全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员员袁圆缘渊缘冤院园愿苑员 耀 园愿苑愿允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员园鄄员员鄄猿园摇 接受日期院圆园员员鄄园猿鄄园远
基金项目院国家重大科技专项渊圆园园愿在载园愿园园圆鄄园园员袁 圆园园怨在载园愿园园圆鄄园园远月冤
作者简介院李摇 钊渊员怨愿缘鄄 冤袁男袁山东人袁硕士研究生袁研究方向为小麦遗传育种遥 栽藻造院园员园鄄愿圆员园愿缘源远曰耘鄄皂葬蚤造院 造蚤扎澡葬燥园缘园源岳 员远猿援 糟燥皂
通讯作者院张增艳渊员怨远猿鄄冤袁女袁河北保定人袁博士袁研究员袁博士生导师袁研究方向为小麦抗病分子生物学遥 栽藻造院园员园鄄愿圆员园愿苑愿员曰耘鄄皂葬蚤造院扎澡葬灶早扎赠岳
皂葬蚤造援 糟葬葬泽援 灶藻贼援 糟灶
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员员冤园缘鄄园愿苑员鄄园愿
植物防卫基因 孕增孕郧陨孕圆和 栽葬蕴栽孕源的
克隆及其对小麦的转化
李摇 钊员袁圆 摇 王金凤圆 摇 庄洪涛圆 摇 蒋摇 雯圆 摇 叶兴国圆 摇 李斯深员 摇 张增艳圆
渊员郾 山东农业大学农学院袁山东 泰安摇 圆苑员园员愿 曰圆郾 中国农业科学院作物科学研究所 辕
农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程 辕农业部作物遗传育种重点实验室袁 北京摇 员园园园愿员冤
摘摇 要院多聚半乳糖酸醛酶抑制蛋白和脂质转移酶蛋白是植物产生的防卫蛋白袁对植物病原真菌具有防
御作用遥 本研究利用同源基因克隆策略和 砸栽鄄孕悦砸 技术袁成功克隆了 员 个菜豆的多聚半乳糖酸醛酶抑
制蛋白渊孕增孕郧陨孕圆冤编码基因和 员 个小麦的脂质转移蛋白渊栽葬蕴栽孕源冤编码基因曰由于它们在功能上具有协
同作用袁我们以 责粤匀悦圆缘 为骨架构建了 孕增孕郧陨孕圆 和 栽葬蕴栽孕源 基因双价表达载体袁对该双价表达载体进行
菌落 孕悦砸筛选尧限制酶消化鉴定和测序分析袁结果表明构建的 孕增孕郧陨孕圆 和 栽葬蕴栽孕源 双价基因表达载体是
成功的袁该载体包含 孕增孕郧陨孕圆 表达盒和 栽葬蕴栽孕源 表达盒袁分别受玉米泛素基因渊哉遭蚤择蚤怎贼蚤灶冤启动子的驱动袁
选用来源于 栽蚤质粒中胭脂碱合成酶基因的终止序列作为终止子渊栽灶燥泽冤遥 采用基因枪法轰击小麦品种
扬麦 员愿 成熟胚愈伤组织 圆园园园 枚袁经过 圆 次 月蚤葬造葬责澡燥泽 筛选袁最终获得扬麦 员愿 再生植株 员员圆 株袁利用表达
载体基因的特异引物对上述成活的转化植株进行 孕悦砸检测袁获得 孕增孕郧陨孕圆 和 栽葬蕴栽孕源 均为阳性的植株
员圆 株袁转化率为 园郾 远豫 遥
关键词院小麦曰菜豆曰多聚半乳糖酸醛抑制蛋白曰脂质转移酶蛋白曰基因克隆曰转化
悦蕴韵晕陨晕郧 韵云 孕蕴粤晕栽 阅耘云耘晕杂耘 郧耘晕耘杂 孕增孕郧陨孕圆 粤晕阅 栽葬蕴栽孕源 粤晕阅
栽匀耘陨砸 栽砸粤晕杂云韵砸酝粤栽陨韵晕 栽韵 宰匀耘粤栽
蕴陨 在澡葬燥员袁圆 摇 宰粤晕郧 允蚤灶鄄枣藻灶早圆 摇 在匀哉粤晕郧 匀燥灶早鄄贼葬燥圆 摇 允陨粤晕郧 宰藻灶圆
再耘 载蚤灶早鄄早怎燥圆 摇 蕴陨 杂蚤鄄泽澡藻灶员 摇 在匀粤晕郧 在藻灶早鄄赠葬灶圆
渊员郾 悦燥造造藻早藻 燥枣 粤早则燥灶燥皂赠袁 杂澡葬灶凿燥灶早 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 栽葬蚤爷葬灶袁 杂澡葬灶凿燥灶早摇 圆苑员园员愿曰
圆郾 晕葬贼蚤燥灶葬造 运藻赠 云葬糟蚤造蚤贼赠 枣燥则 悦则燥责 郧藻灶藻 砸藻泽燥怎则糟藻泽 葬灶凿 郧藻灶藻贼蚤糟 陨皂责则燥增藻皂藻灶贼 辕 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 悦则燥责 郧藻灶藻贼蚤糟 葬灶凿
月则藻藻凿蚤灶早袁酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻 辕 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 悦则燥责 杂糟蚤藻灶糟藻袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园园愿员冤
粤遭泽贼则葬糟贼院孕燥造赠早葬造葬糟贼怎则糟怎葬泽藻鄄蚤灶澡蚤遭蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶 渊孕郧陨孕冤 葬灶凿 蕴蚤责蚤凿鄄贼则葬灶泽枣藻则 责则燥贼藻蚤灶 渊蕴栽孕冤 憎藻则藻 凿藻枣藻灶泽藻 责则燥贼藻蚤灶泽 责则燥凿怎糟藻凿
蚤灶 责造葬灶贼袁 憎澡蚤糟澡 蚤灶澡蚤遭蚤贼 贼澡藻 早则燥憎贼澡 燥枣 责葬贼澡燥早藻灶蚤糟 枣怎灶早蚤援 陨灶 贼澡蚤泽 泽贼怎凿赠袁 葬 孕郧陨孕 藻灶糟燥凿蚤灶早 早藻灶藻 蚤灶 孕澡葬泽藻燥怎造泽 增怎造早葬则蚤泽
渊孕增孕郧陨孕圆冤 葬灶凿 葬 蕴栽孕 藻灶糟燥凿蚤灶早 早藻灶藻 蚤灶 栽则蚤贼蚤糟怎皂 葬藻泽贼蚤增怎皂渊栽葬蕴栽孕源冤 憎藻则藻 泽怎糟糟藻泽泽枣怎造造赠 糟造燥灶藻凿 遭赠 怎泽蚤灶早 澡燥皂燥造燥早燥怎泽
早藻灶藻 糟造燥灶蚤灶早 泽贼则葬贼藻早赠 葬灶凿 砸栽鄄孕悦砸 贼藻糟澡灶蚤择怎藻援 月赠 怎泽蚤灶早 责粤匀悦圆缘 葬泽 葬 枣则葬皂藻 增藻糟贼燥则袁 憎藻 糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿 孕增孕郧陨孕圆 葬灶凿
栽葬蕴栽孕源 遭蚤灶葬则赠 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 增藻糟贼燥则援 栽澡藻灶 贼澡藻 遭蚤灶葬则赠 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 增藻糟贼燥则 憎葬泽 贼澡则燥怎早澡 责则藻造蚤皂蚤灶葬则赠 泽糟则藻藻灶蚤灶早 遭赠 糟燥造燥灶赠 孕悦砸
葬灶凿 则藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬灶凿 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早 葬灶葬造赠泽蚤泽援 栽澡藻 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早 则藻泽怎造贼 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 孕增孕郧陨孕圆 葬灶凿
栽葬蕴栽孕源 遭蚤灶葬则赠 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 增藻糟贼燥则 憎葬泽 泽怎糟糟藻泽泽枣怎造造赠 糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿援 陨灶 贼澡蚤泽 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶 增藻糟贼燥则袁 贼澡藻 孕增孕郧陨孕圆 葬灶凿 栽葬蕴栽孕源
早藻灶藻泽 憎藻则藻 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠 凿则蚤增藻灶 遭赠 贼澡藻 皂葬蚤扎藻 怎遭蚤择怎蚤贼蚤灶 渊哉遭蚤冤 责则燥皂燥贼藻则 葬灶凿 贼藻则皂蚤灶葬贼藻凿 遭赠 贼澡藻 猿忆灶燥灶鄄贼则葬灶泽糟则蚤遭藻凿 则藻早蚤燥灶 燥枣
员苑愿
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
贼澡藻 粤早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 贼怎皂藻枣葬糟蚤藻灶泽 灶燥责葬造蚤灶藻 泽赠灶贼澡葬泽藻 早藻灶藻 渊 栽灶燥泽冤援 栽澡则燥怎早澡 皂蚤糟则燥责则燥躁藻糟贼蚤造藻鄄皂藻凿蚤葬贼藻凿 遭燥皂遭葬则凿皂藻灶贼袁 贼澡藻
遭蚤灶葬则赠 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 增藻糟贼燥则 憎葬泽 贼则葬灶泽枣燥则皂藻凿 贼燥 圆袁园园园 皂葬贼怎则藻 糟葬造造怎泽 燥枣 憎澡藻葬贼 增葬则蚤藻贼赠 再葬灶早皂葬蚤 员愿郾 粤枣贼藻则 贼憎蚤糟藻 则燥怎灶凿泽 燥枣
月蚤葬造葬责澡燥泽 泽糟则藻藻灶蚤灶早 员员圆 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼泽 憎藻则藻 枣蚤灶葬造造赠 燥遭贼葬蚤灶藻凿援 栽澡藻 造蚤增蚤灶早 贼则葬灶泽枣燥则皂藻凿 责造葬灶贼泽 憎藻则藻 泽怎遭躁藻糟贼藻凿 贼燥 孕悦砸
凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 怎泽蚤灶早 责则蚤皂藻则泽 泽责藻糟蚤枣蚤糟 贼燥 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 增藻糟贼燥则 早藻灶藻 贼燥 糟燥灶凿怎糟贼袁 员圆 责燥泽蚤贼蚤增藻 责造葬灶贼泽 憎蚤贼澡 孕增孕郧陨孕圆 葬灶凿 栽葬蕴栽孕源 憎藻则藻
燥遭贼葬蚤灶藻凿袁 葬灶凿 贼澡藻 糟燥灶增藻则泽蚤燥灶 则葬贼藻 憎葬泽 园郾 远豫 援
运藻赠 憎燥则凿泽院憎澡藻葬贼曰 遭藻葬灶曰 责燥造赠早葬造葬糟贼怎则糟怎葬泽藻鄄蚤灶澡蚤遭蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶曰 造蚤责蚤凿鄄贼则葬灶泽枣藻则 责则燥贼藻蚤灶泽曰早藻灶藻 糟造燥灶藻曰 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶
摇 摇 近年来袁真菌病害已成为制约小麦高产尧稳产的重
要因素之一袁我国小麦发生的主要真菌病害包括赤霉
病尧条锈病尧白粉病和纹枯病等遥 圆园园缘 原 圆园园愿 年袁我国
每年遭受小麦纹枯病危害的麦田面积大约在 远苑园 耀
愿园园 万 澡皂圆袁经济损失在 员园 亿元以上咱员暂 遥 这些小麦病
害直接影响着小麦的最终产量遥 因此袁防治小麦真菌
病害对于保证小麦高产尧稳产非常重要遥 然而袁由于小
麦对真菌的抗性均由多基因控制袁缺乏理想的小麦抗
病种质资源袁常规育种方法在选育抗病品种方面的研
究进展缓慢遥 分子生物学和基因工程的发展为植物抗
真菌病育种开辟了一条新途径遥
真菌多聚半乳糖醛酸酶渊 藻灶凿燥鄄责燥造赠早葬造葬糟贼怎则燥灶葬泽藻袁
藻灶凿燥鄄孕郧冤是主要的细胞壁降解酶袁在真菌尧细菌和线虫
侵染寄主过程中起着重要作用咱圆 耀 源暂 遥 多聚半乳糖醛酸
酶抑制蛋白渊责燥造赠早葬造葬糟贼怎则糟怎葬泽藻鄄蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶袁孕郧陨孕冤
是一种能够非竞争性地抑制病原菌的 藻灶凿燥鄄孕郧活性的
细胞壁蛋白咱缘暂 遥 孕郧陨孕 是一种富含亮氨酸重复渊蕴砸砸冤
的蛋白咱远暂 袁一般包含 怨 耀 员园 个 蕴砸砸泽袁每个 蕴砸砸 由 圆源
个氨基酸残基组成袁形成 圆 个 茁鄄泽澡藻藻贼袁其中 泽澡藻藻贼 月员 形
成一个内部的凹陷袁特异性识别 藻灶凿燥鄄孕郧咱苑 耀 怨暂 遥 现已
证明 孕郧陨孕 在植物体内具有防御作用咱缘暂 袁可以减少
藻灶凿燥鄄孕郧对植物细胞壁的降解袁有助于维护植物细胞
壁的完整性袁使植物细胞壁不易被病原真菌分泌的水
解酶所渗透袁以减慢细胞壁的降解袁使病原真菌可以利
用的营养物质减少袁进而减缓病原真菌的生长繁殖速
度咱员园暂 遥 迄今已有多种与抗性基因相关的植物 孕郧陨孕被
克隆咱员员暂 遥 目前袁国内外对 孕郧陨孕 基因的分离以及 孕郧陨孕
在植物抗病中的作用以及在抗病育种中的应用进行了
一定的研究遥 如 蕴葬枣蚤贼贼藻 等咱员圆暂 比较了抗性菜豆
渊孕澡葬泽藻燥怎造泽 增怎造早葬则蚤泽冤品种和易感菜豆品种中 孕郧陨孕的含
量袁发现在病原真菌豆刺盘孢菌的菜豆抗性品种中袁结
合在细胞壁上的 孕郧陨孕 量比易感品种的多 圆猿豫 耀
源园豫 曰月藻则早皂葬灶灶 等咱员猿暂利用免疫组织化学尧晕燥则贼澡藻则灶 和
宰藻泽贼藻灶印迹技术袁从时间和空间上证实当病原真菌侵
染时袁责早蚤责鄄皂砸晕粤 和 孕郧陨孕 在感染位点明显增多袁表明
孕郧陨孕含量增加主要依赖于病原真菌攻击遥 悦藻则增燥灶藻
等咱员源暂发现多种豆类中 孕郧陨孕对真菌 藻灶凿燥鄄孕郧 具有广谱
抗性遥 云则藻凿蚤葬灶蚤 等咱员缘暂在菜豆中发现了编码 孕郧陨孕 的一
类家族基因袁包含 源 个基因咱怨暂 渊 孕增孕郧陨孕员尧孕增孕郧陨孕圆尧
孕增孕郧陨孕猿 和 孕增孕郧陨孕源冤袁位于 月圆 连锁群上咱员远暂 遥 其中
孕增孕郧陨孕圆 可以与 藻灶凿燥鄄孕郧泽 具有广谱性抑菌作用咱怨暂 遥
粤灶灶葬 云葬则蚤灶葬等咱员苑暂对美洲地区的野生型和栽培型菜豆
研究发现袁孕增孕郧陨孕圆 与其他 猿 种豆科植物中的 孕郧陨孕具
有较高的同源性袁大多数的变异出现在 蕴砸砸区袁且对 源
种真菌 渊 云援 责澡赠造造燥责澡蚤造怎皂袁 粤援 灶蚤早藻则袁 月援 糟蚤灶藻则藻葬袁 悦援
造怎责蚤灶蚤冤具有广谱抗性遥
脂质转移蛋白质渊蕴蚤责蚤凿 贼则葬灶泽枣藻则 责则燥贼藻蚤灶袁蕴栽孕冤广泛
存在于动物尧植物和微生物中袁已从许多不同植物组织
中分离得到遥 蕴栽孕 具有一些共同的特征袁如分子量较
小袁约为 愿 耀 员园噪阅曰晕 端具有信号肽结构袁分子内具有
由 愿 个半胱氨酸形成的 源 个二硫键连接成固定结构
等遥 目前 蕴栽孕 已被划分为植物体内富含半胱氨酸且
分子量较小的一类抗菌肽遥 员怨怨源 年 栽澡燥皂葬 等咱员愿暂通过
原位杂交等证明袁蕴栽孕 主要存在于拟南芥渊粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽
贼澡葬造蚤葬灶葬冤气生部分的表皮层中袁进一步细胞学水平上
的定位研究发现 蕴栽孕 存在于植物细胞壁中遥 已从蕃
茄尧大麦尧拟南芥等多种植物中克隆出多种编码 蕴栽孕
的基因或 糟阅晕粤序列咱员怨 耀 圆员暂 遥 研究发现袁蕴栽孕 参与了植
物的抗病反应袁一些纯化的植物 蕴栽孕 蛋白在体外可抑
制细菌及真菌的生长咱圆圆暂 遥 从玉米尧菠菜尧花椰菜尧拟南
芥菜中分离的 蕴栽孕 蛋白都表现出不同程度的抗病功
能咱圆圆 耀 圆源暂 遥 杂怎灶 等咱圆缘暂在小麦 糟阅晕粤 中分离到了 怨 个不
同的 蕴栽孕 并进行了体外抑菌试验袁证明小麦中一些
蕴栽孕如 栽葬蕴栽孕源袁对一些腐生真菌具有较强的抑菌活
性遥
通过多个基因的转化从而获得携带多个基因和性
状的转基因植物袁是植物基因工程的新策略袁已成为一
种转基因新趋势遥 构建多个基因共表达的转化载体是
达到上述目标的前提之一遥 如利用多价抗虫尧抗真菌
基因表达载体袁通过一次性转化获得了转多价基因的
抗虫烟草和抗病水稻咱圆远 耀 圆怨暂 袁再藻 等咱猿园暂将合成前维生素
粤的两个重要植物酶的编码基因 责泽赠 和 糟则蚤陨 构建于一
个 栽蚤质粒中袁通过农杆菌介导法获得了能在水稻种子
胚乳中合成 茁鄄胡萝卜素的转基因水稻袁从而改良了水
圆苑愿
摇 缘 期 植物防卫基因 孕增孕郧陨孕圆 和 栽葬蕴栽孕源 的克隆及其对小麦的转化
稻品质遥 孕增孕郧陨孕圆 与 栽葬栽蕴孕源 分别属于不同作用机制
的 圆 类抗菌蛋白袁并且分别在植物细胞壁和细胞膜中
表达袁可以起到协同作用遥 如构建这 圆 个基因双价表
达载体转化作物袁理论上讲可以增强转基因植物的抗
性和广谱性袁更好地保护植物细胞袁减缓真菌对植物细
胞的侵蚀遥 而且这些蛋白均来自日常食用的作物袁对
人体细胞很少甚至没有影响遥
本研究分别克隆出 员 个菜豆的多聚半乳糖酸醛抑
制蛋白渊孕增孕郧陨孕圆冤编码基因和 员 个小麦的脂质转移酶
蛋白渊栽葬蕴栽孕源冤编码基因袁通过酶切与连接等基因重组
方法构建了 责粤圆缘鄄 孕增孕郧陨孕圆鄄栽葬蕴栽孕源 双价表达载体袁用
于基因枪法转化小麦袁以期获得抗真菌病害的小麦新
品系遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
选择 责粤匀悦圆缘咱猿员暂为载体构建骨架袁小麦渊栽则蚤贼蚤糟怎皂
葬藻泽贼蚤增怎皂冤品种山农 园源猿员 材料由山东农业大学李斯深
教授惠赠袁菜豆渊孕澡葬泽藻燥造怎泽 增怎造早葬则蚤泽冤英国红材料由中国
农业科学院种质资源库宗绪晓研究员提供遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员摇 基因克隆 摇 利用 栽砸陨在韵蕴 试剂渊 陨灶增蚤贼则燥早藻灶 公
司冤提取英国红和山农 园源猿员 的叶片总 砸晕粤袁按 砸晕粤
噪蚤贼 增藻则援 猿郾 园 糟阅晕粤合成试剂盒渊栽葬运葬砸葬冤说明书合成第
员 条链 糟阅晕粤袁以该 糟阅晕粤 为模板袁按照 孕增孕郧陨孕圆
渊晕悦月陨登陆号院云酝圆缘猿员园员冤和 杂怎灶等咱圆缘暂公布的 耘杂栽序
列 渊 晕悦月陨 登 陆 号 阅晕缘缘员缘愿源 冤袁 合 成 圆 对 引 物
渊 孕增孕郧陨孕圆鄄员哉院 缘忆鄄郧悦粤粤悦悦粤栽郧栽悦悦栽悦粤粤郧悦 鄄猿忆袁
孕增孕郧陨孕圆鄄员园员圆蕴院 缘忆鄄粤栽郧粤栽栽粤粤郧栽郧悦粤郧郧悦粤郧郧鄄猿忆曰
栽葬月杂员园愿云苑鄄猿员哉院 缘忆鄄悦悦悦粤栽悦栽悦粤悦悦粤栽悦栽悦悦粤鄄猿忆袁
栽葬月杂员园愿云苑鄄缘远愿蕴院缘忆鄄栽 悦悦栽悦栽悦郧悦栽郧栽悦粤悦郧悦粤鄄猿忆冤遥
孕悦砸反应按标准体系进行袁采用 栽葬择 责造怎泽 阅晕粤 聚
合酶渊栽葬运葬砸葬冤袁反应参数分别为院怨源益预变性 缘皂蚤灶曰
怨源益 员皂蚤灶袁缘远益 员皂蚤灶袁苑圆益 苑缘泽袁循环 猿缘 次曰苑圆益后延
伸 员园皂蚤灶遥 怨源益 预变性 缘皂蚤灶曰怨源益 员皂蚤灶袁缘愿益 源缘泽袁
苑圆益 源缘泽袁循环 猿园 次曰苑圆益后延伸 缘皂蚤灶遥 扩增得到
员园员圆遭责 的 孕增孕郧陨孕圆 片段和 缘猿愿遭责 的 栽葬栽蕴孕源 片段遥
孕悦砸产物经低熔点琼脂糖凝胶回收纯化袁克隆于载体
责酝阅员愿鄄栽渊栽葬运葬砸葬冤袁得到质粒 责酝阅鄄孕增孕郧陨孕圆 和 责酝阅鄄
栽葬栽蕴孕源 质粒袁送北京诺赛基因组研究中心有限公司测
序遥
测序结果表明袁所获得的 圆 个 阅晕粤片段上分别包
含 孕增孕郧陨孕圆 和 栽葬蕴栽孕源 的 韵砸云袁并设计引物渊孕增孕郧陨孕圆鄄
韵砸云鄄云院 缘忆鄄悦悦郧郧郧粤栽郧栽悦悦栽悦粤粤郧悦栽栽粤粤郧悦鄄猿忆袁 孕增孕鄄
郧陨孕圆鄄韵砸云鄄砸院 缘忆鄄悦栽悦郧粤郧粤郧栽郧悦粤郧郧悦粤郧郧粤粤郧粤郧郧鄄
猿忆曰 蕴栽孕源鄄韵耘云鄄云院 缘忆鄄悦悦郧郧郧粤栽郧郧悦栽悦郧悦郧郧栽郧悦粤郧悦鄄
栽粤鄄猿忆袁 蕴栽孕源鄄韵砸云鄄砸院 缘忆鄄悦栽悦郧粤郧悦栽悦郧粤郧粤粤悦郧粤粤栽鄄
悦栽栽粤郧粤粤悦粤郧栽悦悦粤鄄猿忆冤 完 成 孕增孕郧陨孕圆鄄韵砸云 和
栽葬蕴栽孕源鄄韵砸云的扩增遥 为方便下一步转基因表达载体
的构建工作袁分别在 孕增孕郧陨孕圆 和 栽葬蕴栽孕源 的 韵砸云 上游
引入 杂皂葬 陨酶切位点袁在下游引入 杂葬糟 陨酶切位点遥
员郾 圆郾 圆摇 责粤圆缘鄄孕增孕郧陨孕圆 和 责粤圆缘鄄栽粤蕴栽孕源 转基因表达载
体的构建 摇 利用 杂皂葬 陨 和 杂葬糟 陨 分别酶切克隆载体
责酝阅鄄孕增孕郧陨孕圆 和 责酝阅鄄栽葬蕴栽孕源袁回收分别为 员园园缘 和
猿源愿遭责的目标片段曰同时酶切 责粤匀悦圆缘 质粒袁回收切去
郧哉杂基因的 苑愿员愿遭责的载体片段骨架袁两部分按 员颐 猿摩
尔比利用 栽源 蕴蚤早葬泽藻渊栽葬运葬砸葬冤进行连接袁初步构建出由
哉遭蚤择怎蚤贼蚤灶 启动子启动袁 栽灶燥泽 终止子结束的 责粤圆缘鄄
孕增孕郧陨孕圆 和 责粤圆缘鄄栽粤蕴栽孕源遥
员郾 圆郾 猿摇 责粤圆缘鄄孕增孕郧陨孕圆鄄栽葬蕴栽孕源 转基因表达载体的构
建摇 由图 员 所示袁用 杂泽责 陨渊平末端冤单酶切质粒 责粤圆缘鄄
哉遭蚤院院孕增孕郧陨孕圆袁于 猿苑益酶切 缘澡袁用试剂盒回收目的片
段遥 匀蚤灶凿 陨陨陨 酶切质粒 责粤圆缘鄄哉遭蚤院院栽葬蕴栽孕源袁于 猿苑益酶
切 缘澡袁将酶切产物用 园郾 愿豫琼脂糖凝胶电泳分离袁用试
剂盒 回 收 目 的 片 段袁 并 用 栽源 阅晕粤 责燥造赠皂藻则葬泽藻
渊栽葬运葬砸葬冤进行末端平滑化处理遥 末端平滑化院在
园郾 圆皂造 离心管中依次加入 员园 伊 栽源 阅晕粤 责燥造赠皂藻则葬泽藻
遭怎枣枣藻则 员滋造尧园郾 员豫 月杂粤 员滋造尧凿晕栽孕 员滋造尧阅晕粤 回收片段
远滋造袁总体积 怨滋造袁先将离心管在 苑缘益温浴 缘皂蚤灶袁再转移
到 猿苑益袁加入 园郾 猿滋造 渊缘哉 辕 滋造冤栽源 阅晕粤 责燥造赠皂藻则葬泽藻袁猿苑益
温浴 缘皂蚤灶袁反应结束袁将产物迅速于漩涡混合器上剧
烈震荡 员皂蚤灶使 栽源 阅晕粤 责燥造赠皂藻则葬泽藻失活袁并置于冰上袁
立即加入用 杂泽责 陨 渊平末端冤 单酶切的 责粤圆缘鄄哉遭蚤院院
孕增孕郧陨孕圆 片段进行连接反应袁员远益连接 圆园澡遥 将连接
产物转化至大肠杆菌感受态细胞 栽韵孕员园遥
员郾 圆郾 源摇 责粤圆缘鄄孕增孕郧陨孕圆鄄栽葬蕴栽孕源 转基因表达载体的鉴
定摇 利用 耘援 糟燥蚤造感受态菌株 栽韵孕员园 完成遗传转化袁涂
布于含 员园园皂早 辕 蕴 粤皂责 的 蕴月 平板袁在 猿苑益培养 员园 耀
员圆澡袁可以观察到单菌落的生长情况曰将单菌落挑入
员皂造 相同 粤皂责 浓度的液体 蕴月 培养基上震荡培养
渊圆圆园则 辕 皂蚤灶冤猿 耀 源澡遥 当 韵阅远园园 跃 园郾 愿 时袁利用菌液为模
板分别对 哉遭蚤院院孕增孕郧陨孕圆 和 哉遭蚤院院栽葬蕴栽孕源 进行 孕悦砸 鉴
定遥 分别利用 哉遭蚤尧孕增孕郧陨孕圆 和 栽葬蕴栽孕源 上的特异引物
渊 哉遭蚤孕员怨员园哉院 缘忆鄄郧悦栽悦栽郧悦悦栽栽悦粤栽粤悦郧悦栽粤鄄猿忆尧
孕增孕郧陨孕圆蕴院缘忆鄄粤栽悦栽郧栽郧粤悦粤粤郧粤粤粤栽悦郧郧郧鄄猿尧 蕴栽孕源蕴院
缘忆鄄栽悦粤粤悦郧粤粤栽悦栽栽粤郧粤粤悦粤郧栽悦鄄猿忆冤遥 反应参数分别
为院怨源益预变性 缘皂蚤灶曰怨源益 源园泽袁缘圆益 源园泽袁苑圆益 源园泽袁循
猿苑愿
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
图 员摇 责粤圆缘鄄孕增孕郧陨孕圆鄄栽葬蕴栽孕源 表达载体的构建
云蚤早援 员摇 杂贼则怎糟贼怎则藻 燥枣 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 增藻糟贼燥则 责粤圆缘鄄孕增孕郧陨孕圆鄄栽葬蕴栽孕源
环 猿园 次曰苑圆益后延伸 员园皂蚤灶遥 怨源益预变性 缘皂蚤灶曰怨源益
源园泽袁缘苑益 源园泽袁苑圆益 源园泽袁循环 猿园 次曰苑圆益后延伸 缘皂蚤灶遥
孕悦砸结果分析可知渊图 源粤鄄月冤袁我们已经初步获得了
同时含有 孕增孕郧陨孕圆 和 栽葬栽蕴孕源 基因的双价转基因表达
载体遥 由于 孕悦砸试验具有较高的假阳性袁再次使用酶
切鉴定的方法袁分别小量提取 猿 个阳性菌株的质粒袁使
用 杂皂葬 陨 和 杂葬糟 陨 对所提质粒进行反向酶切鉴定遥 并
对克隆载体进行测序分析遥
员郾 圆郾 缘摇 责粤圆缘鄄孕增孕郧陨孕圆鄄栽葬蕴栽孕源 基因枪法转化小麦成
熟胚摇 参照叶兴国咱猿圆暂的方法对小麦成熟胚进行培养
和转化袁小麦成熟种子依次用 苑园豫乙醇 员园皂蚤灶尧圆缘豫次
氯酸钠 圆缘皂蚤灶 灭菌袁无菌水清洗 猿 耀 缘 次袁无菌水浸泡
过夜后再用 圆缘豫次氯酸钠灭菌 员缘皂蚤灶袁无菌水清洗 猿
耀 缘 次袁将灭菌后的种子放在无菌滤纸上吸水袁在种子
上将成熟胚反复多次刮成碎片袁然后轻轻悬浮接种在
酝杂 垣员皂早 辕 蕴 灾月缘渊不含肌醇冤 垣 员郾 圆豫葡萄糖 垣 员郾 缘豫
甘露醇 垣 员郾 缘豫山梨醇 垣 圆郾 园皂早 辕 蕴 阅蚤糟葬皂遭葬 垣 缘园园皂早 辕 蕴
悦匀 垣 源皂早 辕 蕴 粤早晕韵猿 垣 源园皂早 辕 蕴 乙酰丁香酮 垣 园郾 苑缘早 辕 蕴酝早悦造圆 垣 源园皂早 辕 蕴半胱氨酸 垣员园园皂早 辕 蕴维生素 悦 垣 缘皂早 辕蕴谷氨酰胺的培养基渊责匀 缘郾 愿冤上袁圆缘益尧黑暗条件下培
养 苑凿产生初始愈伤组织遥 利用基因枪轰击法将质粒
责粤圆缘鄄孕增孕郧陨孕圆鄄栽葬蕴栽孕源 转入小麦品种扬麦 员愿 成熟胚
愈伤组织袁进而获得转 责粤圆缘鄄孕增孕郧陨孕圆鄄栽葬蕴栽孕源 基因小
麦扬麦 员愿 的 栽园 代植株遥 转化后的愈伤组织转移到酝杂 垣猿郾 园豫 蔗糖 垣 圆郾 园皂早 辕 蕴 阅蚤糟葬皂遭葬 垣相应筛选剂和
抗生素的培养基 渊 责匀 缘郾 愿冤 上袁圆缘益尧散射光 渊光强
缘园园造曾冤条件下培养 圆 周诱导胚性愈伤组织遥 将胚性愈
伤组织转移到 酝杂 垣 月缘 维生素 垣 圆郾 园豫 蔗糖 垣
源苑愿
摇 缘 期 植物防卫基因 孕增孕郧陨孕圆 和 栽葬蕴栽孕源 的克隆及其对小麦的转化
园郾 圆皂早 辕 蕴 圆袁源鄄阅 垣相应筛选剂和抗生素的培养基渊责匀
缘郾 愿冤上袁圆缘益尧光照条件下分化植株遥
员郾 圆郾 远摇 转 责粤圆缘鄄孕增孕郧陨孕圆鄄栽葬蕴栽孕源 基因小麦的 孕悦砸 检
测 摇 基本按照改良的 悦栽粤月 法咱猿源暂 提取转 责粤圆缘鄄
孕增孕郧陨孕圆鄄栽葬蕴栽孕源 基因 栽园 代植株的叶片总 阅晕粤遥员郾 圆郾 远郾 员摇 哉遭蚤院院孕增孕郧陨孕圆鄄栽灶燥泽表达盒转基因检测摇 采
用位于 哉遭蚤院院孕增孕郧陨孕圆鄄栽灶燥泽表达盒序列上的特异引物
检测转 责粤圆缘鄄孕增孕郧陨孕圆鄄栽葬蕴栽孕源 基因小麦遥 扩增反应
采用的位于 孕增孕郧陨孕圆 上的上游引物 孕灾孕郧圆鄄远员缘云院缘忆鄄
悦悦栽悦粤悦悦郧郧郧粤粤郧粤栽栽悦悦郧鄄猿忆和位于 孕增孕郧陨孕圆 上的下
游引物 孕灾孕郧圆鄄愿缘猿砸院缘忆鄄栽栽粤郧悦栽郧悦郧栽悦粤郧栽悦悦悦栽郧悦鄄
猿忆袁对 哉遭蚤院院孕增孕郧陨孕圆鄄栽灶燥泽表达盒进行 孕悦砸 检测分析遥
孕悦砸 反应体系采用 圆园滋造 体系包括 圆滋造 员园 伊 月怎枣枣藻则
渊栽葬运葬砸葬冤袁缘园灶早基因组 阅晕粤袁员郾 缘滋造 凿晕栽孕泽渊圆郾 缘皂皂燥造 辕
蕴冤袁员郾 缘滋造 酝早圆悦造 渊圆缘皂皂燥造 辕 蕴冤袁上尧下游引物各 园郾 缘滋造渊员园滋皂燥造 辕 蕴 冤袁 园郾 圆滋造 则鄄栽葬择 聚合酶 渊 缘哉 辕 滋造 冤袁 加入
凿凿匀圆韵 补至 圆园滋造遥 反应参数为院怨缘益预变性 猿皂蚤灶曰怨源益猿缘泽袁远园益 猿园泽袁苑圆益 猿园泽袁猿缘 个循环曰苑圆益 缘皂蚤灶 延
伸补平遥 扩增产物经 圆豫的琼脂糖凝胶电泳分离分
析遥
员郾 圆郾 远郾 圆摇 哉遭蚤院院栽葬蕴栽孕源鄄栽灶燥泽 表达盒转基因检测 摇 采
用位于 哉遭蚤院院栽葬蕴栽孕源鄄栽灶燥泽 表达盒序列上特异引物检
测转 责粤圆缘鄄孕增孕郧陨孕圆鄄栽葬蕴栽孕源 基因小麦遥 扩增反应采
用位于 栽葬蕴栽孕源 上的上游引物 宰月杂栽鄄圆园怨缘哉圆园院缘 耶鄄
粤栽粤栽悦悦栽郧悦郧郧栽悦粤郧郧栽郧粤悦鄄猿忆和位于 栽灶燥泽 上的下游
引 物 栽晕韵杂鄄圆缘缘猿蕴圆圆院 缘 耶鄄
粤栽郧栽粤栽粤粤栽栽郧悦郧郧郧粤悦栽悦栽粤粤鄄猿忆袁 对 哉遭蚤院院 栽葬蕴栽孕源鄄
栽灶燥泽表达盒进行 孕悦砸 检测分析遥 孕悦砸 反应体系采用
圆园滋造体系袁包括 员园滋造 圆 伊 郧悦 月怎枣枣藻则渊栽葬运葬砸葬冤袁缘园灶早 基
因组 阅晕粤袁员郾 缘滋造 凿晕栽孕泽渊圆郾 缘皂皂燥造 辕 蕴冤袁上尧下游引物各
园郾 缘滋造渊员园滋皂燥造 辕 蕴冤袁园郾 圆滋造 则鄄栽葬择 聚合酶渊缘哉 辕 滋造冤袁加入
凿凿匀圆韵 补至 圆园滋造遥 怨源益 缘皂蚤灶 预变性曰怨源益 源缘泽袁缘愿益源缘泽袁苑圆益源缘泽袁猿缘 个循环曰苑圆益 愿皂蚤灶延伸补平遥 扩增产
物经 员豫的琼脂糖凝胶电泳分离分析遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 基因的克隆与序列分析
所克隆到的 孕增孕郧陨孕圆 与之前所公布的序列渊晕悦月陨
登陆号袁云酝圆缘猿员园员园冤一致袁根据 杂酝粤砸栽渊澡贼贼责院椅泽皂葬则贼援
藻皂遭造鄄澡藻蚤凿藻造遭藻则早援 凿藻 辕 冤对于其典型的结构域进行分析表
明袁所克隆到的 孕增孕郧陨孕圆 基因同样具有 怨 个典型的
蕴砸砸序列遥
所克隆到的 栽葬蕴栽孕源 与 杂怎灶 之前所公布的序列
渊晕悦月陨 登陆号 阅晕缘缘员缘愿源冤存在 猿 个碱基的变异渊图
圆冤袁并导致 圆 个氨基酸的突变袁但没有改变其主要的
作用元件和区域遥
图 圆摇 所克隆到的 栽葬蕴栽孕源 与 郧藻灶遭葬灶噪中 栽葬蕴栽孕源渊阅晕缘缘员缘愿源冤的核酸序列比较
云蚤早援 圆摇 粤造蚤早灶皂藻灶贼 燥枣 糟造燥灶藻凿 泽藻择怎藻灶糟藻 葬灶凿 燥则蚤早蚤灶葬造 栽葬蕴栽孕源 渊阅晕缘缘员缘愿源冤 枣则燥皂 郧藻灶遭葬灶噪
黑色表示 员园园豫同源遥 月造葬糟噪 遭燥曾藻泽 则藻责则藻泽藻灶贼 员园园豫 蚤凿藻灶贼蚤贼赠
圆郾 圆摇 转基因双价表达载体的鉴定
以培养的单克隆菌液为模板袁分别利用 哉遭蚤尧
孕增孕郧陨孕圆 和 栽葬蕴栽孕源 上的特异引物袁分别检测所选出的
员缘 个菌株是否包含 哉遭蚤院院孕增孕郧陨孕圆 和 哉遭蚤院院栽葬蕴栽孕源 表
达盒遥 结果表明渊图 猿冤袁所选的 员缘 个单克隆菌株均为
阳性遥 随后袁提取 员裕尧圆裕尧员猿裕菌液的质粒 阅晕粤袁并用
杂皂葬 陨和 杂葬糟 陨进行双酶切鉴定遥 结果表明袁双酶切可
同时获得 孕增孕郧陨孕圆 和 栽葬蕴栽孕源 的 韵砸云 片段袁大小分别
约为 员园园圆 和 猿源愿遭责渊图 猿冤袁由此可见袁所选择的 猿 个阳
性菌株的阳性率为 员园园豫 遥 综合 孕悦砸和酶切鉴定分析
结果证明袁已获得 责圆缘鄄哉遭蚤院院孕增孕郧陨孕圆鄄哉遭蚤院院栽葬蕴栽孕源 双
价基因表达载体遥
圆郾 猿摇 转 责粤圆缘鄄孕增孕郧陨孕圆鄄栽葬蕴栽孕源 基因小麦的 孕悦砸 检
测
将 责粤圆缘鄄孕增孕郧陨孕圆鄄栽葬蕴栽孕源 质粒 阅晕粤 和适量的金
粉混合袁利用基因枪轰击法对扬麦 员圆 幼胚愈伤组织进
缘苑愿
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
图 猿摇 双价表达载体的 孕悦砸分析与酶切鉴定分析
云蚤早援 猿摇 孕悦砸 葬灶葬造赠泽蚤泽 葬灶凿 则藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 遭蚤增葬造藻灶贼鄄藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 增藻糟贼燥则
粤院哉遭蚤院院孕增孕郧陨孕圆 孕悦砸检测曰月院哉遭蚤院院栽葬蕴栽孕源 孕悦砸检测曰悦院杂皂葬 陨和 杂葬糟 陨酶切双价表达载体鉴定曰酝院员园园 遭责 造葬凿凿藻则泽 袁阅蕴圆园园园
皂葬则噪藻则袁曰 孕院 责粤圆缘鄄哉遭蚤院院孕增孕郧陨孕圆袁责粤圆缘鄄哉遭蚤院院栽葬蕴栽孕源 质粒曰员鄄员缘院转基因大肠杆菌
粤院 孕悦砸 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 哉遭蚤院院孕增孕郧陨孕圆曰 月院 孕悦砸 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 哉遭蚤院院栽葬蕴栽孕源曰悦院 遭蚤增葬造藻灶贼鄄藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 增藻糟贼燥则 憎葬泽 凿蚤早藻泽贼藻凿 遭赠 杂皂葬 陨 葬灶凿 杂葬糟
陨曰酝院员园园 遭责 造葬凿凿藻则泽袁阅蕴圆园园园 皂葬则噪藻则袁曰 孕院 责粤圆缘鄄哉遭蚤院院 孕增孕郧陨孕圆袁责粤圆缘鄄哉遭蚤院院栽葬蕴栽孕源 责造葬泽皂蚤凿曰员鄄员缘院贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 耘援 悦燥蚤造
行共转化袁轰击幼胚愈伤组织 圆园园园 块袁通过分化和 圆
次 月蚤葬造葬责澡燥泽 筛选袁袁最终得到扬麦 员愿 转基因再生植株
员员圆 株遥 提取该 员员圆 株再生植株叶片 阅晕粤遥 利用
哉遭蚤院院孕增孕郧陨孕圆鄄栽燥灶泽表达盒和 哉遭蚤院院栽葬蕴栽孕源鄄栽燥灶泽 表达
盒的特异序列检测分别转入的 哉遭蚤院院孕增孕郧陨孕圆 基因与
图 源摇 转 责粤圆缘鄄孕增孕郧陨孕圆鄄栽葬蕴栽孕源 基因小麦的 孕悦砸分析结果
云蚤早援 源摇 孕悦砸 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼澡藻 责粤圆缘鄄孕增孕郧陨孕圆鄄栽葬蕴栽孕源 早藻灶藻 蚤灶 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 憎澡藻葬贼 责造葬灶贼泽
粤院 哉遭蚤院院孕增孕郧陨孕圆 孕悦砸检测结果曰月院哉遭蚤院院栽葬蕴栽孕源 孕悦砸 检测结果曰酝院皂葬则噪藻则 圆 和 员园园遭责 皂葬则噪藻则曰 孕院 责粤圆缘鄄孕增孕郧陨孕圆鄄栽葬蕴栽孕源 质粒曰宰栽院
扬麦 员愿曰员 耀 员圆院栽园 代转基因株系
粤院孕悦砸 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 哉遭蚤院院孕增孕郧陨孕圆 蚤灶 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 造蚤灶藻泽曰 月院 孕悦砸 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 哉遭蚤院院栽葬蕴栽孕源 蚤灶 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 造蚤灶藻泽曰酝院 皂葬则噪藻则 圆 葬灶凿 员园园遭责 皂葬则噪藻则曰
孕院 责粤圆缘鄄孕增孕郧陨孕圆鄄栽葬蕴栽孕源 责造葬泽皂蚤凿曰 宰栽院 再葬灶早皂葬蚤 员愿曰 员 耀 员圆院 栽园 责造葬灶贼泽 燥枣 贼澡藻 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 造蚤灶藻泽
哉遭蚤院院 栽葬蕴栽孕源 基 因遥 结 果 表 明袁 转 责粤圆缘鄄哉遭蚤院院
孕增孕郧陨孕圆鄄哉遭蚤院院栽葬蕴栽孕源 基因载体的小麦阳性植株中可
同时扩增出 圆猿愿遭责的 孕增孕郧陨孕圆 特异性片段渊图 源鄄粤冤与
源缘愿遭责的 栽葬蕴栽孕源 特异性片段渊图 源鄄月冤遥 从转 责粤圆缘鄄
哉遭蚤院院孕增孕郧陨孕圆鄄哉遭蚤院院栽葬蕴栽孕源 基因小麦再生的 员园猿 株
植株中袁检测出转 哉遭蚤院院孕增孕郧陨孕圆 和 哉遭蚤院院栽葬蕴栽孕源 基因
均呈阳性的植株 员圆 株袁转化率为 园郾 远豫 遥
猿摇 讨论
本研究对所克隆到的 圆 个基因 孕增孕郧陨孕圆 和
远苑愿
摇 缘 期 植物防卫基因 孕增孕郧陨孕圆 和 栽葬蕴栽孕源 的克隆及其对小麦的转化
栽葬蕴栽孕源 进行测序分析发现袁孕增孕郧陨孕圆 序列与公布序列
渊晕悦月陨登陆号袁云酝圆缘猿员园员园冤一致袁栽葬蕴栽孕源 与之前公布
的序列 渊 晕悦月陨 登陆号 阅晕缘缘员缘愿源 冤 在第 源园尧 员猿怨 和
猿圆园遭责位点出现碱基的变化袁并导致 圆 个氨基酸的突
变袁但没有改变其主要的作用元件和区域遥 造成这种
原因的可能性袁一是所选用的小麦材料不同袁导致小麦
基因组 阅晕粤存在一定的区别曰二是基因的克隆条件和
测序过程中存在一定差异袁导致本试验得到的 栽葬蕴栽孕源
序列与 杂怎灶等咱圆缘暂公布的序列存在一定程度碱基的差
异遥
本研究构建的载体主要用于基因枪法转化单子叶
作物小麦袁以期获得抗真菌病害的转基因小麦新品系遥
为便于在转化的过程中更容易筛选转基因阳性植株袁
本试验选择了含有 遭葬则基因渊抗草丁磷冤的 责粤匀悦圆缘 单
子叶高效表达载体作为骨架载体遥 其优点在于进行整
个转基因操作过程中袁可以利用含有除草剂的培养基
对转化的小麦愈伤组织在分化时期即进行筛选袁从而
减少了对 栽园 代植株 孕悦砸 检测的工作量袁更加有针对
性遥
孕增孕郧陨孕圆 和 栽葬蕴栽孕源 的抑菌机制各不相同遥
孕增孕郧陨孕圆 能够非竞争性地抑制病原菌的 藻灶凿燥鄄孕郧 活性
的细胞壁蛋白袁在植物组织的细胞壁对真菌的侵染进
行防卫咱员苑暂 袁栽葬蕴栽孕源 可以与真菌的细胞膜结合袁破坏真
菌的细胞膜结构袁在植物组织的细胞膜对真菌的侵染
进行防卫咱圆缘暂 袁孕增孕郧陨孕圆 和 栽葬蕴栽孕源 可以共同发挥植物
的防御作用遥 因此袁将这 圆 个基因同时转入植物体内袁
可能会获得更强的抗病性和更加广泛的抗菌范围遥 在
构建双价载体时每个基因的两端具有各自的启动子和
终止子等元件袁所以将 圆 个基因串联在一起共同组建
在一个表达载体中袁能转录成 圆 个转录本袁并表达成各
自的产物遥 它们之间一般完全连锁袁只要通过一次转
化就可以方便并成功的获得同时含有 圆 个基因并同时
表达的转基因植株袁同时也排除了 圆 个单价基因共同
转化尧后代基因分离和转化不完全的可能性遥 目前已
通过 孕悦砸检测技术初步鉴定到转双价载体的小麦材
料袁并证明其在小麦体内转化过程中 圆 个表达盒不发
生基因的断裂和分离袁从而进一步证明了本研究所采
用的双价载体可以很好地完成 圆 个表达盒同时转入遥
在后续研究中袁 我们将验证这 圆 个基因的功能与协同
作用遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 赵美琦袁 魏开锋袁 毕可政援 小麦纹枯病流行预测的研究 咱允暂 援 植
物保护学报袁 员怨怨苑袁 圆源渊源冤院 猿园猿 原 猿园愿
咱 圆 暂 摇 阅藻 蕴燥则藻灶扎燥 郧袁 云藻则则葬则蚤 杂援 孕燥造赠早葬造葬糟贼怎则燥灶葬泽藻鄄蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶泽 蚤灶
凿藻枣藻灶泽藻 葬早葬蚤灶泽贼 责澡赠贼燥责葬贼澡燥早藻灶蚤糟 枣怎灶早蚤 咱允暂 援 悦怎则则藻灶贼 韵责蚤灶蚤燥灶 蚤灶 孕造葬灶贼
月蚤燥造燥早赠袁 圆园园圆袁 缘院员 原 缘
咱 猿 暂摇 云藻则则葬则蚤 杂袁 灾葬蚤则燥 阅袁 粤怎泽怎遭藻造 云 酝袁 悦藻则增燥灶藻 云袁 阅藻 蕴燥则藻灶扎燥 郧援
粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 责燥造赠早葬造葬糟贼怎则燥灶葬泽藻鄄蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶泽 渊 孕郧陨孕 冤
葬则藻则藻早怎造葬贼藻凿 遭赠 凿蚤灾藻则藻灶贼 泽蚤早灶葬造 贼则葬灶泽凿怎糟贼蚤燥灶 责葬贼澡憎葬赠泽 凿怎则蚤灶早
枣怎灶早葬造蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶 咱允暂 援 圆园园猿袁孕造葬灶贼 悦藻造造袁 员缘院怨猿 原 员园远
咱 源 暂 摇 酝葬灶枣则藻凿蚤灶蚤 悦袁 杂蚤糟蚤造蚤葬 云袁 云藻则则葬则蚤 杂袁 孕燥灶贼蚤早早蚤葬 阅袁 杂葬造增蚤 郧袁 悦葬责则葬蚤 悦袁
蕴燥则蚤贼燥 酝袁 阅藻 蕴燥则藻灶扎燥 郧援 孕燥造赠早葬造葬糟贼怎则燥灶葬泽藻鄄蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶 圆 燥枣
孕澡葬泽藻燥造怎泽 增怎造早葬则蚤泽 蚤灶澡蚤遭蚤贼泽 月糟孕郧员袁 葬 责燥造赠早葬造葬糟贼怎则燥灶葬泽藻 燥枣 月燥贼则赠贼蚤泽
糟蚤灶藻则藻葬 蚤皂责燥则贼葬灶贼 枣燥则 责葬贼澡燥早藻灶蚤糟蚤贼赠袁 葬灶凿 责则燥贼藻糟贼泽 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽
枣则燥皂 蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶 咱允暂 援 孕澡赠泽蚤燥造 酝燥造 孕造葬灶贼 孕葬贼澡燥造袁 圆园园远袁 远苑院员园愿 原 员员缘
咱 缘 暂摇 阅藻泽蚤凿藻则蚤燥 粤袁 粤则葬糟则蚤 月袁 蕴藻糟噪蚤藻 云袁 酝葬贼贼藻蚤 月袁 杂葬造增蚤 郧袁 栽蚤早藻造葬葬则 匀袁
灾葬灶 砸燥藻噪藻造 允 杂 悦袁 月葬怎造糟燥皂遭藻 阅 悦袁 酝藻造糟澡藻则泽 蕴 杂袁 阅藻 蕴燥则藻灶扎燥 郧袁
悦藻则增燥灶藻 云援 孕燥造赠早葬造葬糟贼怎则燥灶葬泽藻鄄陨灶澡蚤遭蚤贼蚤灶早 孕则燥贼藻蚤灶泽 渊 孕郧陨孕泽 冤 憎蚤贼澡
凿蚤枣枣藻则藻灶贼 泽责藻糟蚤枣蚤糟蚤贼蚤藻泽 葬则藻 藻曾责则藻泽泽藻凿 蚤灶 孕澡葬泽藻燥造怎泽 增怎造早葬则蚤泽 咱 允 暂 援
酝燥造藻糟怎造葬则 孕造葬灶贼鄄酝蚤糟则燥遭藻 陨灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶泽袁员怨怨苑袁 员园渊苑冤院愿缘圆 原 愿远园
咱 远 暂摇 允燥灶藻泽 阅 粤袁 允燥灶藻泽 允 阅 郧援 栽澡藻 则燥造藻泽 燥枣 造藻怎糟蚤灶藻 则蚤糟澡 则藻责藻葬贼泽 蚤灶 责造葬灶贼
凿藻枣藻灶糟藻泽 咱允暂 援 粤凿增 月燥贼 砸藻泽 粤凿增 孕造葬灶贼 孕葬贼澡燥造袁 员怨怨苑袁 圆源院怨园 原 员远苑
咱 苑 暂摇 蕴藻糟噪蚤藻 云袁 酝葬贼贼藻蚤 月袁 悦葬责燥凿蚤糟葬泽葬 悦袁 匀藻皂皂蚤灶早泽 粤袁 晕怎泽泽 蕴袁 粤则葬糟则蚤
月袁 阅藻蕴燥则藻灶扎燥 郧袁 悦藻则增燥灶藻 云援 栽澡藻 泽责藻糟蚤宰糟蚤贼赠 燥枣 责燥造赠早葬造葬糟贼怎则燥灶葬泽藻鄄
蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶 渊 孕郧陨孕冤院 葬 泽蚤灶早造藻 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽怎遭泽贼蚤贼怎贼蚤燥灶 蚤灶 贼澡藻
泽燥造增藻灶贼鄄藻曾责燥泽藻凿 茁鄄泽贼则葬灶凿 辕 茁鄄贼怎则灶 则藻早蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 造藻怎糟蚤灶藻鄄则蚤糟澡 则藻责藻葬贼泽
渊蕴砸砸泽冤 糟燥灶枣藻则糟燥灶枣藻则泽 葬 灶藻憎 则藻糟燥早灶蚤贼蚤燥灶 糟葬责葬遭蚤造蚤贼赠 咱允暂 援 栽澡藻 耘酝月韵
允袁员愿院圆猿缘圆 原 圆猿远猿
咱 愿 暂摇 阅蚤 酝葬贼贼藻燥 粤袁 云藻凿藻则蚤糟蚤 蕴袁 酝葬贼贼藻蚤 月袁 杂葬造增蚤 郧袁 允燥澡灶泽燥灶 运 粤袁 杂葬增蚤灶燥
悦袁 阅藻蕴燥则藻灶扎燥 郧袁 栽泽藻则灶燥早造燥怎 阅袁 悦藻则增燥灶藻 云援 栽澡藻 糟则赠泽贼葬造 泽贼则怎糟贼怎则藻 燥枣
孕郧陨孕 渊 责燥造赠早葬造葬糟贼怎则燥灶葬泽藻鄄蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶冤袁 葬 造藻怎糟蚤灶藻鄄则蚤糟澡 则藻责藻葬贼
责则燥贼藻蚤灶 蚤灶增燥造增藻凿 蚤灶 责造葬灶贼 凿藻枣藻灶泽藻 咱 允暂 援 孕则燥糟 晕葬贼造 粤糟葬凿 杂糟蚤袁 圆园园猿袁
员园园院员园员圆源 原 员园员圆愿
咱 怨 暂 摇 阅爷 韵增蚤凿蚤燥 砸袁 砸葬蚤燥造葬 粤袁 悦葬责燥凿蚤糟葬泽葬 悦袁 阅藻增燥贼燥 粤袁 孕燥灶贼蚤早早蚤葬 阅袁
砸燥遭藻则贼蚤 杂袁 郧葬造造藻贼贼蚤 砸袁 悦燥灶贼蚤 耘袁 韵爷 杂怎造造蚤增葬灶 阅袁 阅藻 蕴燥则藻灶扎燥 郧援
悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 糟燥皂责造藻曾 造燥糟怎泽 燥枣 孕澡葬泽藻燥造怎泽 增怎造早葬则蚤泽 藻灶糟燥凿蚤灶早
责燥造赠早葬造葬糟贼怎则燥灶葬泽藻鄄蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶泽 渊 孕郧陨孕泽 冤 则藻增藻葬造泽 泽怎遭鄄
枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造蚤扎葬贼蚤燥灶 枣燥则 凿藻枣藻灶泽藻 葬早葬蚤灶泽贼 枣怎灶早蚤 葬灶凿 蚤灶泽藻糟贼泽 咱 允暂 援 孕造葬灶贼
孕澡赠泽蚤燥造袁 圆园园源袁 员猿缘院圆源圆源 原 圆源猿缘
咱员园暂 摇 栽怎则灶藻则 允 郧袁 匀燥枣枣皂葬灶 砸 酝援 耘枣枣藻糟贼 燥枣 贼澡藻 孕郧陨孕 枣则燥皂 孕藻葬 燥灶 贼澡藻
澡赠凿则燥造赠泽蚤泽 孕藻葬 糟藻造造 憎葬造造泽 遭赠 贼澡藻 藻凿灶燥鄄孕郧 枣则燥皂 粤泽糟燥糟澡赠贼葬 责蚤泽蚤 咱 允暂 援
孕造葬灶贼 孕葬贼澡燥造袁 员怨愿缘袁 猿源院缘源 原 远园
咱员员暂摇 月藻灶贼 粤 云援 孕造葬灶贼 凿蚤泽藻葬泽藻 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 早藻灶藻泽院 云怎灶糟贼蚤燥灶 皂藻藻贼泽 泽贼则怎糟贼怎则藻
咱允暂 援 孕造葬灶贼 悦藻造造袁 员怨怨远袁 愿院员苑缘苑 原 员苑苑员
咱员圆暂摇 蕴葬枣蚤贼贼藻 悦袁 月葬则贼澡藻 允 孕袁 酝燥灶贼蚤造造藻贼 允 蕴袁 栽燥怎扎藻 粤援 郧造赠糟燥责则燥贼藻蚤灶
蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则泽 燥枣 悦燥造造藻贼燥贼则蚤糟澡怎皂 造蚤灶凿藻皂怎贼澡蚤葬灶怎皂 藻灶凿燥责燥造赠早葬造葬糟贼怎则燥灶葬泽藻 蚤灶
灶藻葬则 蚤泽燥早藻灶蚤糟 造蚤灶藻泽 燥枣 孕澡葬泽藻燥造怎泽 增怎造早葬则蚤泽 则藻泽蚤泽贼葬灶贼 葬灶凿 泽怎泽糟藻责贼蚤遭造藻 贼燥
葬灶贼澡则葬糟灶燥泽藻 咱允暂 援 孕澡赠泽蚤燥造燥早蚤葬造 孕造葬灶贼 孕葬贼澡燥造燥早赠袁 员怨愿源袁 圆缘院猿怨 原 缘猿
咱员猿暂摇 月藻则早皂葬灶灶 悦 宰袁 陨贼燥 再袁 杂蚤灶早藻则 阅援 孕造燥赠早葬造葬糟贼怎则糟怎葬泽藻鄄蚤灶澡蚤遭蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶
葬糟糟怎皂怎造葬贼藻泽 蚤灶 孕澡葬泽藻燥怎造泽 增怎造早葬则蚤泽袁 蕴援 袁 则藻泽责燥灶泽藻 贼燥 宰燥怎灶凿蚤灶早
藻造蚤糟蚤贼燥则泽 葬灶凿 枣怎灶早葬造 蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶 咱允暂 援 孕造葬灶贼 允燥怎则灶葬造袁 员怨怨源袁缘渊缘冤院远圆缘 原
远猿源
咱员源暂摇 悦藻则增燥灶藻 云袁 阅藻 蕴燥则藻灶扎燥袁 阅葬则增造造 粤援 悦葬灶 孕澡葬泽藻燥造怎泽 孕郧陨孕 蚤灶澡蚤遭蚤贼
责藻糟贼蚤糟 藻灶扎赠皂藻泽 枣则燥皂 皂蚤糟则燥遭藻泽 葬灶凿 责造葬灶贼泽 咱 允 暂 援 孕澡赠贼燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠袁
员怨怨园袁 圆怨渊圆冤院源源苑 原 源源怨
苑苑愿
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员员袁圆缘渊缘冤院园愿苑员 耀 园愿苑愿
咱员缘暂摇 云则藻凿蚤葬灶蚤 酝袁 悦则藻皂燥灶蚤灶蚤 砸袁 杂葬造增蚤 郧袁 悦葬责则葬则蚤 悦袁 阅藻泽蚤凿藻则蚤燥 粤袁 阅 鸳
韵增蚤凿蚤燥 砸袁 悦藻则增燥灶藻 云袁 阅藻 蕴燥则藻灶扎燥 郧援 悦赠贼燥造燥早蚤糟葬造 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻
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