全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员员袁圆缘渊缘冤院园怨员园 耀 园怨员缘允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员员冤园缘鄄园怨员园鄄园苑
茶树生长素抑制蛋白基因 悦泽粤砸孕员的克隆与表达分析
王新超摇 马春雷摇 杨亚军摇 姚明哲摇 金基强
渊中国农业科学院茶叶研究所茶树资源和改良研究中心 辕国家茶树改良中心袁浙江 杭州摇 猿员园园园愿冤
摘摇 要院从茶树休眠芽抑制消减杂交文库中分离得到生长素抑制蛋白基因的 猿忆鄄片段袁以休眠芽为材料袁
利用 砸粤悦耘技术克隆了其 糟阅晕粤全长袁并利用荧光定量 孕悦砸研究了该基因在不同休眠阶段芽的相对表
达量遥 结果从茶树休眠芽中获得一个全长为 苑员员遭责的生长素抑制蛋白基因 悦泽粤砸孕员渊郧藻灶月葬灶噪 登录号为
匀匝圆圆缘苑缘愿冤遥 该基因开放阅读框为 猿缘苑遭责袁编码 员员愿 个氨基酸袁推测的蛋白质分子量为 员圆郾 愿圆运阅袁等电点
约为 怨郾 缘苑遥 多序列比对结果显示袁该基因编码的氨基酸序列与其他植物的 粤砸孕 蛋白序列相似性达到
苑园豫以上袁具有生长素抑制基因家族的保守结构域遥 荧光定量 孕悦砸 结果表明袁悦泽粤砸孕员 基因在休眠阶段
表达量较高袁而在解除休眠渊萌发冤后表达量较低袁说明 悦泽粤砸孕员 基因可能与茶树芽休眠有关遥
关键词院茶树曰生长素抑制蛋白基因 悦泽粤砸孕员曰砸粤悦耘曰序列分析曰实时荧光定量 孕悦砸
悦蕴韵晕陨晕郧 粤晕阅 耘载孕砸耘杂杂陨韵晕 粤晕粤蕴再杂陨杂 韵云 粤哉载陨晕鄄砸耘孕砸耘杂杂耘阅
孕砸韵栽耘陨晕 郧耘晕耘 悦泽粤砸孕员 陨晕 栽耘粤 孕蕴粤晕栽 渊悦葬皂藻造造蚤葬 泽蚤灶藻灶泽蚤泽冤
宰粤晕郧 载蚤灶鄄糟澡葬燥摇 酝粤 悦澡怎灶鄄造藻蚤摇 再粤晕郧 再葬鄄躁怎灶摇 再粤韵 酝蚤灶早鄄扎澡藻摇 允陨晕 允蚤鄄择蚤葬灶早
渊砸藻泽藻葬则糟澡 悦藻灶贼藻则 枣燥则 栽藻葬 郧藻则皂责造葬泽皂 葬灶凿 陨皂责则燥增藻皂藻灶贼袁 栽藻葬 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽曰
晕葬贼蚤燥灶葬造 悦藻灶贼藻则 枣燥则 栽藻葬 陨皂责则燥增藻皂藻灶贼袁 匀葬灶早扎澡燥怎袁 在澡藻躁蚤葬灶早摇 猿员园园园愿冤
粤遭泽贼则葬糟贼院粤 猿忆鄄藻灶凿 早藻灶藻 枣则葬早皂藻灶贼 燥枣 葬怎曾蚤灶鄄则藻责则藻泽泽藻凿 责则燥贼藻蚤灶 早藻灶藻 渊粤砸孕冤 憎葬泽 泽糟则藻藻灶藻凿 枣则燥皂 贼澡藻 贼藻葬 责造葬灶贼 凿燥则皂葬灶贼 遭怎凿
泽怎责责则藻泽泽蚤燥灶 泽怎遭贼则葬糟贼蚤增藻 澡赠遭则蚤凿蚤扎葬贼蚤燥灶 渊杂杂匀冤 造蚤遭则葬则赠袁 蚤贼泽 枣怎造造鄄造藻灶早贼澡 糟阅晕粤 泽藻择怎藻灶糟藻 憎葬泽 糟造燥灶藻凿 贼澡则燥怎早澡 则葬责蚤凿 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
燥枣 糟阅晕粤 藻灶凿泽 渊砸粤悦耘冤袁 葬灶凿 蚤贼泽 则藻造葬贼蚤增藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 择怎葬灶贼蚤贼赠 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 泽贼葬早藻泽 燥枣 凿燥则皂葬灶贼 遭怎凿泽 憎葬泽 葬灶葬造赠扎藻凿 遭赠 则藻葬造鄄贼蚤皂藻
枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻 孕悦砸援 栽澡藻 枣怎造造 造藻灶早贼澡 燥枣 贼澡藻 葬怎曾蚤灶鄄则藻责则藻泽泽藻凿 责则燥贼藻蚤灶 早藻灶藻袁 灶葬皂藻凿 悦泽粤砸孕员袁 憎葬泽 苑员员遭责 渊郧藻灶月葬灶噪
葬糟糟藻泽泽蚤燥灶 晕燥援 匀匝圆圆缘苑缘愿冤 葬灶凿 糟燥灶贼葬蚤灶藻凿 葬 猿缘苑遭责 燥责藻灶 则藻葬凿蚤灶早 枣则葬皂藻 渊韵砸云冤 藻灶糟燥凿蚤灶早 葬 员员愿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 则藻泽蚤凿怎藻泽袁 葬灶凿 蚤贼泽
猿忆 怎灶贼则葬灶泽造葬贼藻凿 则藻早蚤燥灶 憎葬泽 葬灶 燥遭增蚤燥怎泽 责燥造赠葬凿藻灶赠造葬贼蚤燥灶 泽蚤早灶葬造援 栽澡藻 凿藻凿怎糟藻凿 责则燥贼藻蚤灶 皂燥造藻糟怎造葬则 憎藻蚤早澡贼 憎葬泽 员圆郾 愿圆噪阅 葬灶凿 蚤贼泽
贼澡藻燥则藻贼蚤糟葬造 蚤泽燥藻造藻糟贼则蚤糟 责燥蚤灶贼 憎葬泽 怨郾 缘苑郾 杂藻择怎藻灶糟藻 葬造蚤早灶皂藻灶贼 燥枣 贼澡藻 凿藻凿怎糟藻凿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿泽 燥枣 悦泽粤砸孕员 则藻增藻葬造藻凿 葬 澡蚤早澡 凿藻早则藻藻 燥枣
泽蚤皂蚤造葬则蚤贼赠 憎蚤贼澡 燥贼澡藻则 皂藻皂遭藻则泽 燥枣 责造葬灶贼 粤砸孕 葬灶凿 澡葬凿 葬 贼赠责蚤糟葬造 凿燥皂葬蚤灶 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 燥枣 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻
孕悦砸 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 悦泽粤砸孕员 早藻灶藻 憎葬泽 藻曾责则藻泽泽藻凿 葬贼 葬 澡蚤早澡藻则 造藻增藻造 蚤灶 凿燥则皂葬灶贼 遭怎凿泽 贼澡葬灶 蚤灶 泽责则燥怎贼蚤灶早 遭怎凿泽援 陨贼 泽怎早早藻泽贼泽 贼澡葬贼
贼澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 悦泽粤砸孕员 早藻灶藻 蚤泽 糟燥则则藻造葬贼藻凿 贼燥 贼澡藻 遭怎凿 凿燥则皂葬灶糟赠 贼则葬灶泽蚤贼蚤燥灶援
运藻赠 憎燥则凿泽院贼藻葬 责造葬灶贼 渊悦葬皂藻造造蚤葬 泽蚤灶藻灶泽蚤泽冤曰 葬怎曾蚤灶鄄则藻责则藻泽泽藻凿 责则燥贼藻蚤灶 早藻灶藻 渊悦泽粤砸孕员冤曰 砸粤悦耘曰 泽藻择怎藻灶糟藻 葬灶葬造赠泽蚤泽曰 则藻葬造鄄
贼蚤皂藻 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻 孕悦砸
收稿日期院圆园员员鄄园员鄄圆远摇 接受日期院圆园员员鄄园猿鄄猿园
基金项目院国家自然科学基金项目渊猿园愿苑圆园缘怨冤袁现代农业渊茶叶冤产业技术体系项目渊悦粤砸杂鄄圆猿冤
作者简介院王新超渊员怨苑缘鄄冤袁男袁安徽霍邱人袁副研究员袁主要从事茶树资源尧育种与分子生物学研究遥 栽藻造院园缘苑员鄄愿远远缘猿员远圆曰耘鄄皂葬蚤造院 曾糟憎苑缘岳 皂葬蚤造援
贼则蚤糟葬葬泽援 糟燥皂
通讯作者院杨亚军渊员怨远员鄄冤袁男袁江苏如皋人袁研究员袁博导袁 主要从事茶树资源尧育种与分子生物学研究遥 耘鄄皂葬蚤造院 赠躁赠葬灶早岳 皂葬蚤造援 贼则蚤糟葬葬泽援 糟燥皂
摇 摇 茶树渊悦葬皂藻造造蚤葬 泽蚤灶藻灶泽蚤泽 渊蕴援 冤 韵援 运怎灶贼扎藻冤是一种多
年生木本植物袁进入秋季袁经历一段时间的短日照和低
温后袁芽会进入休眠状态遥 在春季袁随着气温的回升和
光照时间的增加袁芽打破休眠而萌发遥 芽休眠作为一
园员怨
摇 缘 期 茶树生长素抑制蛋白基因 悦泽粤砸孕员 的克隆与表达分析
种生理现象袁是茶树经过长期演化而获得的一种对环
境条件及季节性变化有益的生物学适应性袁伴随着休
眠的开始袁越冬芽对温度胁迫的抗性增加袁有助于抵抗
冬季严寒的伤害袁安全越冬咱员暂 遥 在影响芽休眠的诸多
因素中袁激素是一个重要的因素遥 已有的研究表明袁缘
大类激素都参与了芽休眠与解除的过程袁激素在其中
是作为信号物质调节其他生理活动的咱圆暂 遥 生长素是
一类重要的激素袁参与细胞的分裂尧生长尧成熟和分化
等过程袁被认为是野主效冶激素咱猿暂 遥 生长素在芽休眠的
形成与解除过程中也起着重要的作用袁它通过抑制芽
对细胞分裂素的信号感受来改变其细胞周期袁从而控
制芽的生长发育咱源暂 遥 生长素作为一类重要的信号分
子袁是通过调节一系列基因的表达来影响植物生长发
育的遥 在与生长素有关的基因研究中袁涉及到两大类袁
一类是生长素受体基因袁尽管生长素受体至今尚未明
确袁但植物细胞中的一类蛋白要要要生长素结合蛋白
渊葬怎曾蚤灶 遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶袁粤月孕冤袁被认为最有可能是生长
素的受体袁粤月孕 与生长素结合袁识别生长素的信号转
导袁进而调节下游基因的表达咱缘暂 曰还有一类是与生长
素相关的转录因子袁如生长素响应因子渊葬怎曾蚤灶 则藻泽责燥灶泽藻
枣葬糟贼燥则泽袁 粤砸云冤和 粤哉载 辕 陨粤粤转录因子等袁它们参与生长
素诱导基因的表达调控咱远暂 遥
以往克隆的生长素相关基因多以诱导上调表达的
基因为主袁而诱导下调表达的基因所知甚少咱苑暂 遥 在有
限的生长素诱导下调表达基因中袁生长素抑制蛋白
渊葬怎曾蚤灶 则藻责则藻泽泽藻凿 责则燥贼藻蚤灶袁 粤砸孕冤基因是其中重要的一
类遥 本研究以从休眠芽的 杂杂匀鄄糟阅晕粤文库中筛选出的
与 粤砸孕基因同源的表达序列标签渊耘杂栽冤为基础咱愿暂 袁采
用 砸粤悦耘 技术首次克隆出茶树 粤砸孕 的 糟阅晕粤 基因全
长渊命名为 悦泽粤砸孕员冤袁利用生物信息学方法对其序列
进行了分析袁并采用 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸技术分析了该基因
在茶树芽休眠的不同时期表达模式袁为研究该基因在
茶树芽休眠中的作用奠定基础遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
供试品种为特早生国家级茶树品种龙井 源猿袁种植
于国家种质杭州茶树圃遥 于 圆园园愿 年 员园 月下旬茶树进
入休眠期开始袁依据芽的发育情况袁采摘 员员 月 缘 日渊休
眠期冤尧员圆 月 圆缘 日渊深休眠期冤尧员 月 员远 日渊膨大期冤尧圆
月 圆园渊萌发期冤尧猿 月 员园渊鱼叶期冤和 猿 月 员远 日渊员 芽 员
叶期冤的剪口下第一腋芽袁液氮速冻后 原 愿园益冰箱保
存待用遥
员郾 圆摇 总 砸晕粤的提取
采用离心柱型植物总 砸晕粤 快速提取试剂盒
渊栽蚤葬灶早藻灶袁北京冤袁按照说明书的要求提取不同休眠阶
段的总 砸晕粤遥 用 晕葬灶燥阅则燥责 晕阅员园园 微量核酸蛋白测定
仪渊孕蚤贼贼泽遭怎则早澡袁 孕粤袁 哉杂粤冤测定吸光值确定 砸晕粤 浓度袁
用 员郾 园豫的变性琼脂糖凝胶电泳检测总 砸晕粤 质量遥
最后得到的总 砸晕粤于 原愿园益保存备用遥
员郾 猿摇 茶树生长素抑制蛋白基因渊悦泽粤砸孕员冤糟阅晕粤 全长
的克隆
从本实验室已经构建的抑制消减杂交文库中分离
到一个在休眠芽中优势表达的 耘杂栽 片段咱愿暂 袁根据序列
比对结果袁发现该片段与生长素抑制蛋白 渊 粤怎曾蚤灶鄄
则藻责则藻泽泽藻凿 责则燥贼藻蚤灶袁 粤砸孕冤基因的 猿忆端高度同源遥 根据
耘杂栽序列信息袁设计 缘忆鄄砸粤悦耘 特异引物袁以休眠期渊员员
月 缘 日冤的 砸晕粤为材料袁按照 悦造燥灶贼藻糟澡 公司的 杂酝粤砸栽
砸粤悦耘试剂盒渊酝燥怎灶贼葬蚤灶 灾蚤藻憎袁 悦粤袁 哉杂粤冤说明书合成
缘忆鄄糟阅晕粤袁稀释 员园 倍后袁用于 缘忆鄄砸粤悦耘鄄孕悦砸 反应遥 反
应在 月蚤燥砸葬凿 孕栽悦鄄园圆圆园郧 孕悦砸 仪上进行袁程序为 怨源益
变性 猿园泽袁远园益退火 猿园泽袁苑圆益延伸 圆皂蚤灶袁猿园 个循环袁
苑圆益终止反应 缘皂蚤灶遥 员郾 园豫琼脂糖凝胶电泳后回收目
的条带袁克隆测序咱怨暂 遥
将所得 缘忆鄄端的序列与原有序列采用 阅晕粤杂贼葬则 软
件进行拼接袁得到基因全长遥 再根据拼接序列设计
粤砸孕基因开放阅读框渊韵砸云冤的上尧下游引物扩增出基
因的 韵砸云 全长遥 孕悦砸 反应条件院怨缘益预变性 猿皂蚤灶曰
怨缘益变性 猿园泽袁缘愿益退火 猿园泽袁苑圆益延伸 怨园泽袁共 猿园 个循
环袁苑圆益终止反应 缘皂蚤灶遥 员郾 园豫琼脂糖凝胶电泳回收
目的条带袁克隆测序遥 本实验所用引物序列见表 员袁由
上海英骏生物技术有限公司合成遥 孕悦砸产物采用 栽 辕 粤
克隆法袁检测后挑选阳性克隆送上海英骏生物技术有
限公司测序遥
员郾 源摇 悦泽粤砸孕员 基因序列分析
通过 月造葬泽贼载 和 月造葬泽贼孕 搜索 晕悦月陨 渊 澡贼贼责院椅遭造葬泽贼援
灶糟遭蚤援 灶造皂援 灶蚤澡援 早燥增 辕 月造葬泽贼援 糟早蚤冤的核苷酸和蛋白质数据
库袁对测定的序列结果进行序列相似性分析及氨基酸
保守性预测和保守结构域分析曰用 郧韵砸渊澡贼贼责院椅灶责泽葬鄄
责遭蚤造援 蚤遭糟责援 枣则 辕 糟早蚤鄄遭蚤灶 辕 灶责泽葬赃葬怎贼燥皂葬贼援 责造钥 责葬早藻 越 辕 晕孕杂粤 辕
灶责泽葬赃早燥则源郾 澡贼皂造冤进行二级结构分析曰用 孕则燥贼孕葬则葬皂 软件
渊澡贼贼责院椅葬怎援 藻曾责葬泽赠援 燥则早 辕 贼燥燥造泽 辕 责则燥贼责葬则葬皂援 澡贼皂造冤 计算蛋
白质的相对分子量和理论等电点曰用 酝耘郧粤源郾 员渊澡贼贼责院
椅皂藻早葬泽燥枣贼憎葬则藻援 灶藻贼 辕 冤 进行氨基酸多序列比对及分子
进化树的绘制曰用 栽酝孕砸耘阅渊 澡贼贼责院椅憎憎憎援 糟澡援 藻皂遭灶藻贼援
燥则早 辕 泽燥枣贼憎葬则藻 辕 栽酝孕砸耘阅赃枣燥则皂援 澡贼皂造冤 预测蛋白质序列的
跨膜区曰栽郧砸耘粤杂耘 软件渊 澡贼贼责院椅枣葬泽贼葬援 遭蚤燥糟澡援 增蚤则早蚤灶蚤葬援
员员怨
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
摇 摇 摇 摇 摇 摇 表 员摇 缘忆鄄砸粤悦耘鄄孕悦砸和荧光定量 孕悦砸所用引物序列
栽葬遭造藻 员摇 孕则蚤皂藻则 泽藻择怎藻灶糟藻泽 枣燥则 缘忆鄄砸粤悦耘鄄孕悦砸 葬灶凿 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸
引物 责则蚤皂藻则 引物序列 责则蚤皂藻则 泽藻择怎藻灶糟藻 用途 枣怎灶糟贼蚤燥灶
粤砸孕鄄缘忆郧杂孕 郧悦栽悦悦悦悦悦栽栽悦悦栽栽悦悦悦悦粤栽悦栽栽栽 缘忆 砸粤悦耘 基因特异引物 早藻灶藻 泽责藻糟蚤枣蚤糟 责则蚤皂藻则 枣燥则 缘忆 藻灶凿
粤砸孕鄄杂 粤郧粤粤粤郧粤粤栽郧郧栽粤栽栽郧栽栽郧郧粤悦 开放阅读框上游引物 枣燥则憎葬则凿 责则蚤皂藻则 枣燥则 韵砸云
粤砸孕鄄粤 郧郧栽粤粤悦悦栽栽悦粤栽悦粤悦悦栽悦粤郧悦郧 开放阅读框下游引物 则藻增藻则泽藻 责则蚤皂藻则 枣燥则 韵砸云
粤砸孕鄄匝杂 郧粤郧郧粤郧悦粤粤郧悦粤栽悦郧悦栽郧粤郧郧栽郧粤 荧光定量上游引物 枣燥则憎葬则凿 责则蚤皂藻则 枣燥则 砸藻葬造鄄孕悦砸
粤砸孕鄄匝粤 栽粤粤郧悦悦粤郧悦粤粤悦粤粤悦悦粤悦郧粤悦粤悦郧 荧光定量下游引物 则藻增藻则泽藻 责则蚤皂藻则 枣燥则 砸藻葬造鄄孕悦砸
茁鄄栽怎遭造蚤灶鄄云 悦粤悦郧栽郧郧郧栽悦悦悦粤郧悦粤粤栽粤悦 荧光定量内参上游引物 枣燥则憎葬则凿 责则蚤皂藻则 燥枣 则藻枣藻则藻灶糟藻 早藻灶藻 枣燥则 砸藻葬造鄄孕悦砸
茁鄄栽怎遭造蚤灶鄄砸 郧郧栽悦粤郧悦粤郧悦粤悦粤悦粤栽悦粤栽郧栽 荧光定量内参下游引物 则藻增藻则泽藻 责则蚤皂藻则 燥枣 则藻枣藻则藻灶糟藻 早藻灶藻 枣燥则 砸藻葬造鄄孕悦砸
藻凿怎 辕 枣葬泽贼葬赃憎憎憎 辕 早则藻葬泽藻援 澡贼皂冤分析亲水性 辕疏水性遥
员郾 缘摇 悦泽粤砸孕员 基因在芽的不同休眠时期荧光定量
孕悦砸分析
根据 悦泽粤砸孕员 基因 员郾 员 中采摘样品序列设计荧光
定量 孕悦砸 的上尧下游引物袁以茶树 茁鄄栽怎遭造蚤灶 基因作为
内参基因设计引物渊表 员冤袁以 员郾 员 中采摘样品的 砸晕粤
为材料袁按照 孕则蚤皂藻杂糟则蚤责贼栽酝 砸栽 则藻葬早藻灶贼渊栽葬运葬砸葬袁大连冤
试剂盒操作手册合成 糟阅晕粤袁稀释 缘 倍做模板遥 荧光
定量反应体系为院杂再月砸 孕则藻皂蚤曾 耘曾 栽葬择 圆缘滋造袁上尧下游
引物渊员园滋皂燥造 辕 蕴冤各 圆滋造袁砸韵载 阅赠藻 陨陨 员滋造袁糟阅晕粤 源滋造袁
加水至终体积 缘园滋造遥 反应在 粤月陨 孕砸陨杂酝 苑缘园园 实时定
量 孕悦砸 仪上进行袁程序为 怨缘益变性 猿园泽袁怨源益 变性
员缘泽袁远园益退火延伸 猿源泽袁 源园 个循环袁反应结束后分析荧
光值变化曲线和融解曲线遥 每个反应重复 猿 次袁采用
圆 原 驻驻悦贼算法分析结果咱员园暂 遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 茶树 粤砸孕全长基因 糟阅晕粤的克隆
根据休眠芽文库阳性克隆序列的生物信息学分析
结果袁发现了 员 条与生长素抑制蛋白渊粤怎曾蚤灶鄄则藻责则藻泽泽藻凿
责则燥贼藻蚤灶袁 粤砸孕冤基因 猿忆端高度同源的 耘杂栽 序列袁根据这
段序列设计 缘忆鄄砸粤悦耘引物袁采用 杂酝粤砸栽 砸粤悦耘技术获
得了该基因的 缘忆鄄片段渊图 员鄄粤冤袁将 缘忆鄄片段回收袁进行
连接和转化袁挑取阳性克隆测序遥 将得到的序列与文
库中获得的片段进行拼接袁得到一条长 苑员员遭责的序列遥
采用 阅晕粤杂贼葬则软件预测开放阅读框渊韵砸云冤袁然后根据
韵砸云设计一对嵌套引物袁扩增出 员 段长约 源园园遭责 的片
段渊图 员鄄月冤遥 将该片段回收尧克隆和测序袁然后将获得
的序列与原来的序列进行再次拼接袁最后获得了长为
苑员员遭责的 糟阅晕粤序列袁其 缘忆鄄端有 圆苑遭责 的非编码区渊缘忆鄄
哉栽砸冤袁猿忆鄄端有 猿圆苑 遭责 的非编码区渊猿忆鄄哉栽砸冤袁其终止
子 栽郧粤 后具有非常保守的多聚腺苷酸加尾信号
粤粤栽粤粤粤袁片段末端含有 责燥造赠渊粤冤序列遥 依据上述特
征判断袁本研究获得了茶树 粤砸孕 的完整 糟阅晕粤 全长序
列遥 该基因已在 郧藻灶月葬灶噪 登录袁登录号为 匀匝圆圆缘苑缘愿袁
命名为 悦泽粤砸孕员渊图 圆冤遥
图 员摇 基因 悦泽粤砸孕员 缘忆鄄砸粤悦耘和 砸栽鄄孕悦砸的电泳结果
云蚤早援 员摇 耘造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽 则藻泽怎造贼泽 燥枣 缘忆鄄砸粤悦耘 葬灶凿
砸栽鄄孕悦砸 燥枣 悦泽粤砸孕员
粤院 缘忆鄄砸粤悦耘端扩增片段曰月院 砸栽鄄孕悦砸扩增产物
粤院 缘忆鄄砸粤悦耘 藻灶凿 枣则葬早皂藻灶贼 燥枣 悦泽粤砸孕员 早藻灶藻曰 月院 责则燥凿怎糟贼 燥枣 砸栽鄄孕悦砸
圆郾 圆摇 茶树 粤砸孕基因渊悦泽粤砸孕员冤推导的氨基酸序列同
源性及系统进化分析
用 韵砸云 软件 渊 澡贼贼责院椅 憎憎憎援 灶糟遭蚤援 灶造皂援 灶蚤澡援 早燥增 辕
早燥则枣 辕 早燥则枣援 澡贼皂造冤对 悦泽粤砸孕员 序列进行分析袁最后确定其
开放阅读框长 猿缘苑遭责袁编码 员员愿 个氨基酸渊图 圆冤袁分子
量为 员圆郾 愿圆噪阅袁等电点渊孕陨冤为 怨郾 缘苑 遥 将 悦泽粤砸孕员 基因
推导的氨基酸序列渊郧藻灶月葬灶噪 登录号 粤阅韵猿圆苑源园冤与
郧藻灶月葬灶噪 中已经登录的烟草 渊 晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 贼葬遭葬糟怎皂袁
粤粤杂苑远远猿缘冤尧牡丹渊孕葬藻燥灶蚤葬 泽怎枣枣则怎贼蚤糟燥泽葬袁粤月宰苑源源苑员冤尧黄
果茄渊杂燥造葬灶怎皂 增蚤则早蚤灶蚤葬灶怎皂袁粤粤杂苑缘愿怨员冤尧草莓渊云则葬早葬则蚤葬
曾 葬灶葬灶葬泽泽葬袁 粤粤粤苑猿愿苑圆冤尧沙棘 渊 耘造葬藻葬早灶怎泽 怎皂遭藻造造葬贼葬袁
粤粤悦远圆员园源冤尧洋槐渊砸燥遭蚤灶蚤葬 责泽藻怎凿燥葬糟葬糟蚤葬袁粤粤郧猿猿怨圆源冤尧
梨渊孕赠则怎泽 责赠则蚤枣燥造蚤葬袁粤悦允远愿源圆圆冤尧西瓜渊悦蚤贼则怎造造怎泽 造葬灶葬贼怎泽
泽怎遭泽责援 增怎造早葬则蚤泽袁 月粤陨缘圆怨缘远 冤尧 野 百 合 渊 杂藻泽遭葬灶蚤葬
凿则怎皂皂燥灶凿蚤蚤袁 粤月匝源源圆愿圆 冤尧 花 生 渊 粤则葬糟澡蚤泽 澡赠责燥早葬藻葬袁
粤粤在圆园圆怨圆冤尧拟南芥渊粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬袁粤粤悦圆远圆园猿冤
等 员员 种植物的 粤砸孕 氨基酸序列进行同源性比对袁结
果发现茶树的 粤砸孕氨基酸序列与这些物种的 粤砸孕 氨
基酸序列相似性较高袁达到 苑园豫以上袁而且 晕 端和 悦
端的氨基酸序列高度保守渊图 猿冤遥
圆员怨
摇 缘 期 茶树生长素抑制蛋白基因 悦泽粤砸孕员 的克隆与表达分析
将茶树 粤砸孕员 蛋白和其他 员员 种植物的 粤砸孕 蛋白
的氨基酸序列采用 晕藻蚤早澡遭燥则鄄允燥蚤灶蚤灶早 法进行系统进化
树分析遥 结果表明袁茶树的 粤砸孕员 蛋白与牡丹的亲缘
关系最近袁其次是沙棘袁而与洋槐和野百合的亲缘关系
最远渊图 源冤遥
图 圆摇 茶树生长素抑制蛋白基因全长 糟阅晕粤的核苷酸序列和推测氨基酸序列
云蚤早援 圆摇 晕怎糟造藻燥贼蚤凿藻 葬灶凿 责怎责葬贼蚤增藻 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻泽 燥枣 贼澡藻 粤砸孕 枣怎造造 造藻灶早贼澡 糟阅晕粤 燥枣 贼藻葬 责造葬灶贼
开放阅读框用下划线标出袁多聚腺苷酸加尾信号用黑体标出遥
韵责藻灶 则藻葬凿蚤灶早 枣则葬皂藻 蚤泽 怎灶凿藻则造蚤灶藻凿袁 贼澡藻 责怎贼葬贼蚤增藻 责燥造赠 渊粤冤 贼葬蚤造 泽蚤早灶葬造 蚤泽 泽澡燥憎藻凿 蚤灶 遭燥造凿 贼赠责藻援
图 猿摇 茶树 粤砸孕与其他植物的生长素抑制蛋白氨基酸序列比对
云蚤早援 猿摇 酝怎造贼蚤责造藻 葬造蚤早灶皂藻灶贼 燥枣 凿藻凿怎糟藻凿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻泽 燥枣 悦泽粤砸孕员 葬灶凿
燥贼澡藻则 噪灶燥憎灶 葬怎曾蚤灶鄄则藻责则藻泽泽藻凿 责则燥贼藻蚤灶 燥枣 责造葬灶贼 燥则蚤早蚤灶
猿员怨
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
图 源摇 茶树 粤砸孕员 与其他植物的生长素抑制蛋白氨基酸序列的进化树分析
云蚤早援 源摇 孕澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 贼则藻藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 悦泽粤砸孕员 责则燥贼藻蚤灶 葬皂燥灶早 凿蚤增藻则泽藻 责造葬灶贼 泽责藻糟蚤藻泽
圆郾 猿摇 悦泽粤砸孕员 蛋白结构分析
二级结构预测结果表明袁茶树 粤砸孕员 蛋白含有
圆园郾 猿源豫的 琢鄄螺旋袁缘郾 怨猿豫的延伸链和 苑猿郾 苑猿豫的随机
卷曲遥 在 晕悦月陨上进行保守结构域分析袁结果表明袁茶
树 粤砸孕蛋白具有 粤怎曾蚤灶鄄则藻责则藻泽泽藻凿 家族的保守结构域袁
位置在 苑 耀 员员愿葬葬袁耘值为 员藻鄄圆怨遥 推测具有该结构域的
蛋白与植物的休眠调控有关咱员员暂 遥
通过 栽酝孕砸耘阅软件预测 悦泽粤砸孕员 蛋白的跨膜结构
域袁结果表明院该蛋白没有明显的跨膜结构域渊图 缘冤曰
利用 栽郧砸耘粤杂耘 软件进行的蛋白质亲水性 辕疏水性分
析结果表明袁茶树 粤砸孕 蛋白疏水性很弱袁是一个亲水
性很强的蛋白渊图 远冤遥
图 缘摇 悦泽粤砸孕员 蛋白的跨膜结构预测
云蚤早援 缘栽澡藻 贼则葬灶泽皂藻皂遭则葬灶藻 凿燥皂葬蚤灶泽
葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 悦泽粤砸孕员 责则燥贼藻蚤灶
通过 杂蚤早灶葬造孕猿郾 园 软件系统袁利用神经网络模型
渊晕晕冤袁分析了茶树 悦泽粤砸孕员 编码的蛋白质的信号肽序
列遥 结果表明袁悦泽粤砸孕员 编码的蛋白没有发现信号肽及
图 远摇 悦泽粤砸孕员 蛋白的疏水性 辕亲水性分析
云蚤早援 远摇 匀赠凿则燥责澡燥遭蚤糟蚤贼赠 辕 澡赠凿则燥责澡蚤造蚤糟蚤贼赠
葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 悦泽粤砸孕员 责则燥贼藻蚤灶
图 苑摇 悦泽粤砸孕员 蛋白的信号肽分析
云蚤早援 苑摇 杂蚤早灶葬造 责藻责贼蚤凿藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 悦泽粤砸孕员
其剪切位点渊图 苑冤袁是非分泌型蛋白遥
圆郾 源摇 悦泽粤砸孕员 基因在不同休眠阶段芽内的荧光定量
孕悦砸分析
茶树芽从秋季到春季不同阶段 悦泽粤砸孕员 基因相对
表达量的差异见图 愿遥 结果发现袁该基因在休眠阶段
的表达量高于萌发阶段遥 与休眠初期相比袁随着休眠
程度的加深袁该基因的表达量升高渊上调表达冤袁在深
休眠期达到高峰袁随着芽发育程度的进行袁茶树芽由休
源员怨
摇 缘 期 茶树生长素抑制蛋白基因 悦泽粤砸孕员 的克隆与表达分析
眠向萌动转变渊膨大期冤袁悦泽粤砸孕员 的表达量降低袁此后
持续降低袁到萌动期时其表达量仅为休眠期的
员猿郾 源豫 袁以后一直维持在较低水平渊图 愿冤遥
图 愿摇 芽的不同阶段 悦泽粤砸孕员 基因的相对表达水平
云蚤早援 愿摇 砸藻造葬贼蚤增藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 悦泽粤砸孕员 早藻灶藻 葬贼
凿蚤枣枣藻则藻灶贼 泽贼葬早藻泽 燥枣 遭怎凿泽
员院 休眠初期渊员员 辕 缘冤曰圆院 深休眠期渊员圆 辕 圆缘冤曰猿院 膨大期渊员 辕 员远冤曰源院
萌动期渊圆 辕 圆园冤曰缘院 鱼叶期渊猿 辕 员园冤曰远院 员 芽 员 叶期渊猿 辕 员远冤
员院 蚤灶蚤贼蚤葬造 凿燥则皂葬灶贼 泽贼葬早藻 渊缘 辕 晕燥增冤曰 圆院 凿藻藻责 凿燥则皂葬灶贼 泽贼葬早藻 渊圆缘 辕 阅藻糟冤曰
猿院 藻曾责葬灶凿蚤灶早 泽贼葬早藻 渊员远 辕 允葬灶冤曰 源院 泽责则燥怎贼蚤灶早 泽贼葬早藻 渊圆园 辕 云藻遭冤曰 缘院 枣蚤泽澡
造藻葬枣 泽贼葬早藻 渊员园 辕 酝葬则冤曰 远院 燥灶藻 葬灶凿 葬 遭怎凿 泽贼葬早藻 渊员远 辕 酝葬则冤
猿摇 讨论
生长素抑制蛋白基因渊粤砸孕冤被认为与休眠相关蛋
白基因渊凿燥则皂葬灶糟赠鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿 责则燥贼藻蚤灶袁阅砸酝冤相关联袁称
为 粤砸孕 辕 阅砸酝 基因家族袁是一类植物特有的基因咱员员暂 遥
目前已从多种植物上分离出 粤砸孕 辕 阅砸酝 基因咱员员 耀 员缘暂 遥
这些基因大部分是从休眠组织 辕器官或受到外界生物
或非生物逆境胁迫的组织 辕器官中分离出来的袁所以推
导该基因家族与植物的休眠或抗逆有关袁但其具体功
能还不清楚遥 研究认为袁粤砸孕 基因一般被外源生长素
诱导抑制表达袁而且它的表达与植物体的发育状况呈
负相关遥 如在草莓上的研究发现袁杂粤砸缘 基因的表达与
果实的发育进程呈负相关咱员圆暂 曰豌豆上的研究表明袁腋
芽中 孕泽阅砸酝员 在顶芽摘除 远澡后表达下降袁而代表腋芽
恢复生长的 砸孕蕴圆苑 基因表达量上升袁说明腋芽恢复生
长后 孕泽阅砸酝员 基因表达受到抑制咱员员暂 曰洋槐上的研究发
现袁砸责粤砸孕的表达与新梢的伸长负相关咱员猿暂 遥 另外的一
些研究也表明袁在受到生物或非生物胁迫时袁粤砸孕基因
上调表达咱员远 耀 员愿暂 遥
本研究利用茶树休眠芽抑制消减杂交文库中获得
的 耘杂栽片段为基础咱愿暂 袁采用 砸粤悦耘 技术成功克隆了茶
树的 粤砸孕 基因袁通过生物信息学分析袁发现茶树的
粤砸孕基因编码的氨基酸序列和来源于其他植物的
粤砸孕蛋白具有 苑园豫以上的相似性袁具有典型的 粤怎曾蚤灶鄄
则藻责则藻泽泽藻凿家族的保守结构域遥 在茶树芽休眠不同阶段
的定量 孕悦砸研究结果表明袁悦泽粤砸孕员 基因随着休眠程
度的加深袁表达量增加袁在休眠阶段的表达量高于萌发
阶段遥 在芽萌发以后袁其表达量处于较低的水平袁这与
牡丹上的研究结果类似咱员怨暂 遥 对生长素与茶树芽休眠
关系的研究结果发现袁在休眠芽中袁游离态的生长素含
量很低袁在休眠解除后袁游离态的生长素含量则在休眠
解除后达到最高峰曰而结合态的生长素则相反咱圆园暂 遥 推
测在休眠阶段袁低水平的游离生长素对 粤砸孕 的抑制作
用效应较低袁而且随着休眠程度的加深袁游离态生长素
含量持续降低袁导致 粤砸孕的表达量较高遥 而休眠解除
后袁游离态生长素含量升高袁对 粤砸孕 基因的表达抑制
作用增强袁从而导致其表达量降低遥 由此可见袁生长素
及其相关基因在茶树芽休眠的调控上是有一定作用
的遥 本研究成功克隆了茶树的生长素抑制蛋白基因
渊悦泽粤砸孕员冤袁为今后进一步研究生长素对茶树芽休眠的
调控提供了参考遥 至于 悦泽粤砸孕员 的具体功能袁尚需通
过其他的方法进一步研究遥
参考文献院
咱 员 暂摇 月葬则怎葬 阅 晕援 杂藻葬泽燥灶葬造 凿燥则皂葬灶糟赠 蚤灶 贼藻葬 渊悦葬皂藻造造蚤葬 泽蚤灶藻灶泽蚤泽 蕴援 冤 咱 允暂 援
晕葬贼怎则藻袁 员怨远怨袁 圆圆源院 缘员源
咱 圆 暂 摇 粤则燥则葬 砸袁 砸燥憎造葬灶凿 蕴 允袁 栽葬灶蚤灶燥 运援 陨灶凿怎糟贼蚤燥灶 葬灶凿 则藻造藻葬泽藻 燥枣 遭怎凿
凿燥则皂葬灶糟赠 蚤灶 憎燥燥凿赠 责藻则藻灶灶蚤葬造泽院 葬 泽糟蚤藻灶糟藻 糟燥皂藻泽 燥枣 葬早藻 咱 允暂 援 匀燥则贼蚤糟
杂糟蚤袁 圆园园猿袁 猿愿院怨员员 原 怨圆员
咱 猿 暂 摇 云造藻皂蚤灶早 粤 允援 孕造葬灶贼 泽蚤早灶葬造蚤灶早院 贼澡藻 蚤灶藻曾燥则葬遭造藻 则蚤泽藻 燥枣 葬怎曾蚤灶 咱 允暂 援
栽则藻灶凿泽 悦藻造造 月蚤燥造袁 圆园园远袁 员远院 猿怨苑 原 源园圆
咱 源 暂 摇 匀燥则增葬贼澡 阅 孕袁 粤灶凿藻则泽燥灶 允 灾袁 悦澡葬燥 宰 杂袁 云燥造藻赠 酝 耘援 运灶燥憎蚤灶早 憎澡藻灶
贼燥 早则燥憎院 泽蚤早灶葬造泽 则藻早怎造葬贼蚤灶早 遭怎凿 凿燥则皂葬灶糟赠 咱 允暂 援 栽则藻灶凿泽 孕造葬灶贼 杂糟蚤袁
圆园园猿袁 愿院缘猿源 原 缘源园
咱 缘 暂 摇 栽蚤皂责贼藻 悦援 粤怎曾蚤灶 遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶院 糟怎则蚤燥怎泽藻则 葬灶凿 糟怎则蚤燥怎泽藻则 咱 允暂 援
栽则藻灶凿泽 孕造葬灶贼 杂糟蚤袁 圆园园员袁 远院 缘愿远 原 缘怨园
咱 远 暂摇 郧怎蚤造枣燥赠造藻 栽 允袁 匀葬早藻灶 郧援 粤怎曾蚤灶 则藻泽责燥灶泽藻 枣葬糟贼燥则泽 咱 允暂 援 悦怎则则 韵责蚤灶
孕造葬灶贼 月蚤燥造袁 圆园园苑袁 员园院 源缘猿 原 源远园
咱 苑 暂 摇 匀葬早藻灶 郧袁 郧怎蚤造枣燥赠造藻 栽援 粤怎曾蚤灶鄄则藻泽责燥灶泽蚤增藻 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶院 早藻灶藻泽袁
责则燥皂燥贼藻则泽 葬灶凿 则藻早怎造葬贼燥则赠 枣葬糟贼燥则泽 咱允暂 援 孕造葬灶贼 酝燥造 月蚤燥造袁 圆园园圆袁 源怨院猿苑猿
原 猿愿缘
咱 愿 暂摇 王新超袁杨亚军袁陈摇 亮袁马春雷袁姚明哲援 茶树休眠芽与萌动芽
抑制消减杂交文库的构建与初步分析咱允暂 援 茶叶科学袁 圆园员园袁 猿园
渊圆冤院员圆怨 原 员猿缘
咱 怨 暂摇 王玲平袁周生茂袁曹家树援 诸葛菜 韵增悦再孕愿远酝云 基因的克隆及其
特性分析咱允暂 援 核农学报袁圆园员园袁圆源渊源冤院苑圆愿 原 苑猿远
渊下转第 怨圆员 页冤
缘员怨
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员员袁圆缘渊缘冤院园怨员远 耀 园怨圆员
月糟酝云圆园 同源基因较保守袁它们在 阅晕粤 序列上的相似
性为 愿远郾 怨豫 耀员园园豫 袁 编码的蛋白质同源性高达
苑苑郾 远豫 耀 员园园豫 袁且均编码 酝酝月 型的 猿 锌指 悦圆匀圆 锌
指蛋白袁在锌指的保守区域袁氨基酸序列完全相同遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 栽葬噪葬贼泽怎躁蚤 匀袁 酝燥则蚤 酝袁 月藻灶枣藻赠 孕 晕袁 砸藻灶 蕴袁 悦澡怎葬 晕 匀援
悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 扎蚤灶糟 枣蚤灶早藻则 阅晕粤鄄遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶 藻曾责则藻泽泽藻凿
泽责藻糟蚤枣蚤糟葬造造赠 蚤灶 责藻贼怎灶蚤葬 责藻贼葬造泽 葬灶凿 泽藻藻凿造蚤灶早咱允暂 援 栽澡藻 耘酝月韵 允燥怎则灶葬造袁
员怨怨圆袁 员员渊员冤院圆源员 原 圆源怨
咱 圆 暂摇 黄摇 骥袁王建飞袁张红生援 植物 悦圆匀圆 型锌指蛋白的结构与功能
咱允暂 援 遗传袁 圆园园源袁 圆远渊猿冤院源员源 原 源员愿
咱 猿 暂 摇 匀怎葬灶早 蕴袁 悦葬燥 允 杂袁 再藻 宰 在袁 蕴蚤怎 栽 栽袁 允蚤葬灶早 蕴鄄匀袁 再藻 再鄄匝援
栽则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶葬造 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽 遭藻贼憎藻藻灶 贼澡藻 皂葬造藻鄄泽贼藻则蚤造藻 皂怎贼葬灶贼 遭糟皂泽 葬灶凿
憎蚤造凿鄄贼赠责藻 月则葬泽泽蚤糟葬 糟葬皂责藻泽贼则蚤泽 泽泽责援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽 则藻增藻葬造 早藻灶藻泽 则藻造葬贼藻凿 贼燥
责燥造造藻灶 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼咱允暂 援 孕造葬灶贼 月蚤燥造燥早赠袁 圆园园愿袁 员园渊猿冤院猿源圆 原 猿缘缘
咱 源 暂 摇 匀葬灶 再 再袁 在澡葬灶早 粤 匀袁 匀怎葬灶早 蕴袁 再怎 载 蕴袁 再葬灶早 运袁 云葬灶 杂 载袁 悦葬燥
允 杂援 月糟酝云圆园袁 葬 责怎贼葬贼蚤增藻 责燥造造藻灶鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 枣葬糟贼燥则 枣则燥皂
月则葬泽泽蚤糟葬 糟葬皂责藻泽贼则蚤泽 泽泽责援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽 咱 允暂 援 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠 砸藻责燥则贼泽袁
圆园员员袁 渊责怎遭造蚤泽澡藻凿 燥灶 造蚤灶藻冤
咱 缘 暂摇 曹家树袁 曹寿椿袁 易清明援 白菜及其相邻类群基因组 阅晕粤 的
砸粤孕阅分析咱允暂 援 园艺学报袁 员怨怨缘袁 圆圆渊员冤院源苑 原 缘圆
咱 远 暂摇 运怎遭燥 运袁 杂葬噪葬皂燥贼燥 粤袁 运燥遭葬赠葬泽澡蚤 粤袁 砸赠遭噪葬 在袁 运葬灶灶燥 再袁 晕葬噪葬早葬憎葬
匀袁 晕蚤泽澡蚤灶燥 栽袁 栽葬噪葬贼泽怎躁蚤 匀援 悦赠泽圆 辕 匀蚤泽圆 扎蚤灶糟鄄枣蚤灶早藻则 责则燥贼藻蚤灶 枣葬皂蚤造赠 燥枣
责藻贼怎灶蚤葬院 藻增燥造怎贼蚤燥灶 葬灶凿 早藻灶藻则葬造 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂 燥枣 贼葬则早藻贼鄄泽藻择怎藻灶糟藻
则藻糟燥早灶蚤贼蚤燥灶咱允暂 援 晕怎糟造藻蚤糟 粤糟蚤凿泽 砸藻泽藻葬则糟澡袁 员怨怨愿袁 圆远渊圆冤院远园愿 原 远员缘
咱 苑 暂摇 哉 晕援 郧藻灶燥皂藻鄄葬灶葬造赠泽蚤泽 蚤灶 月则葬泽泽蚤糟葬 憎蚤贼澡 泽责藻糟蚤葬造 则藻枣藻则藻灶糟藻 贼燥 贼澡藻
藻曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造 枣燥则皂葬贼蚤燥灶 燥枣 月援 灶葬责怎泽 葬灶凿 蚤贼泽 责藻糟怎造蚤葬则 皂燥凿藻 燥枣
枣藻则贼蚤造蚤扎葬贼蚤燥灶咱允暂 援 允葬责葬灶藻泽藻 允燥怎则灶葬造 燥枣 月燥贼葬灶赠袁 员怨猿缘袁 苑院猿愿怨 原 源缘圆
咱 愿 暂摇 田爱梅袁 曹家树援 十字花科植物 蕴栽孕 基因 月糟酝云员缘 同源序列克
隆与进化分析咱允暂 援 核农学报袁 圆园园愿袁 圆圆渊远冤院苑愿怨 原 苑怨猿
咱 怨 暂摇 宋江华袁 朱熠鹏袁 曹家树援 芸薹属植物非编码 砸晕粤 月糟酝云员员 基
因同源序列的克隆与进化分析咱允暂 援 农业生物技术学报袁 圆园园愿袁
员远渊员冤院 员苑怨 原 员愿园
咱员园暂摇 匀怎葬灶早 蕴袁 悦葬燥 允 杂袁 在澡葬灶早 粤 匀袁 再藻 再 匝援 悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 葬
责怎贼葬贼蚤增藻 责燥造造藻灶鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟 葬则葬遭蚤灶燥早葬造葬糟贼葬皂 责则燥贼藻蚤灶 早藻灶藻袁 月糟酝云愿袁 枣则燥皂
月则葬泽泽蚤糟葬 糟葬皂责藻泽贼则蚤泽 泽泽责援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽 咱 允暂 援 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠 砸藻责燥则贼泽袁
圆园园愿袁 猿缘院远猿员 原 远猿怨
渊责任编辑摇 王媛媛冤
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渊上接第 怨员缘 页冤
咱员园暂摇 赵丽萍袁 陈摇 亮袁 王新超袁 姚明哲援 茶树新梢不同叶片中 茁鄄葡
萄糖苷酶和 茁鄄樱草糖苷酶基因表达的实时定量 孕悦砸 分析咱 允暂 援
茶叶科学袁 圆园园远袁 圆远 渊员冤院 员员 原 员远
咱员员暂 摇 杂贼葬枣泽贼则燥皂 允 孕袁 砸蚤责造藻赠 月 阅袁 阅藻增蚤贼贼 酝 蕴袁 阅则葬噪藻 月援 阅燥则皂葬灶糟赠鄄
葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶 责藻葬 葬曾蚤造造葬则赠 遭怎凿泽 咱 允暂 援 孕造葬灶贼葬袁 员怨怨愿袁
圆园缘院 缘源苑 原 缘缘圆
咱员圆暂摇 砸藻凿凿赠 粤 杂 晕袁 孕燥燥增葬蚤葬澡 月 宰援 酝燥造藻糟怎造葬则 糟造燥灶蚤灶早 葬灶凿 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早 燥枣 葬
糟阅晕粤 枣燥则 葬灶 葬怎曾蚤灶鄄则藻责则藻泽泽藻凿 皂藻泽泽藻灶早藻则鄄砸晕粤院 糟燥则则藻造葬贼蚤燥灶 遭藻贼憎藻藻灶
枣则怎蚤贼 早则燥憎贼澡 葬灶凿 则藻责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 葬怎曾蚤灶 则藻早怎造葬贼藻凿 早藻灶藻 咱 允暂 援 孕造葬灶贼
酝燥造 月蚤燥造袁 员怨怨园袁 员源院员圆苑 原 员猿远
咱员猿暂摇 孕葬则噪 杂袁 匀葬灶 运 匀援 粤灶 葬怎曾蚤灶鄄则藻责则藻泽泽藻凿 早藻灶藻 渊砸责粤砸孕冤 枣则燥皂 遭造葬糟噪
造燥糟怎泽 渊砸燥遭蚤灶蚤葬 责泽藻怎凿燥葬糟葬糟蚤葬冤 蚤泽 责燥泽贼贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶葬造造赠 则藻早怎造葬贼藻凿 葬灶凿
灶藻早葬贼蚤增藻造赠 葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿 憎蚤贼澡 泽澡燥燥贼 藻造燥灶早葬贼蚤燥灶 咱允暂 援 栽则藻藻 孕澡赠泽蚤燥造袁 圆园园猿袁
圆猿院愿员缘 原 愿圆猿
咱员源暂摇 杂贼藻蚤灶藻则 悦袁 月葬怎藻则 允袁 粤皂则澡藻蚤灶 晕袁 月怎糟澡藻则 酝援 栽憎燥 灶燥增藻造 早藻灶藻泽 葬则藻
凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 凿怎则蚤灶早 藻葬则造赠 早藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 皂葬造藻
早葬皂藻贼燥责澡赠贼藻 燥枣 晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 贼葬遭葬糟怎皂 咱 允暂 援 月月粤鄄郧藻灶藻 杂贼则怎糟贼 耘曾责则袁
圆园园猿袁 员远圆缘院员圆猿 原 员猿猿
咱员缘暂 摇 运蚤皂 匀 月袁 蕴藻藻 匀袁 韵澡 悦 允袁 蕴藻藻 晕 匀袁 粤灶 悦 杂援 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣
耘怎晕韵阅鄄粤砸孕员 藻灶糟燥凿蚤灶早 葬怎曾蚤灶鄄则藻责则藻泽泽藻凿 责则燥贼藻蚤灶 澡燥皂燥造燥早 蚤泽
怎责则藻早怎造葬贼藻凿 遭赠 葬怎曾蚤灶 葬灶凿 造燥糟葬造蚤扎藻凿 贼燥 贼澡藻 枣蚤曾葬贼蚤燥灶 扎燥灶藻 蚤灶 则燥燥贼 灶燥凿怎造藻泽
燥枣 耘造葬藻葬早灶怎泽 怎皂遭藻造造葬贼藻 咱允暂 援 酝燥造 悦藻造造泽袁 圆园园苑袁 圆猿院 员员缘 原 员圆员
咱员远暂摇 郧燥增蚤灶凿 郧袁 栽澡葬皂皂藻郧燥憎凿葬 匀 灾袁 运葬造葬蚤葬则葬泽蚤 孕 允袁 陨赠藻则 阅 砸袁
酝怎贼澡葬责责葬 杂 运袁 晕藻泽藻 杂袁 酝葬噪葬则造葬 哉 运援 陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬灶凿 枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造
增葬造蚤凿葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 怎灶蚤择怎藻 泽藻贼 燥枣 凿则燥怎早澡贼 蚤灶凿怎糟藻凿 早藻灶藻泽 责则藻枣藻则藻灶贼蚤葬造造赠
藻曾责则藻泽泽藻凿 蚤灶 则藻泽责燥灶泽藻 贼燥 早则葬凿怎葬造 憎葬贼藻则 泽贼则藻泽泽 蚤灶 责藻葬灶怎贼 咱 允暂 援 酝燥造
郧藻灶藻贼 郧藻灶燥皂蚤糟泽袁 圆园园怨袁 圆愿员院缘怨员 原 远园缘
咱员苑暂摇 匀藻则灶佗灶凿藻扎 郧袁 砸葬皂侏则藻扎 酝袁 灾葬造凿佴泽鄄蕴佼责藻扎 韵袁 栽藻泽枣葬赠藻 酝袁 郧则葬澡葬皂 酝
粤袁 悦扎藻糟澡燥憎泽噪蚤 栽袁 杂糟澡造藻则藻贼澡 粤袁 宰葬灶凿则藻赠 酝袁 耘则遭葬灶 粤袁 悦澡藻怎灶早 云袁
宰怎 匀 悦袁 蕴葬则葬 酝袁 栽燥憎灶 悦 阅袁 运燥责噪葬 允袁 哉凿增葬则凿蚤 酝 运袁 灾葬灶糟藻 悦 孕援
孕澡燥泽责澡燥则怎泽 泽贼则藻泽泽 蚤灶 糟燥皂皂燥灶 遭藻葬灶院 则燥燥贼 贼则葬灶泽糟则蚤责贼 葬灶凿 皂藻贼葬遭燥造蚤糟
则藻泽责燥灶泽藻泽 咱允暂 援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造袁 圆园园苑袁 员源源院苑缘圆 原 苑远苑
咱员愿暂 摇 匀憎葬灶早 耘 宰袁 运蚤皂 运 粤袁 孕葬则噪 杂 悦袁 允藻燥灶早 酝 允袁 月赠怎灶 酝 韵袁 运憎燥灶 匀
月援 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 责则燥枣蚤造藻泽 燥枣 澡燥贼 责藻责责藻则 渊 悦葬责泽蚤糟怎皂 葬灶灶怎怎皂冤 早藻灶藻泽
怎灶凿藻则 糟燥造凿 泽贼则藻泽泽 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽 咱允暂 援 允 月蚤燥泽糟蚤袁 圆园园缘袁 猿园院 远缘苑 原 远远苑
咱员怨暂 摇 匀怎葬灶早 载袁 载怎藻 栽袁 阅葬蚤 杂袁 郧葬蚤 杂袁 在澡藻灶早 悦袁 在澡藻灶早 郧援 郧藻灶藻泽
葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿 憎蚤贼澡 贼澡藻 则藻造藻葬泽藻 燥枣 凿燥则皂葬灶贼 遭怎凿泽 蚤灶 贼则藻藻 责藻燥灶蚤藻泽 渊孕葬藻燥灶蚤葬
泽怎枣枣则怎贼蚤糟燥泽葬冤 咱允暂 援 粤糟贼葬 孕澡赠泽蚤燥造 孕造葬灶贼袁 圆园园愿袁 猿园院苑怨苑 原 愿园远
咱圆园暂摇 晕葬早葬则 孕 运袁 杂澡憎藻贼葬 杂援 悦澡葬灶早藻泽 蚤灶 藻灶凿燥早藻灶燥怎泽 葬怎曾蚤灶泽 凿怎则蚤灶早 憎蚤灶贼藻则
凿燥则皂葬灶糟赠 蚤灶 贼藻葬 渊 悦葬皂藻造造蚤葬 泽蚤灶藻灶泽蚤泽 蕴援 冤 韵援 运怎灶贼扎藻 咱 允 暂 援 粤糟贼葬
孕澡赠泽蚤燥造 孕造葬灶贼袁 圆园园远袁 圆愿渊圆冤院员远缘 原 员远怨
渊责任编辑摇 王媛媛冤
员圆怨