全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员源袁圆愿渊员员冤院圆园员缘 耀 圆园圆源允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员源鄄园员鄄园圆摇 接受日期院圆园员源鄄园远鄄园愿
基金项目院国家自然科学基金青年科学基金项目渊猿员猿园员缘苑源冤袁宁波市自然科学基金项目渊圆园员猿粤远员园员缘怨冤
作者简介院杨娜袁女袁主要从事食品科学方面的研究遥 耘鄄皂葬蚤造院赠葬灶早灶葬藻凿怎岳 员远猿援 糟燥皂
通讯作者院王鸿飞袁教授袁主要从事食品科学方面的研究遥 耘鄄皂葬蚤造院憎葬灶早澡燥灶早枣藻蚤岳 灶遭怎援 藻凿怎援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员源冤员员鄄圆园员缘鄄员园
超声波辅助提取裂褶菌多糖及分离纯化的研究
杨摇 娜摇 王鸿飞摇 宋佳敏摇 沈晓俊摇 邵兴锋摇 许摇 凤
渊宁波大学食品科学与工程系袁浙江 宁波摇 猿员缘圆员员冤
摘摇 要院本文研究了超声波辅助法分离纯化裂褶菌多糖的工艺条件遥 分别从超声时间尧超声功率尧液料
比尧提取时间和提取温度 缘 个因素考察了对裂褶菌多糖提取率的影响袁且在此条件下进行响应面优化遥
试验结果表明袁在超声时间 猿园皂蚤灶尧超声功率 圆园园宰尧液料比 源园颐 员和提取温度 源园益时裂褶菌多糖提取率
为 远怨郾 缘远豫 遥 经 阅耘粤耘纤维素 原缘圆 色谱柱和葡聚糖凝胶 郧鄄员园园 分离各得到 圆 种组分袁对其进行紫外 原
可见光光谱渊哉灾冤分析和红外光谱分析得出袁裂褶菌多糖 杂责郧不含蛋白质或核酸袁可能为含呋喃环的 琢
构型的多糖遥 研究为裂褶菌多糖的开发利用提供理论依据遥
关键词院裂褶菌曰裂褶菌多糖曰工艺优化曰分离纯化
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员源郾 员员援 圆园员缘
摇 摇 裂褶菌渊 杂糟澡蚤扎燥责澡赠造造怎皂 糟燥皂皂怎灶藻冤又名白参尧树花
等袁属担子菌纲渊月葬泽蚤凿蚤燥皂赠糟藻贼藻泽冤袁伞菌目渊粤早葬则蚤糟葬造藻泽冤袁
裂 褶 菌 科 渊杂糟澡蚤扎燥责澡赠造造葬糟藻葬藻冤袁 裂 褶 菌 属
渊杂糟澡蚤扎燥责澡赠造造怎皂冤袁是一种药食同源的大型真菌袁广泛分
布于我国热带尧亚热带地区咱员暂 袁具有滋补强身尧抗疲劳
等功效遥 裂褶菌多糖渊 泽糟澡蚤扎燥责澡赠造造蚤葬灶 责燥造赠泽葬糟澡葬则燥泽藻冤是
一种水溶性的 茁鄄阅鄄葡聚糖袁具有调节免疫功能尧抗肿
瘤尧抗辐射等功能袁是一种正在被广泛开发利用的真
菌咱圆暂 遥
本文通过超声波技术辅助提取裂褶菌粗多糖袁并
对其进行分离纯化袁为进一步探讨裂褶菌多糖的药理
活性提供依据遥
员摇 材料和方法
员郾 员摇 材料与试剂
原料院裂褶菌袁购自云南省昆明市中药材市场遥
试剂院阅耘粤耘 糟藻造造怎造燥泽藻鄄缘圆袁购自美国 宰澡葬贼皂葬灶 公
司曰杂藻责澡葬凿藻曾 郧鄄员园园袁购自美国 孕澡葬则皂葬糟蚤葬 公司曰溴化
钾袁光谱纯袁购自美国 杂蚤早皂葬鄄粤造凿则蚤糟澡 公司曰无水乙醇尧
氯化钠尧氢氧化钠袁均为分析纯袁购自国药集团化学试
剂有限公司遥
员郾 圆摇 仪器与设备
阅运鄄杂圆圆型电热恒温水浴锅渊上海精密实验设备有
限公司冤曰匀员远缘园型高速台式离心机渊长沙湘仪离心机设
备有限公司冤曰杂匀在鄄阅渊睾冤型循环真空泵渊巩义市英峪予
华仪器厂冤曰哉灾猿猿园园型紫外可见光光度计渊上海美谱达
仪器有限公司冤曰云阅鄄员阅鄄愿园 冷冻干燥机渊北京博医康实
验仪器有限公司冤曰匀阅鄄猿紫外检测器尧杂月杂鄄员园园自动部分
收集器尧匀蕴鄄圆杂 恒流泵渊上海沪西分析仪器厂有限公
司冤曰晕蚤糟燥造藻贼远苑园园红外光谱仪渊美国 晕蚤糟燥造藻贼公司冤遥
员郾 猿摇 试验方法
员郾 猿郾 员摇 裂褶菌多糖的提取 摇 裂褶菌寅粉碎过筛渊源园
目冤寅加水搅拌寅超声波寅水浸提寅过滤寅浓缩寅
杂藻增葬早藻法去蛋白寅醇沉寅冷冻干燥寅裂褶菌粗多糖遥
取一定量的裂褶菌粉末袁按照一定的液料比加水袁
通过超声波辅助法进行水提袁结束后离心袁取其上清
液袁在 缘园益条件下进行旋转蒸发袁浓缩至原体积的四
分之一左右遥 通过 泽藻增葬早藻法除蛋白袁醇沉 圆源澡左右袁冷
冻干燥袁得到裂褶菌粗多糖咱猿暂 遥
员郾 猿郾 圆摇 单因素试验 摇 按照液料比 猿园院员尧超声功率
圆园园宰尧提取温度 苑园益袁水浴 圆澡袁选择不同的超声时间
进行反应遥 反应结束后按照 员郾 猿郾 员 中的操作袁研究超
声时间对裂褶菌多糖提取的影响咱源暂 遥
缘员园圆
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
按照液料比 猿园 颐 员尧超声时间 员园皂蚤灶尧提取温度
苑园益尧水浴 圆澡袁选择不同的超声功率进行反应袁研究超
声功率对裂褶菌多糖提取的影响遥
将裂褶菌粉末与蒸馏水混合袁保持超声时间
员园皂蚤灶尧超声功率 圆园园宰尧提取温度 苑园益袁水浴 圆澡袁选择
不同的液料比进行反应袁研究液料比对裂褶菌多糖提
取的影响遥
按照液料比 猿园颐 员尧保持超声时间 员园皂蚤灶尧超声功率
圆园园宰尧提取温度 苑园益袁选择不同的提取时间进行反
应袁研究提取时间比对裂褶菌多糖提取的影响遥
按照液料比 猿园 颐 员尧超声时间 员园皂蚤灶尧超声功率
圆园园宰尧水浴 圆澡袁选择不同的提取温度进行反应袁研究
提取温度比对裂褶菌多糖提取的影响遥
员郾 猿郾 猿摇 裂褶菌多糖工艺条件优化摇 在单因素的基础
上袁利用响应面分析法进行提取工艺条件的优化遥 根
据 月燥曾鄄月藻澡灶噪藻灶的中心组合试验设计原理咱缘暂 袁综合单
因素试验所得结果袁选取超声波时间尧超声波功率尧液
料比和提取温度 源 个因素袁分别以 粤尧月尧悦 和 阅 为代
表袁每一个自变量的低尧中尧高试验水平分别以 原员尧园尧员
进行编码遥 以裂褶菌多糖提取率为响应值渊再冤袁在单
因素试验基础上袁采用四因素三水平的响应面分析方
法袁试验因素与水平设计见表 员遥
表 员摇 响应面分析因素与水平
栽葬遭造藻 员摇 灾葬则蚤葬遭造藻泽 葬灶凿 造藻增藻造泽 蚤灶 则藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 凿藻泽蚤早灶
因素
灾葬则蚤葬遭造藻
水平 蕴藻增藻造
原 员 园 员
粤摇 超声时间
哉造贼则葬泽燥灶蚤糟 贼蚤皂藻 辕 皂蚤灶
员园 圆园 猿园
月摇 超声功率
哉造贼则葬泽燥灶蚤糟 责燥憎藻则 辕 宰
员园园 圆园园 猿园园
悦摇 液料比
杂燥造蚤凿 鄄造蚤择怎蚤凿 则葬贼藻 辕 渊皂蕴窑早 原员 冤
圆园 猿园 源园
阅摇 提取温度
耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼蚤皂藻 辕 益
源园 缘园 远园
员郾 猿郾 源摇 提取率测定方法摇 褶菌多糖含量测定方法采
用硫酸 原蒽酮法咱远暂 袁以葡聚糖为标准袁测定裂褶菌原
料中和粗多糖中的总糖含量遥 分别取 员园园怎早窑皂蕴 原员的
葡聚糖溶液 园郾 员尧园郾 圆尧园郾 猿尧园郾 源尧园郾 缘 皂蕴袁用蒸馏水补至
员郾 园皂蕴袁各加入硫酸蒽酮溶液 源皂蕴袁置于冰水中冷却袁
待各管均加完后置水浴中加热 员园皂蚤灶袁取出袁放入自来
水中冷却 员园皂蚤灶袁以相应的试剂为空白袁在 远圆园灶皂波长
处测定其吸光度遥 以吸光度值为纵坐标袁葡聚糖的浓
度为横坐标袁绘制标准曲线渊图 员冤遥
裂褶菌原料和样品中多糖含量测定遥 精确称取
图 员摇 葡聚糖标准曲线
云蚤早援 员摇 杂贼葬灶凿葬则凿 糟怎则增藻 燥枣 凿藻曾贼则葬灶援
员皂早窑皂蕴 原员粗多糖溶液 员郾 园皂蕴袁按照以上的方法测定吸
光值袁根据公式即可得出裂褶菌中多糖的质量分数 宰
单位以克每百克计渊早窑员园园早 原员冤遥
宰 越 悦员 伊 灾员酝员 伊 员园
原源 伊 员园园豫 渊员冤
式中院悦员 为从标准曲线上查得测定液中浓度 渊 怎早窑
皂蕴 原员冤曰灾员 为样品定容体积渊皂蕴冤曰酝员 为粗多糖 辕原料
的质量渊早冤遥
提取率 越 宰员 伊 皂员宰圆 伊 皂圆 伊 员园园豫 渊圆冤
式中院宰员 为裂褶菌多糖含量渊豫 冤曰宰圆 为裂褶菌原料中
所含多糖的含量渊豫 冤曰皂员要要要提取裂褶菌粗多糖渊早冤曰
皂圆 为所用原料的质量渊早冤遥员郾 猿郾 缘摇 裂褶菌多糖 阅耘粤耘 糟藻造造怎造燥泽藻鄄缘圆 离子柱层析分
离纯化摇 取 圆园皂早窑皂蕴 原员的裂褶菌多糖水溶液袁沿柱壁
圆周缓慢加入离子交换柱渊柱高 猿园糟皂袁内径 圆郾 缘糟皂冤袁
同时打开柱下端出口使水缓慢流出遥 用园 耀 圆皂燥造窑蕴 原员
的 晕葬悦造水溶液洗脱袁恒流泵控制流速为员皂蕴窑皂蚤灶 原员袁
自动部分收集器收集洗脱液袁每管收集 缘皂蕴袁硫酸 原蒽
酮法追踪在 远圆园灶皂检测收集液中的多糖的含量袁绘制
洗脱曲线遥 选择最佳吸收峰分段收集样品袁合并收集
液减压浓缩袁 冻干后得到裂褶菌多糖的 阅耘粤耘
糟藻造造怎造燥泽藻鄄缘圆 分离组分咱苑暂 遥
员郾 猿郾 远摇 裂褶菌多糖葡聚糖凝胶渊杂藻责澡葬凿藻曾 郧鄄员园园冤凝
胶色谱分离纯化摇 经过 阅耘粤耘 糟藻造造怎造燥泽藻鄄缘圆 分离得到的
裂褶菌组分袁需要通过 杂藻责澡葬凿藻曾 郧鄄员园园 进行进一步的
分离纯化咱愿暂 遥 将经过 阅耘粤耘 糟藻造造怎造燥泽藻鄄缘圆 柱分离得到
的多糖组分分别配制 圆园皂早窑皂蕴 原员的水溶液 圆皂蕴袁沿柱
壁渊柱高 源园糟皂袁内径 员郾 缘糟皂冤圆周缓慢加入 杂藻责澡葬凿藻曾郧鄄
员园园 葡聚糖凝胶柱遥 用双蒸水洗脱袁恒流泵控制流速
为 员皂蕴窑皂蚤灶 原员袁自动部分收集器收集洗脱液袁每管收集
缘皂蕴袁硫酸 原蒽酮法追踪在 远圆园灶皂 处检测收集液中的
远员园圆
摇 员员 期 超声波辅助提取裂褶菌多糖及分离纯化的研究
多糖的含量袁绘制洗脱曲线遥 选择最佳吸收峰分段收
集样品袁合并收集液减压浓缩袁冻干咱怨暂 遥
员郾 猿郾 苑摇 裂褶菌多糖紫外 原可见光光谱渊哉灾冤分析摇 称
取 圆园皂早纯化后的裂褶菌多糖溶于 员园皂蕴蒸馏水袁配成
圆皂早窑皂蕴 原员多糖的溶液袁在 圆园园 耀 苑园园灶皂 波长范围进行
紫外 原可见光扫描袁检测在 圆远园灶皂和 圆愿园灶皂是否有核
酸和蛋白质的特征吸收峰遥 如果 圆远园灶皂 有吸收峰说
明样品中含有核酸袁如果 圆愿园灶皂 有吸收峰说明样品中
存在蛋白质咱员园暂 遥
员郾 猿郾 愿摇 裂褶菌多糖红外光谱分析摇 对分离纯化得到
的裂褶菌多糖组分的红外光谱分子结构分析采用 运月则
压片法遥 称取预先红外灯下干燥的光谱纯 运月则圆园园皂早袁
用压片机压成薄片用作空白实验调整基线袁然后称取
员 耀 圆皂早 干燥的裂褶菌多糖组分袁与 员园园 耀 圆园园皂早运月则
粉末于玛瑙研钵中轻轻研磨均匀袁经压片机压成薄片袁
傅立叶变换红外光谱仪在 源 园园园 耀 源园园糟皂 原员的红外光
谱进行测定咱员员暂 遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 单因素对裂褶菌多糖提取的影响
圆郾 员郾 员摇 超声波时间对裂褶菌多糖提取的影响摇 在液
料比 猿园颐 员尧超声波功率 圆园园宰袁提取温度 苑园益尧提取时
间 圆澡条件下袁研究不同的超声波时间对裂褶菌多糖提
取率的影响渊图 圆冤遥
图 圆摇 超声时间对裂褶菌多糖提取率的影响
云蚤早援 圆摇 栽澡藻 藻枣枣藻糟贼 燥枣 怎造贼则葬泽燥灶蚤糟 贼蚤皂藻 燥灶
泽糟澡蚤扎燥责澡赠造造蚤葬灶 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 则葬贼藻
由图 圆 可知袁在超声时间小于 圆园皂蚤灶时袁随超声时
间的增加袁裂褶菌多糖提取率为上升趋势曰在超声时间
大于 圆园皂蚤灶时袁裂褶菌多糖提取率逐渐下降袁这可能是
随着超声时间的延长多糖产生了降解遥 当超声时间为
圆园皂蚤灶时袁裂褶菌多糖提取率为 源愿郾 苑缘豫 遥
圆郾 员郾 圆摇 超声波功率对裂褶菌多糖提取的影响摇 在液
料比 猿园颐 员尧超声波时间 员园皂蚤灶尧提取温度 苑园益尧提取时
间 圆澡条件下袁研究不同的超声功率对裂褶菌多糖提取
率的影响袁结果见图 猿遥
图 猿摇 超声波功率对裂褶菌多糖提取率的影响
云蚤早援 猿摇 栽澡藻 藻枣枣藻糟贼 燥枣 怎造贼则葬泽燥灶蚤糟 责燥憎藻则 燥灶
泽糟澡蚤扎燥责澡赠造造蚤葬灶 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 则葬贼藻
由图 猿 可知袁在超声功率小于 圆园园宰 时袁随超声功
率的增加袁裂褶菌多糖提取率为上升趋势曰在超声功率
大于 圆园园宰时袁裂褶菌多糖提取率逐渐下降并趋于平
缓遥 当超声功率为 圆园园宰 时袁裂褶菌多糖提取率为
源猿郾 怨愿豫 遥
圆郾 员郾 猿摇 液料比对裂褶菌多糖提取的影响摇 在超声波
时间 员园皂蚤灶尧超声波功率 圆园园宰尧提取温度 苑园益尧提取时
间 圆澡条件下袁研究不同的液料比对裂褶菌多糖提取率
的影响袁结果见图 源遥
图 源摇 液料比对裂褶菌多糖提取率的影响
云蚤早援 源摇 栽澡藻 藻枣枣藻糟贼 燥枣 杂燥造蚤凿 鄄造蚤择怎蚤凿 燥灶
泽糟澡蚤扎燥责澡赠造造蚤葬灶 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 则葬贼藻
由图 源 可知袁液料比对裂褶菌多糖浸提有较大影
响遥 在液料比小于 猿园 颐 员时袁随料液比的增加袁裂褶菌
苑员园圆
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
多糖提取率增大曰在液料比大于 猿园颐 员以后袁裂褶菌多
糖提取率基本保持不变遥 一般情况下袁在浸提过程中袁
随着溶剂的增加袁多糖溶出的量也增大曰但当溶剂达到
一定量时袁多糖已基本溶出袁多糖提取率随溶剂的增加
不再增大遥 当液料比达到 猿园颐 员时袁裂褶菌多糖提取率
为 缘远郾 员怨豫 遥
圆郾 员郾 源摇 提取时间对裂褶菌多糖提取的影响摇 在超声
波时间 员园皂蚤灶尧超声波功率 圆园园宰尧液料比 猿园颐 员尧提取温
度 苑园益条件下袁研究不同的提取时间对裂褶菌多糖提
取率的影响袁结果见图 缘遥
图 缘摇 提取时间对裂褶菌多糖提取率的影响
云蚤早援 缘摇 栽澡藻 藻枣枣藻糟贼 燥枣 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼蚤皂藻 燥灶
泽糟澡蚤扎燥责澡赠造造蚤葬灶 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 则葬贼藻
由图 缘 可知袁提取时间对裂褶菌多糖浸提有较大
影响遥 在提取时间小于 员郾 缘澡 时袁随提取时间的延长袁
裂褶菌多糖提取率增大曰在提取提时间大于 员郾 缘澡 时袁
裂褶菌多糖提取率有所下降之后趋于平缓遥 这可能是
当提取时间达到一定时间后袁样品中的多糖已基本溶
出袁不再随时间延长而增加遥 当提取时间为 员郾 缘澡 时袁
裂褶菌多糖提取率为 缘源郾 圆源豫 遥
圆郾 员郾 缘摇 提取温度对裂褶菌多糖提取的影响摇 在超声
波时间 员园皂蚤灶尧超声波功率 圆园园宰尧液料比 猿园颐 员尧提取时
间 圆澡条件下袁研究不同的提取温度对裂褶菌多糖提取
率的影响见图 远遥
由图 远 可知袁提取温度对裂褶菌多糖提取有一定
的影响遥 在提取温度小于 缘园益时袁随提取温度的升
高袁裂褶菌多糖提取率增加曰在提取温度大于 缘园益时袁
随提取温度的升高袁裂褶菌多糖提取率降低遥 这是因
为提取温度可以软化组织尧破环细胞璧袁随提取温度的
升高袁使得多糖溶出速度加快尧提取率增加遥 当提取温
图 远摇 提取温度对裂褶菌多糖提取率的影响
云蚤早援 远摇 栽澡藻 藻枣枣藻糟贼 燥枣 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 燥灶
泽糟澡蚤扎燥责澡赠造造蚤葬灶 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 则葬贼藻
度达到 缘园益时袁提取的裂褶菌多糖提取率为 源圆郾 愿远豫 遥
圆郾 圆摇 裂褶菌多糖提取工艺条件的优化
在以上单因素的基础上袁利用响应面分析法裂褶
菌多糖提取工艺条件进行优化遥 对超声时间 粤尧超声
功率 月尧液料比 悦尧提取时间 阅作如下变换院粤 越 渊扎 原 缘 辕
圆园冤袁月 越 渊 贼 原 员 辕 圆园园冤袁悦 越 渊栽 原 猿园 辕 员园冤袁阅 越 渊匀 原 缘园 辕
员园冤曰渊扎尧贼尧栽尧匀 分别为试验的超声时间尧超声功率尧液
料比和提取时间冤遥 试验水平因素及结果见表 圆遥
摇 摇 运用 阅藻泽蚤早灶鄄藻曾责藻则贼 愿郾 园 对响应面试验结果进行分
析袁建立 粤 超声时间尧月超声功率尧悦液料比尧阅提取时
间四因子数学回归模型为院
再 越 源园郾 缘怨 垣 缘郾 缘猿粤 垣 愿郾 源源月 垣 猿郾 圆愿悦 原 苑郾 圆员阅 垣
园郾 怨怨粤月 垣 源郾 员怨粤悦 垣 园郾 远粤阅 原 缘郾 苑员月悦 原 源郾 远猿月阅 原
缘郾 圆圆悦阅 原 猿郾 远圆粤圆 垣 员郾 怨远月圆 垣 怨郾 园缘悦圆 垣 猿郾 员远阅圆遥 其回
归方差分析见表 猿遥
摇 摇 由表 猿 可知袁回归模型的失拟性渊孕 越 园郾 圆 缘愿缘冤差
异不显著袁表明选用的二次回归模型是适当的遥 模型
的校正决定系数 粤凿躁援 砸圆 越 园郾 怨 源源圆袁说明实验测量值和
预测值之间的相关性较高遥 响应面中等高图直观地反
映出各因素交互作用对响应值的影响袁圆形表示二因
素交互作用不显著袁椭圆表示二因素交互作用显
著咱员圆暂 遥 阅藻泽蚤早灶鄄耘曾责藻则贼 愿郾 园 软件处理得响应面分析结果
见图 苑 原 员圆遥
由图 苑 可知袁超声时间和超声功率对裂褶菌多糖
提取率交互作用较小遥 由图 愿 可知袁超声时间和液料
比对裂褶菌多糖提取率有一定的交互作用遥 当超声时
间一定时袁裂褶菌多糖提取率随液料比的增大呈现先
减小后增大的趋势曰当液料比一定时袁裂褶菌多糖提取
率随超声时间的变化缓慢增大遥 由图 怨 可知袁超声时
间和提取温度对裂褶菌多糖提取率的交互作用较小遥
摇 摇 摇 摇
愿员园圆
摇 员员 期 超声波辅助提取裂褶菌多糖及分离纯化的研究
表 圆摇 响应面优化实验设计及试验结果
栽葬遭造藻 圆摇 耘曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造 凿藻泽蚤早灶 葬灶凿 则藻泽怎造贼泽 燥枣 燥责贼蚤皂蚤扎蚤灶早 贼藻泽贼 憎蚤贼澡 则藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 皂藻贼澡燥凿
分组
郧则燥怎责
超时时间
哉造贼则葬泽燥灶蚤糟
贼蚤皂藻 辕 皂蚤灶
粤
超声功率
哉造贼则葬泽燥灶蚤糟
责燥憎藻则 辕 宰
月
液料比
杂燥造蚤凿鄄造蚤择怎蚤凿
悦
提取时间
耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶
贼蚤皂藻 辕 澡
阅
多糖提取率
杂糟澡蚤扎燥责澡赠造造蚤葬灶 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 则葬贼藻 辕 豫
预测值
孕则藻糟贼蚤糟贼蚤增藻 增葬造怎藻
实际值
粤糟贼怎葬造 增葬造怎藻
员 园 园 园 园 源园郾 缘怨 猿苑郾 怨缘
圆 原 员 园 员 园 猿怨郾 缘愿 源员郾 苑缘
猿 园 员 园 原 员 远缘郾 怨愿 远猿郾 源源
源 原 员 原 员 园 园 猿怨郾 苑远 源员郾 圆员
缘 原 员 园 园 原 员 圆缘郾 怨远 圆缘郾 猿缘
远 园 原 员 园 员 源圆郾 园圆 源猿郾 员怨
苑 园 园 原 员 原 员 缘员郾 缘员 缘员郾 员愿
愿 园 园 园 园 源园郾 缘怨 源员郾 园圆
怨 园 员 员 园 缘苑郾 远园 缘苑郾 猿源
员园 园 原 员 园 原 员 猿怨郾 愿缘 源员郾 猿苑
员员 园 员 原 员 园 远圆郾 源苑 远缘郾 怨怨
员圆 员 园 原 员 园 源源郾 园怨 源圆郾 愿员
员猿 园 原 员 原 员 园 猿源郾 员苑 猿缘郾 员怨
员源 园 园 员 员 源猿郾 远缘 源圆郾 猿猿
员缘 员 员 园 园 缘猿郾 怨园 缘圆郾 愿怨
员远 园 原 员 员 园 缘圆郾 员源 源怨郾 猿愿
员苑 原 员 园 原 员 园 源员郾 源员 源园郾 苑远
员愿 园 园 员 原 员 远愿郾 缘园 远怨郾 员猿
员怨 员 园 员 园 缘怨郾 园圆 远怨郾 缘远
圆园 园 园 园 园 源园郾 缘怨 源圆郾 园员
圆员 原 员 园 园 员 圆远郾 愿园 圆缘郾 愿愿
圆圆 园 园 园 园 源园郾 缘怨 猿怨郾 猿缘
圆猿 园 园 园 园 源园郾 缘怨 源圆郾 远圆
圆源 员 原 员 园 园 猿缘郾 园猿 猿圆郾 源猿
圆缘 原 员 员 园 园 源园郾 愿缘 源员郾 愿园
圆远 园 员 园 员 源圆郾 猿圆 源员郾 远怨
圆苑 员 园 园 员 猿怨郾 园远 源园郾 苑远
圆愿 园 园 原 员 员 源苑郾 缘猿 源缘郾 圆缘
圆怨 员 园 园 原 员 缘圆郾 圆苑 缘猿郾 怨源
由图 员园 可知袁超声时间和液料比对裂褶菌多糖提取率
有一定的交互作用遥 当超声功率时袁裂褶菌多糖提取
率随液料比的增大呈现先增大后减小的趋势曰当液料
比一定时袁裂褶菌多糖提取率随超声时间的变化逐渐
增大遥 由图 员员 可知袁超声功率和提取温度对裂褶菌多
糖提取率的交互作用较小遥 由图 员圆 可知袁液料比和提
取温度对裂褶菌多糖提取率有一定的交互作用遥 当液
料比一定时袁裂褶菌多糖提取率随液料比的增大呈缓
慢增大的趋势曰当提取温度一定时袁裂褶菌多糖提取率
随液料比的增大呈先减小后增大的趋势遥
通过回归模型的分析袁可确定裂褶菌多糖适宜的
工艺参数为超声时间 圆苑郾 源苑皂蚤灶尧超声功率 员怨愿郾 愿缘宰尧
液料比 猿怨郾 源缘颐 员尧提取温度 源园郾 源远益袁在此条件下模型
预测裂褶菌多糖提取率为 苑园郾 苑苑豫 曰为了方便实际操
作袁将工艺条件修正为超声时间 猿园皂蚤灶尧超声功率
圆园园宰尧液料比 源园颐 员尧提取温度 源园益袁通过进行 猿 个平
怨员园圆
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
摇 摇 摇 摇 表 猿摇 回归方差分析
栽葬遭造藻 猿摇 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 增葬则蚤葬灶糟藻 憎蚤贼澡 则藻早则藻泽泽蚤燥灶 皂燥凿藻造
差异源
杂燥怎则糟藻
平方和
杂杂
自由度
凿枣
均方
酝杂
云值
云 增葬造怎藻 孕则燥遭 跃 云
显著性水平
杂蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 造藻增藻造
模型 猿 员猿苑郾 园园 员 圆圆源郾 园苑 猿源郾 愿源 约 园郾 园园园员 鄢鄢
粤 猿远远郾 怨苑 员 猿远远郾 怨苑 缘苑郾 园远 约 园郾 园园园员 鄢鄢
月 愿源缘郾 愿园 员 愿源缘郾 愿园 员猿圆郾 怨圆 约 园郾 园园园员 鄢鄢
悦 员圆愿郾 苑苑 员 员圆愿郾 苑苑 圆园郾 园圆 园郾 园园园缘 鄢鄢
阅 远圆猿郾 猿愿 员 远圆猿郾 猿愿 怨远郾 怨源 约 园郾 园园园员 鄢鄢
粤月 猿郾 怨远 员 猿郾 怨远 园郾 远圆 园郾 源源缘苑
粤悦 苑园郾 圆圆 员 苑园郾 圆圆 员园郾 怨圆 园郾 园园缘圆 鄢
粤阅 员郾 源源 员 员郾 源源 园郾 圆圆 园郾 远源猿源
月悦 员猿园郾 源圆 员 员猿园郾 源圆 圆园郾 圆愿 园郾 园园园缘 鄢鄢
月阅 愿缘郾 缘远 员 愿缘郾 缘远 员猿郾 猿员 园郾 园园圆远 鄢
悦阅 员园愿郾 愿怨 员 员园愿郾 愿怨 员远郾 怨猿 园郾 园园员员 鄢
粤圆 愿源郾 苑怨 员 愿源郾 苑怨 员猿郾 员愿 园郾 园园圆苑 鄢
月圆 圆源郾 怨员 员 圆源郾 怨员 猿郾 愿苑 园郾 园远怨圆
悦圆 缘猿员郾 园远 员 缘猿员郾 园远 愿圆郾 缘愿 约 园郾 园园园员 鄢鄢
阅圆 远源郾 苑园 员 远源郾 苑园 员园郾 园远 园郾 园园远愿
残差 怨园郾 园猿 员源 远郾 源猿
失拟 苑缘郾 圆园 员园 苑郾 缘圆 圆郾 园猿 园郾 圆缘愿缘
误差 员源郾 愿猿 源 猿郾 苑员
总和 猿 圆圆苑郾 园源 圆愿
砸圆 越 园郾 怨 苑圆员摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 粤凿躁援 砸圆 越 园郾 怨 源源圆
摇 摇 注院 鄢院 差异显著袁孕 约 园郾 园缘曰鄢鄢院差异极显著袁孕 约 园郾 园员遥
晕燥贼藻院鄢院泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻袁 孕 约 园郾 园缘曰鄢鄢院藻曾贼则藻皂藻造赠 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻袁孕 约 园郾 园员援
图 苑摇 超声时间和超声功率响应曲面图
云蚤早援 苑摇 砸藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 责造燥贼 燥枣
怎蚤贼则葬泽燥灶蚤糟 贼蚤皂藻 葬灶凿 怎蚤贼则葬泽燥灶蚤糟 责燥憎藻则
图 愿摇 超声时间和液料比响应曲面图
云蚤早援 愿摇 砸藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 责造燥贼 燥枣
怎蚤贼则葬泽燥灶蚤糟 贼蚤皂藻 葬灶凿 泽燥造蚤凿鄄造蚤择怎蚤凿
园圆园圆
摇 员员 期 超声波辅助提取裂褶菌多糖及分离纯化的研究
图 怨摇 超声时间和提取温度响应曲面图
云蚤早援 怨摇 砸藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 责造燥贼 燥枣 怎蚤贼则葬泽燥灶蚤糟
贼蚤皂藻 葬灶凿 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻
图 员园摇 超声功率和液料比响应曲面图
云蚤早援 员园摇 砸藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 责造燥贼 燥枣
怎蚤贼则葬泽燥灶蚤糟 责燥憎藻则 葬灶凿 泽燥造蚤凿 鄄造蚤择怎蚤凿
行试验验证袁测得裂褶菌多糖提取率为 远怨郾 缘远豫 袁与理
论预测值的误差为 员郾 圆员豫 袁实际值与理论值基本相
符袁说明采用响应曲面法优化得到的多糖提取工艺条
件参数可靠袁具有一定参考价值遥
圆郾 猿摇 裂褶菌多糖 阅耘粤耘纤维素鄄缘圆 色谱柱分离纯化
裂褶菌多糖经 阅耘粤耘 纤维素鄄缘圆 色谱柱分离袁以
晕葬悦造水溶液为洗脱液袁得到 圆 种组分袁试管 员园 原 圆缘 为
第一组分 杂鄄员袁试管 猿苑 耀 源缘 为第二组分 杂鄄圆渊图 员猿冤遥
圆郾 源摇 裂褶菌多糖葡聚糖凝胶 郧鄄员园园 分离纯化
将通过 阅耘粤耘纤维素鄄缘圆 色谱柱分离得到的组分
利用 杂藻责澡葬凿藻曾 郧鄄员园园 进一步分离纯化袁其中 杂鄄圆 组分
中多糖提取率较少袁故没有进行下一步处理遥 由图 员源
可知袁组分 杂鄄员 经 杂藻责澡葬凿藻曾 郧鄄员园园 分离纯化后又得到
图 员员摇 超声功率和提取温度响应曲面图
云蚤早援 员员摇 砸藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 责造燥贼 燥枣 怎蚤贼则葬泽燥灶蚤糟
责燥憎藻则 葬灶凿 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻
图 员圆摇 液料比和提取温度响应曲面图
云蚤早援 员圆摇 砸藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 责造燥贼 燥枣
泽燥造蚤凿 鄄造蚤择怎蚤凿 葬灶凿 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻
两种组分袁由于第二组组分提取率较少袁故只对第一组
组组分的收集液进行冷冻干燥袁得到裂褶菌多糖样品
杂责郧遥
圆郾 缘摇 裂褶菌多糖紫外 原可见光光谱渊哉灾冤分析
将经过 杂藻责澡葬凿藻曾 郧鄄员园园 纯化分级后的裂褶菌多糖
收集液在波长 员怨园 耀 苑园园灶皂 范围扫描结果如图 员缘 显
示袁在 圆远园灶皂和 圆愿园灶皂处均无明显吸收峰袁说明 阅耘粤耘
离子交换色谱和 杂藻责澡葬凿藻曾 郧鄄员园园 葡聚糖凝胶色谱分离
后的多糖不含有核酸和蛋白质遥
圆郾 远摇 裂褶菌多糖红外光谱分析
将经过 杂藻责澡葬凿藻曾 郧鄄员园园 纯化分级后的裂褶菌多糖
收集液在 源 园园园 耀 源园园糟皂 原员的红外光谱进行测定如图
员远显示袁在 猿 源园园糟皂 原员左右有吸收峰袁这是多糖分子内
或分子间 韵鄄匀的特征吸峰咱员猿暂 曰在 员 远圆苑糟皂 原员附近的吸
收峰主要是酰胺玉带吸收袁归属为 悦 越 韵 的伸缩振
员圆园圆
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
图 员猿摇 裂褶菌多糖经 阅耘粤耘纤维素鄄缘圆 色谱柱的梯度洗脱曲线
云蚤早援 员猿摇 杂贼藻责憎蚤泽藻 藻造怎贼蚤燥灶 糟怎则增藻 燥枣 糟则怎凿藻 泽糟澡蚤扎燥责澡赠造造蚤葬灶 燥灶 糟藻造造怎造燥泽藻鄄缘圆 糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠 糟燥造怎皂灶
图 员源摇 裂褶菌多糖初步分离组分的葡聚糖
凝胶 郧鄄员园园 色谱柱洗脱曲线
云蚤早援 员源摇 耘造怎贼蚤燥灶 糟怎则增藻 燥枣 泽糟澡蚤扎燥责澡赠造造蚤葬灶 燥灶
杂藻责澡葬凿藻曾 郧鄄员园园 糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠 糟燥造怎皂灶
动咱员源暂 曰员 园园园 糟皂 原员附近出现 圆 个峰袁说明裂褶菌多糖可
能含有呋喃环曰愿猿远 糟皂 原员处的吸收峰说明裂褶菌多糖
为 琢构型的多糖咱员缘暂 遥
猿摇 讨论
裂褶菌多糖作为一种药食同源的大型真菌袁已有
国内外学者在工艺尧结构等方面进行研究遥 真菌多糖
的提取工艺有多种方式袁有热水浸提法尧酶解法尧超声
波辅助提取法尧微波辅助提取法和稀碱尧稀盐尧稀酸提
取法等遥 陈聪等咱员远暂用热水尧超声及微波三种方法提取
图 员缘摇 裂褶菌多糖紫外光谱图
云蚤早援 员缘摇 哉灾 泽责藻糟贼则葬 燥枣 泽糟澡蚤扎燥责澡赠造造蚤葬灶
裂褶菌固体发酵基质中的裂褶菌多糖袁尤其以微波辅
助提取的效果最佳袁多糖得率可达到 员圆郾 猿圆豫 袁较热水
浸提法和超声波辅助提取法增加了 苑园郾 圆豫和 源怨郾 远豫 遥
蒲彪等咱员苑暂采用超声波辅助法浸提块菌多糖袁多糖含量
为 苑猿郾 愿怨豫 袁提取率为 员愿郾 员缘豫 袁与传统的水提法相比袁
超声波辅助浸提法时间短袁效率高遥 分离纯化是为除
去多糖中的杂质袁主要有蛋白质尧小分子物质和提取过
程中所形成的色素等遥
超声波是利用超声波物理场的作用袁当超声波的
频率和功率到达一定水平时袁就会激发悬浊液的细胞
剧烈振动袁从而使细胞壁破裂袁有利于多糖的释放遥 本
文通过超声波辅助提取裂褶菌多糖袁从优化结果看袁两
圆圆园圆
摇 员员 期 超声波辅助提取裂褶菌多糖及分离纯化的研究
图 员远 裂褶菌多糖红外光谱图
云蚤早援 员远摇 云栽鄄陨砸 泽责藻糟贼则葬 燥枣 泽糟澡蚤扎燥责澡赠造造蚤葬灶
两之间相互作用并不是都显著袁可能是因为超声功率
对多糖的提取影响较小袁这与单因素结果保持一致遥
通过 阅耘粤耘纤维素鄄缘圆 色谱柱和葡聚糖凝胶 郧鄄员园园 分
离得到的多糖与魏红福等咱员愿暂研究中的姬松茸多糖结
果保持一致遥
源摇 结论
通过超声波辅助提取裂褶菌多糖袁超声时间
圆苑郾 源苑皂蚤灶尧超声功率 员怨愿郾 愿缘宰尧液料比 猿怨郾 源缘 颐 员尧提取
温度 源园郾 源远益袁在此条件下模型预测裂褶菌多糖提取
率为 苑园郾 苑苑豫 遥 为了方便实际操作袁将工艺条件修正
为超声时间 猿园皂蚤灶尧超声功率 圆园园宰尧液料比 源园颐 员尧提取
温度 源园益袁通过进行 猿 个平行试验验证袁测得裂褶菌
多糖提取率为 远怨郾 缘远豫 袁与理论预测值的误差为
员郾 圆员豫 遥
裂褶菌多糖经 阅耘粤耘 纤维素鄄缘圆 色谱柱分离得到
圆 种组分 杂鄄员 和 杂鄄圆袁对提取率较多的第一种组分 杂鄄员
进一步经葡聚糖凝胶 郧鄄员园园 分离得到 圆 种组分袁对提
取率较多的第一种组分命名为 杂责郧遥 对 杂责郧 通过紫
外鄄可见光光谱渊哉灾冤分析和红外光谱分析得出袁裂褶
菌多糖 杂责郧不含蛋白质或核酸袁可能为含呋喃环的 琢
构型的多糖遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 赵琪袁袁理春袁李荣春援 裂褶菌研究进展咱 允暂 援食用菌学报袁圆园园源袁
员员渊员冤院缘怨 原 远猿
咱 圆 暂摇 王振河袁霍云凤援 裂褶菌及裂褶菌多糖研究进展咱允暂 援 微生物学
杂志袁圆园园远袁圆远渊员冤院苑猿 原 苑远
咱 猿 暂摇 邵平袁陈蒙袁裴亚萍袁孙培龙援 径向流色谱分离纯化海藻多糖及
其抗氧化活性比较分析咱 允暂 援 核农学报袁 圆园员猿袁 圆苑渊缘冤院 远猿缘 原
远源园
咱 源 暂摇 刘大纹袁李铁柱袁孙永海援 黑木耳多糖提取工艺的优化咱 允暂 援 农
业机械学报袁圆园园苑袁猿愿渊缘冤院员园园 原 员园猿
咱 缘 暂摇 丁宏伟援 超声波结合微波辅助提取米糠多糖的研究咱 允暂 援 核农
学报袁圆园员猿袁圆苑渊猿冤院猿圆怨 原 猿猿猿
咱 远 暂摇 张惟杰援 复合多糖生化研究技术咱酝暂援 上海院上海科学技术出版
社袁 员怨愿苑院苑
咱 苑 暂摇 方一泓袁余萍袁李薇袁户勋援 茶树菇子实体多糖的分离纯化和免
疫活性研究咱允暂 援 食用菌学报袁圆园园远袁员猿渊源冤院远猿 原 远愿
咱 愿 暂摇 孙延芳袁梁宗锁袁单长卷援 茶野生酸枣果硒多糖纯化与光谱分析
咱允暂 援 农业机械学报袁圆园员员袁源圆渊远冤院员源愿 原 员缘员
咱 怨 暂摇 周林袁郭祀远袁郑必胜援 高分子质量裂褶菌多糖的纯化及表征
咱允暂 援 食品与发酵工业袁圆园园愿袁猿源渊员圆冤院源苑 原 缘园
咱员园暂摇 姚毓婧袁杨仁智袁张劲松袁潘迎捷援 鸡腿菇子实体多糖分离纯化
工艺及结构研究咱允暂 援 微生物学通报袁 圆园园苑袁猿源渊远冤院员园苑员 原 员园苑远
咱员员暂摇 时有明袁刘刚袁刘剑虹袁宋鼎珊援 不同产地黑木耳的傅里叶变换
红外光谱鉴别咱允暂 援 光学学报袁圆园园苑袁圆苑渊员冤院员圆怨 原 员猿圆
咱员圆暂摇 刘航袁国旭丹袁马雨洁援苦荞淀粉制备工艺及其性质研究咱 允暂 援中
国食品学报袁圆园员猿袁员猿 渊源冤院源猿 原 源怨
咱员猿暂摇 在澡葬燥 蕴 再袁 阅燥灶早 再 匀袁 悦澡藻灶 郧 栽袁 匀怎 匝 匀援 耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶袁
责怎则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶袁 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 葬灶凿 葬灶贼蚤贼怎皂燥则 葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 责燥造赠泽葬糟糟澡葬则燥泽藻
枣则燥皂 早葬灶燥凿藻则皂葬 造怎糟蚤凿怎皂咱 允暂 援 悦葬则遭燥澡赠凿则葬贼藻 孕燥造赠皂藻则袁圆园员园袁愿园渊猿冤院
苑愿猿 原 苑愿怨
咱员源暂摇 粤造藻曾葬灶凿藻则 粤 运袁 酝葬则蚤灶藻造葬 悦袁 允燥泽藻 砸袁 晕葬贼葬造蚤赠葬 酝 孕袁 灾造葬凿蚤皂蚤则 灾 陨援
悦燥皂责葬则葬贼蚤增藻 泽责藻糟贼则燥泽糟燥责蚤糟 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责藻糟贼蚤灶 葬灶凿
猿圆园圆
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员源袁圆愿渊员员冤院圆园员缘 耀 圆园圆源
贼澡藻蚤则 泽燥怎则糟藻泽 咱允暂 援 云燥燥凿 匀赠凿则燥糟燥造造燥蚤凿泽袁员怨怨愿袁 员圆渊猿冤院圆远猿 原 圆苑员
咱员缘暂摇 张安强袁张劲松袁潘迎捷援 食药用菌多糖的提取尧分离纯化与结
构分析咱允暂 援 食用菌学报袁圆园园缘袁员圆 渊圆冤院远圆 原 远愿
咱员远暂摇 陈聪袁钟奎袁林伟静袁周素梅援 固体发酵裂褶菌多糖提取方法比
较咱允暂 援 核农学报袁圆园员员袁圆缘渊远冤院员圆员员 原 员圆员缘
咱员苑暂摇 蒲彪袁岳金玫袁陈安均袁刘兴艳援 响应面法优化块菌多糖的超声
波辅助提取工艺咱允暂 援 核农学报袁圆园员猿袁圆苑渊苑冤院怨怨远 原 员园园圆
咱员愿暂摇 魏红福袁孙培龙袁杨开袁张坚袁徐双阳援 姬松茸子实体多糖分离纯
化研究咱允暂 援 中国食用菌袁圆园园缘袁圆源渊缘冤院源缘 原 源愿
哉蚤贼则葬泽燥灶蚤糟 粤泽泽蚤泽贼藻凿 耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶 葬灶凿 孕怎则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬灶凿
阅藻贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 燥枣 杂糟澡蚤扎燥责澡赠造造蚤葬灶 孕燥造赠泽葬糟糟澡葬则燥泽藻
再粤晕郧 晕葬摇 宰粤晕郧 匀燥灶早鄄枣藻蚤摇 杂韵晕郧 允蚤葬鄄皂蚤灶摇 杂匀耘晕 载蚤葬燥鄄躁怎灶摇 杂匀粤韵 载蚤灶早鄄枣藻灶早摇 载哉 云藻灶早
渊阅藻责葬则贼皂藻灶贼 燥枣 云燥燥凿 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 耘灶早蚤灶藻藻则蚤灶早袁 晕蚤灶早遭燥 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 晕蚤灶早遭燥袁 在澡藻躁蚤葬灶早摇 猿员缘圆员员冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 栽澡蚤泽 责葬责藻则 蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻凿 贼澡藻 蚤泽燥造葬贼蚤燥灶 葬灶凿 责怎则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 贼藻糟澡灶燥造燥早赠 燥枣 泽糟澡蚤扎燥责澡赠造造蚤葬灶 责燥造赠泽葬糟糟澡葬则燥泽藻 枣则燥皂
杂糟澡蚤扎燥责澡赠造造怎皂 糟燥皂皂怎灶藻 遭赠 怎造贼则葬泽燥灶蚤糟 葬怎曾蚤造蚤葬则赠 皂藻贼澡燥凿援 杂糟澡蚤扎燥责澡赠造造蚤葬灶 责燥造赠泽葬糟糟澡葬则燥泽藻 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 则葬贼藻 憎葬泽 泽贼怎凿蚤藻凿 枣则燥皂
枣蚤增藻 葬泽责藻糟贼泽院 怎蚤贼则葬泽燥灶蚤糟 责燥憎藻则袁 泽燥造蚤凿鄄造蚤择怎蚤凿 则葬贼蚤燥袁 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 葬灶凿 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼蚤皂藻袁 月葬泽藻凿 燥灶 泽蚤灶早造藻 枣葬糟贼燥则
藻曾责藻则蚤皂藻灶贼泽袁 则藻泽责燥灶泽藻 泽怎则枣葬糟藻 皂藻贼澡燥凿燥造燥早赠 憎葬泽 怎泽藻凿 贼燥 燥责贼蚤皂蚤扎藻 贼澡藻 责则燥糟藻泽泽 责葬则葬皂藻贼藻则泽援 砸藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻
燥责贼蚤皂怎皂 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶 枣燥则 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 憎葬泽院 怎蚤贼则葬泽燥灶蚤糟 贼蚤皂藻 憎葬泽 猿园皂蚤灶袁 怎蚤贼则葬泽燥灶蚤糟 责燥憎藻则 憎葬泽 圆园园宰袁 泽燥造蚤凿鄄造蚤择怎蚤凿 则葬贼蚤燥 憎葬泽 源园院
员 葬灶凿 贼澡藻 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 憎葬泽 源园益袁 葬灶凿 泽糟澡蚤扎燥责澡赠造造蚤葬灶 责燥造赠泽葬糟糟澡葬则燥泽藻 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 则葬贼藻 憎葬泽 远怨郾 缘远豫 曰 栽憎燥
糟燥皂责燥灶藻灶贼泽 憎藻则藻 泽藻责葬则葬贼藻凿 遭赠 阅耘粤耘鄄糟藻造造怎造燥泽藻 糟燥造怎皂灶 糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡 葬灶凿 杂藻责澡葬凿藻曾 郧鄄员园园 早藻造 枣蚤造贼则葬贼蚤燥灶援 粤灶葬造赠扎藻凿 遭赠
哉灾 泽责藻糟贼则葬 葬灶凿 云栽鄄陨砸 泽责藻糟贼则葬袁 杂糟澡蚤扎燥责澡赠造造蚤葬灶 责燥造赠泽葬糟糟澡葬则燥泽藻 澡葬凿 灶燥 责则燥贼藻蚤灶泽 燥则 灶怎糟造藻蚤糟 葬糟蚤凿泽袁 责则燥增蚤灶早 贼澡葬贼 蚤贼 皂葬赠 遭藻 琢
责燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻 糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 枣怎则葬灶 则蚤灶早 糟燥灶枣蚤早怎则葬贼蚤燥灶援
运藻赠 憎燥则凿泽院杂糟澡蚤扎燥责澡赠造造怎皂 糟燥皂皂怎灶藻曰杂糟澡蚤扎燥责澡赠造造蚤葬灶 责燥造赠泽葬糟糟澡葬则燥泽藻曰耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶 贼藻糟澡灶燥造燥早赠曰杂藻责葬则葬贼蚤燥灶 葬灶凿 责怎则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
源圆园圆