全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员缘袁圆怨渊员园冤院员怨园员 耀 员怨园愿允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员源鄄园怨鄄园员摇 接受日期院圆园员源鄄员员鄄员园
基金项目院中央高校基本科研业务费基金项目渊再在圆园员圆员园冤
作者简介院李雅婷袁女袁主要从事药用植生物技术育种研究遥 耘鄄皂葬蚤造院圆园员猿愿园源员愿员岳 灶躁葬怎援 藻凿怎援 糟灶
通讯作者院向增旭袁男袁副教授袁主要从事药用植生物技术育种研究遥 耘鄄皂葬蚤造院扎曾曾蚤葬灶早岳 灶躁葬怎援 藻凿怎援 糟灶
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员缘冤员园鄄员怨园员鄄园愿
铁皮石斛同源四倍体与二倍体基因组
及甲基化差异分析
李雅婷摇 王红娟摇 向增旭
渊南京农业大学 辕中药材研究所袁江苏 南京摇 圆员园园怨缘冤
摘摇 要院采用扩增片段长度多态性渊粤云蕴孕冤和甲基化敏感扩增多态性渊酝杂粤孕冤技术袁探讨铁皮石斛二倍体
经染色体加倍后得到四倍体的过程中袁遗传差异和基因组 阅晕粤 甲基化水平及模式变化情况袁分析了铁
皮石斛二倍体与同源四倍体的基因组变异及甲基化差异遥 粤云蕴孕 结果显示袁在 圆缘 对引物组合扩增的 员
园园远 条带中袁源苑源 条为多态性带袁多态率为 源苑郾 员圆豫 曰在甲基化水平上袁二倍体铁皮石斛总甲基化率为
怨圆郾 远源豫 袁全甲基化率为 远圆郾 园远豫 袁半甲基化率为 猿园郾 缘愿豫 袁同源四倍体对应的甲基化率分别为 愿愿郾 远愿豫 尧
远源郾 缘园豫 尧圆源郾 员苑豫 遥 甲基化模式分析显示袁铁皮石斛同源四倍体有 圆愿郾 远猿豫的位点发生了去甲基化袁
猿园郾 远猿豫的位点发生了过甲基化遥 铁皮石斛同源四倍体 阅晕粤 碱基序列发生改变袁总甲基率低于其二倍
体袁且其甲基化模式发生了较大调整遥 本研究为进一步探索四倍体铁皮石斛的表观遗传调控机制与基
因组变异机理奠定了基础遥
关键词院铁皮石斛曰同源四倍体曰阅晕粤甲基化曰粤云蕴孕曰酝杂粤孕
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员缘郾 员园援 员怨园员
摇 摇 多倍化是植物进化和物种形成的主要驱动力咱员暂 遥
自然界大约 苑园豫的被子植物在进化中发生了多倍化
现象咱圆暂 遥 多倍体植物常表现出抗逆性强尧器官体积增
大及生物量增大等特点遥 蕴蚤怎 等咱猿暂认为袁在新形成的
多倍体中袁特定的染色体区段或序列是敏感的袁与
阅晕粤甲基化有密切的关系遥 阅晕粤 甲基化是基因组
阅晕粤的一种主要表观遗传修饰形式咱源暂 遥 在调控基因
表达尧植物的细胞分化和系统发育的过程中起着重要
的作用咱缘暂 遥 扩增片段长度多态性渊 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 枣则葬早皂藻灶贼
造藻灶早贼澡 责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂袁 粤云蕴孕冤技术是近几年发展起来的
高效分子标记技术袁粤云蕴孕 结合了限制性内切酶片段
长度多态性渊 则藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 贼则葬早皂藻灶贼 造藻灶早贼澡 责燥造赠皂燥则 责澡蚤泽皂袁
砸云蕴孕冤的稳定性和 孕悦砸技术的简便高效性袁同时又能
克服 砸云蕴孕 带型少尧信息量小袁以及随机扩增多态性
阅晕粤标记渊则葬灶凿燥皂 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 责燥造赠皂燥则责澡蚤扎 阅晕粤袁 砸粤孕阅冤
技术不稳定的缺点袁能检测整个基因组的遗传变
异咱远暂 遥 从分子标记方面阐述铁皮石斛多倍化后基因
组和甲基化修饰的差异袁为进一步研究铁皮石斛基因
组调控多倍体表达的规律提供依据遥 近年来袁植物同
源多倍体基因组变异和表观遗传是育种界的研究热
点遥 利用 粤云蕴孕 分子标记技术检测植物多倍体 阅晕粤
分子水平上的遗传变异袁发现一部分植物多倍化过程
中其基因组结构没有发生明显的变化咱苑 原 怨暂 曰而刘文革
等咱员园暂和张晓青等咱员员暂对西瓜和黄瓜的研究发现同源多
倍体间基因组结构有所改变遥 很多学者采用甲基化敏
感扩 增 多 态 性 渊 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶鄄泽藻灶泽蚤贼蚤增藻 葬皂噪责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂袁 酝杂粤孕冤技术对同源多倍体植物表观遗
传做了相关研究遥 杨琼等咱员圆暂和翟晓巧等咱员猿暂研究水稻
和毛泡桐同源四倍体与其二倍体之间甲基化模式后发
现两者差异较大遥 然而杨岚等咱员源暂和聂丽娟等咱怨暂研究
发现甜叶菊和西瓜经染色体加倍前后 阅晕粤 甲基化多
态性差异仅为 园郾 园圆豫 遥 目前铁皮石斛的研究主要集
中在药理学咱员缘 原 员远暂 尧化学成分咱员苑 原 员愿暂 尧规模化生产咱员怨 原 圆园暂
等方面袁而有关铁皮石斛同源四倍体和二倍体基因组
及甲基化的差异鲜见报道遥 本试验利用 粤云蕴孕 和
酝杂粤孕技术袁分析比较铁皮石斛同源四倍体与二倍体
员园怨员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
间的遗传差异及 阅晕粤甲基化水平和模式变异袁探索同
源四倍体与二倍体铁皮石斛 阅晕粤 碱基序列及其甲基
化的变化规律袁为探究植物同源多倍体优势农艺性状
和表观遗传的关系提供依据遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
本试验于 圆园员猿 年 远 月 原 圆园员源 年 远 月在南京农业
大学园艺学院中药系进行遥 以二倍体铁皮石斛及其经
秋水仙素离体诱导得到的同源四倍体试管苗为材料遥
员郾 圆摇 试验方法
员郾 圆郾 员摇 阅晕粤的提取及纯化摇 采用改良的 悦栽粤月 法咱圆员暂
进行 阅晕粤提取遥 取上述供试材料的嫩叶各 园郾 缘早袁在
液氮中研成粉末后转入 圆皂蕴 离心管中袁加入预热的
悦栽粤月提取液渊每克样品加入 猿 耀 缘皂蕴冤袁远缘益保温 猿园 耀
远园皂蚤灶袁每隔 员园皂蚤灶 轻轻颠倒混匀袁员圆 园园园则窑皂蚤灶 原员离心
缘皂蚤灶袁取上清液转入新离心管中袁加入等体积酚颐 氯仿
渊员颐 员冤袁提取后加入等体积的氯仿袁员圆 缘园园则窑皂蚤灶 原员离心
员园皂蚤灶袁取上清液加入 圆 辕 猿 体积的异丙醇混匀袁室温沉
淀 员缘皂蚤灶袁员圆 园园园 则窑皂蚤灶 原员离心 远皂蚤灶袁弃上清袁用 苑园豫的
乙醇漂洗沉淀袁员圆 缘园园 则窑皂蚤灶 原员离心 圆皂蚤灶袁弃上清袁重复
清洗 员 次遥 将提取的产物取 圆 耀 猿滋蕴 用 员郾 园豫琼脂糖
凝胶电泳检测袁其余的置于 原 圆园益保存备用遥
员郾 圆郾 圆摇 粤云蕴孕技术酶切尧链接反应摇 粤云蕴孕实验方法参
照 灾燥泽等咱圆圆暂进行袁并略作修改遥 圆 个不同倍性铁皮石
斛的基因组 阅晕粤 分别进行 耘糟燥砸 陨 辕 匀责葬 陨陨 和 耘糟燥砸 陨 辕
酝泽责 陨 圆 个组合 猿苑益酶切 猿澡袁接着 远缘益酶切 猿澡终止反
应遥 酶切产物加入 耘糟燥砸陨和 酝泽藻陨接头袁员缘益过夜遥
孕悦砸预扩增程序为院怨源益预变性 圆皂蚤灶曰怨源益变性
猿园泽袁缘远益退火 员皂蚤灶袁苑圆益延伸 员皂蚤灶袁圆远 个循环袁苑圆益延
伸 员园皂蚤灶遥 预扩增产物稀释 圆园 倍袁 供选择扩增用遥
孕悦砸选择扩增程序为院 怨源益预变性 圆皂蚤灶曰怨源益变性
猿园泽袁远缘益至 缘远益退火 猿园泽袁每轮循环温度递减 园郾 苑益袁
苑圆益延伸 员皂蚤灶袁扩增 员猿 轮遥 剩下的 圆猿 个循环的步骤
同上面循环渊粤云蕴孕 技术使用的接头和引物序列见表
员冤遥 选择性扩增产物采用 远豫聚丙烯酰胺凝胶电泳
渊非变性胶冤袁电泳结束后采用 圆 步法银染显色咱圆猿暂 遥
员郾 圆郾 猿摇 酝杂粤孕技术摇 用识别四碱基的 匀责葬域和 酝泽责玉
同裂酶分别与识别六碱基的核酸内切酶 耘糟燥砸玉组合
对样本 阅晕粤进行双酶切袁 阅晕粤 酶切的 圆 个反应体系
渊圆园滋蕴冤为院源园园灶早基因组 阅晕粤袁圆滋蕴的 员园 伊 月怎枣枣藻则源渊缘园
皂皂燥造窑蕴 原员运粤糟袁圆园 皂皂燥造窑蕴 原员 栽则蚤泽鄄葬糟藻贼葬贼藻袁员园 皂皂燥造窑蕴 原员
酝早粤糟圆袁员皂皂燥造窑蕴 原员 凿栽栽袁 责匀 值 苑郾 怨 冤曰源园园灶早 基因组
阅晕粤袁圆滋蕴 的 员园 伊 月怎枣枣藻则员 渊 员园皂皂燥造窑蕴 原员 栽则蚤泽鄄匀悦造袁
员园皂皂燥造窑蕴 原员酝早悦造圆袁员 皂皂燥造窑蕴 原员 凿栽栽袁责匀 值 苑郾 园冤渊此反
应内切酶组合为 耘糟燥砸玉和 酝泽责玉冤遥 取 耘糟燥砸玉和 匀责葬
域内切酶各 园郾 愿滋蕴袁猿苑益保温过夜遥 酶切后的反应液
与人工接头渊表 圆冤连接袁用 栽源 连接酶将酶切混合物进
行连接袁接头连接体系为 圆园滋蕴袁员园 伊 栽源 月怎枣枣藻则圆滋蕴袁
圆园滋皂燥造窑蕴 原员的 耘糟燥砸玉和 匀责葬域辕酝泽责玉接头 园郾 源滋蕴袁其
余用水补齐袁于 员远益连接过夜遥 随后进行预扩尧选扩尧
电泳及银染袁其操作过程和程序与上述 粤云蕴孕 分析的
操作一致遥
员郾 圆郾 源摇 酝杂粤孕数据分析摇 孕粤郧耘 条带的统计采用野园冶
和野员冶表示同一位点袁有带计为野员冶袁无带计为野园冶袁电
泳结果的条带分析见表 猿遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 铁皮石斛二倍体和同源四倍体 粤云蕴孕分析
通过 粤云蕴孕技术对铁皮石斛二倍体及其同源四倍
体间 阅晕粤 序列进行分析袁在 圆缘 对引物组合扩增的
员 园园远条带中袁源苑源 条为多态性带袁多态率为 源苑郾 员圆豫 袁
平均每对引物组合扩增的总带数为 源园郾 圆源 条袁多态性
带 员愿郾 怨远 条袁多态性比率在 源苑郾 员圆豫 耀 远远郾 园源豫间遥 说
明袁铁皮石斛二倍体和四倍体经同一引物扩增后袁产生
的 阅晕粤片段大小和数量有一定的差异袁铁皮石斛二倍
体染色体加倍前后 阅晕粤 碱基序列发生了变化遥 同时
也说明铁皮石斛二倍体及其同源四倍体间具有较高的
多样性渊图 员冤遥
圆郾 圆摇 铁皮石斛二倍体和同源四倍体 阅晕粤 甲基化水
平分析
圆 样品经 酝杂粤孕法扩增的带数及甲基化水平见表
源袁圆园 对引物在 圆 个样品中的总扩增片段为 员 缘苑源 条袁
平均每对引物扩增获得 苑愿郾 苑 条遥 不同倍性材料之间
甲基化差异较大袁铁皮石斛二倍体 阅晕粤总甲基化率为
怨圆郾 远源豫 尧全甲基化率为 远圆郾 园远豫 尧半甲基化率为
猿园郾 缘愿豫 袁而四倍体 阅晕粤 相应甲基化率分别为
愿愿郾 远愿豫 尧圆源郾 员苑豫 尧远源郾 缘园豫 遥 由此可知袁二倍体铁皮石
斛总甲基化率和半甲基化率均高于四倍体袁而全甲基
化率却偏低遥
圆郾 猿摇 铁皮石斛二倍体和同源四倍体基因组 阅晕粤 甲
基化模式的变化
通过对同源四倍体铁皮石斛及其二倍体的甲基化
模式比较袁并参考孟华兵等咱圆源暂和王春国等咱圆缘暂对不同
倍性材料基因组 阅晕粤甲基化类型的划分方法袁将所有
扩增的模式分为 粤尧月尧悦尧阅 源 类共 员缘 个亚类渊图 源尧
圆园怨员
摇 员园 期 铁皮石斛同源四倍体与二倍体基因组及甲基化差异分析
摇 摇 摇 摇 表 员摇 粤云蕴孕分析过程中所使用的接头和引物序列
栽葬遭造藻 员摇 杂藻择怎藻灶糟藻 燥枣 葬凿葬责贼藻则泽 葬灶凿 责则蚤皂藻则泽 怎泽藻凿 蚤灶 粤云蕴孕
接头与引物
粤凿葬责贼燥则 葬灶凿 责则蚤皂藻则
序列
杂藻择怎藻灶糟藻 渊缘忆鄄猿忆冤
引物
孕则蚤皂藻则
序列
杂藻择怎藻灶糟藻 渊缘忆鄄猿忆冤
耘糟燥砸 陨接头 员 悦栽悦郧栽粤郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦 酝源愿 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤悦粤悦
耘糟燥砸 陨接头 圆 粤粤栽栽郧郧栽粤悦郧悦粤郧栽悦栽粤悦 酝缘园 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤悦粤栽
酝泽藻 陨 接头 员 郧粤悦郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧 酝缘员 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤悦悦粤
酝泽藻 陨接头 圆 栽粤悦栽悦粤郧郧粤悦栽悦粤栽 酝缘源 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤悦悦栽
耘园园 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦 酝缘远 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤悦郧悦
酝园园 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤 酝缘苑 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤悦郧郧
耘猿远 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤悦悦 酝缘愿 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤悦郧栽
耘猿愿 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤悦栽 酝缘怨 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤悦栽粤
耘源员 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤郧郧 酝远园 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤悦栽悦
耘源圆 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤郧栽 酝远员 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤悦栽郧
耘源猿 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤栽粤 酝远圆 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤悦栽栽
耘源源 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤栽悦 酝远猿 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤郧粤粤
耘源缘 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤栽郧 酝远源 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤郧粤悦
耘源远 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤栽栽 酝远缘 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤郧粤郧
耘源苑 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦悦粤粤 酝远远 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤郧粤栽
耘源愿 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦悦粤悦 酝苑圆 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤郧郧悦
耘缘园 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦悦粤栽 酝愿猿 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤栽悦粤
耘苑缘 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦郧栽粤 酝愿源 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤栽悦悦
耘苑远 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦郧栽悦 酝愿缘 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤栽悦郧
耘苑愿 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦郧栽栽 酝愿远 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧栽粤粤栽悦栽
耘愿源 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦栽悦悦
耘愿缘 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦栽悦郧
耘愿远 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦栽悦栽
表 圆摇 酝杂粤孕分析所用引物
栽葬遭造藻 圆摇 孕则蚤皂藻则泽 怎泽藻凿 蚤灶 酝杂粤孕 葬灶葬造赠泽蚤泽
接头与引物
粤凿葬责贼藻则泽 葬灶凿 责则蚤皂藻则泽
序列
杂藻择怎藻灶糟藻 渊缘忆鄄猿忆冤
引物
孕则蚤皂藻则泽
序列
杂藻择怎藻灶糟藻 渊缘忆鄄猿忆冤
耘糟燥砸 陨 接头 员 悦栽悦郧栽粤郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦 耘源圆 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤郧栽
耘糟燥砸 陨 接头 圆 粤粤栽栽郧郧栽粤悦郧悦粤郧栽悦栽粤悦 耘源猿 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤栽粤
匀酝 接头 员 郧粤悦郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧 耘源源 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤栽悦
匀酝 接头 圆 悦郧悦栽悦粤郧郧粤悦栽悦粤栽 耘源缘 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤栽郧
耘园园 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦 耘源远 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤栽栽
酝杂孕园园 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧悦郧郧 耘源苑 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦悦粤粤
耘员圆 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤悦 耘缘园 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦悦粤栽
耘员源 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤栽 耘苑愿 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦郧栽栽
耘员苑 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦悦郧 耘愿源 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦栽悦悦
耘员愿 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦悦栽 耘愿缘 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦栽悦郧
耘圆源 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦栽悦 酝泽责猿怨 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧悦郧郧粤郧粤
耘猿远 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤悦悦 酝泽责源园 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧悦郧郧粤郧悦
耘猿愿 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤悦栽 酝泽责源员 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧悦郧郧粤郧郧
耘源园 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤郧悦 酝泽责源圆 郧粤栽郧粤郧栽悦悦栽郧粤郧悦郧郧粤郧栽
耘源员 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤郧郧
猿园怨员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
表 猿摇 同裂酶 匀责葬域和 酝泽责玉的甲基化敏感性及限制性谱带和带型归类
栽葬遭造藻 猿摇 栽澡藻 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶鄄泽藻灶泽蚤贼蚤增藻袁 则藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 遭葬灶凿泽 燥枣 匀责葬域葬灶凿 酝泽责玉葬灶凿 贼澡藻 糟造葬泽泽蚤枣赠 燥枣 贼澡藻 遭葬灶凿泽 责葬贼贼藻则灶
带型
栽赠责藻
内切酶的消化及限制性带型
砸藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 葬糟贼蚤增蚤贼赠葬灶凿 则藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 遭葬灶凿泽
匀责葬域 酝泽责玉 匀 酝
悦悦郧郧位点状态
杂贼葬贼藻 燥枣 悦悦郧郧 泽蚤贼藻
悦悦郧郧位点甲基化状态
酝藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 泽贼葬贼藻 燥枣 悦悦郧郧 泽蚤贼藻
玉 有活性
耘枣枣藻糟贼蚤增藻
有活性
耘枣枣藻糟贼蚤增藻
员 员 悦悦郧郧 非甲基化
哉灶皂藻贼澡赠造葬赠燥灶
域 无活性
晕燥灶藻枣枣藻糟贼蚤增藻
有活性
耘枣枣藻糟贼蚤增藻
园 员 悦缘皂悦郧郧 双链内胞嘧啶甲基化
酝藻贼澡赠造葬蚤贼燥灶 燥枣 贼澡藻 蚤灶灶藻则 糟赠贼燥泽蚤灶藻
芋 有活性
耘枣枣藻糟贼蚤增藻
无活性
晕燥灶藻枣枣藻糟贼蚤增藻
员 园 缘澡皂悦悦郧郧
悦缘澡皂悦郧郧
单链外胞嘧啶甲基化
酝藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 燥怎贼藻则 糟赠贼燥泽蚤灶藻
郁 无活性
晕燥灶藻枣枣藻糟贼蚤增藻
无活性
晕燥灶藻枣枣藻糟贼蚤增藻
园 园 缘皂悦缘皂悦郧郧
缘皂悦悦郧郧
完全甲基化
云怎造造赠 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 泽蚤贼藻
图 员摇 铁皮石斛二倍体及其同源四倍体 粤云蕴孕扩增产物
云蚤早援 员摇 粤云蕴孕 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 凿蚤责造燥蚤凿 葬灶凿 贼藻贼则葬责造燥蚤凿 阅藻灶凿则燥遭蚤怎皂 燥枣枣蚤糟蚤灶葬造藻
表 缘冤遥 粤 类包括 猿 个亚类袁单态性位点袁即 圆 个倍性
间甲基化状态相同袁表明铁皮石斛同源四倍与二倍体
相比袁阅粤晕甲基化模式未发生改变袁这一类型的甲基
化模式大约占所检测类型的 猿愿郾 圆源豫 遥 类型 月 包括 缘
个亚类袁为过甲基化或超甲基化类型袁同源四倍体较二
倍体甲基化水平上升袁有 猿园郾 远猿豫的 阅晕粤 位点发生了
过甲基化遥 类型 悦 包括 缘 个亚类袁为去甲基化类型袁
四倍体与二倍体相比有 圆愿郾 远猿豫的位点 阅晕粤 去甲基
化水平下降遥 类型 阅 为次甲基化类型袁包括 圆 个亚
类袁该类型在目前的分析中无法辨别 阅晕粤甲基化的状
源园怨员
摇 员园 期 铁皮石斛同源四倍体与二倍体基因组及甲基化差异分析
摇 摇 摇 摇
注院孕员 耀 孕圆园 代表 圆园 对引物遥
晕燥贼藻院孕员 贼燥 孕圆园 则藻责则藻泽藻灶贼藻凿 圆园 责则蚤皂藻则泽援
图 圆摇 酝杂粤孕分析中检测到的不同 阅晕粤甲基化模式变化类型
云蚤早援 圆摇 阅蚤枣枣藻则藻灶贼 糟澡葬灶早藻泽 燥枣 阅晕粤 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 责葬贼贼藻则灶泽 凿藻贼藻糟贼藻凿 蚤灶 酝杂粤孕 葬泽泽葬赠
表 源摇 不同倍性铁皮石斛 阅晕粤基因组甲基化水平
栽葬遭造藻 源摇 郧藻灶燥皂蚤糟 阅晕粤 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 造藻增藻造泽 燥枣
阅藻灶凿则燥遭蚤怎皂 燥枣枣蚤糟蚤灶葬造藻 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责造燥蚤凿赠
类型
栽赠责藻
二倍体
阅蚤责造燥蚤凿
同源四倍体
粤怎贼燥贼藻贼则葬责造燥蚤凿
总扩增条带数 栽燥贼葬造 遭葬灶凿泽 苑愿愿 苑愿远
全甲基化带数 云怎造造 皂藻贼澡赠造葬贼藻凿 遭葬灶凿泽 源愿怨 缘园苑
半甲基化带数 匀藻皂蚤皂藻贼澡赠造葬贼藻凿 遭葬灶凿泽 圆源员 员怨园
总甲基化带数 栽燥贼葬造 皂藻贼澡赠造葬贼藻凿 遭葬灶凿泽 苑猿园 远怨苑
全甲基化率 云怎造造 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 则葬贼蚤燥 辕 豫 远圆郾 园远 远源郾 缘园
半甲基化率 匀藻皂蚤皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 则葬贼蚤燥 辕 豫 猿园郾 缘愿 圆源郾 员苑
总甲基化率 栽燥贼葬造 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 则葬贼蚤燥 辕 豫 怨圆郾 远源 愿愿郾 远愿
态袁其位点占总检测位点的比率很小袁只有 猿豫左右遥
铁皮石斛四倍体较二倍体发生变化的甲基化条带占总
条带的 远员郾 苑远豫 袁说明其甲基化模式变异显著遥
猿摇 讨论
猿郾 员摇 铁皮石斛二倍体和同源四倍体基于 粤云蕴孕 标记
的遗传差异分析
本试验采用 粤云蕴孕 技术袁对铁皮石斛同源四倍体
和二倍体之间 阅晕粤 碱基序列进行检测袁结果表明在
员 园园远条总扩增条带中袁同源四倍体与二倍体之间的共
有条带为 缘猿圆 条袁多态率达到 源苑郾 员圆豫 袁粤云蕴孕 多态性
高袁西瓜二倍体和同源四倍体的研究结果也是如
此咱员园暂 遥 然而袁翟晓巧等咱员猿暂研究了毛泡桐的同源四倍
体和二倍体后袁认为毛泡桐二倍体加倍后 阅晕粤碱基序
列未发生改变袁其原因是诱导剂的用量少或是为了适
应自然环境而发生了染色体结构的适当调整遥 本试验
中 粤云蕴孕多态性高袁基因片段发生较大程度的改变袁可
能是由于染色体加倍过程中袁阅晕粤 碱基核苷酸序列发
生改变袁形成了新的杂交位点袁或是同源四倍体的等位
基因产生累加效应袁从而在染色体加倍后袁基因组表现
出多态性遥
猿郾 圆摇 铁皮石斛二倍体和同源四倍体甲基化水平差异
及模式变化
阅晕粤甲基化是表观遗传中最重要的内容袁因为染
色质重塑尧组蛋白修饰和组蛋白 匀猿 的特殊甲基化等
都通过调节 阅晕粤甲基化的信号袁而改变表型性状的遗
传袁阅晕粤 甲基化还可调控特定的内源基因表达咱圆远暂 遥
本研究结果显示袁二倍体和四倍体铁皮石斛的半甲基
化分别为 猿园郾 缘愿豫 尧圆源郾 员苑豫 遥 全甲基化为 远圆郾 园远豫 尧
远源郾 缘园豫 遥 铁皮石斛二倍体的总甲基化渊愿愿郾 远愿豫 冤比
四倍体的渊怨圆郾 远源豫 冤高袁此结果表明 阅晕粤 甲基化水平
与染色体的数目无关曰不同倍性间 阅晕粤甲基化水平趋
势与水稻二倍体和四倍体的基本一致咱员圆暂 遥 分析不同
倍性铁皮石斛基因组 阅晕粤甲基化模式发现袁同源四倍
体铁皮石斛约 圆愿郾 远猿豫发生了过甲基化袁有 猿园郾 远猿豫位
点发生了去甲基化袁由此可知经染色体加倍后袁基因结
缘园怨员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
摇 摇 摇 摇 表 缘摇 二倍体与四倍体铁皮石斛的 阅晕粤甲基化模式变化
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类型
栽赠责藻
同源四倍体带型
栽藻贼则葬责造燥蚤凿 遭葬灶凿蚤灶早 责葬贼贼藻则灶
二倍体带型
阅蚤责造燥蚤凿 遭葬灶凿蚤灶早 责葬贼贼藻则灶
匀 酝 匀 酝
不同带型位点
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阅圆 员 园 园 员 员猿
月 垣 悦 垣 阅 远员苑渊远员郾 苑远豫 冤
总计 栽燥贼葬造 怨怨怨
构进行大幅度的调整袁以去甲基化为主袁过甲基化次
之遥 去甲基化能激活基因的表达袁而过甲基化抑制基
因的表达咱圆苑暂 袁这种调整可能是植物产生抗性增强尧产
量增大等表观遗传性状的原因遥 表 缘 显示 阅晕粤 甲基
化模式变异显著 渊远员郾 苑远豫 冤袁此结论与枇杷咱圆愿暂 尧小
麦咱圆怨暂等研究结论基本一致遥
源摇 结论
利用 粤云蕴孕和 酝杂粤孕 圆 种技术袁探究铁皮石斛多倍
化前后基因组 阅晕粤 碱基序列和 阅晕粤 甲基化的变化袁
结果表明袁铁皮石斛四倍体和二倍体在 粤云蕴孕 水平上
阅晕粤碱基序列没有发生变化曰在 酝杂粤孕 扩增电泳上袁
铁皮石斛同源四倍体的 阅晕粤 甲基化和去甲基化频率
高于其二倍体袁总甲基化多态性低于二倍体遥 用 粤云蕴孕
和 酝杂粤孕技术只能测出 阅晕粤片段发生了变化袁而关于
阅晕粤碱基序列如何改变及 阅晕粤 基因片段如何调控多
倍体优良性状表达袁还有待进一步研究遥
参考文献院
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咱 远 暂摇 陈亮袁梁春阳袁孙传清援 粤云蕴孕和 砸云蕴孕标记检测水稻亲本遗传多
样性比较研究咱允暂 援中国农业科学袁圆园园圆袁猿缘渊远冤院缘愿怨 原 缘怨缘
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远园怨员
摇 员园 期 铁皮石斛同源四倍体与二倍体基因组及甲基化差异分析
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咱 怨 暂摇 聂丽娟袁王子成袁王一帆袁李国申袁何艳霞援 二倍体和同源四倍体
西瓜的 阅晕粤甲基化差异分析咱允暂 援 核农学报袁圆园园怨袁圆猿渊员冤院愿园 原
愿源
咱员园暂摇 刘文革袁王鸣袁阎志红援 西瓜二倍体及同源多倍体遗传差异的
粤云蕴孕分析咱允暂 援果树学报袁圆园园源袁圆员渊员冤院 源远 原 源怨
咱员员暂摇 张晓青袁陈劲枫袁雷春袁陈龙正袁钱春桃袁刁卫平援不同倍性黄瓜遗
传差异的 粤云蕴孕分析咱允暂 援 西北植物学报袁圆园园远袁圆远渊员员冤院圆圆远缘 原
圆圆远怨
咱员圆暂摇 杨琼袁李辉袁左钦月袁邱琳袁陈丽袁罗科袁涂升斌援 同源四倍体与二
倍体水稻基因组及甲基化差异分析咱 允暂 援 应用与环境生物学报袁
圆园员猿袁员怨渊源冤院远猿园 原 远猿远
咱员猿暂摇 翟晓巧袁张晓申袁范国强袁赵振利袁曹喜兵援 毛泡桐二倍体及其同
源四倍体的 粤云蕴孕 和 酝杂粤孕 分析咱 允暂 援 中南林业科技大学学报袁
圆园员源袁猿源渊员冤院愿怨 原 怨猿
咱员源暂摇 杨岚袁李红袁向增旭援二倍体和同源四倍体甜叶菊的 阅晕粤 甲基化
差异分析咱允暂 援核农学报袁圆园员猿袁圆苑渊愿冤院员员圆缘 原 员员猿园
咱员缘暂摇 吕圭源袁颜美秋袁陈素红援 铁皮石斛功效相关药理作用研究进展
咱允暂 援中国中药杂志袁圆园员猿袁圆渊源冤院源愿怨 原 源怨猿
咱员远暂摇 施仁潮袁竹剑平袁李明焱援铁皮石斛抗肿瘤作用的研究进展咱 允暂 援
中国药学杂志袁圆园员猿袁员园渊员怨冤院员远源员 原 员远源源
咱员苑暂摇 陈晓梅袁王春兰袁杨峻山袁郭顺星援铁皮石斛化学成分及其分析的
研究进展咱允暂 援中国药学杂志袁圆园员猿袁员园渊员怨冤院员远猿源 原 员远源园
咱员愿暂摇 管惠娟袁张雪袁屠凤娟袁姚新生援铁皮石斛化学成分的研究咱允暂 援中
草药袁圆园园怨袁员圆渊员圆冤院员愿苑猿 原 员愿苑远
咱员怨暂摇 徐程援铁皮石斛种质资源与组培工厂化生产研究咱阅暂援 杭州院浙
江大学袁圆园园远
咱圆园暂摇 冯耀文袁李泽生袁耿秀英袁李桂琳袁白燕冰援 铁皮石斛组培苗工厂
化生产技术关键问题探讨咱允暂 援热带农业科技袁圆园员猿渊猿冤院猿园 原 猿圆
咱圆员暂摇 陈昆松袁李方袁徐昌杰袁张上隆袁傅承新援 改良 悦栽粤月 法用于多年
生植物组织基因组 阅晕粤的大量提取咱允暂 援遗传袁圆园园源袁圆远渊源冤院缘圆怨
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源源园苑 原 源源员源
咱圆猿暂摇 许绍斌袁陶玉芬袁杨昭庆袁褚嘉援简单快速的 阅晕粤 银染和胶保存
方法咱允暂 援遗传袁圆园园圆袁圆源渊猿冤院猿猿缘 原 猿猿远
咱圆源暂摇 孟华兵袁杜雪袁姜宇晓援镉胁迫下二倍体和同源四倍体油菜 阅晕粤
甲基化差异分析咱允暂 援核农学报袁圆园员园袁圆源渊远冤院员圆怨苑 原 员猿园源
咱圆缘暂摇 王春国袁古瑜袁陈成彬袁焦定量袁薛振毅袁宋文芹援不同倍性西瓜基
因组 阅晕粤甲基化水平与模式的 酝杂粤孕 分析咱 允暂 援 分子细胞生物
学报袁圆园园怨袁源圆渊圆冤院员员愿 原 员圆缘
咱圆远暂摇 云则藻蚤贼葬早 酝袁 杂藻造噪藻则 耘 哉援 悦燥灶贼则燥造造蚤灶早 阅晕粤 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶院 皂葬灶赠 则燥葬凿泽 贼燥
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咱圆苑暂摇 陆许可袁王德龙袁阴祖军袁王俊娟袁樊伟丽袁王帅袁赵小洁袁张天豹袁
叶武威援 晕葬悦造和 晕葬圆悦韵猿 对不同棉花基因组的 阅晕粤 甲基化影响
咱允暂 援中国农业科学袁圆园员源袁源苑渊员远冤院猿员猿圆 原 猿员源圆
咱圆愿暂摇 边禹援不同倍性多倍体枇杷基因组变异及其 阅晕粤 甲基化分析
咱阅暂援重庆院西南大学袁圆园员园
咱圆怨暂摇 聂利红袁王延召袁孙其信袁房卫平袁谢德意援 人工异源六倍体小麦
中甲基化差异的 酝杂粤孕分析咱允暂 援华北农学报袁圆园员圆袁圆苑渊圆冤院苑苑 原
愿园
苑园怨员
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
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贼澡葬贼袁 蚤灶 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 员 园园远 遭葬灶凿泽 憎蚤贼澡 圆缘 责葬蚤则泽 燥枣 责则蚤皂藻则 糟燥皂遭蚤灶葬贼蚤燥灶泽袁 源苑源 遭葬灶凿泽 泽澡燥憎藻凿 责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂袁 贼澡藻 责燥造赠皂燥则责澡蚤糟
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愿园怨员