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Screening of High-efficiency Phosphate-solubilizing Trichoderma sp. Strains Using Ultraviolet Mutagenesis

紫外诱变选育木霉高效解磷菌株


为获得高效解磷木霉突变株,以木霉菌株T2为出发菌株进行紫外诱变处理,对紫外诱变条件进行优化,考察突变株的解磷量、植酸酶活性、生长速率、产孢量、遗传稳定性和拮抗能力。结果表明,最佳诱变条件为照射强度20 W,照射时间40 min,照射距离30 cm;在此条件下得到一株具备高效解磷能力的突变株T2-8。该菌株15d的解磷量和植酸酶活性分别达到193.36 μg ·mL-1和784.35 nmol ·L-1,较出发菌株(90.01 μg ·mL-1和335.22 nmol ·L-1)分别提高了114.82%和133.98%,9 d的生长速率和产孢量分别为35.42 mm ·d-1和8.25×109CFU ·mL-1,高于出发菌株,多次传代试验证明,T2-8解磷能力稳定,对尖孢镰刀菌和立枯丝核菌的拮抗能力与出发菌株无显著差异。说明紫外光诱变方法是木霉高效解磷菌株选育过程中一种有价值的菌株改良技术,获得的突变菌株为进一步开发多功能微生物肥料提供了优良材料。


全 文 :摇 核 农 学 报摇 圆园员缘袁圆怨渊愿冤院员缘园怨 耀 员缘员远允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员缘鄄园员鄄园怨摇 接受日期院圆园员缘鄄园源鄄圆苑
基金项目院甘肃省高校基本科研业务费渊甘财教 咱圆园员圆暂员圆怨 号冤袁甘肃省教育厅高校科研项目渊圆园员猿粤 原 园远员冤袁甘肃省自然科学基金项目
渊员源缘砸允在粤园怨缘冤袁甘肃农业大学科技创新基金资助项目渊郧粤哉鄄悦载员园员源冤
作者简介院薛应钰袁男袁副教授袁主要从事植物病理学和生防制剂研究遥 耘鄄皂葬蚤造院曾怎藻赠赠岳 早泽葬怎援 藻凿怎援 糟灶
通讯作者院徐秉良袁女袁教授袁主要从事植物免疫学和生防制剂研究遥 耘鄄皂葬蚤造院曾怎遭造岳 早泽葬怎援 藻凿怎援 糟灶
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员缘冤园愿鄄员缘园怨鄄园愿
紫外诱变选育木霉高效解磷菌株
薛应钰摇 叶摇 巍摇 张树武摇 徐秉良摇 杨百昶
渊甘肃农业大学草业学院 辕草业生态系统教育部重点实验室 辕甘肃省草业工程实验室 辕
中 原美草地畜牧业可持续发展研究中心袁甘肃 兰州摇 苑猿园园苑园冤
摘摇 要院为获得高效解磷木霉突变株袁以木霉菌株 栽圆 为出发菌株进行紫外诱变处理袁对紫外诱变条件进
行优化袁考察突变株的解磷量尧植酸酶活性尧生长速率尧产孢量尧遗传稳定性和拮抗能力遥 结果表明袁最佳
诱变条件为照射强度 圆园 宰袁照射时间 源园 皂蚤灶袁照射距离 猿园 糟皂曰在此条件下得到一株具备高效解磷能力
的突变株 栽圆 原 愿遥 该菌株 员缘凿的解磷量和植酸酶活性分别达到 员怨猿郾 猿远 滋早窑皂蕴 原员和 苑愿源郾 猿缘 灶皂燥造窑蕴 原员袁较
出发菌株渊怨园郾 园员 滋早窑皂蕴 原员和 猿猿缘郾 圆圆 灶皂燥造窑蕴 原员冤分别提高了 员员源郾 愿圆豫和 员猿猿郾 怨愿豫 袁怨 凿的生长速率和产
孢量分别为 猿缘郾 源圆 皂皂窑凿 原员和 愿郾 圆缘 伊 员园怨悦云哉窑皂蕴 原员袁高于出发菌株袁多次传代试验证明袁栽圆 原 愿 解磷能力
稳定袁对尖孢镰刀菌和立枯丝核菌的拮抗能力与出发菌株无显著差异遥 说明紫外光诱变方法是木霉高
效解磷菌株选育过程中一种有价值的菌株改良技术袁获得的突变菌株为进一步开发多功能微生物肥料
提供了优良材料遥
关键词院木霉曰紫外光曰诱变育种曰解磷量
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员缘郾 园愿援 员缘园怨
摇 摇 磷是植物生长发育所必需的营养元素袁它对农作
物的生长发育尧产量构成和品质提高有重要意义遥 施
用磷肥渊包括有机和化学磷肥冤是土壤磷的主要来源袁
但是袁施入的磷肥当季作物利用率为 缘豫 耀 圆缘豫 袁大部
分形成难溶性磷酸盐渊无效态冤积累在土壤中袁很难被
植物直接吸收利用咱员暂 遥 土壤有效磷的缺乏是限制植
物生长的主要因素之一咱圆暂 袁提高磷的利用率已经成为
目前我国农业生产中亟待解决的主要问题袁解磷微生
物渊 责澡燥泽责澡葬贼藻鄄泽燥造怎遭造藻 皂蚤糟则燥燥则早葬灶蚤泽皂泽袁孕杂酝泽冤的研究为
解决这一问题提供了新的途径遥
木霉渊栽则蚤糟澡燥凿藻则皂葬 泽责责援 冤是土壤中广泛存在并且
具有生防潜力的一类丝状真菌袁在生产上已经广泛应
用袁并且明确了一些防治机理袁如寄生尧竞争尧拮抗和诱
导抗性等咱猿 原 源暂 遥 近年来袁木霉菌的研究与开发向多功
能方向发展袁尤其是解磷作用的研究袁正在引起人们的
高度重视袁但是自然界中木霉菌本身解磷能力一般不
强袁加之由于筛选技术的缺陷等原因袁自然状态下很难
得到高效解磷木霉菌株咱缘暂 遥 因此袁提高野生木霉菌株
的解磷能力和进行菌株改良对创造多功能菌种具有重
要的现实意义遥
微生物菌株改良的手段主要有诱变育种尧原生质
体融合和遗传改造咱远 原 苑暂 遥 其中诱变育种技术是提高菌
株生产能力的重要手段袁尤其在菌种遗传背景不是很
清楚的情况下袁物理或化学诱变方法可选育多种优良
突变体和新的有益基因类型咱愿 原 怨暂 遥 紫外线诱变作为经
典的诱变技术袁是一种简便尧实用尧应用广泛的菌种改
良方法袁其主要原理是紫外线线照射能引起 阅晕粤链上
的碱基之间形成嘧啶二聚体袁结构发生改变袁阻碍碱基
正常配对袁阻碍 阅晕粤 的复制或引起碱基排列次序的变
化袁导致遗传基因发生变异袁从而创造新基因引起体内
生化途径的改变袁产生新型菌株咱员园暂 遥 但直到 圆园 世纪
愿园 年代袁诱变育种技术才真正用于木霉研究袁现在对
于木霉菌的紫外诱变取得了一定进展袁周乐聪咱员员暂分析
了木霉紫外线突变株的水解酶活性变化袁发现突变株
怨园缘员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
的几丁质酶活性和 茁 原 员袁猿 葡聚糖酶活性比野生型菌
株有明显提高袁对病原菌的拮抗作用显著增强曰尹婷
等咱员圆暂通过紫外诱变亲本菌株 栽圆 筛选出了 源 株对速克
灵抗药性较强的菌株院栽圆 原 员尧栽圆 原 圆尧栽圆 原 缘 和 栽圆 原 远曰
高晗旸等咱员猿暂以绿色木霉菌株为出发菌株袁通过紫外诱
变筛选出纤维素酶产量高且具有遗传稳定性的突变菌
株 在袁由此可见袁木霉诱变的目标主要集中于拮抗能
力尧分解纤维素能力和耐药性方面的研究袁但是袁通过
紫外诱变进行木霉高效解磷菌株的选育鲜见报道遥
本试验以甘肃农业大学植物病理实验室分离保存
的 员 株具有较强拮抗能力但解磷能力相对较弱的木霉
栽圆 菌株为出发菌株进行紫外渊哉灾冤诱变袁并研究其突
变菌株的遗传稳定性袁以期获得高效解磷的木霉突变
菌株遥 研究结果可为开发微生物肥料袁提高肥料利用
率袁减轻或免除肥料污染袁发展可持续尧高效农业提供
一定的理论依据遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 供试菌株
木霉渊栽则蚤糟澡燥凿藻则皂葬 泽责援 冤菌株 栽圆袁由甘肃农业大学
植物病原学实验室保存遥
员郾 圆摇 培养基及培养条件
员郾 圆郾 员摇 孕阅粤培养基摇 马铃薯 圆园园郾 园早曰葡萄糖 圆园郾 园早曰
琼脂 员愿郾 园早曰蒸馏水定容至 员 园园园 皂蕴遥
员郾 圆郾 圆摇 解磷培养基渊晕月砸陨孕 培养基冤 摇 渊 晕匀源 冤圆杂韵源园郾 缘 早袁晕葬悦造 园郾 猿 早袁运悦造 园郾 猿 早袁酝早杂韵源 窑苑匀圆韵 园郾 猿 早袁云藻杂韵源 窑 苑匀圆韵 园郾 园猿 早袁 酝灶杂韵源 窑 源匀圆韵 园郾 园猿 早袁 悦葬猿渊孕韵源冤圆 缘 早袁葡萄糖 员园郾 园早袁责匀 值 苑郾 园 耀 苑郾 缘袁固体培养
基加 圆豫的琼脂粉袁员员缘益 灭菌 猿园皂蚤灶备用遥
员郾 猿摇 试验方法
员郾 猿郾 员摇 分生孢子悬浮液的制备摇 将木霉菌株 栽远 活化
并进行扩大培养袁接到 孕阅粤 平板培养基上袁圆愿益培养
缘 凿待产生大量的绿色分生孢子后袁加灭菌生理盐水遥
用无菌毛刷洗涤袁盛入 缘园 皂蕴三角瓶中袁加 员 滴分散剂
并置于摇床上振荡 员园 皂蚤灶 后取出袁用无菌纱布过滤除
去菌丝制成分生孢子悬浮液袁用血球计数板在显微镜
下测定悬浮液孢子浓度袁制成浓度为到 造 伊 员园愿
悦云哉窑皂蕴 原员分生孢子悬浮液袁备用遥
员郾 猿郾 圆摇 紫外渊哉灾冤诱变处理摇 用无菌生理盐水稀释分
生孢子悬浮液袁通过镜检调节孢子浓度为 员园圆 耀 员园源
悦云哉窑皂蕴 原员袁然后取 园郾 圆皂蕴 均匀地涂布于 孕阅粤 平板袁
在室温条件下进行紫外诱变遥 诱变前先打开紫外灯预
热 猿园皂蚤灶袁然后将涂有分生孢子悬浮液的 孕阅粤 平板培
养皿去掉盖子置于 圆园宰紫外灯下照射袁照射的距离分
别为 员园尧圆园尧猿园尧源园 糟皂袁照射时间分别为 员园尧圆园尧猿园尧源园尧
缘园尧远园 皂蚤灶袁共 圆源 个处理袁每个处理 猿 个重复袁处理后
立即用牛皮纸把平板包好袁遮光袁并放入 圆缘益的恒温
箱中黑暗培养袁远凿后统计平板上生长菌落数遥 以不经
过紫外线处理袁直接在室温条件下培养的分生孢子
孕阅粤平板为对照遥 统计单菌落数尧单菌落直径袁分别
计算致死率和正突变率袁确定最佳诱变条件遥
致死率 越 渊对照菌落数 原处理菌落数冤 辕对照菌落
数 伊员园园豫 遥
正突变率 越菌落直径大于对照菌株菌落的突变株
数目 辕突变株总数 伊员园园豫
员郾 猿郾 猿摇 突变株的初筛和复筛摇 将分生孢子悬浮液均匀
涂布在 孕阅粤平板上袁置于最佳诱变条件下对出发菌株
进行紫外诱变处理袁处理后黑暗培养 缘凿后袁将获得的菌
落直径比出发菌株直径大的菌株菌落用打孔器打成 凿
越远皂皂的菌饼袁转接于解磷固体培养基表面袁每个菌株
重复 猿次袁圆缘益下恒温培养 愿凿袁测定各自的解磷圈直径
渊阅忆冤和其菌落直径渊阅冤袁以解磷圈直径渊阅忆冤与其菌落直
径渊阅冤比值大于 员郾 猿袁作为初筛标志进行解磷突变株的
初筛遥 将初筛获得的突变菌株配制成浓度为 员园远
悦云哉窑皂蕴 原员的孢子悬浮液袁取 员皂蕴孢子悬浮液接种于盛
有 晕月砸陨孕液体培养基三角瓶中袁置于 圆愿益袁员缘园 则窑皂蚤灶 原员
摇床震荡培养 员缘凿后测定解磷量和植酸酶活性遥
员郾 猿郾 源摇 解磷量的测定 摇 采用磷钒钼黄比色法咱员源暂测
定袁标准曲线绘制院取标准磷酸溶液 园尧员园尧圆园尧源园尧愿园尧
员园园滋蕴放入试管中袁加水至 圆郾 缘皂蕴袁每管加入颜色终止
液 圆郾 园皂蕴袁摇匀袁猿苑益水浴加热 猿园 皂蚤灶袁使之充分显色袁
冷却后袁于 源员缘灶皂 处用分光光度计测定袁并记录吸光
度遥 以吸光度为横坐标袁相应的标准液的磷含量为纵
坐标袁绘制磷标准曲线遥 将菌液 远 园园园 则窑皂蚤灶 原员离心 猿园
皂蚤灶袁吸取上清液 员 皂蕴袁加入准备好的试管中袁另准备 员
支试管加入蒸馏水 员皂蕴做对照袁再向试管中加入 圆皂蕴
水袁圆皂蕴反应终止液袁摇匀后 猿苑益水浴加热 造园皂蚤灶袁测
定 驻韵阅源员缘袁每个处理隔 缘泽测量 员 次袁共测 远 次袁取平均
值遥 驻韵阅源员缘 越样品 驻韵阅源员缘 原对照 驻韵阅源员缘遥 根据标准
曲线方程计算出菌液中可溶性磷的含量遥
员郾 猿郾 缘摇 植酸酶活性测定摇 参照乔欢等咱员缘暂的方法袁略
作修改遥 取适量发酵液袁缘 园园园 则窑皂蚤灶 原员离心 员园皂蚤灶袁上
清液即为粗酶液遥 将酶液进行适当稀释后袁取 园郾 圆 皂蕴
加入 园郾 远 皂蕴 责匀 值 缘郾 缘袁园郾 圆缘 皂燥造窑蕴 原员乙酸缓冲液袁在
猿苑 益保温 缘 皂蚤灶 后加入 愿郾 源 早窑蕴 原员植酸钠 员郾 远 皂蕴袁继
续保温 猿园 皂蚤灶袁加入颜色 辕终点混合液 员郾 远 皂蕴袁用上海
悦丰仪器仪表有限公司生产的 苑圆圆 原 耘 型分光光度计
园员缘员
摇 愿 期 紫外诱变选育木霉高效解磷菌株
于 源员缘 灶皂处测定光密度值遥 对照为在 园郾 圆皂蕴 酶液加
入 园郾 远皂蕴 乙酸缓冲液后袁再加入 员郾 远 皂蕴颜色 辕终点混
合液袁最后加入底物遥 植酸酶活性单位定义院在 猿苑 益
责匀值 缘郾 缘 的条件下袁每分钟从底物释放 员 灶皂燥造 无机
磷所需要的植酸酶量袁用 灶皂燥造窑泽 原员表示遥
员郾 猿郾 远摇 木霉突变菌株生长速率及产孢能力测定摇 将
经紫外线诱变的木霉菌株分别接种在 孕阅粤平板中央袁
于 圆缘益恒温黑暗培养袁用十字交叉法分别于 缘尧苑尧怨 凿
测量菌落直径袁计算菌落生长速率曰并用无菌水轻轻洗
刷 孕阅粤表面绿色孢子放入 员园园 皂蕴盛有无菌水的三角
瓶中袁在 圆园园 则窑皂蚤灶 原员的摇床上振荡 圆园皂蚤灶袁然后用血球
计数板测量孢子数遥 每处理重复 猿 次袁并以出发菌株
作为对照遥
生长速率 越平均菌落直径 辕生长时间遥
员郾 猿郾 苑摇 解磷突变菌株遗传稳定性测定 摇 将得到的 圆
株诱变效果较好的木霉突变菌株分别接种于 孕阅粤 培
养基上袁圆缘益培养 猿凿记为第 员 代袁之后袁每间隔 猿凿袁以
孕阅粤培养基传代 员 次袁分别接种于接种 晕月砸陨孕 培养基
培养 员源凿袁共传代 苑 次袁测定每代各菌株的解磷圈直
径尧溶磷量和植酸酶活性遥
员郾 猿郾 愿摇 突变菌株拮抗试验摇 将木霉亲本菌株和遗传稳
定的突变菌株 栽圆 原 愿 分别与尖孢镰刀菌和立枯丝核菌
对峙接种于 孕阅粤平板袁菌块直径 远 皂皂袁圆接菌点相距源园
皂皂遥 同时袁单独接种木霉菌尧病原菌做对照遥 每处理重
复 猿次袁于 圆缘益下培养 源愿澡袁并测量对照病原菌直径和
各病原菌菌落中心到木霉菌菌落边缘的距离袁计算各木
霉菌株对各病原菌的抑菌率袁统计拮抗系数袁并筛选出
拮抗性最强的菌株遥 计算抑菌率采用以下公式院
玉 越 咱员 原 渊砸圆 辕 砸员冤暂 伊 造园园豫 咱员远暂
式中袁玉为木霉菌的抑菌率袁砸员 为对照病原菌直径袁砸圆 为各病原菌菌落中心到木霉菌菌落边缘的距离遥
拮抗系数分级标准渊缘 级冤 咱员苑暂 院玉级院深绿木霉菌
丝面积逸员园园豫平皿面积曰域级院深绿木霉菌丝面积逸
远苑豫平皿面积曰芋级院猿猿豫平皿面积 约深绿木霉菌丝面
积 约远苑豫平皿面积曰郁级院深绿木霉菌丝面积臆猿猿豫平
皿面积曰吁级院病原菌菌丝面积逸员园园豫平皿面积遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 最佳紫外诱变参数的确定
在功率为 圆园宰的紫外灯照射下袁测定不同照射时
间和照射距离对木霉菌株 栽圆 生长的影响遥 结果表明袁
紫外光不同照射时间和照射距离的诱变处理对木霉
栽圆菌株生长均产生影响渊表 员冤遥 在 员园 耀 源园糟皂的照射
距离下袁照射距离相同袁随着照射时间的延长袁分生孢
子的死亡率即致死率均逐渐提高袁而正突变率呈先升
高后降低的趋势曰在 员园 耀 远园皂蚤灶的照射时间内袁照射时
间相同袁紫外光对木霉菌 栽圆 菌株的致死率随着照射距
离的增加而逐渐降低遥 照射距离为 员园糟皂 时袁员园皂蚤灶 的
照射致死率为 源源郾 远豫 袁 猿园皂蚤灶 的照射致死率可达
愿怨郾 源豫 袁照射 源园皂蚤灶以上致死率高达 员园园豫 曰而照射距
离为 源园糟皂时袁员园皂蚤灶的照射致死率仅为 猿员郾 缘豫 袁缘园皂蚤灶
的照射致死率才达 愿圆郾 缘豫 袁照射 远园皂蚤灶 以上时袁致死
率可达 员园园豫 遥 可见照射距离较近时袁短时间内就可
以获得较高的致死率曰距离较远时袁需要较长时间的照
射袁才能获得较高的致死率遥 按照诱变剂量选择的一
般原则袁选取菌体致死率大约在 远园豫 耀怨缘 豫的诱变剂
量来观察其正突变率袁把正突变率最高的剂量作为最
佳诱变剂量遥 由表 员 可知袁在紫外光照射距离 猿园糟皂尧
照射时间 源园皂蚤灶的条件下袁木霉菌株 栽圆 的分生孢子致
死率最高袁为 愿源郾 苑豫 袁此时的正突变率也最高袁达
怨郾 源豫 遥 因此袁为了获得较好的突变效果袁选择照射距
离 猿园糟皂尧照射时间 源园皂蚤灶 的条件作为最佳诱变条件袁
对木霉 栽圆 菌株进行诱变遥
表 员摇 紫外线处理对木霉菌株 栽圆 致死率和正突变率的影响
栽葬遭造藻 员摇 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 哉灾 燥灶 贼澡藻 造藻贼澡葬造 则葬贼藻 葬灶凿 责燥泽蚤贼蚤增藻 皂怎贼葬灶贼 则葬贼藻 燥枣 栽则蚤燥糟澡凿藻则皂葬 栽圆 泽贼葬蚤灶 辕 豫
照射距离
陨则则葬凿蚤葬贼蚤燥灶
凿蚤泽贼葬灶糟藻 辕 糟皂
照射时间 陨则则葬凿蚤葬贼蚤燥灶 贼蚤皂藻 辕 皂蚤灶
员园 圆园 猿园 源园 缘园 远园
致死率
造藻贼澡葬造造贼赠
则葬贼藻
正突变率
孕燥泽蚤贼蚤增藻
皂怎贼葬贼蚤燥灶
则葬贼藻
致死率
造藻贼澡葬造造贼赠
则葬贼藻
正突变率
孕燥泽蚤贼蚤增藻
皂怎贼葬贼蚤燥灶
则葬贼藻
致死率
造藻贼澡葬造造贼赠
则葬贼藻
正突变率
孕燥泽蚤贼蚤增藻
皂怎贼葬贼蚤燥灶
则葬贼藻
致死率
造藻贼澡葬造造贼赠
则葬贼藻
正突变率
孕燥泽蚤贼蚤增藻
皂怎贼葬贼蚤燥灶
则葬贼藻
致死率
造藻贼澡葬造造贼赠
则葬贼藻
正突变率
孕燥泽蚤贼蚤增藻
皂怎贼葬贼蚤燥灶
则葬贼藻
致死率
造藻贼澡葬造造贼赠
则葬贼藻
正突变率
孕燥泽蚤贼蚤增藻
皂怎贼葬贼蚤燥灶
则葬贼藻
员园 源源郾 远 原 远缘郾 圆 圆郾 猿 愿怨郾 源 圆郾 远 员园园 原 员园园 原 员园园 原
圆园 源园郾 苑 原 缘苑郾 源 员郾 远 苑愿郾 猿 愿郾 远 愿猿郾 怨 苑郾 员 员园园 原 员园园 原
猿园 猿缘郾 愿 员郾 猿 缘圆郾 远 员郾 愿 远远郾 远 缘郾 苑 愿源郾 苑 怨郾 源 怨远郾 源 原 员园园 原
源园 猿员郾 缘 员郾 源 源园郾 愿 圆郾 缘 缘员郾 猿 源郾 愿 远愿郾 源 远郾 源 愿圆郾 缘 缘郾 员 员园园 原
员员缘员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
圆郾 圆摇 突变株的初筛
在最佳诱变条件下袁将获得的 员员 株菌落直径较大
的突变菌株渊栽圆 原 员 耀 栽圆 原 员员冤转接于解磷固体培养基
上袁培养 愿凿后观察各个突变菌株是否产生解磷圈袁并
测量解磷圈的大小遥 结果表明袁员员 个突变菌株中袁 栽圆
原 猿尧栽圆 原 缘尧栽圆 原 怨 和 栽圆 原 员员 共 源 个突变菌株没有产
生明显的透明解磷圈曰其余 苑 个突变菌株都产生了透
明解磷圈袁但是 栽圆 原 员尧栽圆 原 源 和 栽圆 原 员园 共 猿 个菌株的
解磷圈直径分别为 园郾 怨远尧园郾 愿猿 和 员郾 园远 糟皂袁其解磷圈直
径渊阅忆冤与其菌落直径渊阅冤比值分别为 员郾 园缘尧园郾 怨员 和
员郾 员远袁均小于 员郾 猿袁而 栽圆 原 圆尧栽圆 原 远尧栽圆 原 苑 和 栽圆 原 愿 共
源 个突变菌株的透明解磷圈直径分别为 圆郾 圆缘尧员郾 怨愿尧
员郾 圆远尧圆郾 源员糟皂袁其 阅忆 辕 阅 分别为 圆郾 源苑尧 圆郾 员愿尧 员郾 猿愿 和
圆郾 远缘袁均大于 员郾 猿遥 因此袁选取 栽圆 原 圆尧 栽圆 原 远尧栽圆 原 苑 和
栽圆 原 愿 源 个突变菌株进行后续试验遥
表 圆摇 员员 株木霉突变菌株在解磷固体培养基上解磷圈测定结果
栽葬遭造藻 圆摇 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 哉灾 燥灶 贼澡藻 造藻贼澡葬造 则葬贼藻 葬灶凿 责燥泽蚤贼蚤增藻 皂怎贼葬灶贼 则葬贼藻 燥枣 栽则蚤燥糟澡凿藻则皂葬 栽圆 泽贼葬蚤灶
菌株名称
杂贼则葬蚤灶 灶葬皂藻 栽圆 栽圆 原 员 栽圆 原 圆 栽圆 原 猿 栽圆 原 源 栽圆 原 缘 栽圆 原 远 栽圆 原 苑 栽圆 原 愿 栽圆 原 怨 栽圆 原 员园 栽圆 原 员员
解磷圈直径 阅忆
阅蚤葬皂藻贼藻则 燥枣
孕鄄 泽燥造怎遭蚤造蚤扎蚤灶早
糟蚤则糟造藻 辕 糟皂
园郾 怨员藻 园郾 怨远藻 圆郾 圆缘葬 原 园郾 愿猿藻 原 员郾 怨愿遭 员郾 圆远糟 圆郾 源员葬 原 员郾 园远凿 原
菌落直径 阅
悦燥造燥灶赠 凿蚤葬皂藻贼藻则 辕 糟皂 园郾 愿苑遭 园郾 怨员葬 园郾 怨园葬 原 园郾 愿源糟 原 园郾 怨员葬 园郾 怨员葬 园郾 怨员葬 原 园郾 怨员葬
阅忆 辕 阅 员郾 园缘 员郾 园缘 圆郾 源苑 原 员郾 园员 原 圆郾 员愿 员郾 猿愿 圆郾 远缘 原 员郾 员远 原
摇 摇 注院 测定数据为 猿 次重复的平均袁不同小写英文字母表示在 园郾 园缘 水平差异显著遥 原 表示菌株无解磷作用遥 下同遥
晕燥贼藻院栽澡藻 凿葬贼葬 憎葬泽 葬增藻则葬早藻 增葬造怎藻 燥枣 贼澡则藻藻 泽葬皂责造藻泽援 月葬则泽 憎蚤贼澡 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 造藻贼贼藻则泽 皂藻葬灶 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽 葬贼 园郾 园缘 造藻增藻造援 原 皂藻葬灶泽 贼澡藻 泽贼则葬蚤灶泽 澡葬增藻 灶燥
责澡燥泽责澡葬贼藻鄄泽燥造怎遭蚤造蚤扎蚤灶早 葬遭蚤造蚤贼赠援 栽澡藻 泽葬皂藻 葬泽 枣燥造造燥憎蚤灶早援
圆郾 猿摇 突变株的复筛
由图 员 可知袁源 株木霉突变菌株在液体培养条件
下袁其解磷量高于出发菌株遥 栽圆 原 愿 的菌株解磷能力
最强袁 为 员怨猿郾 猿远滋早窑皂蕴 原员袁 比 出 发 菌 株 渊 怨园郾 园员
滋早窑皂蕴 原员冤提高了 员员源郾 愿圆豫 袁其次是 栽圆 原 圆 和 栽圆 原 远袁
解磷量为 员愿怨郾 园猿滋早窑皂蕴 原员和 员源猿郾 圆愿滋早窑皂蕴 原员袁分别较
出发菌株提高了 员员园郾 园员豫和 缘怨郾 员愿豫 袁栽圆 原 苑 菌株的
解磷能力最弱袁为员员源郾 猿园滋早窑皂蕴 原员袁较出发菌株提高了
远园郾 猿圆豫 遥
对 源 株突变菌株在液体解磷培养基中植酸酶活性
测定结果表明袁源 个突变菌株的植酸酶活性与其解磷
能力变化趋势一致袁即 栽圆 原 愿 的活性最高袁为 苑愿源郾 猿缘
灶皂燥造窑蕴 原员袁较出发菌株提高 员猿猿郾 怨愿豫 曰其次为 栽圆 原 圆
和 栽圆 原 远曰栽圆 原 苑 最低袁为 猿怨远郾 缘愿 灶皂燥造窑蕴 原员袁但都高于
出发菌株的植酸酶活性 猿猿缘郾 圆圆 灶皂燥造窑蕴 原员渊图 圆冤遥
综上所述袁解磷圈大且溶磷能力强作为衡量指标袁
图 员摇 源 株突变菌株液体培养条件下的解磷能力
云蚤早援 员摇 栽澡藻 责澡燥泽责澡葬贼藻 泽燥造怎遭蚤造蚤扎蚤灶早 责燥憎藻则 燥枣 源
栽则蚤糟澡燥凿藻则皂葬 皂怎贼葬灶贼 泽贼则葬蚤灶泽 蚤灶 造蚤择怎蚤凿 糟怎造贼怎则藻
图 圆摇 源 株木霉突变菌株在液体培养条件
下植酸酶活性测定结果
云蚤早援 圆摇 栽澡藻 责澡赠贼葬泽藻 葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 源 栽则蚤糟澡燥凿藻则皂葬
皂怎贼葬灶贼 泽贼则葬蚤灶泽 蚤灶 造蚤择怎蚤凿 糟怎造贼怎则藻
栽圆 原 愿 和 栽圆 原 圆 的解磷能力强于其它菌株遥
圆郾 源摇 突变菌株生长速率和产孢量
由表 猿 可知袁紫外线诱变所得的 圆 株解磷能力较
高的突变菌株 栽圆 原 圆 和 栽圆 原 愿 的生长速率均比出发菌
株 栽圆 快袁且产孢量高遥 培养 缘凿袁突变菌株 栽圆 原 圆 和 栽圆
圆员缘员
摇 愿 期 紫外诱变选育木霉高效解磷菌株
原愿 的生长速率和产孢量分别为 猿圆郾 圆远 皂皂窑凿 原员尧缘郾 园猿
伊 员园怨 悦云哉窑皂蕴 原员和 猿源郾 员圆 皂皂窑凿 原员尧缘郾 愿源 伊 员园怨 悦云哉窑
皂蕴 原员袁出发菌株 栽圆 的生长速率和产孢量分别为 猿圆郾 圆猿
皂皂窑凿 原员尧源郾 源缘 伊 员园怨 悦云哉窑皂蕴 原员曰培养 苑凿的生长速率和
产孢量分别为 猿源郾 愿园 皂皂窑凿 原员尧苑郾 圆源 伊 员园怨 悦云哉窑皂蕴 原员和
猿远郾 缘远 皂皂窑凿 原员和 苑郾 猿远 伊 员园怨 悦云哉窑皂蕴 原员袁均高于出发菌
株渊猿猿郾 园猿 皂皂窑凿 原员尧苑郾 圆员 伊 员园怨 悦云哉窑皂蕴 原员 冤曰培养 怨凿
后袁栽圆 原 圆 和 栽圆 原 愿 圆 个突变菌株的产孢量达到最大袁
分别为 苑郾 怨猿 伊 员园怨 悦云哉窑皂蕴 原员和 愿郾 圆缘 伊 员园怨 悦云哉窑皂蕴 原员袁
而生长速率减慢袁但高于出发菌株的生长速率 猿猿郾 园圆
皂皂窑凿 原员遥
表 猿摇 解磷突变菌株 栽圆 原圆 和 栽圆 原愿 的生长速率和产孢量
栽葬遭造藻 猿摇 栽澡藻 早则燥憎贼澡 则葬贼藻 葬灶凿 泽责燥则怎造葬贼蚤燥灶 择怎葬灶贼蚤贼赠 燥枣 栽则蚤糟澡燥凿藻则皂葬 皂怎贼葬灶贼 泽贼则葬蚤灶泽 栽圆 原圆 葬灶凿 栽圆 原愿
菌株编号
杂贼则葬蚤灶 晕燥援
培养天数 悦怎造贼怎则藻 凿葬赠泽 辕 凿
缘 苑 怨
生长速率
郧则燥憎贼澡 则葬贼藻 辕
渊皂皂窑凿 原员 冤
产孢量
杂责燥则怎造葬贼蚤燥灶 择怎葬灶贼蚤贼赠 辕
渊员园怨悦云哉窑皂蕴 原员 冤
生长速率
郧则燥憎贼澡 则葬贼藻 藻 辕
渊皂皂窑凿 原员 冤
产孢量
杂责燥则怎造葬贼蚤燥灶 择怎葬灶贼蚤贼赠 辕
渊员园怨悦云哉窑皂蕴 原员 冤
生长速率
郧则燥憎贼澡 则葬贼藻藻 辕
渊皂皂窑凿 原员 冤
产孢量
杂责燥则怎造葬贼蚤燥灶 择怎葬灶贼蚤贼赠 辕
渊员园怨悦云哉窑皂蕴 原员 冤
栽圆 猿圆郾 圆猿遭 源郾 源缘糟 猿猿郾 园猿遭 苑郾 圆员遭 猿猿郾 园圆糟 苑郾 愿苑遭
栽圆 原 圆 猿圆郾 圆远遭 缘郾 园猿遭 猿源郾 愿园遭 苑郾 圆源遭 猿源郾 员缘遭 苑郾 怨猿遭
栽圆 原 愿 猿源郾 员圆葬 缘郾 愿源葬 猿远郾 缘远葬 苑郾 猿远葬 猿缘郾 源圆葬 愿郾 圆缘葬
表 源摇 解磷木霉突变菌株 栽圆 原圆 和 栽圆 原愿 的传代稳定性
栽葬遭造藻 源摇 栽澡藻 泽贼葬遭造藻 澡藻则藻凿蚤贼葬则赠 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 燥枣 栽则蚤糟澡燥凿藻则皂葬 皂怎贼葬灶贼 泽贼则葬蚤灶泽 栽圆 原圆 葬灶凿 栽圆 原愿
培养代数
栽蚤皂藻泽
解磷圈直径
阅蚤葬皂藻贼藻则 燥枣 孕鄄 泽燥造怎遭蚤造蚤扎蚤灶早 糟蚤则糟造藻 辕 糟皂
可溶性磷含量
粤皂燥怎灶贼 燥枣 泽燥造怎遭造藻 责澡燥泽责澡葬贼藻 辕 渊滋早窑皂蕴 原员 冤
植酸酶活性
孕澡赠贼葬泽藻 葬糟贼蚤增蚤贼赠 辕 渊灶皂燥造窑蕴 原员 冤
栽圆 原 圆 栽圆 原 愿 栽圆 原 圆 栽圆 原 愿 栽圆 原 圆 栽圆 原 愿
员 圆郾 圆猿葬 圆郾 源苑葬 员愿愿郾 缘源葬遭 员怨猿郾 怨缘葬 远源愿郾 圆源葬遭 苑愿猿郾 猿圆葬
圆 圆郾 员愿葬 圆郾 源缘葬 员愿远郾 猿圆遭 员怨猿郾 圆源葬 远源源郾 缘愿遭 苑愿园郾 员苑葬
猿 圆郾 圆愿葬 圆郾 源源葬 员愿怨郾 员缘葬 员怨圆郾 源缘葬 远缘圆郾 愿缘葬 苑苑愿郾 源愿葬
源 圆郾 园怨葬 圆郾 源远葬 员愿缘郾 圆苑遭 员怨猿郾 源愿葬 远源园郾 员苑糟 苑愿员郾 愿远葬
缘 员郾 愿猿遭 圆郾 源缘葬 员远园郾 远缘糟 员怨猿郾 猿员葬 远园园郾 员圆凿 苑愿园郾 远源葬
远 员郾 远远糟 圆郾 源远葬 员源远郾 源远凿 员怨猿郾 愿愿葬 缘远圆郾 猿怨藻 苑愿员郾 远怨葬
苑 员郾 缘源糟 圆郾 源缘葬 员猿缘郾 圆愿藻 员怨圆郾 怨圆葬 缘缘园郾 圆远枣 苑苑怨郾 怨源葬
圆郾 缘摇 突变菌株的遗传稳定性
将得到的解磷能力较好的 栽圆 原 圆 和 栽圆 原 愿 转接 苑
代袁分别接种固体解磷和液体解磷培养基袁进行突变菌
株的遗传稳定性试验遥 结果表明袁突变菌株 栽圆 原 圆 和
栽圆 原 愿 转接 苑凿 后袁其解磷能力的遗传稳定性有差别袁
其中 栽圆 原 圆 的稳定性比较差袁培养 猿 代袁其解磷圈直径
最大袁为 圆郾 圆愿糟皂袁可溶性磷含量和植酸酶活性最高袁分
别为 员愿怨郾 员缘滋早窑皂蕴 原员和 远缘圆郾 愿缘 灶皂燥造窑蕴 原员遥 但培养 源
至 苑 代袁解磷圈直径逐渐变小袁磷含量和植酸酶活性逐
渐降低袁尤其第 苑 代的解磷圈直径仅为 员郾 缘源 糟皂袁可溶
性磷含量和植酸酶活性分别降低为 员猿缘郾 圆愿滋早窑皂蕴 原员和
缘缘园郾 圆远 灶皂燥造窑蕴 原员曰但 栽圆 原 愿 菌株的遗传稳定性比较
强袁其解磷圈直径尧可溶性磷含量和植酸酶活性变化不
大袁分别在 圆郾 源源 耀 圆郾 源苑糟皂尧员怨圆郾 源缘 耀 员怨猿郾 怨缘滋早窑皂蕴 原员
和 苑苑愿郾 源愿 耀 苑愿猿郾 猿圆 灶皂燥造窑蕴 原员之间变化袁表明随着传代
培养解磷能力没有消失渊表 源冤遥
圆郾 远摇 突变菌株的拮抗能力测定结果
对获得的遗传稳定性比较好的突变菌株 栽圆 原 愿 进
行拮抗能力测定袁结果表明突变菌株对尖孢镰刀菌和
立枯丝核菌有强烈的拮抗作用袁但其拮抗能力略低于
出发菌株遥 对峙培养 源愿澡袁栽圆 原 愿 菌株对尖孢镰刀菌和
立枯丝核菌的抑制率分别为 愿怨郾 源远豫和 怨源郾 员员豫 袁而出
发菌株对尖孢镰刀菌和立枯丝核菌的抑制率分别为
愿愿郾 愿员豫和 怨猿郾 圆远豫 袁分别相差 园郾 远缘豫和 园郾 愿缘豫 袁但无
明显差别遥 在培养过程中观察袁最初袁栽圆 原 愿 菌株和尖
孢镰刀菌尧立枯丝核菌在平板两边各自生长袁源愿 澡 后
两菌落边缘接触袁木霉菌对其产生抑制作用袁使其生长
猿员缘员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
摇 摇 摇 摇 表 缘摇 解磷木霉突变菌株 栽圆 原愿 对尖孢镰刀菌和立枯丝核菌的拮抗作用
栽葬遭造藻 缘摇 栽澡藻 葬灶贼葬早燥灶蚤泽皂 燥枣 栽则蚤糟澡燥凿藻则皂葬 皂怎贼葬灶贼 泽贼则葬蚤灶 栽圆 原愿 贼燥 云怎泽葬则蚤怎皂 燥曾赠泽责燥则怎皂 葬灶凿 砸澡蚤扎燥糟贼燥灶蚤葬 泽燥造葬灶蚤
菌株编号
杂贼则葬蚤灶 晕燥援
尖孢镰刀菌 云怎泽葬则蚤怎皂 燥曾赠泽责燥则怎皂 立枯丝核菌 砸澡蚤扎燥糟贼燥灶蚤葬 泽燥造葬灶蚤
抑菌率
蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则赠 则葬贼藻 辕 豫
平均抑菌率
酝藻葬灶 燥枣
蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则赠 则葬贼藻 辕 豫
拮抗系数
粤灶贼葬早燥灶蚤泽贼
糟燥藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼
抑菌率
蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则赠 则葬贼藻 辕 豫
平均抑菌率
酝藻葬灶 燥枣
蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则赠 则葬贼藻 辕 豫
拮抗系数
粤灶贼葬早燥灶蚤泽贼
糟燥藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼
栽圆 原 愿 愿愿郾 远圆 愿愿郾 猿圆 愿怨郾 源缘 愿愿郾 愿员葬 芋 怨源郾 猿缘 怨圆郾 缘怨 怨圆郾 愿源 怨猿郾 圆远葬 芋
栽圆 怨园郾 园源 愿怨郾 圆员 愿怨郾 员圆 愿怨郾 源远葬 芋 怨缘郾 园愿 怨源郾 员圆 怨猿郾 员圆 怨源郾 员员葬 郁
速率减缓直至停止袁栽圆 原 愿 对尖孢镰刀菌的拮抗系数
和出发菌株 栽圆 相同袁均为芋曰但对立枯丝核菌的拮抗
系数与出发菌株有差别渊表 缘冤遥 通过对试验结果的综
合分析袁最后筛选出突变型木霉菌株 栽圆 原 愿 为最佳解
磷菌株遥
猿摇 讨论
紫外线诱变是一种使用最早尧沿用最久尧效果明显
的物理诱变方法袁通过其诱变可大大提高微生物的突
变率袁从而可更加快速地筛选出各种类型的突变株袁用
于生产和研究咱员怨 原 圆园暂 遥 该方法已被广泛应用于木霉菌
株多种功能的改良方面遥 本试验以木霉 栽圆 菌株为出
发菌株进行紫外线诱变处理袁获得了 员 株遗传稳定的
解磷突变株 栽圆 原 愿袁其解磷量达 员怨猿郾 猿远滋早窑皂蕴 原员袁比出
发菌株渊怨园郾 园员滋早窑皂蕴 原员 冤提高了 员员源郾 愿圆豫 袁接近于张
曼曼等咱圆员暂 从土壤中分离到的拟康氏木霉 渊 栽援
噪燥灶蚤灶早蚤燥责泽蚤泽冤 栽 原 源园源 菌株的解磷能力袁高于杨合同
等咱猿暂分离到的木霉 栽员猿 原 愿 和 栽 原 圆猿 菌株的解磷能
力袁且其对主要土传病害病原菌的拮抗能力与出发菌
株相当袁从而使作为生防菌的木霉菌株解磷能力增强袁
弥补了现有木霉菌剂效果单一的缺陷袁扩大了木霉菌
的应用范围袁具有明显的应用潜力遥
紫外诱变过程中袁对于诱变参数的确定极为重要袁
诱变剂量尧照射时间和照射距离对诱变成功至关重要遥
不同的微生物袁所需的诱变条件不尽相同袁白腐菌
渊孕澡葬灶藻则燥糟澡葬藻贼藻 糟澡则赠泽燥泽责燥则蚤怎皂冤紫外诱变选育高产漆
酶咱圆圆暂和芽短梗霉渊粤怎则藻燥遭葬泽蚤凿蚤怎皂 责怎造造怎造葬灶冤 晕郧 菌株高
产普鲁兰糖咱圆猿暂突变株的最佳条件为使用 员缘宰 紫外
灯袁照射距离为 猿园糟皂袁照射时间为 员圆园 泽曰深绿木霉渊栽援
葬怎则藻燥增蚤则蚤凿藻冤栽燥则菌株紫外光诱导耐低温突变菌株的最
佳条件为使用 圆园宰紫外灯袁照射距离为 源园糟皂袁照射时
间为 源园皂蚤灶咱圆源暂 曰绿色木霉渊栽援 增蚤则蚤凿藻冤 蕴栽砸圆圆 菌株紫外
诱导耐低温和对多菌灵具有抗性突变株的最佳条件为
使用 员缘憎 紫外灯袁照射距离为 圆园糟皂袁照射时间为
员园皂蚤灶咱圆暂 袁这可能是由于不同的微生物对紫外光的敏
感性有所差异遥 因此袁本试验对出发菌株 栽圆 紫外诱变
的诱变剂量尧照射时间和照射距离进行了优化遥 一般
情况下袁诱变剂量越大袁致死率越高袁正突变越低曰诱变
剂量一定的情况下袁随着照射时间的延长袁致死率会逐
渐提高袁正突变率也会相应降低咱圆缘暂 遥 为了提高孢子的
诱变率袁应该选择具有相对较高致死率和和正突变率
的条件袁一般选择致死率为 愿园豫 耀 怨园豫时袁相应正突
变率较高的诱变条件咱圆远暂 遥 本试验在设定照射功率
圆园宰的条件下袁照射时间为 源园皂蚤灶袁照射距离 猿园糟皂 时袁
木霉菌株 栽圆 的分生孢子致死率为 愿源郾 苑豫 袁此时的正
突变率也最高袁达 怨郾 源豫 遥 因此袁确定最佳诱变条件是
圆园憎紫外光下袁照射 源园 皂蚤灶袁照射距离为 猿园糟皂遥
此外袁人们利用单一因子作用于微生物的同时袁开
始尝试用多种因子组合即复合诱变来研究微生物的诱
变和育种袁也取得了较好的结果遥 彭滟钞等咱圆苑暂采用紫
外和远园悦燥 原 酌 射线对烟色烟管菌渊月躁藻则噪葬灶凿藻则葬 枣怎皂燥泽葬冤
进行复合诱变得到能够稳定遗传的 悦燥 原 员员袁其产漆酶
活力比出发菌株提高了 缘愿郾 员豫 遥 虞龙等咱圆愿暂以红霉素
生产菌红色链霉菌渊 杂贼则藻燥贼燥皂赠糟藻泽 藻则赠贼澡则藻怎泽冤为研究对
象袁采用氯化锂 原紫外 原离子束复合诱变袁筛选获得高
产突变株 耘园猿员苑 原 员 原 苑 原 圆远袁该菌株摇瓶效价达
苑员 圆远滋早窑皂蕴 原员袁较出发菌株 耘园猿 提高了 圆园郾 猿豫 遥 复合
诱变是近年来新兴的一种诱变方法袁通过多次诱变的
菌株经过筛选依旧可以获得高效稳定的菌株遥 因此袁
考虑采用复合诱变技术对亲本菌株 栽圆 进行诱变处理
以得到拮抗作用和解磷能力更强的突变菌株有待于进
一步研究遥
源摇 结论
本研究采用紫外线诱变方法对木霉 栽圆 菌株进行
诱变处理袁获得 员 株最佳突变株 栽圆 原 愿袁该突变株的解
磷量 达 员怨猿郾 猿远滋早窑皂蕴 原员袁 比 出 发 菌 株 提 高 了
员员源郾 愿圆豫 袁生长速率和产孢量均高于出发菌株袁经连续
源员缘员
摇 愿 期 紫外诱变选育木霉高效解磷菌株
转接 苑 代袁其解磷能力非常稳定袁而且对尖孢镰刀菌和
立枯丝核菌 圆 种土传病原真菌的抑制率与出发菌株相
当袁分别达 愿怨郾 源远豫和 怨源郾 员员豫 遥 可见袁在木霉高效解
磷菌株选育中紫外线诱变是一种比较有效的尧值得利
用的菌株改良技术袁获得的突变菌株为扩大木霉菌应
用范围尧开发多功能木霉制剂奠定了良好的基础遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 云藻则灶燥灶凿藻扎 蕴 粤袁 在葬造遭葬 孕袁 郧燥皂藻扎 酝 粤援 孕澡燥泽责澡葬贼藻 泽燥造怎遭蚤造蚤扎葬贼蚤燥灶
葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 遭葬糟贼藻则蚤葬造 泽贼则葬蚤灶泽 蚤灶 泽燥蚤造 葬灶凿 贼澡藻蚤则 藻枣枣藻糟贼 燥灶 泽燥赠遭藻葬灶 早则燥憎贼澡
怎灶凿藻则 早则藻藻灶澡燥怎泽藻 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽 咱 允暂 援 月蚤燥造燥早赠 葬灶凿 云藻则贼蚤造蚤贼赠 燥枣 杂燥蚤造泽袁
圆园园苑袁源猿渊远冤院愿园缘 原 愿园怨
咱 圆 暂 摇 在葬蚤凿蚤 粤袁运澡葬灶 酝 杂袁粤澡藻皂葬凿 酝袁韵增藻泽 酝袁宰葬灶蚤 孕 粤援 砸藻糟藻灶贼 葬凿增葬灶糟藻泽
蚤灶 责造葬灶贼 早则燥憎贼澡 责则燥皂燥贼蚤燥灶 遭赠 责澡燥泽责澡葬贼藻 原 泽燥造怎遭蚤造蚤扎蚤灶早 皂蚤糟则燥遭藻泽
咱酝暂 辕 辕 运澡葬灶 酝 杂袁在葬蚤凿蚤 粤袁酝怎泽葬则则葬贼 允援 酝蚤糟则燥遭蚤葬造 杂贼则葬贼藻早蚤藻泽 枣燥则 悦则燥责
陨皂责则燥增藻皂藻灶贼袁 月藻则造蚤灶院 杂责则蚤灶早藻则袁圆园园怨袁 圆猿 原 缘园
咱 猿 暂 摇 杨合同袁于雪云袁魏艳丽袁周红姿袁宋莉璐袁扈进冬袁李纪顺援 多功
能植病生防木霉的分离筛选与鉴定 咱 允暂 援 山东科学袁圆园园怨袁圆圆
渊缘冤院圆苑 原 猿园
咱 源 暂摇 粤造贼燥皂葬则藻 悦袁晕燥则增藻造造 宰 粤袁月躁燥噪皂葬灶 栽袁匀葬则皂葬灶 郧 耘援 杂燥造怎遭蚤造蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣
责澡燥泽责澡葬贼藻泽 葬灶凿 皂蚤糟则燥灶怎贼则蚤藻灶贼泽 遭赠 贼澡藻 责造葬灶贼 早则燥憎贼澡 责则燥皂燥贼蚤灶早 葬灶凿
遭蚤燥糟燥灶贼则燥造 枣怎灶早怎泽 栽则蚤糟澡燥凿藻则皂葬 澡葬则扎蚤葬灶怎皂 砸蚤枣葬蚤 咱 允暂 援 耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造
酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠袁 员怨怨怨袁远缘院圆怨圆远 原 圆怨猿猿
咱 缘 暂 摇 王光华袁赵英袁周德瑞袁杨谦援解磷菌的研究现状与展望咱允暂 援生态
环境袁圆园园猿袁员圆渊员冤院猿愿 原 源猿
咱 远 暂 摇 赵小蓉袁林启美援 微生物解磷的研究进展咱 允暂 援 土壤肥料袁圆园园员
渊猿冤院苑 原 员员
咱 苑 暂摇 夏江袁梅乐和袁黄俊袁盛清袁许静袁吴晖援 产 酌 原 圆 氨基丁酸的乳酸
菌株筛选及诱变咱允暂 援核农学报袁圆园园远袁圆园渊缘冤院猿苑怨 原 猿愿圆
咱 愿 暂 摇 康萍芝袁张丽荣援拮抗木霉菌株 栽猿圆 的紫外线诱变改良咱允暂 援湖北
农业科学袁圆园员圆袁缘员渊员冤院源源 原 源苑
咱 怨 暂 摇 李剑峰袁张淑卿袁师尚礼援 微波诱变选育高产生长素及耐药性根
瘤菌株研究咱允暂 援 核农学报袁圆园园怨袁圆猿渊远冤院怨愿员 原 怨愿缘
咱员园暂摇 龚文琪袁陈伟援氧化亚铁硫杆菌的分离培养及其浸磷效果咱允暂 援过
程工程学报袁圆园园苑袁苑渊猿冤院缘愿源 原 缘愿愿
咱员员暂摇 周乐聪援植物病原核盘菌生防菌的筛选尧诱变及分子改造咱阅暂援
北京院中国农业大学袁圆园园园
咱员圆暂摇 尹婷袁徐秉良袁梁巧兰袁古丽君袁李荣峰援耐药性木霉 栽圆 菌株的筛
选尧紫外诱变与药剂驯化咱允暂 援 草业学报袁圆园员猿袁圆圆渊圆冤院员员苑 原 员圆圆
咱员猿暂摇 高晗旸袁孙清袁吕济敏援 利用紫外诱变绿色木霉对玉米秸秆进行
酶解糖化的研究咱 允暂 援 沈阳农业大学学报袁圆园员猿袁源源渊圆冤院圆猿苑 原
圆源园
咱员源暂摇 韩梅袁李丽娜袁魏冉袁彭帅袁韩晓日援 混合培养提高菌株解磷解钾
能力的探讨咱允暂 援微生物学杂志袁圆园员园袁猿园渊缘冤院苑源 原 苑苑
咱员缘暂摇 乔欢袁吴小芹袁王早援一株嗜松青霉 允孕 原 晕允源 的解磷特性咱 允暂 援微
生物学通报袁圆园员源袁 源员渊怨冤院员苑源员 原 员苑源愿
咱员远暂摇 梁志怀袁魏林袁安哲宇袁陈玉荣援生防木霉菌耐三唑类杀菌剂菌株
的选育咱允暂 援中国生物防治袁圆园员园袁圆远渊员冤院远园 原 远缘
咱员苑暂摇 柳燕袁蒋妮袁唐美琼袁繆剑华袁李林轩援 木霉菌对山豆根根腐病菌
的拮抗作用咱允暂 援中药材袁圆园员员袁猿源渊源冤院源怨怨 原 缘园圆
咱员愿暂摇 刘海英袁张运峰袁范永山袁李科南袁刘先援 紫外线对杏鲍菇原生质
体的诱变作用咱允暂 援核农学报袁圆园员员袁圆缘渊源冤院 苑员怨 原 苑圆猿
咱员怨暂摇 葛春梅袁古绍彬袁姚建铭袁潘仁瑞袁余增亮援 蕴 原乳酸高产菌株的选
育和产酸条件的研究 咱允暂 援微生物学通报袁圆园园源袁猿渊圆缘冤院源远 原 源怨
咱圆园暂摇 闫冬袁别小妹袁陆兆新袁吕凤霞袁赵海珍袁张充援 多粘类芽孢杆菌
允泽葬 原 怨 高产 蕴陨 原 云 类抗菌脂肽突变株的选育咱 允暂 援 核农学报袁
圆园员源袁圆愿渊员园冤院 员苑猿怨 原 员苑源猿
咱圆员暂摇 张曼曼袁邓春生袁马金奉袁张燕荣袁耿兵袁李顺鹏援 多功能木霉的
筛选及鉴定 咱 允暂 援 农业环境科学学报袁圆园员圆袁猿员 渊愿冤院 员缘苑员 原
员缘苑缘援
咱圆圆暂摇 郑蕾援白腐菌紫外诱变选育高产漆酶突变株及其产酶条件研究
咱允暂 援生物学杂志袁圆园员圆袁圆怨渊缘冤院怨远 原 怨怨
咱圆猿暂摇 靳建忠袁王慧娟袁孔维甲袁葛海涛袁张宁袁李炳学援紫外诱变选育出
芽短梗霉高产普鲁兰糖白化突变菌株咱 允暂 援 食品科学袁圆园员员袁猿圆
渊员员冤院员愿苑 原 员怨员
咱圆源暂摇 王芳袁徐秉良袁曹奎荣援 深绿木霉紫外光诱导耐低温突变菌株的
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咱圆缘暂摇 刘达玉袁段献银袁黄丹袁周晓庆援高盐稀态酱油专用米曲霉的紫外
诱变选育咱 允暂 援 西南大学学报院自然科学版袁圆园员猿袁猿缘渊圆冤院员缘缘 原
员缘怨
咱圆远暂摇 贾翠英袁张玉辉袁吴志洋援 紫外诱变与羧甲基半胱氨酸复合筛选
高产 蕴 原精氨酸菌株咱允暂 援核农学报袁圆园员圆袁圆远渊远冤院愿苑怨 原 愿愿猿
咱圆苑暂摇 彭滟钞袁曹福祥袁董旭杰袁彭继庆袁胡双喜援紫外尧远园悦燥 原 酌 复合诱
变选育烟色烟管菌漆酶高产突变株咱 允暂 援 生物技术通报袁圆园员源
渊怨冤院员圆园 原 员圆源
咱圆愿暂摇 虞龙袁张宇袁龚文静袁安肖袁徐翔援 氯化锂 原紫外 原离子束复合诱
变红霉素高产菌株研究咱允暂 援原子能科学技术袁圆园员员袁 源缘渊苑冤院苑愿园
原 苑愿源
缘员缘员
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员缘袁圆怨渊愿冤院员缘园怨 耀 员缘员远
杂糟则藻藻灶蚤灶早 燥枣 匀蚤早澡鄄藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠 孕澡燥泽责澡葬贼藻鄄泽燥造怎遭蚤造蚤扎蚤灶早 栽则蚤糟澡燥凿藻则皂葬 泽责援
杂贼则葬蚤灶泽 哉泽蚤灶早 哉造贼则葬增蚤燥造藻贼 酝怎贼葬早藻灶藻泽蚤泽
载哉耘 再蚤灶早赠怎摇 再耘 宰藻蚤摇 在匀粤晕郧 杂澡怎憎怎摇 载哉 月蚤灶早造蚤葬灶早摇 再粤晕郧 月葬蚤糟澡葬灶早
渊运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 郧则葬泽泽造葬灶凿 耘糟燥泽赠泽贼藻皂 燥枣 酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 耘凿怎糟葬贼蚤燥灶 辕 孕则葬贼葬糟怎造贼怎则葬造 耘灶早蚤灶藻藻则蚤灶早 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 郧葬灶泽怎 孕则燥增蚤灶糟藻 辕
孕则葬贼葬糟怎造贼怎则葬造 悦燥造造藻早藻 燥枣 郧葬灶泽怎 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠 辕 杂蚤灶燥鄄哉援 杂援 悦藻灶贼藻则泽 枣燥则 郧则葬泽泽造葬灶凿 耘糟燥泽赠泽贼藻皂 杂怎泽贼葬蚤灶葬遭蚤造蚤贼赠袁 蕴葬灶扎澡燥怎袁郧葬灶泽怎摇 苑猿园园苑园冤
粤遭泽贼则葬糟贼院陨灶 燥则凿藻则 贼燥 燥遭贼葬蚤灶 澡蚤早澡造赠 藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼 凿蚤泽泽燥造增藻 责澡燥泽责澡燥则怎泽 栽则蚤糟澡燥凿藻则皂葬 泽贼则葬蚤灶袁葬 凿蚤泽泽燥造增藻 责澡燥泽责澡燥则怎泽 栽则蚤糟澡燥凿藻则皂葬
泽贼则葬蚤灶 栽圆 憎葬泽 蚤则则葬凿蚤葬贼藻凿 遭赠 怎造贼则葬增蚤燥造藻贼援 栽澡藻 怎造贼则葬增蚤燥造藻贼 皂怎贼葬早藻灶藻泽蚤泽 责葬则葬皂藻贼藻则泽 憎藻则藻 燥责贼蚤皂蚤扎藻凿袁 葬灶凿 贼澡藻 葬皂燥怎灶贼 燥枣 泽燥造怎遭造藻
责澡燥泽责澡葬贼藻袁责澡赠贼葬泽藻 葬糟贼蚤增蚤贼赠袁早则燥憎贼澡 则葬贼藻袁泽责燥则怎造葬贼蚤燥灶 择怎葬灶贼蚤贼赠袁早藻灶藻贼蚤糟 泽贼葬遭蚤造蚤贼赠 葬灶凿 葬灶贼葬早燥灶蚤泽皂 糟葬责葬遭蚤造蚤贼赠 燥枣 贼澡藻 皂怎贼葬灶贼
憎藻则藻 蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻凿援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 燥灶藻 皂怎贼葬灶贼 灶葬皂藻凿 耶 栽圆 原 愿爷 憎葬泽 燥遭贼葬蚤灶藻凿 怎灶凿藻则 贼澡藻 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽 燥枣 哉灾
则葬凿蚤葬贼蚤燥灶 蚤灶贼藻灶泽蚤贼赠 葬遭燥怎贼 圆园宰袁蚤则则葬凿蚤葬贼蚤燥灶 凿蚤泽贼葬灶糟藻 葬遭燥怎贼 猿园糟皂 葬灶凿 蚤则则葬凿蚤葬贼蚤燥灶 贼蚤皂藻 葬遭燥怎贼 远园泽援 栽澡藻 葬皂燥怎灶贼 燥枣 泽燥造怎遭造藻
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