全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 29(4)：556— 560 2009年 7月
葡萄糖对杜氏盐藻 3一磷酸甘油脱氢酶活性的影响
魏 娟，吕芳芳，唐欣昀 ，张海生，曹媛媛 ，赵 良侠
(安徽农业大学 生命科学学院，合肥 230036)
摘 要：杜氏盐藻是一种抗渗透能力强的单细胞绿藻，甘油在其渗透调节过程中具有重要作用。葡萄糖对杜
氏盐藻细胞数量的增加效果不明显，但对盐藻细胞内甘油积累有显著促进作用，在 0～1 5 g／L范围内葡萄糖
的浓度与胞内甘油积累显著相关(R ：0．9604，P一0．01)；葡萄糖浓度达到 15 g／L时，胞 内甘油积累量达到最
高值 7．80 pg／cell，是对照的 1．88倍，胞内甘油积累量与葡萄糖的消耗量极显著相关(R —0．9982，P=0．01)。
葡萄糖对盐藻细胞内总蛋 白、3～磷酸甘油脱氢酶(GPDH)酶活和比活都有显著影响，在 15 g／L葡萄糖时这 3
个值达到最大值，分别是对照的1．354、4．384、3．229倍。数据显示葡萄糖浓度在 15 g／L时细胞内蛋白质含
量增加不多 ，但 GPDH酶活和 比活却大幅度增加 ；葡萄糖导致的渗透压的变化可能诱导新的同功酶的合成。
关键词：杜氏盐藻；葡萄糖 ；甘油 ；3-磷酸甘油脱氢酶
中图分类号 ：Q935 文献标识码 ：A 文章编号：1000—3142(2009)04—0556—05
Effects of glu
phosphate deh
cose on activities of Glycerol_-3_·
ydrogenase of Dunaliella salina
WEI Juan，Lti Fang-Fang，TANG Xin-Yun ，ZHANG
Hal—Sheng，CAO Yuan-Yuan，ZHA0 Liang-Xia
(College of Life Sciences，Anhui Agricultural University，Hefei 230036，China)
Abstract：／9．salina is the single-cel green alga with strong anti-osmosis ability，and glycerol has the very important role
in the process of osmosis regulation．Glucose(Glu)had weak effect on the increase of cel density of D．salina，but could
obviously promote the acumulation of intracelular glycerol(Gly)of the alga，and the effect linearly correlated remarkably
with intracellular Gly eoncentration(R2一O．9604，P=0．01)，when the concentration of glucose was between O一15 g／L
Upon Glu being 15 g／L，the accumulation of intracelular Gly reached ma ximal value of 7．80 pg／cell，which was 1．88
times of the control treatment．Intracelular Gly concentration linearly correlated remarkably with the consumption of
GIu(Rz：O．9982，P=0．01)．Glu could clearly increase the intracelular protein content，activity of glycerol一3一phosphate
dehydrogenase(GPDH)，and the total amount of intracelular protein，activty of GPDH，specific activty of GPDH
reached maximal values，which were 1．354，4．384 and 3．229 times of that of control treatment，respectively，when the
concentration of Glu was at 15 g／L Data indicated that，when Glu being at 15 g／L，the amount of intracelular protein
just increased slightly，while the activty and the specific activty of GPDH increased very dramaticaly；the change of OS—
mostic pressure resulted by Glu might induced the synthesis of some new isoenzymes．
Key words：Dunaliela salina；glucose；glycerol；glycerol一3一phosphate dehydrogenase
杜氏盐藻(Dunaliella salina)具有极强的渗透调
节能力，在含 0．5~5mol／L NaC1的培养液中都能生
长，甚至在潮湿有光的盐晶体表面也能生存(Chitlaur
&Pick等，1989)。甘油是杜氏盐藻的主要渗透调节
收稿日期：2007—12—12 修回日期：2008—03—05
基金项 目：安徽省自然科学基金(2006KJ173B，2007jq1052)[Supported by Natural Science Foundation of Anhui Education Department
(2006KJ173B，2007jq1052)]
作者简介：魏娟(1982一)，女，安徽合肥人 ，硕士，从事微生物制药方面的工作。
通讯作者(Author for corresIJ0ndence，E～mail：tangxinyun@21cn．corn)
4期 魏娟等：葡萄糖对杜氏盐藻 3一磷酸甘油脱氢酶活性的影响 557
物质(陈志等，1991，1992)，该藻细胞内有一条专门的
调节渗透压的代谢途径，即甘油循环代谢途径(Ben-
amotz& Aron，1983；Gimmler& Meller，1981；Haus
＆Wegmann，1984)，对外界盐浓度变化做出迅速反
应，调节胞内甘油浓度以使细胞内外达到渗透平衡。
在甘油代谢过程中有 3个酶起到重要作用：二羟丙
酮还原酶、二羟丙酮激酶和 3一磷酸甘油脱氢酶(GP—
DH)；其中依赖于 NAD 的 GPDH酶能催化 3一磷
酸甘油和磷酸二羟丙酮之间 的平衡反应 ，是甘油代
谢途径中的第一个关键酶。3一磷酸甘油脱氢酶广泛
存在于动物、植物和微生物的细胞 中。
为弥补光自氧营养时能源和碳源的不足，藻类
能利用一些有机物进行混养生长(张义明，1999)。
异养转化不仅可以提高藻类的生长效率、降低其生
产的成本，而且还有利于藻细胞内某些代谢产物的
积累(缪晓玲等，2003)。较高的葡萄糖浓度能够提
高微生物细胞内的甘油含量(孙俊楠等，2006)，克鲁
氏假丝酵母中甘油的合成不仅受到盐浓度的调控，
同时也受到葡萄糖的诱导(王正祥等，2000)。对盐
藻及其他微生物在不同盐浓度条件下胞内甘油含量
变化及甘油代谢主要酶活性变化过程已有大量报
道，但对于葡萄糖是否可以诱导盐藻胞内甘油的大
量合成、是否对甘油代谢途径中的关键酶 3一磷酸甘
油脱氢酶具有调控作用还缺乏相关研究。本实验以
杜氏盐藻为材料，研究葡萄糖对其生长、胞内甘油及
GPDH酶活性的影响，为进一步揭示盐藻甘油代谢
机理提供参考 。
1 斌 与方法
1．1盐藻的培养
杜氏盐藻藻种为中国科学院青岛海洋所秦松博
士馈赠，经本 实验室 纯化并保存。采 用改 良的
Johnson培养基(陈志等，1992)培养杜氏盐藻；葡萄
糖添加量分别为 0、5、10、15、2O g／L；光照强度为 60
／~mol photon·m-。·s～，光暗比为 14 h：10 h，温度
27℃，接种初始密度为2．2×10。个／mL。
1．2盐藻细胞密度的测定
采用分光光度法在 430 nm测定藻液的OD值，
然后根据显微计数法所确定的细胞密度与 OD430
值之间的函数关系计算盐藻细胞密度，取 3次平行
处理测定其平均值。
1．3胞内甘油的测定
按照 Ben—Amotz& Avron(1978)的方法并稍
做修改。取 5 mL的藻液，经 3 000 rpm离心 l5
rain，去上清，加蒸馏水离心洗涤一次，去上清；在沉
淀藻泥中加入 1．5 mL蒸馏水和 0．2 mL三氯 甲烷，
8 000 g离心 20 min去除蛋白质沉淀。取 3O L上
清液，加蒸馏水至 0．2 mL，再加高碘酸钠试剂 0．2
mL，摇匀后室温静止 5 min，再加 2．5 mL乙酰丙酮
试剂 (乙酰丙酮 ：异丙醇一1：99)，迅速摇匀 ，42℃
恒温水浴 20 min，410 nm测 OD值，根据绘制的甘
油标样标准曲线计算样品中的甘油含量，取 3个平
行处理的平均值。
1．4酶的粗提
取培养12 d的藻液在 4 500×g离心收集，得鲜
重约 5 g，加 20 mL缓冲液(Tris-HC1，50 mmol／L；
Na2-EDTA，5 mmol／L；DTT，1 mmol／L；PH7．6)。
冰浴超声破碎 ，超声功率 200 W ，每次作用时间 8 S，
间隔 30 s，共作用 1O次。4℃ 40 000×g离心 30
min，取上清液作为粗提液(张学武等，1999)。
1．5酶活性的测定
磷酸二羟丙酮(DHAP)还原的反应液中包括
5O mmol／LHEPES缓 冲液 (pH7．6)、0．4 mmol／L
DHAP、0．16 mmol／L NADH、5～5O L酶液 (视酶
活力高低加适当体积)，总体积 1 mL。反应以加入
辅酶开始，反应温度为 25℃，用分光光度计在 340
am处测定单位时间内OD值的变化，取 3个平行处
理的平均值。在上述条件下，反应中每分钟还原 1
／~mol DHAP的酶量为一个酶活单位(U)(张学武
等，1999)。
1．6蛋白质含量的测定
考马斯亮蓝法测定蛋 白质含量 (李琳等，1980)。
以牛血清白蛋白为标准蛋白，取 3个平行处理的平
均值。
1．7还原糖测定
还原糖测定采用 3，5--硝基水杨酸比色法(沈
力钧，2002)。
2 结果
2．1葡萄糖盐藻生长及单个细胞内甘油积累的影响
在培养液中分别添加浓度 0、5、10、l5、20 g／L
葡萄糖，将盐藻培养 12 d后，测定藻细胞密度及甘
油含量，结果如图 1。
558 广 西 植 物 29卷
3
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葡萄糖浓度 (g／L)
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图 l 葡萄糖对盐藻生长及胞内甘油含量的影响
Fig．1 Effect of glucose on the growth and the
intracellular glycerol content of D．salina
由图 1可以看 出，葡萄糖对盐藻细胞 内甘油积
累有明显的促进作用 ，在 0～15 g／L范 围内葡萄糖
的浓度与胞 内甘油 积 累显 著相关 (Y一0．2306Z+
4．0995，R。一0．9604)，葡萄糖浓度达到 15 g／L时 ，
胞内甘油积累量达到最高值，为7．799 pg／cel，较对
照提高了88．2 ；继续增加葡萄糖浓度却不利于甘
油的增加。葡萄糖对盐藻细胞数量的增加和胞 内甘
油积累的影响不一致。低浓度的葡萄糖虽然能够促
进杜氏盐藻的生长 ，但效果不明显 ，当葡萄糖浓度为
10 g／L时，盐藻细胞 密度达最大 ，为 85．23×lO。个
／mL，仅 比对照提高 了 4．77 ，葡萄糖浓度大于 15
g／L却导致盐藻细胞数下降 。
图2显示盐藻对葡萄糖的利用情况(葡萄糖浓
度 15 g／L)。随着细胞数量 的增加 ，培养液中的甘
油浓度稳定增加，葡萄糖浓度明显下降，甘油浓度与
葡萄糖浓度极显著负相关(r一一0．879，P一0．01)，与
葡萄糖 的消耗极显 著相关 (图 1，r一0．9982，P一
0．01)。显然，盐藻细胞可以利用葡萄糖合成甘油，
进行异养生长。
2．2葡萄糖对盐藻蛋 白质含量的影响
在不同浓度的葡萄糖培养液 中蛋 白质的浓度变
化如图 3所示。从图 3可看出在浓度为 0～l5 g／L
范围内葡萄糖对细胞水溶性蛋白含量有一定促进效
应(R。=0．8962)。葡萄糖 15g／L的培养液中藻体
内蛋白质累积量 比其它处理高，最高达到 87．O3
／,g／mL，较对照提高了 36．3 9／6。葡萄糖浓度达 20
g／L时，藻体生长不旺盛，蛋白质累积量相对较低，
且低于无葡萄糖的培养液中的蛋白质含量。
2．3葡萄糖对盐藻 GPDH酶活性的影响
葡萄糖对藻体内 GPDH酶活的影响如图 3所
示。在 pH7．6时 GPDH催化磷酸二羟丙酮还原为
岛
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时间 Time(d)
图 2 盐藻的生长和对葡萄糖的利用
Fig．2 The growth of D．salina and
glucose consumption
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葡萄糖浓度(g／L)
图 3 葡萄糖对盐藻 GPDH酶活性
和胞 内蛋白质含量的影响
Fig．3 Effects of glucose on activities of GPDH and
intracellular protein content of D．salina
3一磷酸甘 油，不 同 葡萄糖 浓度处 理的盐 藻胞 内的
GPDH酶活性的大小也有 明显差异。从 图中可 以
看出 ，GPDH酶活性的变化趋势与盐藻胞 内甘油含
量的变化相似，都是当葡萄糖浓度达到 15 g／L时达
到最 大，此 时 的酶 活为 1．415 U／mL，是 对 照 的
4．398倍。
2．4葡萄糖对盐藻单个细胞 GPDH酶活和总蛋白的
的影响
将以上数据重新处理，以单个细胞的 GPDH酶
活、总蛋白及 比活(酶活／蛋白质)表达，并与对照(无
葡萄糖)相比较，结果见表 1。从表 1可看出，当葡
萄糖浓度为 15 g／I 时，单个细胞内的甘油积累量最
大，为 7．80 pg／cel，此 时的 GPDH 酶 活也达 到最
高，为0。275／*U／cel，是对照的 4．384倍。与此同
时，单个细胞的蛋白含量及比活也相应提高，分别是
对照的 1．354和 3．229倍 。而在 5 g／L和 10 g／L
葡萄糖处理的样品中，尽管甘油的含量在逐渐增加，
∞ ∞ ∞ ∞ 0
4期 魏娟等：葡萄糖对杜氏盐藻 3一磷酸甘油脱氢酶活性的影响 559
但平均每个细胞蛋白质含量、酶活的差异却不显著，
只是比活稍有增加 。
3 讨论
葡萄糖在经磷酸化和醛缩酶的作用下分解成
3一磷酸甘油醛和磷酸二 羟丙酮 ，前 者经脱 羧反应 进
入三羧酸循环或 EMP途径，后者在 NAD 依赖性
GPDH酶催化下还原为 3一磷酸甘油 ，此为进入甘油
合成分支途径中的第一步酶促反应。细胞 NAD
依赖性 GPDH 酶活水平将直接决定葡萄糖分解代
谢过程中向甘油合成方向的物质流分配量，由此也
决定甘油的生成水平 。从本实验数据可看出采用葡
萄糖对盐藻进行异养培养，对于盐 藻的细胞数量没
有明显影响，且浓度稍高即产生抑制作用；但葡萄糖
对盐藻甘油的积累具有明显作用，在 0～15 g／L范
围内葡萄糖浓度与甘油的积累呈线性相关，但达到
20 g／L这种效果下 降。本数据显示盐藻可以直接
利用葡萄糖进行异养生长、积累甘油。孙俊楠等
(2006)报道 ，在缺乏无机碳 、葡萄糖浓度为 2O 时 ，
盐藻体内甘油、蛋白质含量均达最高值，但该文没有
比较不同处理间的差异程度 ，且所用葡萄糖的浓度
液大大高于本文设计的浓度，其中差异有待进一步
的研究。Fuji(1991)采用不同无机离子模拟改变渗
透压均可诱导 Dunaliella tertiolecta合成甘油。盐
藻可以忍受较高浓度的 NaC1，本文数据显示葡萄糖
可以诱导杜氏盐藻提高细胞 内甘油的含量，但稍高
浓度的葡萄糖即对盐藻的生长产生不利的影响；而
盐藻可以利用葡萄糖进行异养生长，因此高浓度葡
萄糖对盐藻生长抑制 的原 因可能与异养条件有关 ，
显然盐藻对 NaC1和葡萄糖这两种不同物质引起的
渗透压变化的耐受机制可能是不一样的，需要设计
表 1 葡萄糖对单个细胞甘油含量、GPDH酶活性及总蛋白的影响
Table 1 Effects of glucose on glycerol，protein content and activities of GPDH of single cell of D．salina
深入的研究来揭示这种差别。
葡萄糖对盐藻细胞 内 GPDH 酶活、蛋 白质及 比
酶活的影响都在 15 g／L时达 到最大值 ，并在 lO～
15 g／L之间产生较大的变化，这种变化与葡萄糖和
甘油的浓度的变化幅度不成 比例。在 10 g／L葡萄
糖样品中 GPDH酶活、蛋白质及 比活 3个值分别是
对照的 1．649、1．104、1．439倍 ，而在 15 g／L葡萄糖
样品中这 3个值分别是对照 的 4．384、1．354、3．229
倍，可以看出细胞内蛋白质含量增加不多，但 GP—
DH酶活和比活却大幅度增加。推测可能有 3种因
素导致了细胞内甘油的大量积累：①较高浓度的葡
萄糖产生了较大的渗透压，杜氏盐藻要依靠体内的
甘油含量来调节藻体内部与外部的渗透压变化，葡
萄糖浓度增加导致 GPDH酶活性提高，促进甘油 的
合成；②葡萄糖浓度的持续上升，特别在 15 g／L葡
萄糖时，诱导新的蛋白质(同功酶)的合成(总蛋白是
对照的 1．354倍 )；③新 的同功酶具有较高的活性 ，
导致细胞内比活的大幅度提高(3．229倍)，总酶活
提高 4．384倍 。由此就出现 葡萄糖对 GPDH酶总
量的提高影响不大，但显著提高 GPDH相对酶活的
现象。在 20 g／L葡萄糖处理 的样品中也存在类似
的情况 ，虽然由于高浓度葡萄糖的抑制效应 ，细胞数
量 、总蛋 白比对照还要低 ，但酶活 、比活却均是对照
的 2．549和 2．308倍。
盐藻参与渗透调节的 GPDH存在 3个同功酶
(白林含等，1995)，分别参与高渗条件下甘油、甘油
酯和甘油磷酸酯的合成，但尚没有定量分析同功酶
的活性、含量与渗透压变化关系的报道；研究认为由
于渗透压的变化引起该酶的激活，进而导致甘油浓
度上升，而该酶的激活与培养液中渗透调节剂的种
类无关。Sadka等(1991)认为在渗透压的变化过程
中没有新的蛋白质的合成，但有证据表明新的蛋白
560 广 西 植 物 29卷
质合成受其他生理条件调节(Sadka等，1989)，并且
分离提纯出高盐诱导的 150 kD和 6O kD的蛋白质。
酿酒酵母和产甘油假丝酵母中也存在高渗胁迫诱导
GPDH酶的高效表达(Ben-Amotz{5L Avron，1978；
Sadka等，1989)。本文数据表明由葡萄糖导致的高
渗条件在杜氏盐藻中可能诱导了新的蛋白质(GP—
DH酶)的合成，需要详细的实验来分析葡萄糖对杜
氏盐藻 GPDH酶活性的调控 和诱导机理。
参考文献 ：
李琳，焦新之．1980．应用蛋白染色剂考马斯亮蓝 G-250测定蛋
白质的方法[J]．植物生理学通讯，6：52—56
沈力钧．2002．食品分析EM]．北京 ：中国轻工业出版社，173
Bai LH(白林含)．Zhou JM(周冀明)，Zhang ZQ(张兆清)，et a1．
1995．The studies on osmoregulation and isoforms of Glycorl-3一
phosphate Dehydrogenase by polylamidegel disceleetrophoresis of
Dunaliela salina(杜氏盐藻渗透调节与三磷酸甘油脱氢酶同
功酶的电泳分析)[J]．J Sichuan Univ(Nat Sci Edi)(四川1大
学学报 ·自然科学版)，32(6)：738—742
Ben-amotz A，Avron M．1983．On the factors which determine
massive carotene accumulation in the halotolerant alga Du—
naliella bardawilEJ]．Plant Physiol，72：593—597
Ben-Amotz A，Avron M．1978．On the mechanism of osmoregula—
tion in Dunaliella／／Caplan SR，Ginzburg M(eds)．Engergetics
and Structure of Halophilie Microorganisms．Elsevier／North-
Holand Biomedical Press，529——541
Chen Z(陈志)，Jiao XZ(焦新之)．1992．Regulative mechanism of
Dunaliella salina and its industrial potentiality(杜 氏藻渗透节
机制的研究及其工业应用前景 )[J]．Plant Physiol Commun
(植物生理学通讯)，28：88-93
Chen Z(陈志)，Jiao XZ(焦新之)，Liu H(刘虹)．199l_The plas-
ma membrane H+一ATPase during the osmoregulation of the al—
ga Dunaliella salina under hypertonic stress(杜 氏盐藻 质膜
ATPase在渗透调节中的可能作用)[J]．Acta Phytophysiol
Sin(植物生理学报)，17(4)：333—341
Chitlaur E。Pick U． 1989．Selection and characterization of Du-
naliela salina mutants defective in haloadaptation[J]．Plant
Physiol，91：788— 794
Fuji S．1991．The growth and intracellular ionic composition of
Dunaliella tertiolecta in Magnesium-rich mediaEJ]．Plant and
Cell Physiol，32(4)：549—554
Gimmler H，Mler E．1981．Salinty-dependent regulation of starch
and glycerol metabolism in Dunaliella parva I-J]．Plant Cel
E viron，4：367— 375
Haus M，Wegnmnn K．1984．Glycerol-3一phosphosphate dehydro-
denase(EC1．1．1．8)from Dunaliella ertiolecta 1．Purifications
and kinetic propertiesEJ-]．Physiol Plant，60
Miao XL(缪晓玲)，Wu QY(吴庆余)．2003．Exploitation of bio-
mass renewable energy sources of mierolgae(微藻生物质可再生
能源的开发利用)[J]．Renewable Energy(可再生能源)，(3)：
13— 16
Sadka A，Himmelhoch S，Zamir A．1991．A 150一kilodalton cel
surface protein is induced by salt in the halotolerant green alga
Dunaliella salina[J]．Plant Physiol，95：22—31
Sadka A。Lers A，Zamir A，et a1．1989．A critical examination of
the role of de nove protein synthesis in the osmotic adaptation of
the halotolerant alga Dunliaella[J]．Febs Letter，244：93—98
Sun JN(孙俊楠)，Zhang JA(张建安)，Yang MD(杨明德)，et a1．
2006．Efects of glucose concentration on the cultivation of Du-
nalialla salina(葡萄糖对杜氏盐藻生长转性影响的研究)[J]．
Renewable Energy(可再生能源)，4：38—41
Wang zx(王正祥)，Zhuge J(诸葛健)，Cao Y(曹钰)，et a1．2000．
The key enzymes of metabolisms of glycerol in candida glycerol—
genesis(产甘油假丝酵 母甘油 代谢关键 酶的研究)[J]．Acta
Microbiol Sin(微生物学报)，40(2)：18O一187
Zhang XW(张学武)，Liu Cx(刘承宪)．1999．Purification and cha卜
acterization of glycerol-3一phosphate dehydrogenase in Dunaliella
salina(盐生杜氏藻甘油 3一磷酸脱氢酶的分离纯化及其特性的
研究)[J]．Acta Bot Sin(植物学报)，41(3)：290-295
Zhang YM(张义 明)．1999．Estimation of heterotrophic growth
fraction in mixotrophie culture of Spirulina platensis(钝顶螺旋
藻在混合营养培养 中异养生长 能力 的估算)[J]．J Guizhou
U iv Tech(贵州工业大学学报)，28(2)：71—74
(上接第 555页 Continue from page 555)
“Gouqi”(关于中药现代化中的物种鉴定问题——基于枸杞分
类和生产问题的讨论)EJ]．Acta Bot Boreali—Occidentalia Sin
(西北植物学报)，23(7)：1 O77—1 083
Wu ZY(吴征镒)，Wang JX(王锦秀)，Tang YC(汤彦承)．2006．
Huma should be Linum usitattissimum，not Sesamum indicum
with special reference to the source of confusion of names for
traditional Chinese medicine and the writtern time and author of
Shen Nung Pen TS’ao Ching(胡麻是亚麻 ，非脂麻辨——兼论
中草药名称混乱的根源和《神农本草经》的成书年代及作者)
[J]_Acta Phytotax Sin(植物分类学报)，45(4)：458—472
Xue CY，Ho TN，Li DZ．2002a．Megasporogenesis and female ga-
metogenesis development of the Tibetan medicine“Zang Yin
Chan”Swertia mussoti[J]．Guihaia，22(3)：249—25
Xue CY(薛春迎 )，Ho TN(ig廷农)，Li DZ(李德 铢)．2002b．
Floral nectaries in Szoertia：anatomy and morphology(獐牙菜属
植物花蜜腺形态及解剖学)[J]．Acta Bot Yunnan(云南植物研
究)，24(3)：359—369
Xue CY，Li DZ，Lu JM，et a1．2006．Molecular authentication of
traditional Tibetan medicinal plant Swertia mussotii(Gentianace-
ae)[J]．Planta Med，70：1 223—1 226
Yang HL(杨慧玲)，Liu JQ(刘建全)．2005．Seed germination of
Swertia mussoti，an important application in Tibetan folk medi-
cine(重要藏药JI西獐 牙菜种 子萌发 的研究)[J]．Acta Bot
Yunnan(云南植物研究)，27(3)：295—300
Zhao ZZ．Li TYS．2004．Hongkong commonly confused Chinese
Medicines[M]．Hong Kong：Chinese Medicine Merchants Asso—
ciation I td