全 文 ：核 农 学 报摇 圆园员源袁圆愿渊员员冤院员怨缘园 耀 员怨缘缘
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员源鄄园员鄄圆圆摇 接受日期院圆园员源鄄园苑鄄园远
基金项目院上海农业科学院青年基金农青科技咱圆园员猿渊圆远员冤暂袁上海市农委重点攻关项目渊圆园员员鄄员鄄圆袁圆园员员鄄源鄄源冤
作者简介院何建华袁男袁研究实习员袁主要从事分子生物学尧遗传育种研究遥 耘鄄皂葬蚤造院造燥增藻遭蚤燥源员圆岳 远员猿援 糟燥皂
通讯作者院唐雪明袁男袁研究员袁主要从事微生物学尧基因工程研究遥 耘鄄皂葬蚤造院曾怎藻皂蚤灶早苑园岳 枣燥曾皂葬蚤造援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员源冤员员鄄员怨缘园鄄园远
粤砸栽孕诱变筛选草菇优良菌株及 砸粤孕阅分析
何建华员袁圆 摇 蒋摇 玮员袁圆 摇 吕贝贝员袁圆 摇 李摇 鹏员袁圆 摇 武国干员袁圆
王金斌员袁圆 摇 祝子坪员袁圆 摇 吴摇 潇员袁圆 摇 唐雪明员袁圆
渊员 上海市农业科学院生物技术研究所袁上海摇 圆园员员园远曰 圆上海市农业遗传育种重点实验室袁上海摇 圆园员员园远冤
摘摇 要院为构建草菇优良菌株突变体库袁首次利用常压室温等离子体技术诱变草菇原生质体袁优化的诱变
条件是输出功率 员圆缘 宰尧处理时间 圆园 泽遥 筛选出 猿 株抗冻能力明显提高的突变菌株袁猿 株突变株在草菇
生长的 圆园益低温环境与对照相比生长速度提高了 员苑豫 耀缘苑豫 袁出菇爬料速度提高了 园郾 愿 耀 圆郾 源 倍袁出菇
时间提前了 员 耀 圆凿袁抗低温胁迫能力提高了 圆源澡遥 研究运用 砸粤孕阅 技术进行分子鉴定袁建立草菇 粤砸栽孕
诱变育种筛选与检测评价平台遥
关键词院草菇曰常压室温等离子体曰砸粤孕阅
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员源郾 员员援 员怨缘园
摇 摇 草菇咱灾燥造增葬则蚤藻造造葬 增燥造增葬糟藻葬 渊月怎造造援 藻曾 云则援 冤 杂蚤灶早援 暂属
真菌门袁担子菌亚门袁无隔担子菌纲尧伞菌目尧鹅膏菌
科袁是一种重要的食用菌咱员暂 袁也是我国主要出口菇类袁
因营养丰富咱圆暂 袁味道鲜美袁深受广大消费者喜欢遥 草
菇生产成本低袁生长周期短袁适宜在高温高湿环境下生
长袁但是草菇不耐低温袁源益下菌丝在 源愿 澡 内发生自溶
而死亡袁子实体在 圆源 澡内发生软化尧自溶尧褐变乃至腐
烂袁阻碍了草菇产业的发展咱猿暂 遥 因此袁培育耐低温尧生
物学效率高的草菇新品种袁是草菇生产上亟需解决的
问题遥
传统的草菇育种方法包括自然选育尧诱变育种尧杂
交育种尧基因工程育种和原生质体融合等遥 自然选育
主要是利用低温持续刺激进行筛选袁虽然方法简单袁但
筛选周期很长袁只是积累并利用自然条件下发生的有
利变异曰且草菇遗传背景还不是很清楚袁单孢菌株尧单
核菌株获得比较困难袁杂交育种技术难以形成稳定的
重组体袁工作量大袁周期长咱源暂 遥 而食用菌的转基因技
术只有在双孢蘑菇等少数几种菌中比较成功袁在草菇
中表达不稳定袁并且转基因品种认定限制较多袁不易于
推广咱缘暂 遥 普通诱变育种通常是从每一轮产生的突变
体库中筛选出最优的一株菌株作为下一轮诱变的出发
菌株袁但长期诱变处理会造成菌种活力衰退袁产量下
降袁因此要避免长期尧多次诱变遥
本研究利用一种新型的常压室温等离子体
渊葬贼皂燥泽责澡藻则蚤糟 则燥燥皂 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 责造葬泽皂葬袁粤砸栽孕冤诱变技
术袁该诱变技术采用裸露金属电极结构的大气压射频
辉光放电等离子体源袁主要作用活性粒子是处于激发
态的 匀藻尧韵尧晕圆尧韵匀等粒子遥 这些活性粒子对核酸尧蛋
白质袁细胞整体结构都有一定作用袁能够使微生物细胞
壁 辕 膜的结构及通透性改变袁并引起基因损伤袁进而使
微生物基因序列及其代谢网络发生显著变化袁最终导
致微生物产生突变咱远 原 苑暂 遥
和传统诱变方法相比袁常压室温等离子体诱变
粤砸栽孕对遗传物质的损伤机制多样袁因此获得突变型
多样性的可能性增大袁这使得 粤砸栽孕 在应对代谢网络
复杂的微生物的诱变育种时袁显示出其独特的优势遥
粤砸栽孕诱变育种技术具有高效尧普适尧快速尧便捷尧安全
的优点袁被广泛应用于细菌尧放线菌尧霉菌尧植物及动物
细胞中咱愿 原 员员暂 袁但在食用真菌中鲜有相关报道遥 本研究
对草菇的常压室温等离子体诱变技术进行了探索袁为
后续育种以及相关分子生物学机理的探索奠定基础遥
园缘怨员
摇 员员 期 粤砸栽孕诱变筛选草菇优良菌株及 砸粤孕阅分析
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
员郾 员郾 员摇 菌株 灾圆猿袁保藏于上海农业科学院食用菌研究
所遥
员郾 员郾 圆摇 培养基摇 菌丝培养培养基院 孕阅粤培养基曰原生
质体再生培养基院 孕阅粤 培养基中加 园郾 远 酝 甘露醇渊渗
透压稳定剂冤曰原种培养基院棉籽壳 愿缘豫 袁麦麸 员园豫 袁
石灰 源豫 袁含水量 远园豫 袁责匀 值 愿郾 园 耀 怨郾 园袁员圆员益灭菌 圆园
皂蚤灶曰出菇栽培培养基院棉籽壳 怨缘豫 袁石灰 缘豫 袁远缘益二
次发酵遥
员郾 员郾 猿摇 主要仪器和试剂摇 常压室温等离子体育种机
渊粤砸栽孕冤院无锡思清源生物科技公司遥 溶壁酶院广东微
生物研究所研制遥 稳渗剂院园郾 远 酝甘露醇遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员摇 出发菌株准备摇 取 孕阅粤斜面上生长旺盛的菌
丝袁接种于 孕阅粤 液体培养基中袁猿圆 依 园郾 缘 益静置培养袁
每天早晚各摇动 员 次遥
员郾 圆郾 圆摇 原生质体悬浮液的制备咱员圆暂 摇 将已培养好的菌
丝用无菌水洗涤干净后用灭菌滤纸吸去表面水分待
用遥 配制 圆豫溶菌酶袁称取所需酶量袁用 园郾 远 酝甘露醇
溶液溶解后袁经 园郾 圆圆滋皂 微孔滤膜过滤除菌后使用遥
每 圆园园 皂早菌丝加入 员 皂蕴 酶液袁以 员园园 则窑皂蚤灶 原员转速
猿圆益振荡酶解袁酶解后将酶解液用灭菌的 郧猿 砂芯漏
斗过滤袁用血球计数板计数袁计算原生质体得率遥 酶解
液以 源 园园园 则窑皂蚤灶 原员离心 员园 皂蚤灶袁去除上清液袁用渗透压
稳定剂洗涤 圆 次袁得到纯化的原生质体遥 将原生质体
用渗透压稳定剂 园郾 远 酝 甘露醇稀释成悬液袁用血球计
数板计数袁调整到 员园远 个窑皂蕴 原员遥
员郾 圆郾 猿摇 粤砸栽孕 常温等离子体诱变处理 摇 利用常压室
温等离子体育种机渊粤砸栽孕冤进行草菇菌种的等离子诱
变遥 原生质体悬浮液上样量 圆园滋蕴袁处理输出功率
员圆缘 宰尧辐照距离 圆 皂皂袁气体流速 员园 蕴窑皂蚤灶 原员袁处理时
间为梯度 圆园尧远园尧怨园尧员圆园尧员缘园 泽袁每个梯度做 猿 个平行袁
将诱变后的菌液用 园郾 远 酝甘露醇原生质体渗透压稳定
剂稀释涂板袁计算致死率遥
员郾 圆郾 源摇 筛选 摇 诱变后菌落重新接种袁猿圆益培养 远 澡
后袁源益进行临界致死处理 员园 凿袁然后 猿圆益培养 猿 凿袁计
算正突变率遥
员郾 圆郾 缘摇 遗传稳定性和形态稳定性试验摇 为了分析突
变株的遗传稳定性袁在固体培养基上进行 远 次传代培
养袁对每一代菌株的形态和低温致死活性进行分析遥
员郾 圆郾 远摇 形态观察与生长速率测定摇 测定筛选菌株在
圆园尧圆缘尧猿圆益下的生长速率咱员猿暂 遥 菌丝生长速度渊以日平
均生长速度计算冤 越菌落半径增长长度 辕培养天数渊糟皂
窑凿 原员冤
员郾 圆郾 苑 摇 砸粤孕阅 及分析 摇 阅晕粤 提取参照 悦栽粤月 方
法咱员源暂 袁砸粤孕阅 体系总体积为 圆缘 滋蕴袁 员园 伊 孕悦砸 月怎枣枣藻则
圆郾 缘滋蕴袁员园皂酝 凿晕栽孕泽 员滋蕴袁 圆缘 皂酝 酝早圆 垣 员郾 缘滋蕴袁员园
皂酝引物 员郾 缘 滋蕴袁模板 阅晕粤员滋蕴袁园郾 源 哉 阅晕粤 聚合酶袁
最后用双蒸水补至 圆缘 滋蕴遥 反应程序为院怨源 益预变性
缘 皂蚤灶曰怨源 益变性 远园 泽袁猿缘 益复性 怨园 泽袁苑圆 益延伸 怨园 泽袁
共 源园 个循环曰最后在 苑圆 益条件下延伸 员园 皂蚤灶袁结束后
源 益保存遥 扩增产物在 员郾 缘豫琼脂糖凝胶中电泳 猿园 耀
缘园 皂蚤灶遥
表 员摇 砸粤孕阅 引物序列
栽葬遭造藻 员摇 孕则蚤皂藻则泽 凿藻泽蚤早灶藻凿 枣燥则 砸粤孕阅
引物编号
孕则蚤皂藻则 糟燥凿藻
序列渊缘忆 原 猿忆冤
杂藻择怎藻灶糟藻 渊缘忆 原 猿忆冤
引物编号
孕则蚤皂藻则 糟燥凿藻
序列渊缘忆 原 猿忆冤
杂藻择怎藻灶糟藻 渊缘忆 原 猿忆冤
引物编号
孕则蚤皂藻则 糟燥凿藻
序列渊缘忆 原 猿忆冤
杂藻择怎藻灶糟藻 渊缘忆 原 猿忆冤
孕员 杂猿圆 栽悦郧郧悦郧粤栽粤郧 孕员源 杂圆圆苑 郧粤粤郧悦悦粤郧悦悦 孕圆远 杂员缘 郧郧粤郧郧郧栽郧栽栽
孕圆 杂源苑 栽栽郧郧悦粤悦郧郧郧 孕员缘 杂圆猿园 郧郧粤悦悦栽郧悦栽郧 孕圆苑 杂猿远员 悦粤栽栽悦郧粤郧悦悦
孕猿 杂源愿 郧栽郧栽郧悦悦悦悦粤 孕员远 杂圆员 悦粤郧郧悦悦悦栽栽悦 孕圆愿 杂圆员员员 郧粤悦郧粤悦悦郧悦粤
孕源 杂员员 郧栽粤郧粤悦悦悦郧栽 孕员苑 杂圆猿 粤郧栽悦粤郧悦悦粤悦 孕圆怨 杂圆园源圆 粤悦粤郧栽粤郧悦郧郧
孕缘 杂员愿 悦悦粤悦粤郧悦粤郧栽 孕员愿 杂圆源 粤粤栽悦郧郧郧悦栽郧 孕猿园 杂员园员园 郧郧郧粤栽郧粤悦悦粤
孕远 杂远圆 郧栽郧粤郧郧悦郧栽悦 孕员怨 杂圆缘 粤郧郧郧郧栽悦栽栽郧 孕猿员 杂员园园缘 栽栽郧悦粤郧郧悦粤郧
孕苑 杂源猿 郧栽悦郧悦悦郧栽悦粤 孕圆园 杂圆苑 郧粤粤粤悦郧郧郧栽郧 孕猿圆 杂猿愿园 郧栽郧栽悦郧悦郧粤郧
孕怨 杂源圆 郧郧粤悦悦悦粤粤悦悦 孕圆员 杂圆愿 郧栽郧粤悦郧栽粤郧郧 孕猿猿 杂猿园园园 粤郧粤栽栽悦悦悦郧悦悦
孕员园 杂缘愿 郧粤郧粤郧悦悦粤粤悦 孕圆圆 杂猿员 悦粤粤栽悦郧悦悦郧栽 孕猿源 杂猿苑怨 悦粤悦粤郧郧悦郧郧粤
孕员员 杂愿猿 郧粤郧悦悦悦栽悦悦粤 孕圆猿 杂猿圆 栽悦郧郧悦郧粤栽粤郧 孕猿缘 杂圆猿源 粤郧粤栽悦悦悦郧悦悦
孕员圆 杂怨园 粤郧郧郧悦悦郧栽悦栽 孕圆源 杂猿缘 栽栽悦悦郧粤粤悦悦悦 孕猿远 杂员源苑 粤郧粤栽郧悦粤郧悦悦
孕员猿 杂怨苑 粤悦郧粤悦悦郧粤悦粤 孕圆缘 杂猿愿 粤郧郧栽郧粤悦悦郧栽 孕猿苑 杂猿猿 悦粤郧悦粤悦悦悦粤悦
员缘怨员
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
员郾 圆郾 愿摇 草菇栽培及子实体观察摇 将原种在原种培养
基中培养 苑凿左右袁待菌丝布满袁接种到栽培培养基上袁
对其相关农艺性状进行观察遥 子实体采摘后在 员园益
下进行低温冷冻胁迫实验袁拍照观察遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 粤砸栽孕诱变草菇原生质体条件优化
草菇原生质体无细胞壁尧细胞膜保护袁因此草菇原
生质体对 粤砸栽孕育种极其敏感袁在处理 圆园 泽 时只有少
量突变体存活袁而其他梯度下仅有偶尔突变体存活遥
因此将诱变条件设定为输出功率 员圆缘 宰袁处理距离 圆
皂皂袁气体流速 员园 蕴窑皂蚤灶 原员袁处理时间 圆园 泽袁进行诱变实
验遥
圆郾 圆摇 突变株冷冻筛选
草菇原生质体经 圆园 泽 常压室温等离子体辐照后
共有 猿远 株再生菌株袁经致死剂量 源益冷冻筛选 员园 凿后
有 员源 株草菇再生菌丝仍然存活遥
圆郾 猿摇 耐低温稳定性实验
对经常压室温等离子体诱变的再生菌株进行 远 代
连续培养袁每次培养 源益冷冻筛选 员园 凿袁并检测其抗冻
活性与生长能力遥 突变株 在尧酝尧韵 传代 远 次后仍具有
良好的抗低温胁迫能力及较好的遗传稳定性袁是抗冻
能力稳定的突变株遥
注院悦运为出发菌株袁灾圆猿 酝 在 韵 为突变菌株袁菌丝在 猿圆益 孕阅粤平板上生长 猿凿遥
晕燥贼藻院酝怎贼葬灶贼 灾圆猿 酝 在 韵 葬灶凿 贼澡藻 憎蚤造凿 贼赠责藻 悦运 早则燥憎贼澡 猿 凿葬赠泽 葬贼 猿圆益 燥灶 孕阅粤 责造葬贼藻援
图 员摇 诱变菌株与亲本菌株的菌丝形态比较
云蚤早 员摇 栽澡藻 皂燥则责澡燥造燥早蚤糟葬造 糟燥皂责葬则蚤泽燥灶 遭藻贼憎藻藻灶 粤砸栽孕鄄皂怎贼葬灶贼泽 葬灶凿 贼澡藻 责葬则藻灶贼葬造 泽贼则葬蚤灶
圆郾 源摇 粤砸栽孕常温气体等离子体诱变株菌落形态
诱变后袁菌丝生长形态与出发菌株相比具有很大差
异袁突变株 韵菌丝放射状明显袁 诱变株 在 气生菌丝多尧
生长快袁 诱变株 酝比较密实渊图 员冤遥 突变株生长旺盛尧
气生菌丝多袁具有良好的营养生长和生殖生长能力遥
圆郾 缘 对 猿 株突变株进行生长速率测定试验
突变株 在尧酝尧韵比出发菌株菌丝生长速度分别有
了大幅提高袁具有显著差异袁并且温度越低越显著遥 在
低温培养渊圆园益冤时袁突变株 在尧酝尧韵 生长速率分别提
高了 缘苑豫 尧缘苑豫 尧员苑豫 遥 随着温度升高生长优势减弱袁
说明这些菌丝相对出发菌株更适应低温生长遥
表 圆摇 诱变菌株与亲本菌株的生长速度比较
栽葬遭造藻 圆摇 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 糟燥造燥灶赠爷泽 早则燥憎贼澡 则葬贼藻
遭藻贼憎藻藻灶 粤砸栽孕鄄皂怎贼葬灶贼泽 葬灶凿 贼澡藻 责葬则藻灶贼葬造 泽贼则葬蚤灶
菌株
杂贼则葬蚤灶泽
生长温度 栽澡藻 早则燥憎贼澡 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻
圆园益 圆缘益 猿圆益
悦运 园郾 圆猿 ±园郾 园圆葬 园郾 苑苑 ±园郾 园猿葬 员郾 苑远 ±园郾 园源葬
在 园郾 猿远 ±园郾 园圆遭 园郾 愿远 ±园郾 园源遭 圆郾 园远 ±园郾 园源遭
酝 园郾 猿远 ±园郾 园猿遭 园郾 怨远 ±园郾 园圆糟 员郾 怨愿 ±园郾 园猿糟
韵 园郾 圆苑 ±园郾 园员糟 园郾 愿员 ±园郾 园猿葬遭 员郾 怨愿 ±园郾 园猿糟
摇 摇 注院不同小写字母表示 孕 约 园郾 园缘 差异显著性遥
晕燥贼藻院 阅蚤枣枣藻则藻灶贼 造燥憎藻则糟葬泽藻 造藻贼贼藻则泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 燥枣 孕 约
园郾 园缘援
圆郾 远摇 砸粤孕阅指纹图谱
利用 源园 个随机引物进行 砸粤孕阅分析袁绝大部分引
物能扩出条带袁其中 员远 个引物能不同程度地扩增出差
异性条带袁扩增的分子量分布在 园郾 圆 耀 员郾 缘 噪遭之间遥
突变菌株与出发菌株 砸粤孕阅 结果有明显差异袁从
分子水平证实突变菌株与出发菌株非同种菌株袁核酸
序列发生变化遥
圆郾 苑摇 草菇栽培试验
猿 株突变株爬料速度渊尤其是前期速度冤显著快于
出发菌株袁培养 猿凿后袁速率测定显示突变株 酝是出发
菌株的 猿郾 源 倍袁突变株 在尧韵 是出发菌株的 员郾 愿尧圆郾 远
倍遥
将突变菌株与出发菌株在同一栽培与管理水平上
进行品比试验袁结果表明袁突变株 酝 出菇与出发菌株
相比早 圆凿袁突变株 酝尧 在尧 韵猿 株产量均比出发菌株高袁
其中 酝尧 韵 的产量是出发菌株的 员郾 缘 倍左右袁突变株
圆缘怨员
摇 员员 期 粤砸栽孕诱变筛选草菇优良菌株及 砸粤孕阅分析
注院悦运为亲本菌株遥
晕燥贼藻院酝葬则噪藻则 蚤泽 阅蕴圆园园园援
图 圆摇 引物 杂源愿尧杂源猿尧杂源圆尧杂圆园源圆 扩增的 砸粤孕阅图谱
云蚤早援 圆摇 砸粤孕阅 责葬贼贼藻则灶泽 燥枣 泽贼则葬蚤灶泽 遭赠 责则蚤皂藻则泽 杂源愿尧杂源猿尧杂源圆尧杂圆园源圆
在尧韵 子实体菌褶比出发菌株子实体厚遥
将收获的子实体进行低温胁迫试验袁随着冷冻胁
迫时间的延长袁出发菌株开始渗水尧褐变袁而突变菌株
相对出发菌株袁出水少袁褐变速度慢袁诱变菌株 在尧韵尧酝
相对亲本菌株更为抗冻袁其中 酝 产量最高袁但其抗冻
性能不如 在尧韵遥 可能是由于诱变体 在尧韵 子实体菌褶
较为厚实袁因此相比 酝具有更好的抗冻性能遥 通过出
菇试验进一步证实了突变体与原始菌株具有明显不同
的生理状态遥
猿摇 讨论
本研究采用草菇原生质体作为材料袁具有出菇率
高的特点袁并且草菇原生质体是单细胞袁作为诱变材料
便于控制袁简单可行袁避免了后代过多的分离现象袁是
良好的诱变材料咱员缘暂 遥 但原生质体由于没有细胞壁的
保护袁对诱变因素极为敏感袁等离子体对其致死影响很
大袁限制了使用遥 草菇孢子由于具有厚壁的保护作用袁
对等离子体辐射更具有耐性遥 食用菌存在有性生殖袁
其孢子会有基因重组的现象袁存在广泛的变异机制袁无
法证明突变来源于 粤砸栽孕 诱变咱员远暂 遥 通过本研究证实
粤砸栽孕技术在草菇诱变中的效应后袁后期可利用原生
质体再生菌株尧菌丝粉碎细胞尧担孢子等进行诱变研
究遥
本研究利用 粤砸栽孕 快速诱变草菇原生质体细胞袁
该方法的射流温度低尧产生的等离子体均匀尧无需真空
装置袁与传统诱变方法相比具有操作简易尧成本低和对
生物大分子和细胞作用明显等优点袁已成为快速突变
微生物基因组的有效方法遥 载怎 等咱愿暂利用 粤砸栽孕 技术
构建了绿色木霉的突变体库并成功应用于 郧藻灶燥皂藻
泽澡怎枣枣造蚤灶早曰 在燥灶早 等咱怨暂 利用 粤砸栽孕 技术对 泽贼则藻责贼燥皂赠糟藻泽
葬造遭怎造怎泽进行诱变筛选出 着 聚赖氨酸产量比野生菌株
高 猿 倍的高产菌株曰金丽华等咱员园暂利用 粤砸栽孕 对产油酵
母进行诱变成功获得的突变株产油量为原始菌的 圆郾 圆
倍袁生物量为原始菌株的 员郾 缘 倍曰陈坚等咱员员暂利用 粤砸栽孕
技术选育谷氨酰胺转胺酶高产菌株茂源链轮丝菌袁突
变菌株酶活提高 愿圆豫 遥 本研究首次在食用菌草菇中
验证了常压室温等离子体诱变技术的可行性袁为后续
将 粤砸栽孕技术应用于其他食用真菌及深入研究奠定基
础遥
目前的食用菌诱变研究主要是利用紫外线诱变方
法遥 刘海英等咱员远暂和冯伟业等咱员苑暂用紫外线对杏鲍菇的
原生质体进行诱变研究遥 王灿琴等咱员愿暂用紫外线对草
菇菌丝进行辐照筛选耐低温尧耐碱性草菇袁粤砸栽孕 相同
时间内对草菇原生质体的杀伤作用远远大于紫外线辐
照袁这种诱变方式比紫外辐照更加剧烈袁致突变率高袁
使用该方法极易获得基因水平的突变菌株遥
砸粤孕阅 技术由于具有操作简单尧分析速度快尧成本
较低尧安全等优点得到广泛应用遥 陈剑等咱员怨暂 利用
砸粤孕阅 技术鉴定了草菇杂交后代曰韩业君等咱圆园暂利用
砸粤孕阅 技术对利用紫外线诱变尧悦燥鄄酌射线尧硫酸二乙酯
渊阅耘杂冤等方法得到的草菇突变体进行了分析曰徐学锋
猿缘怨员
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
注院粤尧月尧悦处理分别为出发菌株 悦运尧突变株 酝尧在尧韵 员园益下低温处理 园尧员圆尧猿远澡遥
晕燥贼藻院栽澡藻 贼则藻葬贼皂藻灶贼 粤袁 月袁 悦 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠 葬泽 贼澡藻 皂燥则责澡燥造燥早蚤糟葬造 糟燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 贼澡藻 泽贼葬则贼蚤灶早 泽贼则葬蚤灶 悦运袁
贼澡藻 皂怎贼葬灶贼 泽贼则葬蚤灶泽 酝袁 在袁 韵 贼澡则燥怎早澡 园澡袁 员圆澡袁 猿远澡 葬贼 员园 益 援
图 猿摇 出发菌株与突变菌株低温胁迫试验
云蚤早 猿摇 栽澡藻 泽贼则藻泽泽 贼藻泽贼 遭藻贼憎藻藻灶 贼澡藻 燥则蚤早蚤灶葬造 泽贼则葬蚤灶 葬灶凿 贼澡藻 皂怎贼葬灶贼 泽贼则葬蚤灶 憎蚤贼澡 造燥憎 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻
等咱圆员暂利用 砸粤孕阅对草菇单孢子和亲本进行分析袁筛选
出 圆 耀 猿 条较好引物遥 本研究利用 砸粤孕阅 对草菇诱变
菌株进行了分析袁不同引物的扩增效果有明显差异袁出
现了多态性条带袁可以从核酸水平上证实 粤砸栽孕 诱变
作用袁并且筛选出几种较好的引物用于后续突变体库
的建立与筛选遥 但是 砸粤孕阅 技术仍然存在假阳性尧重
复性和稳定性不高等问题咱圆圆暂 袁后续将此技术与其他分
子标记技术相结合咱圆猿暂 袁开发新的遗传标记袁以便能快
速有效地进行分子水平的鉴定咱圆源 原 圆缘暂 遥
本研究从原生质体到菌丝并进行出菇生产试验袁
经过筛选得到的 猿 株突变株生长速度明显快于亲本菌
株袁并且温度越低袁与亲本菌株生长速度差异越大袁子
实体并且与成体在冷冻实验中也有较大差异袁由此推
断草菇经过常压室温等离子体辐照已经发生基因突
变遥 综合分子核酸水平研究和出菇品位试验袁建立起
食用真菌的 粤砸栽孕 诱变育种平台袁为今后深入研究与
推广建立了基础遥
源摇 结论
本研究利用常压室温等离子诱变技术对草菇进行
诱变育种袁通过冷冻胁迫尧菌丝形态观察尧生长速度袁
砸粤孕阅分子标记验证了突变体袁并通过栽培出菇袁子实
体低温胁迫试验证实了突变体的优势袁筛选出 猿 株生
长速度快袁子实体抗冷冻胁迫明显的 猿 株突变体袁证明
了 粤砸栽孕在草菇育种中的巨大潜力袁建立了草菇 粤砸栽孕
诱变育种的筛选与检测体系袁为构建草菇突变体库尧快
速选育优良品种提供了新的手段遥
参考文献院
咱 员 暂摇 悦澡葬灶早 杂 栽袁 月怎泽憎藻造造 允 粤援 酝怎泽澡则燥燥皂 遭蚤燥造燥早赠 葬灶凿 皂怎泽澡则燥燥皂 责则燥凿怎糟贼泽
咱酝暂援 匀燥灶早 运燥灶早院 栽澡藻 悦澡蚤灶藻泽藻 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠 孕则藻泽泽袁 员怨怨猿院 苑员 原 愿猿
咱 圆 暂摇 粤澡造葬憎葬贼 韵 孕袁杂蚤灶早澡 砸袁运怎皂葬则 杂援 耘增葬造怎葬贼蚤燥灶 燥枣 灾燥造增葬则蚤藻造造葬 增燥造增葬糟藻葬
源缘怨员
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员源袁圆愿渊员员冤院员怨缘园 耀 员怨缘缘
泽贼则葬蚤灶泽 枣燥则 赠蚤藻造凿 葬灶凿 凿蚤泽藻葬泽藻泽 辕 蚤灶泽藻糟贼要责藻泽贼泽 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 怎泽蚤灶早
藻燥皂责燥泽贼藻凿 泽怎遭泽贼则葬贼藻 燥枣 责葬凿凿赠 泽贼则葬憎 葬灶凿 糟燥贼贼燥灶 皂蚤造造 憎葬泽贼藻泽 咱 允暂 援
陨灶凿蚤葬灶 允燥怎则灶葬造 燥枣 酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠袁圆园员员袁缘员渊圆冤院圆园园 原 圆园缘
咱 猿 暂 摇 孙晓红袁冯爱萍袁陈明杰袁潘迎捷援 草菇冷诱导相关基因的克隆
及序列分析 咱允暂 援菌物学报袁圆园园远袁圆缘渊员冤院愿愿 原 怨猿
咱 源 暂 摇 傅俊生袁朱坚袁谢宝贵袁邓优锦袁刘新锐援 草菇杂交菌株 圆远圆愿 的
鉴定与品比试验咱允暂 援中国农学通报袁圆园员园袁圆远渊员源冤院源愿 原 缘猿
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