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Effects of Germination on the Antioxidant Activities of Oat Oil

发芽对燕麦油脂抗氧化活性的影响


采用GC/MS及不同的抗氧化体系,对发芽前后燕麦油脂的组成及其清除自由基和抑制脂质过氧化的能力进行了探讨。结果表明,发芽前后的燕麦油脂均可有效清除自由基·DPPH,·OH,O2-·及抑制脂质过氧化,且燕麦发芽后制备的油脂其抗氧化活性明显优于发芽前,以发芽5d的燕麦油脂抗氧化效果最佳。发芽前后的燕麦油脂主要为不饱和脂肪酸,含量均在80%以上,且油脂中总酚的含量在发芽过程中有所增加。本文的研究为燕麦芽类食品的开发利用提供了一定的理论依据。


全 文 :核 农 学 报  2013,27(11):1756 ~ 1761
Journal of Nuclear Agricultural Sciences
收稿日期:2012⁃12⁃26  接受日期:2013⁃05⁃30
基金项目:“十二五”农村领域国家科技计划项目(2011BAD23B02)
作者简介:戚向阳,女,教授,主要从事食品化学与天然产物化学的研究。 E⁃mail:qixiangyang85@ sina. com
通讯作者:曹少谦,女,副教授,主要从事食品化学与食品加工研究。 E⁃mail:shaoqiancao@ sina. com
文章编号:1000⁃8551(2013)11⁃1756⁃06
发芽对燕麦油脂抗氧化活性的影响
戚向阳  曹少谦  刘合生  陈  伟
(浙江万里学院生物与环境学院,浙江 宁波  315100)
摘  要:采用 GC / MS及不同的抗氧化体系,对发芽前后燕麦油脂的组成及其清除自由基和抑制脂质过
氧化的能力进行了探讨。 结果表明,发芽前后的燕麦油脂均可有效清除自由基·DPPH,·OH,O2 -·及抑
制脂质过氧化,且燕麦发芽后制备的油脂其抗氧化活性明显优于发芽前,以发芽 5d 的燕麦油脂抗氧化
效果最佳。 发芽前后的燕麦油脂主要为不饱和脂肪酸,含量均在 80%以上,且油脂中总酚的含量在发
芽过程中有所增加。 本文的研究为燕麦芽类食品的开发利用提供了一定的理论依据。
关键词:燕麦;油脂;发芽;抗氧化活性
    燕麦(Avena satival L. )属禾本科燕麦属草本植
物,分为皮燕麦和裸燕麦两种,已有两千多年的栽培历
史[1]。 燕麦被认为是谷物食品中最好的全价营养食
品,具有营养与保健双重功效[2]。 其中裸燕麦是世界
上目前种植面积最大的一个燕麦品种,是很多哺乳动
物和非哺乳动物的优良食物来源[3]。 裸燕麦中蛋白
质,脂肪,矿物质元素总量及不饱和脂肪酸含量均居谷
物之首,具有降血脂、血糖和抗氧化等多种功能[4],尤
其是其脂肪含量很高,且主要由单不饱和脂肪酸、亚油
酸和次亚油酸构成。 而亚油酸是目前世界上公认的降
血脂药物的有效成分,可以软化毛细血管,预防血管硬
化,延缓人体衰老[5]。
种子在萌发中涉及到一系列形态上和生理生化的
变化,如功能成分含量的增加、生物利用率的提高及抗
营养因子的不利因素被消除等,这些现象在芽类食品
的开发中受到人们的普遍关注[6 - 7]。 在我国,发芽类
食品已有两千多年的生产历史,是我国人民喜爱的一
种传统优质食品。
目前,关于燕麦发芽的研究主要集中在发芽过程
中 3 大营养素及其相关酶活性的变化[8],而燕麦油脂
及其抗氧化活性在发芽前后的变化目前鲜有文献报
道。 本文选择裸燕麦为研究对象且对其进行发芽试
验,探讨燕麦发芽前后油脂组成及其抗氧化活性的变
化,为功能型油脂的开发以及燕麦的精深加工提供一
定的理论依据。
1  材料与方法
1􀆰 1  材料
1􀆰 1􀆰 1  试验材料  裸燕麦:由河北省坝上农科所提供
的新九号。
1􀆰 1􀆰 2  试验动物  ICR系小鼠,雄性(22 ~ 25g),清洁
级,购买于浙江省实验动物中心,编号 SCXK(Z)2008
- 0033。
1􀆰 1􀆰 3  主要试剂  DPPH及 D -脱氧核糖购于 Sigma
公司;二甲基亚砜、三氯乙酸、硫代巴比妥酸及石油醚
等试剂购于国药集团化学试剂有限公司,均为分析纯。
1􀆰 2  方法
1􀆰 2􀆰 1  发芽燕麦样品的制备   燕麦种子首先用
0􀆰 3%的次氯酸钠溶液浸泡 30min。 冲洗干净后,于
16℃条件下浸泡 20h。 吸涨后,置于铺有滤纸并用适
量蒸馏水湿润过的培养皿上,然后转入 16℃恒温避光
培养。 每 12h用蒸馏水冲洗发芽基质和发芽中的燕麦
2 次,并及时去掉发霉腐败的种子,以保持培养皿和种
子的清洁。
发芽期间每日 8:00 - 9:00 时进行取样,随机取出
发芽情况相似的发芽燕麦。 先将样品在 105℃高温下
烘 10min,终止酶活后置于 60℃条件下热风干燥 10h。
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  11 期 发芽对燕麦油脂抗氧化活性的影响
然后粉碎,过 40 目筛,并密封于 5℃保存[9]。
1􀆰 2􀆰 2  燕麦油脂的提取  准确称取 5 g 即时粉碎的
样品,以石油醚(30 ~ 60℃沸程)为溶剂,在 45℃条件
下索氏提取 6 h,然后 40℃减压蒸发去除有机溶剂,于
- 20℃冷冻保存,备用。
1􀆰 2􀆰 3  燕麦油脂对·DPPH 的清除作用  取一定量的
油脂溶解在甲苯溶剂里,然后配成不同浓度的样品溶
液。 取不同稀释度的样品 2mL 和 2 × 10 - 4 mol·L - 1
DPPH 2mL溶液混合,常温避光条件下放置 30min 后,
以甲苯为参比,在 517nm 处测定吸光值(A)。 样品对
照以甲苯溶液代替·DPPH 溶液,空白对照以甲苯溶液
代替样品[10]。 按下式计算清除率:
清除率 = [1 - (A样 - A样对) / A空白] × 100%
1􀆰 2􀆰 4  燕麦油脂对羟基自由基(·OH)的清除作用 
将一定量的油脂溶解在二甲基亚砜溶剂里,配成不同
浓度的样品溶液。 取 pH值 7􀆰 5 50m mol·L - 1 KH2PO4
- KOH 0􀆰 4mL,加入样品溶液 0􀆰 1mL,1􀆰 04mmol·L - 1
EDTA 0􀆰 1mL,12mmol·L - 1 H2O2 0􀆰 1mL,60mmol·L - 1
DR 0􀆰 1mL, 2mmol·L - 1 Vc 0􀆰 1mL 及 1mmol·L - 1
FeCl30􀆰 1mL,然后于 37℃保温 1h,立即加入 25% HCl
1mL及 1% TBA 1mL后,沸水浴 15min后立即冷却,在
532nm处测定吸光值(A)。 样品对照以蒸馏水代替
DR,空白对照以蒸馏水代替样品[11]。
清除率 = [1 - (A样 - A样对) / A空白] × 100% 。
1􀆰 2􀆰 5  燕麦油脂对超氧阴离子(O2 -·)的清除作用
  将一定量的油脂溶解在二甲基亚砜溶剂里,配成不
同浓度的样品溶液。 取 0􀆰 1mol·L - 1,pH 值 8􀆰 2 Tris⁃
HCl缓冲液 4􀆰 5mL,分别加入 1mL EDTA,1mL 样品溶
液,2􀆰 4mL 二甲基亚砜,摇匀,置于 25℃水浴中预热
10min,再加入 100μL,9mmol·L - 1焦性没食子酸溶液,
摇匀计时,准确反应 3min 后,加入 50mg·mL - 1的抗坏
血酸溶液 50μL 终止反应。 以 Tris⁃HCl 缓冲液作参
比,在 325nm处测定吸光值(A)。 样品对照以蒸馏水
代替焦性没食子酸溶液,空白对照以蒸馏水代替样
品[12]。 清除率按下式计算:
清除率 = [1 - (A样 - A样对) / A空白] × 100%
1􀆰 2􀆰 6  燕麦油脂对小鼠肝组织匀浆丙二醛(MDA)生
成的影响  取肝组织块 0􀆰 5 g 在冰冷的生理盐水中漂
洗,除去血液,称重,放入 5 ~ 10mL 的小烧杯内。 取总
量 2 / 3 的生理盐水于烧杯中,用眼科小剪尽快剪碎组
织块。 将剪碎的组织倒入匀浆管中,再将剩余的 1 / 3
生理盐水用来冲洗残留在烧杯中的碎组织块,一起倒
入匀 浆 管 中 进 行 匀 浆, 使 组 织 匀 浆 化, 然 后
3000r·min - 1离心 10 ~ 15min,上清液即为 10%肝组织
匀浆,备用[13]。
每支试管加入 0􀆰 2mL10%肝匀浆,样品组每管分
别加入不同浓度的样品 100μL,再加二甲基亚砜使总
体积为 0􀆰 4mL,对照组加入等体积生理盐水,37℃温浴
1h 后 分 别 加 入 10% 的 TCA 1􀆰 0mL、 0􀆰 67%
TBA1􀆰 0mL,充分混合均匀,沸水浴 15min后立即冷却,
用改良的 TBA 比色法测 MAD 含量,以吸光值表示
MAD含量,并计算清除率。
另取两组试管,一组先加入 30mmol·L - 1过氧化氢
0􀆰 1mL,另一组先加入 5mmol·L - 1硫酸亚铁 0􀆰 1mL,再
向这两组中依前所述加入肝组织匀浆和样品液,温浴,
冷却后测其 MDA含量[14]。
1􀆰 2􀆰 7  燕麦油脂还原能力的测定  将一定量的油脂
溶解在二甲基亚砜溶剂里,配成不同浓度的样品溶液。
在具塞试管中加入 1mL样品,0􀆰 2mL 磷酸钠缓冲溶液
(PBS,0􀆰 2mol·L - 1,pH 值 6􀆰 6)和 1% K3 [Fe(CN) 6 ]
0􀆰 5mL,置 50℃恒温水浴中反应,20min 后流水速冷,
再加入 1mL,10%三氯乙酸溶液,5000r·min - 1离心
10min,取上清液 1􀆰 5mL,加 3mL 去离子水和 0􀆰 2mL,
1% FeCl3 溶液,混合均匀,5min 后于 700nm 下测定其
吸光值,以二甲基亚砜作为空白。 吸光值越大表示还
原能力越强[15]。
1􀆰 2􀆰 8  燕麦油脂中脂肪酸含量的测定  油脂的甲酯
化按照以下步骤进行:称取燕麦油脂样品约 0􀆰 15g 于
10mL具塞试管中,然后加入 0􀆰 4 mol·L - 1的氢氧化钠 /
甲醇溶液 2mL,在 60℃水浴中加热至油珠完全消失
(约 20min)。 冷却至室温后,加入 25%的三氟化硼 /
甲醇溶液 2mL,然后在 70℃水浴酯化 15min。 冷却后
加入 2mL正己烷,振摇均匀后,加入饱和 NaCl 溶液使
有机相升至顶部,静置分层,上层清夜过滤膜后进样
GC / MS(Trace DSQ Ⅱ MS,Thermol)分析[16]。
GC / MS条件如下:DS⁃max 毛细管柱;载气 He;分
流比 75 ∶ 1;进样口温度 250℃;程序升温,起始温度
100℃保持 2min,以 6􀆰 0℃·min - 1升至 160℃,保持
3min,再以 5􀆰 0℃·min - 1升至 238℃,保留 15􀆰 0min;进
样量:1μL。 质谱条件:电离方式 EI,电子能量 70eV,
离子源温度 250℃,溶剂延迟 3min,扫描质量范围 40
~ 450amu。
1􀆰 2􀆰 9  总酚含量的测定   Folin⁃Ciocalteu 比色法[17]。
取燕麦油 10μL,分别加入二甲基亚砜 190μL、0􀆰 2M的
Folin试剂 1mL、7􀆰 5%的碳酸钠溶液 0􀆰 8mL。 30℃水
浴保温 1h,然后于在 765nm 下测吸光值,根据标准曲
线测定总酚的含量。 用没食子酸做标准曲线,得线性
回归方程为:Y = 0􀆰 1264X +0􀆰 0458,R2 = 0􀆰 9998。
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1􀆰 2􀆰 10  数据处理  试验数据用 X = 􀭰x ± SD 表示,用
SAS专用软件进行分析,观察其显著性。 P < 0􀆰 05 为
差异显著,P > 0􀆰 05 为差异不显著。
2  结果与分析
2􀆰 1  燕麦油脂对·DPPH的清除作用
二苯基苦肼基自由基(简称 DPPH),是一种人工
合成的稳定自由基,其甲醇溶液呈紫色,在 517nm 处
有最大吸收。 当有自由基清除剂时,·DPPH 的单电子
由于被配对,·DPPH 浓度减小而使其颜色变浅,在
517nm处吸光值变小。 相对其它方法,·DPPH 活力法
测定简便、快速、重现性好,被广泛用于评价天然产物
的自由基清除活性。 IC50值是指清除 50%自由基时所
需样品的浓度值,是衡量抗氧化效果的有效指标,
IC50值越小说明抗氧化效果越好。 由图 1 可知,发芽前
后的燕麦油脂对·DPPH 的清除能力都是随着浓度的
增加逐渐提高。原样、浸泡 20 h 及发芽 5d 燕麦油脂的
IC50分别为 9􀆰 394 ± 0􀆰 124mg·mL - 1,7􀆰 854 ± 0􀆰 059mg·
mL - 1,8􀆰 947 ± 0􀆰 059mg·mL - 1。 表明燕麦浸泡及发芽
后所制备的油脂其清除·DPPH 的能力显著优于未发
芽样(P < 0􀆰 05)。
图 1  燕麦油脂清除·DPPH的效果
Fig. 1  The scavenging effects of oat oil on·DPPH
2􀆰 3  燕麦油脂对·OH自由基的清除作用
·OH 是造成组织脂质过氧化、蛋白质解聚与聚
合、核酸断裂、多糖解聚的重要活性氧。 因此·OH 清
除率是反映物质抗氧化作用的重要指标。由图 2 可知,
这 3 种燕麦油脂对羟基自由基均有一定的清除作用,
且随着浓度的增加,其清除效果逐渐增强。 3 种样品
的 IC50值分别为:发芽 5d 油脂 23􀆰 058 ± 0􀆰 895mg·
mL - 1、浸泡 20h 油脂 23􀆰 717 ± 0􀆰 140mg·mL - 1、未发芽
样 29􀆰 811 ± 0􀆰 345mg·mL - 1,发芽后的样品其清除·OH
图2  燕麦油脂清除·OH的效果
Fig. 2  The scavenging effects of oat oil on·OH
自由基的能力显著高于未发芽样(P < 0􀆰 05)。
2􀆰 4  燕麦油脂对 O2 -·的清除作用
O2 -·在油脂酸败、食品氧化变质中扮演重要的角
色,它可引起其它的氧化反应,缩短食品的氧化期,是
一种破坏性极强的自由基。 由图 3 可知,这 3 种样品
对 O2 -·均有清除作用,且随着浓度的增加,其清除效
果逐渐增高。 以发芽 5d的燕麦油脂对 O2 -·的清除效
果最好(IC50 = 43􀆰 381 ± 0􀆰 593mg·mL - 1),其次为浸泡
20h的燕麦油脂( IC50 = 52􀆰 133 ± 1􀆰 029mg·mL - 1),未
发芽的效果最差(IC50 = 109􀆰 287 ± 3􀆰 460mg·mL - 1)。
图 3  燕麦油脂清除 O -2·的效果
Fig. 3  The scavenging effects of oat oil on O2 -·
2􀆰 5  燕麦油脂对对小鼠肝匀浆自发性生成 MDA 的
影响
组织匀浆本身在温育条件下可以发生自氧化反应
产生氧自由基,而这些自由基能通过攻击生物膜中的
多不饱和脂肪酸引发脂质过氧化反应,并因此形成脂
质过氧化物,脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成脂
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  11 期 发芽对燕麦油脂抗氧化活性的影响
质分解产物,而且还可通过链式或支链式反应,放大活
性氧作用。 因此测试 MDA 的量不仅可反映出组织内
脂质过氧化的程度,还能间接反映出细胞损伤的程
度[18]。
丙二醛生成量的多少代表了脂质过氧化的程度。
由图 4 可知,发芽后燕麦油脂对小鼠肝匀浆组织 MDA
的抑制作用优于未发芽样(P < 0􀆰 05),以发芽 5d 的燕
麦油脂效果最佳( IC50 = 66􀆰 780 ± 0􀆰 270mg·mL - 1),其
次为浸泡 20 h的燕麦油脂(IC50 = 74􀆰 918 ± 11􀆰 030mg·
mL - 1 ), 未 发 芽 的 效 果 最 差 ( IC50 = 920􀆰 413 ±
155􀆰 866mg·mL - 1)。 本结果表明发芽后燕麦油脂可很
好的抑制肝组织自氧化,从而达到保护肝组织的目的。
图 4  燕麦油脂对小鼠肝组织匀浆丙二醛生成的影响
Fig. 4  The effects of oat oil on MDA
formation of rat liver
2􀆰 6  燕麦油脂对 FeSO4 或 H2O2 诱导小鼠肝匀浆生
成MDA的影响
亚铁离子和双氧水是很强的自由基诱导剂,在小
鼠肝匀浆中添加自由基诱导剂后其自氧化产生的
MDA显著增加。 由图 5 可知,随着浓度的增加,燕麦
油脂对 FeSO4 诱导小鼠肝匀浆 MDA 生成的抑制作用
逐渐增强,发芽后的燕麦油脂其抑制作用明显高于未
发芽样(P < 0􀆰 05)。 抑制效果依次为:发芽 5 d 的燕
麦油脂(IC50 = 16􀆰 902 ± 0􀆰 187mg·mL - 1) >浸泡 20 h
的燕麦油脂( IC50 = 24􀆰 046 ± 0􀆰 611mg·mL - 1) > 未发
芽样(IC50 = 40􀆰 572 ± 0􀆰 664mg·mL - 1)。
燕麦油脂对 H2O2 诱导小鼠肝匀浆 MDA 的生成
有一定的抑制作用,其中浸泡 20h ( IC50 = 32􀆰 768 ±
2􀆰 629mg·mL - 1 ) 和发芽 5d ( IC50 = 44􀆰 344 ± 4􀆰 273
mg·mL - 1)的燕麦油脂其抑制作用均显著优于未发芽
样品(IC50 = 78􀆰 686 ± 3􀆰 325mg·mL - 1) (P < 0􀆰 05) (图
6)。
图 5  燕麦油脂对 FeSO4 诱导小鼠肝
匀浆生成MDA的影响
Fig. 5  The effects of oat oil on MDA formation
of rat liver induced by FeSO4
图 6  燕麦油脂对 H2O2 诱导小鼠
肝匀浆生成MDA的影响
Fig. 6  The effects of oat oil on MDA formation
of rat liver induced by H2O2
2􀆰 7  燕麦油脂还原能力的测定
如图 7 所示,燕麦油脂的吸光值随着浓度的增大
而增大。 显著性检验表明,浸泡 20h及发芽 5d的燕麦
油脂还原能力明显大于未发芽样品(P < 0􀆰 05),且发
芽 5 d的 燕麦油脂其还原力最强。
2􀆰 8  发芽前后燕麦油脂成分的分析
由表 1 可知,燕麦在发芽过程中,油脂含量随着发
芽天数的增加而减少,而总酚的含量在发芽过程中显
著上升。 燕麦发芽前后油脂中脂肪酸分析如表 2 所
示,其饱和脂肪酸含量随着发芽天数的增加而减少,单
不饱和脂肪酸的含量变化不大,多不饱和脂肪酸的含
量在发芽过程有所上升。
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表 1  燕麦发芽前后油脂主要成分的变化
Table 1  The changes of major composition of oat oils during the germination process
成分
Composition
对照
Control group
浸泡 20 h
Soaking 20h
发芽 5 d
Germination 5d
油脂含量 / % 8􀆰 6 8􀆰 3 5􀆰 2
多酚含量 / (mg·mL - 1) 9􀆰 53 11􀆰 14 13􀆰 52
表 2  燕麦发芽前后油脂中脂肪酸分析
Table 2  The analysis of fatty acids of oat oils
during the germination process
相对百分含量
Relative percentage / %
对照
Control group
浸泡 20 h
Soaking 20h
发芽 5 d
Germination 5d
饱和脂肪酸 18􀆰 2 16􀆰 2 16􀆰 5
单不饱和脂肪酸 39􀆰 8 39􀆰 4 39􀆰 1
多不饱和脂肪酸 41􀆰 6 43 42􀆰 1
图 7  不同燕麦油脂的还原能力
Fig. 7  The reducing capacity of different oat oils
3  结论和讨论
凡是具有未成对电子的原子,分子或原子团都称
为自由基。 自由基的化学性质十分活跃,它会产生很
多的危害。 如:导致细胞膜发生变性、造成基因突变、
诱发癌症发生、侵蚀机体组织、导致各种非菌类炎症、
老性痴呆及侵蚀脑细胞等[19],因此筛选天然高效的自
由基清除剂已成为当前研究的热点。
本文研究了发芽前后燕麦油脂的抗氧化活性,研
究表明发芽前后的燕麦油脂对羟基自由基、二苯基苦
肼基自由基、超氧阴离子都有清除作用,对小鼠肝组织
匀浆丙二醛(MDA)生成及 FeSO4 或 H2O2 诱导小鼠肝
匀浆 MDA生成也有一定的抑制作用。 且随着浓度的
增加,其对自由基的清除作用及对脂质过氧化的抑制
作用随之增强。 而发芽后燕麦油脂的抗氧化活性明显
优于未发芽燕麦,这可能是由于燕麦发芽过程中,多酚
的含量有所增加,从而使提取的油脂中多酚含量显著
增加,而多酚具有很好的清除自由基和抗氧化功
能[20 - 22],这可能是燕麦发芽后所提取油脂抗氧化作用
增加的重要原因。
芽类食品已成为研究的热点,很多研究表明发芽
食品其营养价值及生物活性明显大于发芽前[23]。 本
文研究也显示燕麦发芽后所提取的油脂抗氧化活性显
著增加,表明发芽作为一种提高燕麦油脂功能的有效
方法具有广阔的应用前景。
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Effects of Germination on the Antioxidant Activities of Oat Oil
QI Xiang⁃yang  CAO Shao⁃qian  LIU He⁃shen  CHEN Wei
(College of Biological & Environmental Sciences, Zhejiang Wanli university, Ningbo,Zhejiang  315100)
Abstract:s: The compositions and inhibitory effects on free radicals and lipid peroxidation of oil from ungerminated and
germinated oat were analyzed by GC / MS and different antioxidant systems. The results showed that the oil obtained from
ungerminated and germinated oat could both effectively scavenge DPPH,·OH, O2 -·and inhibit the lipid peroxidation
in liver. The antioxidant activities of oil from germinated oat were better than those from ungerminated. In addition, the
oil from oat after germinating for 5 days showed the strongest antioxidant effects. GC / MS analysis indicated that
unsaturated fatty acids were the major ingredient of fatty acid with the content higher than 80% in the ungerminated and
germinated oat oil. The content of phenols increased during the germination process. These findings provide the evidence
for the development and application of germinated oats.
Key words:Oat; Lipid; Germination; Antioxidant activity
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