐藻总 砸晕粤 的提取摇 在盐藻培养第 远 天渊处
于对数生长后期冤袁取 猿园 皂蕴 培养的盐藻细胞放入 源园
皂蕴离心管中袁在愿园园园 早窑皂蚤灶 原员条件下离心 圆皂蚤灶袁用
砸晕粤蚤泽燥 孕造怎泽试剂盒提取盐藻细胞总 砸晕粤袁并经 员豫琼
脂糖凝胶电泳检测 砸晕粤质量后待用遥
员援 圆援 圆摇 盐藻 悦阅孕运基因的扩增摇 利用 悦造怎泽贼葬造憎圆 软件
对盐藻尧衣藻和团藻的 悦阅孕运碱基序列进行同源比对袁
找出保守区袁设计一对引物 杂孕 和 粤孕渊表 员冤遥 以总
砸晕粤反转录的 糟阅晕粤 为模板袁设计的 杂孕 和 粤孕 为引
物袁在 怨源益预变性 缘皂蚤灶曰怨源益变性 猿园 泽袁缘缘益退火 猿园
泽袁苑圆益延伸 员皂蚤灶袁猿缘 个循环曰苑圆益终延伸 员园皂蚤灶 条件
下进行 孕悦砸扩增遥 扩增产物经 员援 缘豫琼脂糖凝胶电泳
分离后袁用 粤曾赠孕则藻责 凝胶回收试剂盒回收目的片段遥
将目的片段连接于 责酝阅造愿 原 栽载体渊栽 原 粤克隆冤袁转化
至大肠杆菌 阅匀缘琢 中袁并用 粤皂责 垣抗性平板筛选得到
阳性单克隆袁然后经质粒 孕悦砸和酶切鉴定得到重组克
隆遥 所得重组克隆由上海生物工程公司进行测序遥
员援 圆援 猿摇 盐藻 悦阅孕运 基因的 猿忆尧缘忆 原 砸粤悦耘 扩增摇 根据
测得的 悦阅孕运片段核苷酸序列设计 猿忆 原 砸粤悦耘 巢式引
物 猿忆郧杂孕和 猿忆晕郧杂孕渊表 员冤遥 以按照 杂酝粤砸栽藻则栽酝 砸粤悦耘
糟阅晕粤 粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 运蚤贼方法反转录的 糟阅晕粤为模板袁猿忆
郧杂孕和 哉孕酝渊表 员冤为引物进行第一轮 孕悦砸扩增袁扩增
条件院怨源益 预变性 缘皂蚤灶曰怨源益 变性 猿园 泽袁 苑圆益 退火
猿皂蚤灶袁缘 个循环曰怨源益变性 猿园 泽袁苑园益退火 猿园 泽袁苑圆益延
伸 猿皂蚤灶袁缘 个循环曰怨源益变性 猿园 泽袁远缘益退火 猿园 泽袁苑圆益
延伸 猿皂蚤灶袁圆缘 个循环曰苑圆益 延伸 员园皂蚤灶遥 将第一轮
孕悦砸产物稀释 员园 倍作为模板袁以 猿忆晕郧杂孕 和 晕哉孕渊表
员冤为引物进行第二轮 孕悦砸 扩增袁扩增条件院怨源益预变
性 缘皂蚤灶曰怨源益变性 猿园 泽袁远缘益退火 猿园 泽袁苑圆益延伸 圆皂蚤灶袁
猿缘个循环曰苑圆益延伸 员园皂蚤灶遥 将通过两次 孕悦砸 获得的
猿忆 原 砸粤悦耘扩增产物回收尧检测并测序遥 缘忆 原 砸粤悦耘 的
反转录按试剂盒说明进行袁引物设计渊表 员冤方法和扩
增条件与 猿忆 原 砸粤悦耘 相同袁只在第二轮 孕悦砸 扩增时的
退火温度因引物而异遥
员援 圆援 源 摇 盐藻 悦阅孕运 基因开放阅读框的扩增 摇 利用
阅晕粤泽贼葬则软件将中间段及 猿忆尧缘忆测序结果进行拼接袁分
析出其开放阅读框袁在开放框的外侧设计一对引物
匝杂孕和 匝粤孕渊表 员冤遥 以总 砸晕粤 反转录的 糟阅晕粤 为模
板袁匝杂孕和 匝粤孕为引物进行 孕悦砸扩增袁扩增条件院怨源益
预变性 缘皂蚤灶曰怨源益变性 猿园 泽袁缘缘益退火 猿园泽袁苑圆益延伸
圆皂蚤灶袁猿缘 个循环曰苑圆益终延伸 员园皂蚤灶遥 目的片段经回
收尧检测并测序遥
怨员源
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
表 员摇 引物序列
栽葬遭造藻 员摇 蕴蚤泽贼泽 燥枣 责则蚤皂藻则 泽藻择怎藻灶糟藻泽
引物名称 孕则蚤皂藻则 灶葬皂藻泽 引物序列渊缘忆 原 猿忆冤 孕则蚤皂藻则 泽藻择怎藻灶藻泽 用途 粤责责造蚤糟葬贼蚤燥灶
杂孕 悦栽杂粤粤郧悦悦晕郧粤砸粤粤再栽栽悦再栽 中间段上游引物
渊再 越 悦 辕 栽曰砸 越 粤 辕 郧曰晕 越 粤 辕 栽 辕 悦 辕 郧冤
粤孕 悦晕郧悦再粤砸砸粤粤再栽悦悦栽悦砸栽粤砸栽 中间段下游引物渊再 越 悦 辕 栽曰砸 越 粤 辕 郧曰晕 越 粤 辕 栽 辕 悦 辕 郧冤
哉孕酝﹡ 蕴燥灶早院 悦栽粤粤栽粤悦郧粤悦栽悦粤悦栽粤栽粤郧郧郧 猿忆袁缘忆通用引物
悦粤粤郧悦粤郧栽郧郧栽粤栽悦粤粤悦郧悦粤郧粤郧栽
杂澡燥则贼院 悦栽粤粤栽粤悦郧粤悦栽悦粤悦栽粤栽粤郧郧郧
晕哉孕﹡ 粤粤郧悦粤郧栽郧郧栽粤栽悦粤粤悦郧悦粤郧粤郧栽 猿忆袁缘忆巢式引物
猿忆郧杂孕 郧悦悦粤悦郧郧粤悦栽栽栽郧郧郧悦栽郧栽悦栽悦郧栽栽 猿忆端外侧引物
猿忆晕郧杂孕 郧郧粤悦粤粤悦粤郧悦郧郧悦粤悦粤粤栽悦栽悦栽 猿忆端内侧引物
缘忆郧杂孕 郧悦粤悦郧悦粤粤粤悦粤悦悦栽栽郧粤郧郧郧悦粤栽栽悦 缘忆端外侧引物
缘忆晕郧杂孕员 粤栽郧栽悦栽郧悦悦栽悦悦栽栽郧悦悦粤栽粤悦栽郧栽 缘忆端内侧引物 员
缘忆晕郧杂孕圆﹡ 郧悦栽悦悦粤栽郧粤悦悦粤栽郧栽郧悦粤悦郧栽粤郧 缘忆端内侧引物 圆
匝杂孕 栽粤粤粤栽郧郧郧郧栽郧栽栽悦郧郧粤悦粤郧 全长克隆上游引物
匝粤孕 栽悦悦栽粤悦悦郧栽栽悦栽悦粤粤悦悦粤悦粤郧 全长克隆下游引物
摇 摇 注院﹡ 哉孕酝尧晕哉孕由 杂酝粤砸栽栽酝 砸粤悦耘试剂盒提供遥 缘忆晕郧杂孕圆 在以 缘忆晕郧杂孕员 为引物的扩增产物序列基础上设计
晕燥贼藻院﹡ 哉孕酝 葬灶凿 晕哉孕 责则燥增蚤凿藻凿 遭赠 杂酝粤砸栽 栽酝 砸粤悦耘 运蚤贼援 缘忆晕郧杂孕圆 憎葬泽 凿藻泽蚤早灶藻凿 燥灶 贼澡藻 遭葬泽蚤泽 燥枣 贼澡藻 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 责则燥凿怎糟贼 泽藻择怎藻灶糟藻 憎蚤贼澡 缘忆 晕郧杂孕员 责则蚤皂藻则
员援 圆援 缘 摇 盐藻 悦阅孕运 基因的生物信息学分析 摇 利用
月蚤燥耘凿蚤贼软件查找 悦阅孕运 的开放式阅读框袁并翻译成氨
基酸遥 利用在线工具和相关软件对蛋白序列进行理化
性质分析院澡贼贼责院椅憎憎憎援 藻曾责葬泽赠援 燥则早 辕 孕则燥贼孕葬则葬皂咱圆远暂 曰二级
结构预测院澡贼贼责院椅憎憎憎援 责则藻凿蚤糟贼责则燥贼藻蚤灶援 燥则早曰同源建模院
澡贼贼责院椅泽憎蚤泽泽皂燥凿藻造援 藻曾责葬泽赠援 燥则早 辕 憎燥则噪泽责葬糟藻 辕 蚤灶凿藻曾 数据库
和 孕赠皂燥造软件曰亚细胞定位院澡贼贼责院椅责泽燥则贼援 澡早糟援 躁责 辕 枣燥则皂援
澡贼皂造曰跨膜区预测院憎憎憎援 糟遭泽援 凿贼怎援 凿噪 辕 泽藻则增蚤糟藻泽 辕 栽酝匀酝酝曰
信号肽预测院憎憎憎援 糟遭泽援 凿贼怎援 凿噪 辕 泽藻则增蚤糟藻泽 辕 杂蚤早灶葬造孕曰磷酸化
位点预测院澡贼贼责院椅噪蚤灶葬泽藻责澡燥泽援 皂遭糟援 灶糟贼怎援 藻凿怎援 贼憎 和结构
域分析澡贼贼责院椅憎憎憎援 藻遭蚤援 葬糟援 怎噪 辕 栽燥燥造泽 辕 责枣葬 辕 蚤责则泽糟葬灶咱圆苑暂等分析遥 利用 晕悦月陨
数据库中的 月造葬泽贼功能将目的基因编码的氨基酸序列
与 郧藻灶月葬灶噪中的氨基酸序列进行比对和相似性搜索袁
得到的相似度逸愿园豫的序列袁采用 酝耘郧粤缘 软件的邻
接归并法渊晕允法冤构建进化树袁并用自举法进行可信度
评估遥
圆摇 结果与分析
圆援 员摇 盐藻 悦阅孕运基因的克隆
圆援 员援 员摇 基因片段 摇 孕悦砸 扩增产物的电泳结果表明
渊图 员冤袁在接近 苑缘园遭责位置有一条清晰的条带渊图 员 原
葬冤袁与预计目的条带大小相符袁经测序获得一条 苑员愿遭责
的核苷酸序列遥 用 孕则蚤皂藻则 缘 软件将其翻译成氨基酸袁
在 晕悦月陨 中进行 月造葬泽贼 比对袁发现蛋白序列与团藻尧衣
藻 悦阅孕运 基因部分蛋白序列的相似度分别为 苑员豫 尧
远缘豫 袁初步确定克隆到的为盐藻 悦阅孕运 基因的保守区
片段遥
圆援 员援 圆摇 猿忆末端摇 猿忆 原 砸粤悦耘 扩增产物电泳结果显示袁
在接近 圆园园园遭责 的位置有一条预期条带渊图 员 原 遭冤袁经
测序后得到一条 员愿愿圆遭责 的核苷酸序列袁初步确定
悦阅孕运基因序列末端有 责燥造赠粤尾袁确定 猿忆扩增完成遥
圆援 员援 猿摇 缘忆末端 摇 缘忆 原 砸粤悦耘 扩增产物的电泳结果显
示袁在接近 缘园园遭责的位置显示出一条预期条带渊图 员 原
糟冤袁测序后得到一条 源源员遭责的核苷酸序列袁经分析后并
未找到准确的起始密码子袁确认为没有获得 缘忆端的全
部序列遥 在已扩出的 缘忆端序列的基础上设计引物 缘忆
晕郧杂孕圆袁与 晕哉孕 配对进行 孕悦砸 扩增袁电泳后又得到一
条接近 缘园园遭责 的条带 渊图 员 原 凿冤袁经测序后为一条
源远远遭责的核苷酸序列袁经分析初步确定已扩出准确的
悦阅孕运基因序列起始密码子遥
圆援 员援 源 摇 开放阅读框 摇 利用 月蚤燥耘凿蚤贼 软件对扩增出的
悦阅孕运基因中间片段与 猿忆末端尧缘忆末端序列进行拼接
获得一条 猿园缘圆遭责 的序列袁并分析确定其开放阅读框
渊图 圆袁起始与终止密码子用梯形框标出冤遥 用在开放
阅读框外侧设计的特异引物进行 砸栽鄄孕悦砸 扩增袁结果
园圆源
摇 源 期 盐藻 悦阅孕运基因的克隆与生物信息学分析
摇 摇 摇 摇 摇
图 员摇 盐藻 悦阅孕运基因 孕悦砸产物凝胶电泳图
云蚤早援 员摇 耘造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽 燥枣 孕悦砸 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 悦阅孕运 早藻灶藻 燥枣 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 泽葬造蚤灶葬
酝袁阅蕴圆园园园 酝葬则噪藻则曰员袁悦阅孕运基因片段的扩增产物曰圆袁猿忆 原 砸粤悦耘扩增产物曰猿袁缘忆 原 砸粤悦耘第一次扩增产物曰
源袁缘忆 原 砸粤悦耘第二次扩增产物曰缘袁悦阅孕运基因开放阅读框的扩增产物
酝袁 阅蕴圆园园园 酝葬则噪藻则曰 员袁 悦阅孕运 早藻灶藻 枣则葬早藻皂藻灶贼 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 责则燥凿怎糟贼泽曰圆袁 猿忆 原 砸粤悦耘 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 责则燥凿怎糟贼泽曰 猿袁缘忆 原 砸粤悦耘 枣则蚤泽贼 贼蚤皂藻
葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 责则燥凿怎糟贼泽曰 源袁 悦阅孕运 早藻灶藻 缘忆 原 砸粤悦耘 泽藻糟燥灶凿 贼蚤皂藻 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 责则燥凿怎糟贼泽曰 缘袁悦阅孕运 早藻灶藻 韵砸云 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 责则燥凿怎糟贼泽
图 圆摇 盐藻 悦阅孕运基因的 糟阅晕粤全序列和翻译出的氨基酸序列
云蚤早援 圆摇 晕怎糟造藻燥贼蚤凿藻 泽藻择怎藻灶糟藻 葬灶凿 凿藻凿怎糟藻凿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻 燥枣 贼澡藻 悦阅孕运 早藻灶藻 燥枣 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 泽葬造蚤灶葬
员圆源
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
检测如图 员 原 藻所示袁经测序初步确定获得了 悦阅孕运基
因序列包含开放阅读框在内的 员苑源员遭责核苷酸序列遥
圆援 圆摇 盐藻 悦阅孕运的生物信息学分析
经 月蚤燥耘凿蚤贼软件分析袁盐藻 悦阅孕运 基因的 糟阅晕粤 序
列全长为 猿园缘圆遭责袁 猿忆 原 哉栽砸渊非编码区冤长为 苑园遭责袁开
放阅读框长 员远缘园遭责袁编码 缘源怨 个氨基酸袁缘忆 原 哉栽砸 长
员猿猿圆遭责渊图 圆冤遥
蛋白的理化性质分析显示院氨基酸 缘源怨 个袁原子数
愿远源园 个袁分子式为 悦圆苑员源 匀源猿圆猿 晕苑缘怨 韵愿员缘 杂圆怨袁分子质量远员缘缘缘援 缘遥 带负电的氨基酸残基渊粤泽责 垣 郧造怎冤 愿员 个袁带
正电的氨基酸残基渊粤则早 垣 蕴赠泽冤苑缘 个袁等电点理论值 远援
猿源袁为弱酸性遥 稳定系数为 猿员援 员源袁属于稳定蛋白渊 约
源园 视为稳定冤遥 脂肪系数为 苑怨援 猿远袁总平均疏水指数 原
园援 源远员袁为亲水蛋白遥
蛋白的二级结构分析显示院肽链中含有 琢 原螺旋
猿远援 怨愿豫 袁茁 原转角 员园援 猿愿豫 袁无规则卷曲 缘圆援 远源豫 遥 以
无卷曲结构和 琢 原螺旋为主遥
蛋白的三级结构同源建模成功袁并以二级结构类
型标色渊图 猿冤遥
图 猿摇 盐藻 悦阅孕运基因的三级结构
云蚤早援 猿摇 栽澡则藻藻鄄凿蚤皂藻灶泽蚤燥灶葬造 糟燥灶泽贼蚤贼怎贼蚤燥灶
燥枣 贼澡藻 悦阅孕运 燥枣 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 泽葬造蚤灶葬
红色标注 琢 原螺旋袁黄色标注 茁 原转角袁
绿色标注无规则卷曲
匀藻造蚤曾藻泽 憎藻则藻 皂葬则噪藻凿 则藻凿袁 泽贼则葬灶凿 憎葬泽
皂葬则噪藻凿 遭赠 赠藻造造燥憎袁 造燥燥责泽 憎藻则藻 皂葬则噪藻凿 早则藻藻灶
在植物界数据库中检索袁对 悦阅孕运 蛋白进行亚细
胞定位袁结果显示院悦阅孕运蛋白主要存在叶绿体中和细
胞核中渊叶绿体基质 源怨援 猿豫 曰细胞核 猿园援 园豫 曰叶绿体的
类囊体膜 圆源援 园豫 曰叶绿体的类囊体空间 员缘援 缘豫 冤遥
跨膜结构域和信号肽预测显示院蛋白无跨膜结构袁
无信号肽遥
磷酸化位点预测显示院有 源 个丝氨酸磷酸化位点
分别在第 圆怨尧猿远源尧猿苑源尧缘源园 位氨基酸处尧源 个苏氨酸磷
酸化位点分别在第 猿愿尧猿怨尧猿猿猿尧缘员远 位氨基酸处和 猿 个
酪氨酸磷酸化位点分别在第 员圆远尧圆圆园尧源员员 位氨基酸
处遥
蛋白结构域的分析显示院缘猿 耀 猿猿员 位氨基酸处为
蛋白激酶结构域渊图 圆 下划线处冤袁粤栽孕结合域位于 缘怨
耀 愿圆 位氨基酸处渊图 圆 矩形框中冤曰丝氨酸 辕苏氨酸蛋
白激酶活性域在 员苑猿 耀 员愿缘 位氨基酸处渊图 圆 椭圆框
中冤曰悦阅孕运的 源 个 耘云 原 澡葬灶凿 钙结合域分别在 猿缘苑 耀
猿愿缘尧猿怨猿 耀 源圆员尧源圆怨 耀 源缘苑尧源远缘 耀 源怨猿 位氨基酸处渊图 圆
阴影处冤遥
悦阅孕运的进化分析显示院悦阅孕运 进化树渊图 源冤中袁
盐藻 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 泽葬造蚤灶葬 与团藻渊序列相似度 愿苑豫 冤尧衣
藻渊序列相似度 愿园豫 冤和盐藻 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 贼藻则贼蚤燥造藻糟贼葬渊序
列相似度 愿员豫 冤并为一处袁其亲缘关系最近遥
猿摇 讨论
悦阅孕运对植物抗盐胁迫有正调节的作用咱圆源袁圆愿暂 袁其
下游的信号通路与多种信号转导途径有着复杂而紧密
的联系咱圆怨暂 遥 悦阅孕运 作为一种直接受钙离子调节的蛋
白激酶袁在信号通路中处于关键位置袁获取其基因和相
关序列信息是进一步研究的基础遥 研究证明袁悦阅孕运
通常以单肽链形式存在袁结构高度保守袁从肽链的 晕
端到 悦端存在 源 个功能区结构域袁依次为可变区尧催
化区尧连接区和调控区咱圆怨暂 遥 盐藻 悦阅孕运 基因中第 缘猿
位氨基酸之前为可变区袁是 晕 端互作蛋白识别区袁也
是不同 悦阅孕运识别特定底物的依据咱猿园暂 遥 缘猿 耀 猿猿员 位氨
基酸处是蛋白激酶结构域袁为催化区袁是所有 悦阅孕运蛋
白中都具有的典型亚结构咱圆源暂 袁员苑猿 耀 员愿缘 位氨基酸处
的丝氨酸 辕苏氨酸蛋白激酶活性域处于此区域中曰猿猿圆
耀 猿缘远 位氨基酸处为连接区袁是蛋白激酶活性自抑区
域袁其序列最为保守咱圆愿暂 曰调控区在 猿缘苑 耀 源怨猿 位氨基酸
附近袁包括 猿缘苑 耀 猿愿缘尧猿怨猿 耀 源圆员尧源圆怨 耀 源缘苑尧源远缘 耀 源怨猿
个氨基酸处的 源 个手性结构域袁是钙结合区袁也是
悦阅孕运有别于其它类激酶的特有区域咱猿员暂 袁其结构和功
能类似于钙调素渊悦葬酝冤的氨基酸序列袁这是 悦阅孕运 对
悦葬圆 垣高度亲和而不依赖于钙调素的原因咱圆怨暂 遥
植物响应胁迫应答的信号通路极其复杂袁随着研
究的深入袁多种通路正在不断的完善中遥 有研究者已
经将 悦阅孕运的研究重点转向其作用底物咱猿圆暂 袁并取得了
一定的研究成果遥 但 悦阅孕运 怎样与下游蛋白互作尧与
哪些通路相关联以及应答盐胁迫的全过程等仍需进一
圆圆源
摇 源 期 盐藻 悦阅孕运基因的克隆与生物信息学分析
图 源摇 盐藻 悦阅孕运的进化树
云蚤早援 源摇 孕澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 贼则藻藻 燥枣 贼澡藻 悦阅孕运 燥枣 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 泽葬造蚤灶葬
图中用到的序列如下院盐藻袁允匝怨远源员员猿援 员曰盐藻袁粤粤云圆员园远圆援 员曰衣藻袁载孕赃员苑园猿远圆怨援 员曰团藻袁载孕赃园园圆怨缘圆缘远怨援 员曰赤藓袁粤粤月苑园苑园远援 员曰地钱袁
月粤粤愿员苑源怨援 员曰番薯袁月粤粤员猿源源园援 员曰蒺藜苜蓿袁载孕赃园园猿远圆圆愿猿苑援 员曰拟南芥袁晕孕赃员怨远苑苑怨援 员曰小立碗藓袁粤月灾圆圆缘远缘援 员曰卷柏袁载孕赃园园圆怨苑猿员员远援 员曰玉
米袁晕孕赃园园员员园缘缘源圆援 员曰马铃薯袁粤悦在圆远猿园圆援 员曰人参袁粤悦再苑愿远愿园援 员曰番茄袁晕孕赃园园员圆猿源缘愿圆援 员曰西葫芦袁粤粤月源怨怨愿源援 员曰小麦袁粤月悦缘怨远员怨援 员曰烟草袁
摇 摇 摇 粤耘再怨怨怨苑怨援 员曰毛果杨袁载孕赃园园圆圆怨怨怨苑缘援 员曰紫萍袁悦粤阅苑园员远缘援 员
栽澡藻 泽藻择怎藻灶糟藻 怎泽藻凿 蚤灶 贼澡藻 枣蚤早怎则藻 憎藻则藻 葬泽 枣燥造造燥憎泽院阅怎灶葬造蚤藻造造葬 泽葬造蚤灶葬袁允匝怨远源员员猿援 员曰阅怎灶葬造蚤藻造造葬 贼藻则贼蚤燥造藻糟贼葬袁 粤粤云圆员园远圆援 员曰悦澡造葬皂赠凿燥皂燥灶葬泽 则藻蚤灶澡葬则凿贼蚤蚤袁
载孕赃员苑园猿远圆怨援 员曰灾燥造增燥曾 糟葬则贼藻则蚤 枣援 灶葬早葬则蚤藻灶泽蚤泽袁载孕赃园园圆怨缘圆缘远怨援 员曰杂赠灶贼则蚤糟澡蚤葬 则怎则葬造蚤泽袁粤粤月苑园苑园远援 员曰 酝葬则糟澡葬灶贼蚤葬 责燥造赠皂燥则责澡葬袁月粤粤愿员苑源怨援 员曰陨责燥皂燥藻葬
遭葬贼葬贼葬泽袁月粤粤员猿源源园援 员曰 酝藻凿蚤糟葬早燥 贼则怎灶糟葬贼怎造葬袁 载孕 赃 园园猿远圆圆愿猿苑援 员曰 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬袁 晕孕 赃 员怨远苑苑怨援 员曰 孕澡赠泽糟燥皂蚤贼则藻造造葬 责葬贼藻灶泽袁 粤月灾圆圆缘远缘援 员曰
杂藻造葬早蚤灶藻造造葬 皂燥藻造造藻灶凿燥则枣枣蚤蚤袁载孕 赃园园圆怨苑猿员员远援 员曰在藻葬 皂葬赠泽袁 晕孕 赃园园员员园缘缘源圆援 员曰 杂燥造葬灶怎皂 贼怎遭藻则燥泽怎皂袁粤悦在圆远猿园圆援 员曰孕葬灶葬曾 早蚤灶泽藻灶早袁 粤悦再苑愿远愿园援 员曰
杂燥造葬灶怎皂 造赠糟燥责藻则泽蚤糟怎皂袁晕孕赃园园员圆猿源缘愿圆援 员曰悦怎糟怎则遭蚤贼葬 责藻责燥袁粤粤月源怨怨愿源援 员曰栽则蚤贼蚤糟怎皂 葬藻泽贼蚤增怎皂袁粤月悦缘怨远员怨援 员曰晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 贼葬遭葬糟怎皂袁粤耘再怨怨怨苑怨援 员曰孕燥责怎造怎泽
摇 摇 摇 贼则蚤糟澡燥糟葬则责葬袁载孕赃园园圆圆怨怨怨苑缘援 员曰蕴葬灶凿燥造贼蚤葬 责怎灶糟贼葬贼葬袁悦粤阅苑园员远缘援 员
步研究遥
源摇 结论
本研究以盐藻 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 泽葬造蚤灶葬 为试验材料袁通过
生物信息学方法找出 悦阅孕运 基因的保守序列袁采用
砸栽鄄孕悦砸和 砸粤悦耘技术等分子生物学实验手段对其同
源区和全序列进行克隆遥 得到的盐藻全长 糟阅晕粤序列
首次公布在 晕悦月陨上袁序列登陆号为 允匝怨远源员员猿遥
盐藻 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 泽葬造蚤灶葬 悦阅孕运基因序列的生物信息
学分析结果表明袁此 悦阅孕运为稳定的弱酸性亲水蛋白袁
无跨膜结构域袁无信号肽袁有多个磷酸化位点袁在细胞
内定位于叶绿体和细胞核中袁与团藻尧衣藻和盐藻
阅怎灶葬造蚤藻造造葬 贼藻则贼蚤燥造藻糟贼葬的亲缘关系最近曰同时袁还预测了
悦阅孕运蛋白的二级尧三级结构袁明确了其结构域遥 本研
究结果为进一步研究 悦阅孕运的功能和探究盐藻耐盐机
制的信号转导途径提供了一定的数据遥
参考文献院
咱 员 暂摇 周丽袁孟祥红袁刘成圣袁于乐军袁陈西广援 渗透胁迫对杜氏盐藻
胞内甘油含量及相关酶活性影响咱 允暂 援 植物学通报袁 圆园园远袁 圆猿
渊圆冤院 员源缘 原 员缘员
咱 圆 暂 摇 运葬贼扎 粤袁 孕蚤糟噪 哉援 孕造葬泽皂葬 皂藻皂遭则葬灶藻 藻造藻糟贼则燥灶 贼则葬灶泽责燥则贼 糟燥怎责造藻凿 贼燥
晕葬 垣 藻曾贼则怎泽蚤燥灶 蚤灶 贼澡藻 澡葬造燥贼燥造藻则葬灶贼 葬造早葬 阅怎灶葬造蚤藻造造葬咱允暂 援 月蚤燥糟澡蚤皂蚤糟葬 藻贼
月蚤燥责澡赠泽蚤糟葬 粤糟贼葬袁 圆园园员袁 员缘园源院 源圆猿 原 源猿员
猿圆源
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员猿袁圆苑渊源冤院园源员愿 耀 园源圆源
咱 猿 暂 摇 杂澡蚤 匀袁 蕴藻藻 月 匀袁 宰怎 杂 允袁 在澡怎 允 运援 韵增藻则藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 葬 责造葬泽皂葬
皂藻皂遭则葬灶藻 晕葬 垣 辕 匀 垣 葬灶贼蚤责燥则贼藻则 早藻灶藻 蚤皂责则燥增藻泽 泽葬造贼 贼燥造藻则葬灶糟藻 蚤灶
粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬咱允暂 援 晕葬贼怎则藻 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁 圆园园圆袁 圆员院 愿造 原 愿缘
咱 源 暂 摇 管祯玮援 盐藻钠磷共转运通道基因家族的克隆与分析咱阅暂援 上
海院上海大学袁 圆园员圆援 远
咱 缘 暂 摇 郧燥赠葬造 粤援 韵泽皂燥则藻早怎造葬贼蚤燥灶 蚤灶 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 孕葬则贼 陨陨院 孕澡燥贼燥泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 葬灶凿
泽贼葬则糟澡 糟燥灶贼则蚤遭怎贼藻 糟葬则遭燥灶 枣燥则 早造赠糟藻则燥造 泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 凿怎则蚤灶早 葬 泽葬造贼 泽贼则藻泽泽 蚤灶
阅怎灶葬造蚤藻造造葬 贼藻则贼蚤燥造藻糟贼葬 咱 允 暂 援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠 葬灶凿 月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠袁
圆园园苑袁 源缘渊怨冤院 苑园缘 原 苑员园
咱 远 暂 摇 匀藻 匝袁 匝蚤葬燥 阅袁 月葬蚤 蕴袁 在澡葬灶早 匝袁 再葬灶早 宰袁 蕴蚤 匝袁 悦葬燥 再援 悦造燥灶蚤灶早
葬灶凿 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 责造葬泽贼蚤凿蚤糟 早造赠糟藻则燥造 猿 原 责澡燥泽责澡葬贼藻
凿藻澡赠凿则燥早藻灶葬泽藻 糟阅晕粤 枣则燥皂 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 泽葬造蚤灶葬咱 允暂 援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁
圆园园苑袁 员远源渊圆冤院 圆员源 原 圆圆园
咱 苑 暂摇 赵丽娜袁 陈喜文袁 陈德富援 甘油代谢对杜氏盐藻盐耐受性的调
节咱允暂 援 生物技术通讯袁 圆园员园袁 圆圆渊猿冤院 源圆愿 原 源猿圆
咱 愿 暂摇 粤皂藻造 粤援 栽葬皂皂葬皂袁 耘皂葬灶 酝援 云葬噪澡则赠袁 酝燥泽贼葬枣葬 耘造 原 杂澡藻藻噪澡援 耘枣枣藻糟贼
燥枣 泽葬造贼 泽贼则藻泽泽 燥灶 葬灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼 泽赠泽贼藻皂 葬灶凿 贼澡藻 皂藻贼葬遭燥造蚤泽皂 燥枣 贼澡藻 则藻葬糟贼蚤增藻
燥曾赠早藻灶 泽责藻糟蚤藻泽 蚤灶 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 泽葬造蚤灶葬 葬灶凿 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 贼藻则贼蚤燥造藻糟贼葬 咱 允暂 援
粤枣则蚤糟葬灶 允燥怎则灶葬造 燥枣 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁 圆园员员袁 员园渊员怨冤院 猿苑怨缘 原 猿愿园愿
咱 怨 暂 摇 崔润丽袁 刁现民援 植物耐盐相关基因克隆与转化研究进展咱允暂 援
中国生物工程杂志袁 圆园园缘袁 圆缘渊愿冤院 圆缘 原 猿园
咱员园暂 摇 酝蚤泽澡则葬 粤袁 允澡葬 月援 陨泽燥造葬贼蚤燥灶 葬灶凿 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 藻曾贼则葬糟藻造造怎造葬则
责燥造赠皂藻则蚤糟 泽怎遭泽贼葬灶糟藻泽 枣则燥皂 皂蚤糟则燥 原 葬造早葬藻 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 泽葬造蚤灶葬 怎灶凿藻则
泽葬造贼泽贼则藻泽泽咱允暂 援 月蚤燥则藻泽燥怎则糟藻 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁 圆园园怨袁 员园园渊员猿冤院 猿猿愿圆 –
猿猿愿远
咱员员暂 摇 黄 秦袁 曹瑜袁吴鹏袁史 岩袁张书 袁乔代蓉袁曹毅援 盐生杜氏藻
猿 原磷酸甘油脱氢酶不同结构域蛋白的表达纯化及其抗体的制
备与分析咱允暂 援 应用与环境生物学报袁 圆园园怨袁 员缘渊圆冤院 圆园圆 原 圆园远
咱员圆暂 摇 悦怎蚤 蕴 匝袁 悦澡葬蚤 再 砸袁 蕴蚤 允袁 蕴蚤怎 匀 栽袁 在澡葬灶早 蕴袁 载怎藻 蕴 载援
陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 早造怎糟燥泽藻 原 远 原 责澡燥泽责澡葬贼藻 蚤泽燥皂藻则葬泽藻 蚤灶增燥造增藻凿 蚤灶
葬凿葬责贼葬贼蚤燥灶 贼燥 泽葬造贼 泽贼则藻泽泽 燥枣 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 泽葬造蚤灶葬咱 允暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 粤责责造蚤藻凿
孕澡赠糟燥造燥早赠袁 圆园员园袁 圆圆渊缘冤院 缘远猿 原 缘远愿
咱员猿 暂 摇 酝蚤泽澡则葬 粤袁 允澡葬 月援 悦造燥灶蚤灶早 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 泽葬造贼 蚤灶凿怎糟藻凿
糟阅晕粤泽 枣则燥皂 阅怎灶葬造蚤藻造造葬 泽葬造蚤灶葬 怎灶凿藻则 泽怎责藻则 泽葬贼怎则葬贼藻凿 泽葬造贼 泽贼则藻泽泽 怎泽蚤灶早
泽怎遭贼则葬糟贼蚤增藻 澡赠遭则蚤凿蚤扎葬贼蚤燥灶咱允暂 援 月燥贼葬灶蚤糟葬 酝葬则蚤灶葬袁 圆园员员袁 缘源 渊圆冤院 员愿怨
原 员怨猿
咱员源暂 摇 薛 飞袁柴晓杰袁余祝君袁 张晓琳袁张 婷援 盐藻新基因 阅泽杂栽孕运的
克隆及生物信息学分析咱 允暂 援 中国生物化学与分子生物学报袁
圆园员圆袁 圆愿渊猿冤院 圆愿怨 原 圆怨缘
咱员缘暂摇 秘彩莉袁 郭光艳袁 齐志广袁 沈银柱援植物盐胁迫的信号传导途径
咱 允暂 援 河北师范大学学报院 自然科学版袁 圆园园苑袁 猿员渊猿冤院 猿苑缘 原 猿愿园
咱员远暂摇 悦澡燥蚤 匀 陨袁 孕葬则噪 匀 允袁 孕葬则噪 允 匀袁 运蚤皂 杂袁 陨皂 酝 再袁 杂藻燥 匀 匀袁 运蚤皂 再
宰袁 匀憎葬灶早 陨袁 运蚤皂 杂 再援 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 糟葬造糟蚤怎皂 原 凿藻责藻灶凿藻灶贼 责则燥贼藻蚤灶
噪蚤灶葬泽藻 粤贼悦孕运猿圆 蚤灶贼藻则葬糟贼泽 憎蚤贼澡 粤月云源袁 葬 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶葬造 则藻早怎造葬贼燥则 燥枣
葬遭泽糟蚤泽藻泽 葬糟蚤凿 则藻泽责燥灶泽蚤增藻 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 葬灶凿 皂燥凿怎造葬贼藻泽 蚤贼泽 葬糟贼蚤增蚤贼赠
咱允暂 援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 圆园园缘袁 员猿怨渊源冤院 员苑缘园 原 员苑远员
咱员苑暂摇 酝燥则蚤 陨袁 酝怎则葬贼葬 再袁 再葬灶早 再 在袁 酝怎灶藻皂葬泽葬 杂袁 宰葬灶早 再 云袁 粤灶凿则藻燥造蚤
杂袁 栽蚤则蚤葬糟 匀袁 粤造燥灶泽燥 允 酝袁 匀葬则责藻则 允 云袁 耘糟噪藻则 允 砸袁 运憎葬噪 允 酝袁
杂糟澡则燥藻凿藻则 允 陨援 悦阅孕运泽 悦孕运远 葬灶凿 悦孕运猿 枣怎灶糟贼蚤燥灶 蚤灶 粤月粤 则藻早怎造葬贼蚤燥灶
燥枣 早怎葬则凿 糟藻造造 杂 原 贼赠责藻 葬灶蚤燥灶 原 葬灶凿 悦葬圆 垣 原 责藻则皂藻葬遭造藻 糟澡葬灶灶藻造泽 葬灶凿
泽贼燥皂葬贼葬造 糟造燥泽怎则藻咱允暂 援 孕蕴韵杂 月蚤燥造燥早赠袁 圆园园远袁 源渊员园冤院 员苑源怨 原 员苑远圆
咱员愿暂摇 在澡怎 杂 再袁 再怎 载 悦袁 宰葬灶早 载 允袁 在澡葬燥 砸袁 蕴蚤 再袁 云葬灶 砸 悦袁 杂澡葬灶早 再袁
阅怎 杂 再袁 宰葬灶早 载 云袁 宰怎 云 匝袁 载怎 再 匀袁 在澡葬灶早 载 再袁 在澡葬灶早 阅 孕援
栽憎燥 糟葬造糟蚤怎皂 原 凿藻责藻灶凿藻灶贼 责则燥贼藻蚤灶 噪蚤灶葬泽藻泽袁 悦孕运源 葬灶凿 悦孕运员员袁
则藻早怎造葬贼藻 葬遭泽糟蚤泽藻泽 葬糟蚤凿 泽蚤早灶葬造 贼则葬灶泽凿怎糟贼蚤燥灶 蚤灶 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽咱 允暂 援 孕造葬灶贼
悦藻造造袁 圆园园苑袁 员怨渊员园冤院 猿园员怨 原 猿园猿远
咱员怨暂摇 太帅帅袁 刘贯山袁 孙玉合袁 陈 珈援 普通烟草 悦阅孕运 基因家族的
克隆及表达分析咱 允暂 援 中国农业科学袁 圆园园怨袁 源圆渊员园冤院 猿远园园 原
猿远园愿
咱圆园暂 摇 张 浩袁 蔡文伟袁 张树珍袁 杨 学袁 刘 琳袁 杨本鹏援 龙血树
阅悦阅孕运圆 基因的克隆及表达分析咱允暂 援 热带作物学报袁 圆园员园袁 猿员
渊苑冤院 员员猿园 原 员员猿远
咱圆员暂摇 王呈玉袁张明哲袁 吕世友袁李彦舫援 短芒大麦钙依赖蛋白激酶基
因的克隆与功能分析咱 允暂 援 西北农林科技大学学报院 自然科学
版袁 圆园员员袁 猿怨渊圆冤院 员员员 原 员员怨
咱圆圆暂摇 王 萌袁 王俊刘洪袁 李 静袁 段 可袁 叶正文袁 高清华援 草莓钙依赖
蛋白激酶基因的克隆与表达分析咱允暂 援 西北植物学报袁 圆园员员袁 猿员
渊缘冤院 愿苑缘 原 愿愿园
咱圆猿暂摇 王娇娇袁 韩胜芳袁 李小娟袁 谷俊涛袁 路文静袁 肖 凯援 钙依赖蛋白
激酶渊悦阅孕运泽冤介导植物信号转导的分子基础咱 允暂 援 草业学报袁
圆园园怨袁 员愿渊猿冤院 圆源员 原 圆缘园
咱圆源暂摇 万丙良袁 查中萍袁 戚华雄援 钙依赖的蛋白激酶与植物抗逆性
咱允暂 援 生物技术通报袁 圆园园怨袁 员院 苑 原 员园
咱圆缘暂摇 汪 澈袁 张立军袁 樊金娟袁 阮燕晔袁 崔震海援 植物钙结合蛋白
咱允暂 援 植物生理学通讯袁 圆园园怨袁 源缘渊猿冤院 圆园怨 原 圆员远
咱圆远暂摇 魏 跃袁 王永平袁 王全智袁 史红林袁 薄凯亮袁 陈劲枫援 甜瓜属野生
种铝胁迫诱导基因 悦澡粤陨 的克隆及序列分析咱 允暂 援 核农学报袁
圆园员园袁 圆远渊源冤院 员圆愿远 原 员圆怨园
咱圆苑暂摇 周 玮袁 刘齐元袁 朱腾义袁 范东东袁 朱肖文袁 程元强援 雄性不育烟
草 葬贼责远 基因育性相关生物信息学分析咱允暂 援 核农学报袁 圆园员圆袁 圆远
渊员冤院 园园缘源 原 园园缘怨
咱圆愿暂摇 耿帅锋袁 赵永亮袁 李爱丽袁 毛龙袁 王卫国袁 李 磊援 植物钙依赖性
蛋白激酶的进化和功能研究进展咱 允暂 援 河南工业大学学报院 自
然科学版袁 圆园员园袁 猿员渊缘冤院 愿远 原 怨圆
咱圆怨暂摇 余晓丛袁 娜 仁袁 张少英援 钙信号在植物抗病性中的作用研究进
展咱允暂 援 中国农学通报袁 圆园员圆袁 圆愿渊园猿冤院 员圆 原 员远
咱猿园暂 摇 栽葬噪葬澡葬泽澡蚤 再袁 陨贼燥 栽援 杂贼则怎糟贼怎则藻 葬灶凿 枣怎灶糟贼蚤燥灶 燥枣 悦阅孕运院 葬 泽藻灶泽燥则
则藻泽责燥灶凿藻则 燥枣 糟葬造糟蚤怎皂咱 允暂 援 杂蚤早灶葬造蚤灶早 葬灶凿 悦燥皂皂怎灶蚤糟葬贼蚤燥灶 蚤灶 孕造葬灶贼泽袁
圆园员员袁 员园院 员圆怨 原 员源远
咱猿员暂摇 在澡葬灶早 匀 悦袁 再蚤灶 宰 蕴袁 载蚤葬 载 蕴援 悦葬造糟蚤灶藻怎则蚤灶 月 原 蕴蚤噪藻 枣葬皂蚤造赠 蚤灶
孕燥责怎造怎泽院 糟燥皂责葬则葬贼蚤增藻 早藻灶燥皂藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 葬灶凿 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 责葬贼贼藻则灶 怎灶凿藻则
糟燥造凿袁 凿则燥怎早澡贼 葬灶凿 泽葬造贼 泽贼则藻泽泽 贼则藻葬贼皂藻灶贼 咱 允 暂 援 孕造葬灶贼 郧则燥憎贼澡
砸藻早怎造葬贼蚤燥灶袁 圆园园愿袁 缘远院 员圆怨 原 员源园
咱猿圆 暂 摇 陨贼燥 栽袁 晕葬噪葬贼葬 酝袁 陨泽澡蚤凿葬 杂袁 栽葬噪葬澡葬泽澡蚤 再援 栽澡藻 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂 燥枣
泽怎遭泽贼则葬贼藻 则藻糟燥早灶蚤贼蚤燥灶 燥枣 悦葬圆 垣 凿藻责藻灶凿藻灶贼 责则燥贼藻蚤灶 噪蚤灶葬泽藻泽咱 允暂 援 孕造葬灶贼
杂蚤早灶葬造 葬灶凿 月藻澡葬增蚤燥则袁 圆园员员袁 远渊苑冤院 怨圆源 原 怨圆远
源圆源