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Optimization of Ultrasonic-assisted Extraction Process of Polysaccharides from Truffles by Response Surface Methodology

响应面法优化块菌多糖的超声波辅助提取工艺


利用响应面分析法对超声波辅助提取块菌多糖的工艺进行优化。在单因素试验的基础上,以超声时间、功率、温度和液料比为自变量,以多糖提取率和多糖含量共为响应值,进行Box-Behnken中心组合试验,回归分析确定最优工艺条件。分析各个因素的显著性和交互作用后,得出最优工艺条件为:超声功率140 W、处理时间36min、处理温度50℃、液料比40:1,多糖理论提取率为18.42%,实际提取率为18.15%,相对误差为1.47%;多糖理论含量为74.70%,实际含量73.89%,相对误差为1.08%。


全 文 :核 农 学 报摇 圆园员猿袁圆苑渊苑冤院园怨怨远 耀 员园园圆
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员圆鄄园远鄄员怨摇 接受日期院圆园员圆鄄园远鄄员怨
作者简介院岳金玫袁女袁研究方向为功能性食品遥 耘鄄皂葬蚤造院赠怎藻躁蚤灶皂藻蚤圆园园缘岳 员远猿援 糟燥皂
通讯作者院蒲彪袁男袁教授袁主要研究方向为果蔬加工尧功能性食品遥 耘鄄皂葬蚤造院责怎遭蚤葬燥圆园园圆岳 员远猿援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员猿冤园苑鄄园怨怨远鄄园苑
响应面法优化块菌多糖的超声波辅助提取工艺
蒲摇 彪摇 岳金玫摇 陈安均摇 刘兴艳
渊四川农业大学食品学院袁四川 雅安摇 远圆缘园员源冤
摘摇 要院利用响应面分析法对超声波辅助提取块菌多糖的工艺进行优化遥 在单因素试验的基础上袁以超
声时间尧功率尧温度和液料比为自变量袁以多糖提取率和多糖含量共为响应值袁进行 月燥曾鄄月藻澡灶噪藻灶 中心组
合试验袁回归分析确定最优工艺条件遥 分析各个因素的显著性和交互作用后袁得出最优工艺条件为院超
声功率 员源园 宰尧处理时间 猿远皂蚤灶尧处理温度 缘园益尧液料比 源园颐 员袁多糖理论提取率为 员愿郾 源圆豫 袁实际提取率为
员愿郾 员缘豫 袁相对误差为 员郾 源苑豫 曰多糖理论含量为 苑源郾 苑园豫 袁实际含量 苑猿郾 愿怨豫 袁相对误差为 员郾 园愿豫 遥
关键词院块菌曰多糖曰响应面分析法曰超声波
摇 摇 块菌属真菌子囊菌亚门渊粤泽糟燥皂赠糟燥贼蚤灶葬冤尧块菌目
渊栽怎遭藻则葬造藻泽冤尧块菌科渊栽怎遭藻则葬糟藻葬藻冤尧块菌属渊栽怎遭藻则冤 咱员暂 袁
是与树木共生的外生菌根型食药两用真菌咱圆暂 遥 块菌
的主要活性成分有 琢 原雄烷醇尧神经酰胺尧块菌多糖
等袁其中块菌多糖是主要的生物活性物质袁是一种糖蛋
白袁水溶性好尧毒性低袁具有诱导细胞凋亡尧抗肿瘤尧免
疫调节等功能咱猿暂 遥
超声波辅助提取法袁主要是利用超声波辐射产生的
空化作用袁形成强大的压力使细胞壁甚至整个生物体在
瞬间破裂袁同时超声波产生的振动效应能加快胞内物质
释放尧扩散及溶解袁从而极大地缩短提取时间袁提高提取
效率咱缘 原 远暂 遥 目前国内对块菌的研究其产地主要集中在
云南省和四川省会东县咱苑 原员圆暂 袁有关四川攀枝花产块菌目
前仅有罗强等咱员猿暂 遥 对其水溶性多糖的单糖组成与抗氧
化活性进行相关的研究遥 攀枝花有野块菌之乡冶的称号袁
是中国商业块菌的中心袁本文采用响应面法优化超声波
辅助提取块菌多糖的工艺参数袁旨在为攀枝花块菌的深
入研究及产业化开发提供一定的参考遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料与试剂
块菌子实体院新鲜子实体于 圆园员员 年 员员 月份采自
四川省攀枝花市袁采收之后低温冷藏在最短时间运回
实验室袁贮藏于 原 苑园益备用曰福林酚袁北京索来宝科技
有限公司曰怨缘豫乙醇尧苯酚尧浓硫酸等袁均为国产分析
纯曰试验用水均为蒸馏水遥
员郾 圆摇 仪器与设备
阅 原 猿苑缘圆园 型离心机渊德国 月蚤燥枣葬早藻 泽贼则葬贼燥泽 公司冤曰
砸耘缘圆 原 怨怨 旋转蒸发器渊上海亚荣生化仪器厂冤曰哉灾 原
猿园园园孕悦扫描型紫外可见分光光度计渊上海美谱达仪
器冤曰 运匝缘圆园园阅月 型超声波清洗器渊昆山市超声波仪器
有限公司冤曰孕蕴猿园园园 型冷冻干燥机渊美国 栽澡藻则皂燥 公
司冤遥
员郾 猿摇 方法
员郾 猿郾 员摇 块菌粗多糖的提取工艺摇 原料寅缘园益干燥寅
粉碎过 远园 目筛寅无水乙醇预处理渊缘园益尧猿 澡冤寅超声
波处理寅热水浸提渊怨园益尧远园皂蚤灶冤寅真空抽滤寅滤液
减压浓缩寅乙醇沉淀寅离心渊缘源园园则窑皂蚤灶 原员袁员园皂蚤灶冤寅
沉淀冷冻干燥寅粗多糖遥
员郾 猿郾 圆摇 单因素试验 摇 准确称取样品 缘郾 园早 渊精准至
园郾 园园园员早冤袁在试验设计的条件下进行提取袁得到块菌粗
多糖袁称量计算多糖提取率遥 采用浓硫酸 原 苯酚
法咱员源暂 袁用葡萄糖作标准曲线袁测定多糖含量遥
多糖提取率渊砸员冤 越粗提物质原料质量 伊员园园豫
多糖含渊砸圆冤 越
样品浓度 伊稀释倍数 伊反应液体积
粗提物质量
伊员园园豫
远怨怨
摇 苑 期 响应面法优化块菌多糖的超声波辅助提取工艺
超声波处理温度院设定超声功率 员园园 宰尧超声时间
圆园皂蚤灶尧液料比 源园颐 员袁考察超声温度分别为 源园尧缘园尧远园尧
苑园尧愿园益遥
超声波处理时间院设定超声功率 员远园 宰尧超声温度
远园益尧液料比 源园颐 员袁分别超声 员园尧圆园尧猿园尧源园尧缘园尧远园皂蚤灶遥
超声功率院设定超声温度 远园益尧时间 猿园皂蚤灶尧液料
比 源园 颐 员袁超声功率分别为 愿园尧 员园园尧 员圆园尧 员源园尧 员远园尧
员愿园宰遥
液料比院设定超声温度 远园益尧超声时间 猿园皂蚤灶尧超
声功率 员远园宰袁液料比分别为 员园 颐 员尧圆园 颐 员尧猿园 颐 员尧源园 颐 员尧
缘园颐 员尧远园颐 员遥
员郾 猿郾 猿摇 月燥曾鄄月藻澡灶噪藻灶中心组合试验摇 根据单因素试验
结果袁进行 源 因素 猿 水平 月燥曾鄄月藻灶澡灶噪藻灶 中心组合试验
试验袁以多糖提取率和多糖含量为响应值袁优化提取工
艺遥
员郾 猿郾 源摇 数据处理 摇 利用 阅藻泽蚤早灶 耘曾责藻则贼 苑郾 园 统计分析
软件和 耘曾糟藻造处理试验数据遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 单因素试验
圆郾 员郾 员摇 超声波处理温度对块菌多糖提取的影响
由图 员 可知袁多糖提取率和含量随着超声波温度
的升高而提高袁在 远园益时达到各自的最大值袁之后随
温度的持续升高而不同程度的下降遥 可能是因为温度
的升高使液体介质的表面张力和黏度降低袁使得细胞
破坏程度增大袁促进细胞内部的多糖物质向外溶出遥
但是温度过高在使多糖向外扩散的能力增强的同时也
导致子实体颗粒中的其他成分溶出袁使得溶液中杂质
含量增高袁降低提取液中多糖的含量遥
图 员摇 超声温度对多糖提取率和多糖含量的影响
云蚤早援 员摇 栽澡藻 藻枣枣藻糟贼 燥枣 怎造贼则葬泽燥灶蚤糟 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 燥灶
责燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻泽 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 则葬贼蚤燥 葬灶凿 贼澡藻
糟燥灶贼藻灶贼 枣则燥皂 糟则怎凿藻 藻曾贼则葬糟贼
圆郾 员郾 圆摇 超声波处理时间对块菌多糖提取的影响摇 由
图 圆 可看出袁多糖的提取率随超声波时间的延长而不
断增加袁可能是由于超声波的空化效应使颗粒在高速
碰撞尧振荡和剥离下变成更小的质团袁粘度降低使得溶
出率提高曰同时超声波所产生的高温尧高压使基质内部
溶出组分的分子与原有固体分子间的结合键断裂袁促
进了溶出过程遥 多糖含量随超声波时间的延长逐渐升
高袁至 猿园皂蚤灶 达到最高点袁之后随超声波时间的延长而
降低遥 原因是当超声波处理数分钟后细胞破碎程度增
大袁细胞内部的多糖物质开始向外扩散袁多糖的含量开
始升高到最大值袁但随超声波处理时间的越长袁对多糖
结构的破坏可能也是造成多糖含量下降的原因遥
图 圆摇 超声时间对多糖提取率和多糖含量的影响
云蚤早援 圆摇 栽澡藻 藻枣枣藻糟贼 燥枣 怎造贼则葬泽燥灶蚤糟 贼蚤皂藻 燥灶
责燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻泽 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 则葬贼藻泽 葬灶凿 贼澡藻
糟燥灶贼藻灶贼 枣则燥皂 糟则怎凿藻 藻曾贼则葬糟贼
圆郾 员郾 猿摇 超声功率对块菌多糖提取的影响摇 由图 猿 可
知袁超声波强度对多糖的提取有明显的影响袁多糖提取
率和含量随超声波功率的加强而提高袁在 员圆园 宰 时达
到最高点袁超过 员圆园 宰后均明显下降遥 推测这可能因
为当超声波作用时间和温度固定时袁超声波的破碎作
用主要取决于超声波功率袁功率太小不能使细胞破碎
或破碎程度不足袁使多糖不能快速有效地扩散曰功率越
大其机械振动强度越大袁对晶体结构的破坏越彻底袁越
有利于多糖的提取遥 但超声波功率过大可能会导致多
糖分子的糖苷键断裂袁从而影响多糖提取遥
圆郾 员郾 源摇 液料比对块菌多糖提取的影响摇 根据块菌多
糖提取率和含量袁比较不同液料比对多糖提取的影响袁
结果如图 源 所示遥
由图 源 可知袁多糖提取率和含量随溶剂量比例的
增大而提高袁在液料比为 猿园颐 员是达到最大值袁随液料
比的持续增大而下降遥 由于溶剂较少袁多糖溶出一定
的程度后溶液就达到饱和袁不再继续溶出曰同时如果溶
剂量太少袁材料本身吸收一定量后袁作为超声波介质的
苑怨怨
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
图 猿摇 超声功率对多糖提取率和
多糖含量的影响
云蚤早援 猿摇 栽澡藻 藻枣枣藻糟贼 燥枣 怎造贼则葬泽燥灶蚤糟 责燥憎藻则 燥灶
责燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻泽 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 则葬贼藻泽 葬灶凿
贼澡藻 糟燥灶贼藻灶贼 枣则燥皂 糟则怎凿藻 藻曾贼则葬糟贼
图 源摇 液料比对多糖提取率和
多糖含量的影响
云蚤早援 源摇 栽澡藻 藻枣枣藻糟贼 燥枣 造蚤择怎蚤凿鄄泽燥造蚤凿 则葬贼蚤燥
燥灶 责燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻泽 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 则葬贼藻泽
葬灶凿 贼澡藻 糟燥灶贼藻灶贼 燥枣 糟则怎凿藻 藻曾贼则葬糟贼
液体就会很少袁影响超声波在液相中的作用曰因此随着
溶剂量的增大袁细胞内部的多糖物质开始向外扩散袁多
糖提取率和含量随之增大遥 但随着反应体系中溶剂量
的持续增大袁反应产物的浓度降低袁多糖提取率和含量
也随之下降遥 因此选择 猿园颐 员为最佳液料比遥
圆郾 圆摇 月燥曾鄄月藻澡灶噪藻灶中心组合设计试验
在单因素试验的基础上袁固定液料比为 猿园 颐 员袁以
超声时间尧超声温度尧液料比尧超声功率为自变量袁进行
源 因素 猿 水平 月燥曾鄄月藻灶澡灶噪藻灶 的中心组合试验袁因素水
平表及编码如表 员遥
圆郾 圆郾 员摇 响应面试验设计及结果摇 由 阅藻泽蚤早灶 耘曾责藻则贼 苑郾 园
统计分析软件的试验设计袁源 因素 猿 水平的中心组合
设计包括 圆怨 个试验方案袁具体的试验方案及试验结果
如表 圆 所示遥
表 员摇 块菌多糖的超声波辅助提取
响应面试验因素水平编码表
栽葬遭造藻 员摇 悦燥凿藻凿 增葬则蚤葬遭造藻泽 葬灶凿 贼澡藻蚤则
糟燥凿藻凿 造藻增藻造泽 蚤灶 则藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 葬灶葬造赠泽蚤泽
试验因素
耘曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造 枣葬糟贼燥则泽
因素水平与编码 蕴藻增藻造 燥枣 糟燥凿藻
原 员 园 员
超声时间渊粤冤 辕 皂蚤灶 圆园 猿园 源园
超声温度渊月冤 辕 益 缘园 远园 苑园
液料比渊悦冤 圆园颐 员 猿园颐 员 源园颐 员
超声功率渊阅冤 辕 宰 员园园 员圆园 员源园
摇 摇 晕燥贼藻院 粤院 怎贼则葬泽燥灶蚤糟 贼蚤皂藻袁 月院 怎贼则葬泽燥灶蚤糟 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻袁 糟院 蕴蚤择怎鄄蚤凿鄄蚤凿鄄泽燥造蚤凿
则葬贼燥袁 阅院 怎贼则葬泽燥灶蚤糟 责燥憎藻则援 栽澡藻 泽葬皂憎 葬泽 遭藻造燥憎援
表 圆摇 块菌多糖超声波辅助提取的
响应面试验设计及结果
栽葬遭造藻 圆摇 耘曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造 凿藻泽蚤早灶 葬灶凿 糟燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早
则藻泽怎造贼泽 枣燥则 则藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 葬灶葬造赠泽蚤泽
试验
栽藻泽贼 粤 月 悦 阅 砸员 砸圆
员 猿园 缘园 圆园 员圆园 员源援 园远 远苑援 愿愿
圆 源园 远园 猿园 员源园 员远援 怨愿 苑员援 怨远
猿 猿园 苑园 猿园 员源园 员猿援 圆猿 远苑援 猿员
源 猿园 缘园 猿园 员源园 员远援 园缘 苑员援 远缘
缘 圆园 苑园 猿园 员圆园 员员援 圆源 远圆援 猿愿
远 圆园 远园 圆园 员圆园 员源援 缘缘 远愿援 愿员
苑 猿园 苑园 源园 员圆园 员员援 园怨 远圆援 圆远
愿 圆园 远园 源园 员圆园 员圆援 员猿 远源援 圆猿
怨 源园 远园 源园 员圆园 员缘援 苑猿 远怨援 缘愿
员园 猿园 远园 源园 员源园 员远援 猿源 苑圆援 圆园
员员 猿园 远园 猿园 员圆园 员远援 愿缘 苑猿援 员远
员圆 猿园 远园 猿园 员圆园 员远援 猿缘 苑圆援 怨源
员猿 源园 远园 圆园 员圆园 员源援 圆源 远愿援 圆圆
员源 猿园 苑园 猿园 员园园 员圆援 缘缘 远缘援 园圆
员缘 猿园 远园 猿园 员圆园 员远援 苑圆 苑圆援 怨圆
员远 圆园 远园 猿园 员园园 员圆援 圆源 远缘援 源源
员苑 圆园 远园 猿园 员源园 员源援 远缘 远怨援 园园
员愿 源园 苑园 猿园 员圆园 员圆援 员员 远源援 员怨
员怨 猿园 苑园 圆园 员圆园 员源援 圆源 远愿援 圆圆
圆园 猿园 远园 猿园 员圆园 员远援 愿源 苑圆援 苑苑
圆员 猿园 缘园 源园 员圆园 员源援 愿猿 远怨援 猿源
圆圆 源园 缘园 猿园 员圆园 员源援 员源 远愿援 园猿
圆猿 猿园 远园 圆园 员园园 员缘援 源怨 苑园援 缘怨
圆源 猿园 远园 源园 员园园 员员援 缘源 远猿援 员员
圆缘 源园 远园 猿园 员园园 员猿援 远圆 远苑援 园缘
圆远 猿园 远园 猿园 员圆园 员苑援 圆愿 苑猿援 怨愿
圆苑 圆园 缘园 猿园 员圆园 员员援 愿猿 远源援 缘缘
圆愿 猿园 缘园 猿园 员园园 员圆援 员源 远苑援 员猿
圆怨 猿园 远园 圆园 员源园 员猿援 怨源 远苑援 远缘
愿怨怨
摇 苑 期 响应面法优化块菌多糖的超声波辅助提取工艺
圆郾 圆郾 圆摇 以多糖提取率为响应值的回归分析 摇 据表 圆
的结果袁建立多糖提取率渊砸员冤与超声时间 粤尧超声温
度 月尧液料比 悦尧超声功率 阅的 源 因素 猿 水平数学回归
模型为院砸员 越 员远郾 愿员 垣 园郾 愿缘粤 原 园郾 苑圆月 原 园郾 源员悦 垣 员郾 员猿阅原园郾 猿远粤月 垣 园郾 怨愿粤悦 垣 园郾 圆源粤阅 原 园郾 怨愿月悦 原 园郾 愿员月阅 垣
员郾 缘怨 悦阅 原 员郾 远愿粤圆 原 圆郾 源圆月圆 原 员郾 园怨悦圆 原 员郾 园员阅圆袁方差
分析见表 猿遥
图 缘摇 渊葬冤超声时间与液料比尧渊遭冤超声温度与液料比尧渊糟冤超声温度与超声功率尧渊凿冤液料比与超声功率的
互交作用对多糖提取率的影响
云蚤早援 缘摇 栽澡藻 藻枣枣藻糟贼泽 燥枣 怎造贼则葬泽燥灶蚤糟 贼蚤皂藻 葬灶凿 造蚤择怎蚤凿鄄泽燥造蚤凿 则葬贼蚤燥渊葬冤 怎造贼则葬泽燥灶蚤糟 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 葬灶凿 造蚤择怎蚤凿鄄泽燥造蚤凿 则葬贼蚤燥 渊遭冤 怎造贼则葬泽燥灶蚤糟
贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 葬灶凿 怎造贼则葬泽燥灶蚤糟 责燥憎藻则 渊糟冤 造蚤择怎蚤凿 葬灶凿泽燥造蚤凿 则葬贼蚤燥 葬灶凿 怎造贼则葬泽燥灶蚤糟 责燥憎藻则 渊凿冤 燥灶 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠
摇 摇 由表 猿 的方差分析可知院回归方程的失拟性检验
云员 越 圆郾 苑愿 约 云园 郾 园缘 渊员园袁源冤 越 缘郾 怨远袁差异不显著袁表明所
选用的二次回归模型是适当的曰回归方程的显著性检
验 云圆 越 圆怨郾 猿苑 跃 云园 郾 园员 渊员源袁员源冤 越 猿郾 苑园袁差异极显著袁说
明模型的预测值与实际值非常吻合曰该回归模型的总
决定系数 砸圆 为 园郾 怨远苑员袁表明因变量和全体自变量之
间的线性关系显著曰调整决定系数 砸圆粤凿躁为 园郾 怨猿源员袁表明
该模型的拟合程度较好袁响应值的 怨猿郾 源员豫来自于所
选变量袁可用该方程代替真实的试验点进行分析袁预测
响应值遥 对回归系数进行显著性检验袁在 琢 越 园郾 园缘 显
著水平剔除不显著项袁得到优化后的方程为院砸员 越员远郾 愿员 垣 园郾 愿缘粤 原 园郾 苑圆月 原 园郾 源员悦 垣 员郾 员猿阅 垣 园郾 怨愿粤悦 原
园郾 怨愿月悦 原园郾 愿员月阅 垣员郾 缘怨悦 原 员郾 远愿粤圆 原 圆郾 源圆月圆 原 员郾 园怨悦圆
原 员郾 园员阅圆遥 各因素的 云 值可以反映因素对试验指标
的重要性袁云值越大袁表明对试验指标的影响越大袁即
重要性越大咱员缘暂 遥 从方差分析可知袁对多糖提取率的影
响程度大小依次为超声功率 跃超声时间 跃超声温度 跃
液料比袁均呈极显著影响遥 考察因素间的交互作用袁在
所建立的数学回归模型中袁粤悦尧月悦尧月阅尧悦阅 几项之间
存在极显著的交互作用遥 绘制 粤悦尧月悦尧月阅尧悦阅 的响
应曲面袁分别如图 缘 原 葬尧缘 原 遭尧缘 原 糟尧缘 原 凿所示遥
摇 摇 响应面分析图是特定的响应面对应的因素 载员尧
表 猿摇 多糖提取率渊砸员冤的响应面试验
结果方差分析表
栽葬遭造藻 猿摇 粤灶葬造赠泽蚤泽 增葬则蚤葬灶糟藻 燥枣 贼澡藻 糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿
则藻早则藻泽泽蚤燥灶 藻择怎葬贼蚤燥灶 枣燥则 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶
赠蚤藻造凿 燥枣 责燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻泽
来源
杂燥怎则糟藻
平方和
杂杂
自由度
阅云
均方
酝杂
云值
云 增葬造怎藻
孕值
孕 增葬造怎藻
显著性
杂蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶糟藻
模型 员园猿援 猿园 员源 苑援 猿愿 圆怨援 猿苑 约 园援 园园园员 鄢鄢
粤 愿援 远源 员 愿援 远源 猿源援 猿苑 约 园援 园园园员 鄢鄢
月 远援 员缘 员 远援 员缘 圆源援 源苑 园援 园园园圆 鄢鄢
悦 员援 怨苑 员 员援 怨苑 苑援 愿猿 园援 园员源圆 鄢
阅 员缘援 源源 员 员缘援 源源 远员援 源源 约 园援 园园园员 鄢鄢
粤月 园援 缘圆 员 园援 缘圆 圆援 园远 园援 员苑圆愿
粤悦 猿援 愿圆 员 猿援 愿圆 员缘援 圆员 园援 园园员远 鄢鄢
粤阅 园援 圆猿 员 园援 圆猿 园援 怨园 园援 猿缘怨源
月悦 猿援 愿源 员 猿援 愿源 员缘援 圆怨 园援 园园员远 鄢鄢
月阅 圆援 远员 员 圆援 远员 员园援 猿愿 园援 园园远员 鄢鄢
悦阅 员园援 园愿 员 员园援 园愿 源园援 员圆 约 园援 园园园员 鄢鄢
粤圆 员愿援 圆苑 员 员愿援 圆苑 苑圆援 苑员 约 园援 园园园员 鄢鄢
月圆 猿愿援 园缘 员 猿愿援 园缘 员缘员援 源源 约 园援 园园园员 鄢鄢
悦圆 苑援 远愿 员 苑援 远愿 猿园援 缘苑 约 园援 园园园员 鄢鄢
阅圆 远援 远苑 员 远援 远苑 圆远援 缘苑 园援 园园园员 鄢鄢
剩余 猿援 缘圆 员源 园援 圆缘
失拟 猿援 园苑 员园 园援 猿员 圆援 苑愿 园援 员远愿苑
误差 园援 源源 源 园援 员员
总和 员园远援 愿圆 圆愿
载圆尧载猿 构成的一个三维立体图袁以及在二维平面上的
等高线袁其中等高线的形状反映交互效应的强弱袁趋于
怨怨怨
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
椭圆形表示二因素之间的交互作用显著袁趋于圆形则
正好相反遥 由图 缘 原 葬 和图 缘 原 遭 可见袁其等高线呈椭
圆形袁椭圆形的轴线分别与 粤尧悦坐标轴和 月尧悦坐标轴
存在一定角度袁说明超声时间和超声温度与液料比均
存在一定的交互作用袁二者的响应曲线陡峭袁表明 粤悦
和 月悦对多糖提取率的影响极为显著遥 由图 缘 原 糟 和
图 缘 原 凿可知袁超声温度与超声功率尧液料比与超声功
率的等高线均呈抛物线袁二者的响应曲面走势剧烈袁表
明 月阅和 悦阅对多糖提取率都有极显著影响遥 因素间
的交互作用对多糖提取率的影响程度依次为 悦阅 跃 月悦
跃 粤悦 跃 月阅遥
图 远摇 渊葬冤超声时间与液料比尧渊遭冤超声温度与液料比尧渊糟冤液料比与超声功率的
互交作用对多糖含量的影响
云蚤早援 远摇 栽澡藻 藻枣枣藻糟贼泽 燥枣 怎造贼则葬泽燥灶蚤糟 贼蚤皂藻 葬灶凿 造蚤择怎蚤凿鄄泽燥造蚤凿 则葬贼蚤燥渊葬冤袁 怎造贼则葬泽燥灶蚤糟 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 葬灶凿
造蚤择怎蚤凿鄄泽燥造蚤凿 则葬贼蚤燥渊遭冤袁 造蚤择怎蚤凿鄄泽燥造蚤凿 则葬贼蚤燥 葬灶凿 怎造贼则葬泽燥灶蚤糟 责燥憎藻则渊糟冤燥灶 责燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻 糟燥灶贼藻灶贼
圆郾 圆郾 猿摇 以多糖含量为响应值的回归分析摇 据表 圆 结
果袁建立多糖含量与超声时间尧超声温度尧液料比尧超声
功率的 源 因素 猿 水平回归方程为院砸圆 越 苑猿郾 员缘 垣 员郾 圆圆粤原 员郾 远园月 原 园郾 愿怨悦 垣 员郾 苑怨阅 原 园郾 源圆粤月 垣 员郾 源愿粤悦 垣
园郾 猿源粤阅 原 员郾 愿远月悦 原 园郾 缘远月阅 垣 猿郾 园员悦阅 原 猿郾 源苑粤圆 原
源郾 员远月圆 原 圆郾 猿怨悦圆 原 员郾 远源阅圆遥
摇 摇 由表 源 的方差分析可知院回归方程的失拟性检验
云员 越 猿郾 猿源 约 云园 郾 园缘 渊员园袁源冤 越 缘郾 怨远袁差异不显著袁表明所
选用的二次回归模型是适当的曰回归方程的显著性检
验 云圆 越 猿苑郾 苑圆 跃 云园 郾 园员 渊员源袁员源冤 越 猿郾 苑园袁差异极显著曰该
回归模型的总决定系数 砸圆 越 园郾 怨苑源圆袁调整决定系数
砸圆粤凿躁 越 园郾 怨源愿猿袁说明该模型的拟合程度良好袁模型成立遥
对回归系数显著性检验袁在 琢 越 园郾 园缘 显著水平剔除不
显著项袁得到优化后的方程为院砸圆 越 苑猿郾 员缘 垣 员郾 圆圆粤 原员郾 远园月 原 园郾 愿怨悦 垣 员郾 苑怨阅 垣 员郾 源愿粤悦 原 员郾 愿远月悦 垣 猿郾 园员悦阅
原猿郾 源苑粤圆 原 源郾 员远月圆 原 圆郾 猿怨悦圆 原 员郾 远源阅圆遥 各因素对多糖
含量均呈极显著影响袁其影响程度依次为超声功率 跃
超声温度 跃超声时间 跃液料比袁与各因素对多糖提取
表 源摇 多糖含量的响应面试验结果方差分析表
栽葬遭造藻 源摇 粤灶葬造赠泽蚤泽 增葬则蚤葬灶糟藻 燥枣 贼澡藻 糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿
则藻早则藻泽泽蚤燥灶 藻择怎葬贼蚤燥灶 枣燥则 贼澡藻 责燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻 糟燥灶贼藻灶贼
来源
杂燥怎则糟藻
平方和
杂杂
自由度
阅云
均方
酝杂
云值
云 增葬造怎藻
孕值
孕 增葬造怎藻
显著性
杂蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶糟藻
模型 猿圆愿援 园苑 员源 圆猿援 源猿 猿苑援 苑圆 约 园援 园园园员 鄢鄢
粤 员苑援 愿员 员 员苑援 愿员 圆愿援 远苑 园援 园园园员 鄢鄢
月 猿园援 苑圆 员 猿园援 苑圆 源怨援 源缘 约 园援 园园园员 鄢鄢
悦 怨援 源缘 员 怨援 源缘 员缘援 圆员 园援 园园员远 鄢鄢
阅 猿愿援 圆苑 员 猿愿援 圆苑 远员援 远园 约 园援 园园园员 鄢鄢
粤月 园援 苑园 员 园援 苑园 员援 员圆 园援 猿园苑源
粤悦 愿援 愿圆 员 愿援 愿圆 员源援 圆园 园援 园园圆员 鄢鄢
粤阅 园援 源远 员 园援 源远 园援 苑猿 园援 源园远圆
月悦 员猿援 苑远 员 员猿援 苑远 圆圆援 员缘 园援 园园园猿 鄢鄢
月阅 员援 圆源 员 员援 圆源 圆援 园园 园援 员苑怨园
悦阅 猿远援 员愿 员 猿远援 员愿 缘愿援 圆源 约 园援 园园园员 鄢鄢
粤圆 苑愿援 员怨 员 苑愿援 员怨 员圆缘援 愿远 约 园援 园园园员 鄢鄢
月圆 员员圆援 园怨 员 员员圆援 园怨 员愿园援 源圆 约 园援 园园园员 鄢鄢
悦圆 猿苑援 园苑 员 猿苑援 园苑 缘怨援 远愿 约 园援 园园园员 鄢鄢
阅圆 员苑援 源员 员 员苑援 源员 圆愿援 园圆 园援 园园园员 鄢鄢
剩余 愿援 苑园 员源 园援 远圆
失拟 苑援 苑苑 员园 园援 苑愿 猿援 猿源 园援 员圆愿圆
误差 园援 怨猿 源 园援 圆猿
总和 猿猿远援 苑苑 圆愿
率影响的分析结果有一定差异遥 考察因素间的交互作
用袁由方差分析可知袁在所建立的数学回归模型中袁
粤悦尧月悦和 悦阅猿 项存在极显著的交互作用袁即超声时间
与液料比尧超声温度与液料比尧液料比与超声功率的交
互作用对多糖含量有极显著的影响遥 与对多糖提取率
园园园员
摇 苑 期 响应面法优化块菌多糖的超声波辅助提取工艺
的影响结果存在差异袁仅有 悦阅 项对多糖提取率和多
糖含量同时存在极显著作用遥 根据响应方程绘制 粤悦尧
月悦和 悦阅的响应曲面分别如图 远 原 葬尧图 远 原 遭尧图 远 原 糟
所示遥
根据回归分析结果袁一次项和平方项为极显著项袁
说明所选因素对响应值的影响除了显著的线性关系
外袁还是高度卷曲的袁通过响应曲面可直观地看出其卷
曲度遥 由图 远 原 葬和图 远 原 遭 可见袁二者的等高线均呈
椭圆形袁说明超声时间和超声温度均与液料比之间存
在较强的交互效应袁与以多糖提取率为响应值的结果
一致遥 其中 月悦的响应曲面比 粤悦的响应曲面陡峭袁表
明 月悦间的交互作用强于 粤悦遥 由图 远 原 糟 可知袁液料
比与超声功率的等高线呈抛物线袁响应曲面走势剧烈袁
表明 悦阅的交互效应对多糖含量的影响巨大遥 由方差
分析可知袁粤悦尧月悦和 悦阅对多糖含量都有极显著影响袁
强弱程度依次为 悦阅 跃 月悦 跃 粤悦袁与对多糖提取率的影
响结果一致遥
圆郾 圆郾 源摇 超声辅助提取块菌多糖的工艺条件验证试验
由软件分析得最优条件为超声时间 猿远皂蚤灶尧超声
温度 缘园益尧液料比 源园颐 员尧超声功率 员源园 宰袁进行验证性
试验袁试验设 猿 次重复遥 多糖的理论提取率为
员愿郾 源圆豫 袁实际提取率为 员愿郾 员缘豫 袁相对误差为 员郾 源苑豫 曰
理论含量为 苑源郾 苑园豫 袁实际含量 苑猿郾 愿怨豫 袁相对误差为
员郾 园愿豫 遥
圆郾 猿 不同提取方法的比较
分别采用 猿 种方法提取块菌多糖袁比较各自的多
糖提取率和多糖含量袁结果见表 缘遥
表 缘摇 三种提取方法的结果比较
栽葬遭造藻 缘摇 栽澡藻 糟燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 则藻泽怎造贼泽 燥枣 贼澡则藻藻 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 皂藻贼澡燥凿泽
提取方法
耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿泽
最佳工艺条件
栽澡藻 燥责贼蚤皂怎皂 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽 枣燥则 贼澡藻 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶
提取率
孕燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻泽 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶
则葬贼藻泽 辕 豫
多糖含量
悦燥灶贼藻灶贼 燥枣 糟则怎凿藻
藻曾贼则葬糟贼 辕 豫
超声波法 超声时间 猿远皂蚤灶尧超声温度 缘园益尧超声功率 员源园宰袁液料比 猿园颐 员 员愿郾 员缘 依 园郾 员员 苑猿郾 愿怨 依 园郾 怨远
酶法咱员远暂 酶解时间 远缘皂蚤灶尧酶解温度 远员益尧酶用量 员郾 远豫 尧责匀为 缘郾 远袁液料比 猿园颐 员 员源郾 猿员 依 园郾 园苑怨 苑源郾 怨远 依 园郾 苑愿
热水浸提法咱员苑 暂 温度 怨园益尧时间 远园皂蚤灶尧液料比 猿猿颐 员 员猿郾 猿圆 依 园郾 园远圆 苑员郾 缘怨 依 员郾 员猿
摇 摇 由表 缘 的试验结果可知袁不同提取方法对块菌多
糖提取率存在较大影响袁超声波提取块菌多糖的提取
率明显高于酶法和热水浸提法遥 虽然超声波提取的多
糖含量相对值小于酶法袁但由于它的多糖提取率最高
高袁因此超声波提取得到的块菌多糖绝对含量为最大袁
表明该方法能有效提取块菌多糖遥
汤亚杰等咱员愿暂人利用液体深层发酵生成制备块菌
多糖袁胞内多糖产量最大值为 圆郾 怨圆 依 园郾 圆园 早窑蕴 原员遥 与
其他真菌多糖的提取研究相比较袁郑静等咱员怨暂人利用超
声波协同酶法从灵芝中得到多糖提取率为 猿郾 员远豫 袁廖
伟玲等咱圆园暂人用纤维素酶协同超声波从香菇中提取多
糖的得率为 远郾 苑远豫 袁魏桢元等咱员源暂用响应面优化得到香
菇多糖的提取率为 员源郾 圆圆豫 袁多糖含量为 猿愿郾 缘苑豫 袁陈
聪等咱圆员暂比较了热水尧超声及微波法提取裂褶菌多糖的
提取率袁结果表明微波提取法效果最好袁多糖得率达到
员圆郾 猿圆豫 遥 本试验得到块菌多糖的提取率和含量均较
高袁有一定的研究和实用意义袁为块菌多糖的提取尧纯
化尧化学结构尧性质分析尧组成成分分析等深入研究提
供初步的理论依据遥
目前袁对多糖提取的研究一般只以多糖提取率或
多糖含量之一为指标袁本试验以二者共为指标衡量试
验结果袁能更为准确和全面地考察试验因素的影响袁回
归模型和工艺参数可信度高袁能较为准确地预测实际
值遥 响应试验得到的多糖提取率和多糖含量均比单因
素试验高袁说明响应面优化超声波辅助提取块菌多糖
的工艺具有可行性袁可为实际生产研究提供一定的数
据参考遥
猿摇 结论
本试验采用超声波技术辅助提取块菌多糖袁结果
表明袁超声波法提取时间短尧提取率高袁同时还可避免
高温对提取成分的影响袁最佳工艺条件为院超声功率
员源园宰尧时间 猿远皂蚤灶尧温度 缘园益尧液料比 源园颐 员袁在此条件
下袁多糖提取率可达 员愿郾 员缘豫 袁多糖含量为 苑猿郾 愿怨豫 遥
参考文献院
咱 员 暂摇 魏景超援真菌鉴定手册咱酝暂援上海院上海科技出版社袁员怨苑愿院圆苑源 原
圆苑苑
咱 圆 暂摇 陈应龙袁弓明钦援 块菌资源多样性及其地理分布咱 允暂 援 中国食用
菌袁圆园园园渊缘冤院远 原 苑
员园园员
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员猿袁圆苑渊苑冤院园怨怨远 耀 员园园圆
咱 猿 暂 摇 汤亚杰袁孔国平袁朱伶俐袁 刘瑞桑袁 李冬生援块菌活性成分及其人
工栽培研究进展咱允暂 援中草药袁圆园园苑袁猿愿渊源冤院远圆怨 原 远猿圆
咱 源 暂摇 胡慧娟袁李佩珍袁林涛袁杭秉茜袁郭跃伟援 块菌多糖对小鼠肿瘤及
免疫系统的影响咱允暂 援中国药科大学学报袁员怨怨源袁圆缘渊缘冤院圆愿怨 原 圆怨圆
咱 缘 暂摇 邬方宁援超声提取技术在现代中药中的应用咱 允暂 援 中草药袁圆园园苑袁
猿愿渊圆冤院猿员缘 原 猿员远
咱 远 暂 摇 刘进杰袁张玉香袁冯志彬袁林秀梅援 超声波提取莲花粉多糖工艺
咱允暂 援食品科学袁圆园员员袁渊员愿冤院源源 原 源愿
咱 苑 暂 摇 张世奇袁阚建全援会东块菌香气成分的 郧悦鄄酝杂 分析咱 允暂 援食品科
学袁圆园员员袁猿圆渊愿冤院圆愿员 原 圆愿缘
咱 愿 暂 摇 张世奇援会东块菌多糖的纯化及其分子量测定咱 允暂 援食品与发酵
科技袁圆园员园袁源远渊远冤院怨苑 原 员园园
咱 怨 暂 摇 刘娟袁屈效源援 块菌多糖的相对分子质量测定和单糖组成分析
咱允暂 援中草药袁圆园园怨袁源园渊怨冤院员猿愿园 原 员猿愿员
咱员园暂摇 吴少华袁陈有为袁杨丽源袁李绍兰袁李治滢援 印度块菌的化学成分
研究咱允暂 援中草药袁圆园园怨袁源园渊愿冤院员圆员员 原 员圆员源
咱员员暂摇 郭坦袁侯成林袁魏磊袁孙娟袁范黎援 印度块菌提取物抗氧化活性的
研究咱允暂 援菌物学报袁圆园员园袁圆怨渊源冤院缘远怨 原 缘苑缘
咱员圆暂摇 曹晋忠袁魏磊袁苏红袁范黎袁李玉援 印度块菌粗多糖的提取及抗氧
化活性研究咱允暂 援 山西大学学报院自然科学版袁圆园员员袁猿源渊员冤院员猿苑
原 员源圆
咱员猿暂摇 罗强袁颜亮袁吴俐莎袁张杰袁杨志荣袁孙群援印度块菌水溶性多糖的
单糖组成与抗氧化活性研究咱允暂 援食品科学袁圆园员园袁渊圆猿冤院缘圆 原 缘远
咱员源暂摇 魏桢元袁钟耀广袁刘长江援 响应面优化法对香菇多糖提取的工艺
研究咱允暂 援辽宁农业科学袁圆园员园袁渊圆冤院员员 原 员源
咱员缘暂摇 徐建国袁田呈瑞袁胡青平袁董俊荣援响应面法优化槐花水溶性多糖
的超声波辅助提取工艺咱允暂 援食品科学袁圆园员员袁猿圆渊源冤院员员圆 原 员员远
咱员远暂摇 岳金玫袁蒲彪袁周月霞袁陈安均袁刘兴艳援 响应面法优化块菌多糖
的酶法辅助提取工艺咱允暂 援食品科学袁圆园员猿袁猿源渊圆冤院圆苑员 原 圆苑源援
咱员苑暂摇 岳金玫袁蒲彪袁陈安均袁刘兴艳援响应面法优化块菌多糖的提取工
艺咱允暂 援食品工业科技袁圆园员圆袁猿猿渊员怨冤院圆苑员 原 圆苑源
咱员愿暂摇 栽葬灶早 再 允袁 在澡怎 蕴 蕴袁 蕴蚤 阅 杂袁 酝蚤 在 再袁 蕴蚤 匀 酝援 杂蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶糟藻 燥枣
蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶 凿藻灶泽蚤贼赠 葬灶凿 糟葬则遭燥灶 泽燥怎则糟藻 燥灶 贼澡藻 皂赠糟藻造蚤葬造 早则燥憎贼澡 葬灶凿
栽怎遭藻则 责燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻泽 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶 遭赠 泽怎遭皂藻则早藻凿 枣藻则皂藻灶贼葬贼蚤燥灶 燥枣
悦澡蚤灶藻泽藻 贼则怎枣枣造藻 栽怎遭藻则 泽蚤灶藻灶泽藻咱 允暂 援 孕则燥糟藻泽泽 月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠袁 圆园园愿袁源猿
渊缘冤院缘苑远 原 缘愿远
咱员怨暂摇 郑静袁常逎滔袁林英袁程晖援超声波法和超声波酶法提取灵芝多糖
的条件研究咱允暂 援食用菌学报袁圆园园远袁员猿渊员冤院源愿 原 缘圆
咱圆园暂摇 廖伟玲袁徐晓飞袁冯金源袁翟旭峰援纤维素酶协同超声波法提取香
菇多糖的研究咱允暂 援湖南中医杂志袁圆园园愿袁渊远冤院愿苑 原 愿怨
咱圆员暂摇 陈聪袁钟葵袁林伟静袁周素梅援固体发酵裂褶菌多糖提取方法比较
咱允暂 援核农学报袁圆园员员袁圆缘渊远冤院员圆员员 原 员圆员缘
韵责贼蚤皂蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 哉造贼则葬泽燥灶蚤糟鄄葬泽泽蚤泽贼藻凿 耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶 孕则燥糟藻泽泽 燥枣
孕燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻泽 枣则燥皂 栽则怎枣枣造藻泽 遭赠 砸藻泽责燥灶泽藻 杂怎则枣葬糟藻 酝藻贼澡燥凿燥造燥早赠
孕哉 月蚤葬燥袁 再哉耘 允蚤灶鄄皂藻蚤袁 悦匀耘晕 粤灶鄄躁怎灶袁 蕴陨哉 载蚤灶早鄄赠葬灶
渊悦燥造造藻早藻 燥枣 云燥燥凿 杂蚤藻灶糟藻袁 杂蚤糟澡怎葬灶 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠 袁再葬爷葬灶袁 杂蚤糟澡怎葬灶摇 远圆缘园员源冤
粤遭泽贼则葬糟贼院栽燥 燥责贼蚤皂蚤扎藻 贼澡藻 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 责则燥糟藻泽泽 燥枣 栽则怎枣枣造藻泽 责燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻泽袁 贼澡藻 则藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 皂藻贼澡燥凿燥造燥早赠 渊砸杂酝冤 憎葬泽
葬凿燥责贼藻凿援 月葬泽藻凿 燥灶 贼澡藻 泽蚤灶早造藻 枣葬糟贼燥则 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼 贼澡藻 皂葬贼澡藻皂葬贼蚤糟葬造 则藻早则藻泽泽蚤燥灶 皂燥凿藻造 憎葬泽 藻泽贼葬遭造蚤泽澡藻凿 葬遭燥怎贼 贼澡藻 凿藻责藻灶凿藻灶贼
增葬则蚤葬遭造藻 渊藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 赠蚤藻造凿 燥枣 栽则怎枣枣造藻泽 责燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻泽 葬灶凿 责燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻泽 糟燥灶贼藻灶贼冤 葬灶凿 蚤灶凿藻责藻灶凿藻灶贼 增葬则蚤葬遭造藻泽 渊怎造贼则葬泽燥灶蚤糟
贼蚤皂藻袁 怎造贼则葬泽燥灶蚤糟 责燥憎藻则袁 怎造贼则葬泽燥灶蚤糟 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 葬灶凿 造蚤择怎蚤凿鄄泽燥造蚤凿 则葬贼蚤燥冤 援 栽澡藻 枣葬糟贼燥则泽 蚤灶枣造怎藻灶糟蚤灶早 贼澡藻 责则燥糟藻泽泽 责葬则葬皂藻贼藻则泽
憎藻则藻 凿藻贼藻则皂蚤灶藻凿 遭赠 则藻早则藻泽泽蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽袁 葬灶凿 贼澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 燥责贼蚤皂怎皂 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽 枣燥则 贼澡藻 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 憎藻则藻 葬泽
枣燥造造燥憎泽院 怎造贼则葬泽燥灶蚤糟 责燥憎藻则 憎葬泽 员源园宰袁 怎造贼则葬泽燥灶蚤糟 贼蚤皂藻 憎葬泽 猿远皂蚤灶袁 怎造贼则葬泽燥灶蚤糟 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 憎葬泽 缘园益 葬灶凿 造蚤择怎蚤凿鄄泽燥造蚤凿 则葬贼蚤燥
憎葬泽 源园院员援 栽澡藻 责则藻凿蚤糟贼蚤增藻 皂葬曾蚤皂怎皂 赠蚤藻造凿 燥枣 责燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻泽 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 憎葬泽 员愿郾 源圆豫 葬灶凿 贼澡藻 责燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻泽 糟燥灶贼藻灶贼 憎葬泽
苑源郾 苑园豫 袁 怎灶凿藻则 贼澡藻 燥责贼蚤皂蚤扎藻凿 责则燥糟藻泽泽 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽袁 贼澡藻 葬糟贼怎葬造 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 憎葬泽 员愿郾 员缘豫 葬灶凿 贼澡藻 则藻造葬贼蚤增藻 藻则则燥则 憎葬泽 员郾 源苑豫
袁 贼澡藻 葬糟贼怎葬造 糟燥灶贼藻灶贼 憎葬泽 苑猿郾 愿怨豫 葬灶凿 贼澡藻 则藻造葬贼蚤增藻 藻则则燥则 憎葬泽 员郾 园愿豫 援
运藻赠 憎燥则凿泽院栽则怎枣枣造藻泽曰 孕燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻泽曰 砸藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 皂藻贼澡燥凿泽曰 哉造贼则葬泽燥灶蚤糟 宰葬增藻 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶
圆园园员