全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员缘袁圆怨渊怨冤院员远苑苑 耀 员远愿远允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员源鄄员园鄄圆源摇 接受日期院圆园员缘鄄园猿鄄员远
基金项目院十二五国家科技支撑 渊圆园员圆月粤阅园圆月园园袁 圆园员员月粤阅猿缘月园苑袁圆园员圆月粤阅缘园郧园员袁圆园员源月粤阅园员月园愿冤袁北京农林科学院科技创新建设专项
渊噪躁糟曾圆园员源园员员员冤袁蔬菜种质资源评价与创新渊噪躁糟曾圆园员源园员员员冤
作者简介院张洪伟袁男袁主要从事洋葱与胡萝卜遗传育种研究遥 耘鄄皂葬蚤造院扎澡憎憎葬憎扎躁糟曾岳 员远猿援 糟燥皂
通讯作者院梁毅袁男袁副研究员袁主要从事洋葱与胡萝卜遗传育种研究遥 耘鄄皂葬蚤造院造蚤葬灶早赠蚤岳 灶藻则糟增援 燥则早
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员缘冤园怨鄄员远苑苑鄄员园
洋葱 哉云郧栽基因的克隆和表达分析
张洪伟员 摇 梁摇 毅员 摇 刘小义圆 摇 谭武平员
渊员 北京市农林科学院蔬菜研究中心 辕农业部华北地区园艺作物生物学与种质创制重点
实验室 辕北京京研益农科技发展中心袁北京摇 员园园园怨苑曰圆 中国质量认证中心袁北京摇 员园园园苑园冤
摘摇 要院为了研究洋葱 哉云郧栽基因的生物学功能及其与花青素合成之间的关系袁通过简并 孕悦砸 技术和
砸粤悦耘技术克隆了 圆 条洋葱 哉云郧栽 基因全长 糟阅晕粤 序列 粤糟哉云郧栽员 和 粤糟哉云郧栽圆遥 序列分析表明袁这 圆 个
基因编码 源缘园 和 源苑缘 个氨基酸残基组成的多肽链袁包含糖基转移酶的保守序列 孕杂孕郧 框袁且分别与美洲
葡萄和烟草 哉云郧栽 蛋白相似性较高曰系统进化分析表明袁它们分别与海枣及二穗短柄草的亲缘关系较
近袁但是二者的亲缘关系却较远曰表达分析表明袁这 圆 个基因均在红皮洋葱鳞茎中大量表达袁在黄皮和白
皮洋葱中几乎不表达曰在鳞茎膨大初期表达量最大袁并在之后表达量缓慢降低袁不同的是 粤糟哉云郧栽圆 在鳞
茎膨大后期缓慢上升曰花青素含量测定发现红皮洋葱中含量最高袁黄皮尧白皮洋葱含量很低袁而鳞茎膨大
初期大量积累尧之后缓慢积累尧最后稍有下降遥 本研究初步证明了这 圆 个 哉云郧栽基因与洋葱花青素合成
有关系袁为进一步探究洋葱花青素的生物合成途径提供了理论依据遥
关键词院洋葱曰花青素曰哉云郧栽曰基因表达
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员缘郾 园怨援 员远苑苑
摇 摇 葱科葱属的二年生草本植物洋葱渊粤造造蚤怎皂 糟藻责葬冤是
主要的蔬菜种类之一袁也是我国重要的栽培和出口创
汇商品遥 植物的颜色由类黄酮素渊云造葬增燥灶燥蚤凿泽冤尧类胡萝
卜素渊悦葬则燥贼藻灶燥蚤凿泽冤和甜菜碱素渊月藻贼葬造葬蚤灶泽冤等色素的不
同分布而决定袁花青素作为一种类黄酮色素袁决定了植
物红尧蓝尧紫等多种颜色咱员暂 遥 花青素的存在不仅使植
物呈现多种多样的颜色袁吸引昆虫传粉袁参与自身免受
紫外线尧昆虫咬食等的抗病抗逆过程袁还有着延缓衰
老尧增强机体免疫力尧抗肿瘤尧抗高血压等多种保健功
能咱圆 原 源暂 遥
花青素的生物合成袁需要一系列酶类渊结构基因
编码冤以及辅助因子的存在袁以 蕴 原苯丙氨酸为直接前
体袁经历苯丙烷类代谢途径尧类黄酮途径和各种花青素
的合成等 猿 个阶段袁最后形成稳定的花青苷袁并转运到
植物液泡中咱缘暂 遥 其中 哉云郧栽渊哉阅孕鄄早造怎糟燥泽藻院 枣造葬增燥灶燥蚤凿 猿
原 韵鄄早造怎糟燥泽赠造贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻袁哉阅孕 原葡萄糖院类黄酮 猿 原 韵 原
葡萄糖基转移酶冤是该途径中最后 员 个由结构基因编
码的酶袁催化不稳定花色素苷的糖基化反应袁生成稳定
的花青素袁是植物花青素生物合成的关键酶和限速
酶咱远暂 遥
洋葱鳞茎表皮颜色多种多样袁可分为白尧黄尧红等
多种不同的色系袁其中花青素累积决定了洋葱的红色
着色遥 哉云郧栽 基因的克隆和表达袁以及其与花青素合
成的关系袁已在许多植物中有所研究遥 研究发现袁
哉云郧栽基因在红色苹果果皮中大量表达袁而在非红色
果皮表达极少袁在根尧芽尧种子等部位不表达袁其表达量
与果皮着色程度成正相关袁但是他们的编码区和启动
子序列并无区别袁说明这种基因在不同颜色品系和部
位的表达差异来源于调控因子咱苑 原 怨暂 曰月燥泽泽等咱员园暂在对葡
萄花青素合成基因的研究中发现袁红皮葡萄 哉云郧栽 基
因产物仅于果皮中发现袁而白皮葡萄中所有组织均未
发现袁因而缺乏花青素的累积曰晕葬噪葬贼泽怎噪葬 等咱员员暂发现袁
只能在龙胆的花瓣中检测到 哉云郧栽 的表达袁而且白色
花瓣中该基因的表达量也很低遥 本研究以红皮洋葱为
苑苑远员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
材料袁利用简并 孕悦砸 技术和 砸粤悦耘 技术克隆获得了 圆
条 哉云郧栽基因全长 糟阅晕粤 序列袁对其进行了一系列的
生物信息学分析袁并利用 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸技术分析了该
基因在不同皮色及不同发育时期洋葱鳞茎的表达情
况袁以期为洋葱 哉云郧栽 基因以及更进一步的花青素生
物合成途径研究奠定基础遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 试验材料及试剂
大田间种植洋葱白皮品种白雪尧红皮品种中生赤
玉和黄皮品种黄金大玉葱袁常规栽培管理遥 分别于鳞
茎开始膨大后 员园尧圆园尧猿园尧源园 凿 收集红皮洋葱鳞茎袁用
以研究鳞茎不同发育时期 哉云郧栽 基因的表达情况曰以
鳞茎膨大后 猿园 凿 的白尧黄尧红 猿 种皮色洋葱为材料研
究不同颜色鳞茎 哉云郧栽基因的表达情况遥 将收集到的
洋葱材料液氮速冻袁于 原愿园 益保存遥
员郾 圆摇 试验方法
员郾 圆郾 员摇 哉云郧栽 基因片段克隆 摇 选取与洋葱亲缘关系
较近的几种植物渊水稻尧蝴蝶兰尧玉米冤的 哉云郧栽 基因
序列进行多重比对袁并通过这些序列的保守区域的分
析设计简并引物 哉云郧栽鄄凿藻鄄云 和 哉云郧栽鄄凿藻鄄砸渊表 员冤袁按
照 栽燥贼葬造砸晕粤耘曾贼则葬糟贼燥则渊栽则蚤扎燥造冤 渊上海生工冤的操作说明
书提取洋葱鳞茎总 砸晕粤遥 取完整性良好的总 砸晕粤
员郾 园 滋早袁利用 孕则蚤皂藻杂糟则蚤责贼 陨陨 员泽贼 杂贼则葬灶凿 糟阅晕粤 杂赠灶贼澡藻泽蚤泽
运蚤贼渊栽葬运葬砸葬袁大连冤反转录合成其 糟阅晕粤第一链遥 基因
片段扩增反应体系为院栽葬运葬砸葬 蕴粤 栽葬择渊缘 哉窑滋蕴 原员 冤袁
园郾 缘 滋蕴曰员园 伊 蕴粤 孕悦砸 月怎枣枣藻则 陨陨 渊酝早圆 垣 孕造怎泽冤袁缘郾 园 滋蕴曰
凿晕栽孕 酝蚤曾贼怎则藻渊各 圆郾 缘 皂皂燥造窑蕴 原员 冤袁愿郾 园 滋蕴曰糟阅晕粤 第一
链袁圆郾 园 滋蕴曰哉云郧栽鄄凿藻鄄云渊缘园 滋皂燥造窑蕴 原员冤袁圆郾 园 滋蕴曰哉云郧栽鄄
凿藻鄄砸渊缘园 滋皂燥造窑蕴 原员 冤袁圆郾 园 滋蕴曰加 凿凿匀圆韵 补至 缘园 滋蕴遥
其扩增程序为院怨源 益预变性 猿 皂蚤灶曰怨源 益变性 源园 泽袁缘远
益退火 源园 泽袁苑圆 益延伸 员 皂蚤灶袁猿缘 个循环曰苑圆 益延伸 员园
皂蚤灶遥 将 孕悦砸产物进行琼脂糖凝胶电泳检测袁切下目
的条 带 并 用 栽葬运葬砸葬 酝蚤灶蚤月耘杂栽 粤早葬则燥泽藻 郧藻造 阅晕粤
耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶 运蚤贼 灾藻则援 猿郾 园渊栽葬运葬砸葬袁大连冤纯化回收袁将回
收后的目的条带和 责酝阅员愿 原 栽 灾藻糟贼燥则渊栽葬运葬砸葬袁大连冤
连接后转化大肠杆菌 允酝员园怨袁经蓝白斑筛选尧孕悦砸和酶
切鉴定后袁取合适的阳性克隆送北京奥科鼎盛生物科
技有限公司测序遥
表 员摇 涉及到的引物及其序列
栽葬遭造藻 员摇 孕则蚤皂藻则泽 蚤灶增燥造增藻凿 蚤灶 贼澡藻 泽贼怎凿赠 葬灶凿 蚤贼泽 泽藻择怎藻灶糟藻泽
引物名称
孕则蚤皂藻则 灶葬皂藻
核苷酸序列渊缘忆寅 猿忆冤晕怎糟造藻燥贼蚤凿藻 泽藻择怎藻灶糟藻渊缘忆寅 猿忆冤
用途
孕怎则责燥泽藻
哉云郧栽鄄凿藻鄄云 郧栽悦郧再杂栽粤悦郧栽酝宰杂杂栽栽悦郧郧 中间片段扩增
哉云郧栽鄄凿藻鄄砸 栽酝粤栽悦悦宰宰月月悦悦悦月栽悦悦栽悦悦
砸栽鄄孕则蚤皂藻则鄄砸栽 郧粤悦栽悦郧粤郧栽郧悦粤悦粤栽悦郧栽员苑 猿忆鄄砸粤悦耘 中合成第一链 糟阅晕粤
砸栽鄄孕则蚤皂藻则鄄孕悦砸 郧粤悦栽悦郧粤郧栽郧悦粤悦粤栽悦郧 猿忆鄄砸粤悦耘 扩增
哉猿云鄄员 悦郧郧粤悦郧粤粤郧郧粤郧悦粤粤郧郧郧粤栽郧 粤糟哉云郧栽员 猿忆鄄端扩增
哉苑云鄄员 栽郧郧粤粤粤栽郧粤郧悦郧郧郧悦粤郧粤郧郧栽 粤糟哉云郧栽圆 猿忆鄄端扩增
哉猿砸鄄员 悦悦悦栽栽悦粤悦悦粤悦悦栽栽悦栽悦悦粤粤粤悦 粤糟哉云郧栽员 缘忆鄄端扩增
哉猿砸鄄圆 悦悦栽栽粤悦悦悦栽悦粤粤郧粤悦悦悦粤粤悦悦悦
哉苑砸鄄员 栽悦郧郧悦粤悦栽悦悦粤栽栽悦粤栽栽粤悦郧悦 粤糟哉云郧栽圆 缘忆鄄端扩增
哉苑砸鄄圆 栽悦栽悦粤栽悦郧悦栽悦郧郧郧悦栽悦悦栽悦粤悦
粤糟粤糟贼蚤灶鄄杂 粤悦粤悦郧郧悦悦栽郧郧粤栽粤郧悦粤粤悦粤栽 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸 粤糟贼蚤灶 内参引物
粤糟粤糟贼蚤灶鄄粤 粤郧粤郧悦粤郧栽粤栽栽悦悦悦粤粤郧悦粤栽栽
哉猿鄄杂 悦郧悦粤栽栽栽悦栽栽郧悦悦栽栽栽悦悦悦 粤糟哉云郧栽员 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸引物
哉猿鄄粤 粤粤郧悦悦郧粤栽栽悦悦郧悦悦粤悦栽粤郧
哉苑鄄员 粤郧郧栽栽栽悦栽郧栽郧郧郧栽郧郧栽郧粤 粤糟哉云郧栽圆 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸引物
哉苑鄄圆 悦粤栽悦郧郧悦粤悦栽悦悦粤栽栽悦粤悦栽粤
愿苑远员
摇 怨 期 洋葱 哉云郧栽基因的克隆和表达分析
员郾 圆郾 圆摇 哉云郧栽基因全长克隆摇 设计用于 猿忆 原 砸粤悦耘 的
反转录引物 砸栽鄄孕则蚤皂藻则鄄砸栽 和相应的特异引物 砸栽鄄
孕则蚤皂藻则鄄孕悦砸袁根据克隆得到的 圆 条 哉云郧栽 基因片段序
列袁设计基因特异引物 哉猿云 原 员 和 哉苑云 原 员遥 以 砸栽鄄
孕则蚤皂藻则鄄砸栽为引物袁洋葱鳞茎总 砸晕粤 为模板袁合成其
糟阅晕粤第一链遥 以该反转录产物为模板袁砸栽鄄孕则蚤皂藻则鄄
孕悦砸为下游引物袁哉猿云 原 员尧哉苑云 原 员 分别为上游引物袁
扩增获得这 圆 个基因的 猿忆 原端片段遥 设计 圆 个基因的
缘忆 原 砸粤悦耘 特异引物 哉猿砸 原 员 和 哉猿砸 原 圆尧哉苑砸 原 员 和
哉苑砸 原圆遥 按照 栽葬运葬砸葬公司渊大连冤的 缘忆 原 云怎造造 砸粤悦耘
运蚤贼说明书袁经 孕悦砸扩增获得 圆 个基因的 缘忆 原端片段遥
将上述扩增产物纯化回收袁与载体 责酝阅员愿 原 栽 连接并
转化大肠杆菌后袁经蓝白斑筛选尧孕悦砸 及酶切鉴定后
测序遥 分别将 圆 个序列的中间片段尧猿忆 原端和 缘忆 原端
序列拼接袁得到它们的全长 糟阅晕粤序列遥
员郾 圆郾 猿摇 哉云郧栽基因的生物信息学分析 摇 韵砸云 查找和
核苷酸的翻译等使用软件 灾藻糟贼燥则 晕栽陨曰氨基酸理化性
质分析使用软件 孕则燥贼孕葬则葬皂 渊 澡贼贼责院 辕 辕 憎藻遭援 藻曾责葬泽赠援 燥则早 辕
责则燥贼责葬则葬皂 辕 冤曰序列同源比对使用程序 月蕴粤杂栽 责则燥早则葬皂
渊澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 灶糟遭蚤援 灶造皂援 灶蚤遭援 早燥增 辕 遭造葬泽贼冤曰晕 原端信号肽
序列预测使用 杂蚤早灶葬造猿郾 园 渊 澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 糟遭泽援 凿贼怎援 凿噪 辕
泽藻则增蚤糟藻泽 辕 杂蚤早灶葬造孕 辕 冤曰序列的多重比对使用 悦造怎泽贼葬造 宰
渊憎憎憎援 藻遭蚤援 葬糟援 怎噪 辕 糟造怎泽贼葬造憎 辕 冤和 月燥曾杂澡葬凿藻渊澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援
糟澡援 藻皂遭灶藻贼援 燥则早 辕 泽燥枣贼憎葬则藻 辕 月韵载赃枣燥则皂援 澡贼皂造冤曰克隆得到的
圆 个洋葱 哉云郧栽基因推导产物和其他 哉云郧栽 蛋白的系
统进化分析使用软件 酝藻早葬 源郾 员 来进行袁其中算法选择
晕鄄允 算法袁重复抽样次数为 员 园园园 次遥
员郾 圆郾 源摇 基于 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸 的 哉云郧栽基因表达分析摇
以膨大后 猿园 凿的白尧黄尧红 猿 种皮色洋葱鳞茎为实验
材料袁分析不同颜色鳞茎 哉云郧栽基因的表达情况曰以开
始膨大后 员园尧圆园尧猿园尧源园 凿 的红皮洋葱鳞茎为材料袁分
析鳞茎不同发育时期 哉云郧栽基因的表达情况遥 洋葱鳞
茎总 砸晕粤 的提取使用 栽燥贼葬造砸晕粤耘曾贼则葬糟贼燥则渊 栽则蚤扎燥造冤 渊上
海生工冤袁糟阅晕粤 第一链的合成使用 孕则蚤皂藻杂糟则蚤责贼 域 员泽贼
杂贼则葬灶凿 糟阅晕粤 杂赠灶贼澡藻泽蚤泽 运蚤贼渊栽葬运葬砸葬冤袁调整该 糟阅晕粤 的
浓度并作为 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸的模板曰内参基因选择 茁 原
粤糟贼蚤灶渊引物为 粤糟粤糟贼蚤灶鄄杂和 粤糟粤糟贼蚤灶鄄粤冤袁分别使用引物
对 哉猿 原 杂 和 哉猿 原 粤尧 哉苑 原 员 和 哉苑 原 圆袁 试剂
砸藻葬造酝葬泽贼藻则酝蚤曾渊杂再月砸 郧则藻藻灶冤渊栽葬运葬砸葬袁大连冤袁在 蕴蚤早澡贼
悦赠糟造藻则 泽赠泽贼藻皂 渊 砸燥糟澡藻 蕴蚤早澡贼悦赠糟造藻则源愿园 实时荧光定量
孕悦砸仪袁罗氏诊断有限公司袁德国冤上进行 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻
孕悦砸袁数据分析采用 圆 原吟吟悦栽法咱员圆暂 遥
员郾 圆郾 缘摇 洋葱花青素含量的测定摇 选取上述实验中用
到的洋葱鳞茎各 员郾 园 早袁充分研磨后加入 员园 皂蕴 预冷
园郾 园园缘豫盐酸 原甲醇溶液 源 益避光静置 员圆 澡袁收集上清
液袁残渣以同样的方法再次处理袁合并上清液并定容遥
上述溶液以体积比 员颐 源分别与 园郾 源 皂燥造窑蕴 原员 运悦造鄄匀悦造缓
冲液渊责匀 值 员郾 园冤和 晕葬粤糟缓冲液渊责匀 值 源郾 缘冤混合袁静
置 圆园 皂蚤灶后袁分光光度计检测 缘猿园 灶皂和 苑园园 灶皂处吸
光值遥 花青素含量的计算参照杨兆艳咱员猿暂的方法遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 哉云郧栽基因序列分析
利用与洋葱亲缘关系较近的几种植物的 哉云郧栽基
因序列袁设计简并引物袁经过 孕悦砸得到了 员 个大约 源园园
遭责的条带渊图 员 原 粤冤袁将条带切胶回收并克隆后袁经测
序获得了 圆 个不同的 糟阅晕粤 片段袁大小分别为 源源园 遭责
和 源园猿 遭责袁通过 月造葬泽贼分析发现袁这 圆 个基因分别与石
榴 哉云郧栽基因渊郧哉猿苑员源源猿郾 员冤和蓖麻 哉阅孕 原葡萄糖基
转移酶基因渊载酝赃园园圆缘猿猿愿远缘郾 员冤相似性较高袁因此袁这
圆 个基因都可能是和洋葱花青素合成相关的 哉云郧栽 基
因袁分别命名为 粤糟哉云郧栽员 和 粤糟哉云郧栽圆遥 通过上述测序
结果设计引物袁利用 砸粤悦耘 技术获得了这 圆 个基因的
猿忆 原端和 缘忆 原序列渊图 员 原 月 耀 耘冤袁分别将各自 猿 段序
列进行拼接袁获得 圆 个基因的全长 糟阅晕粤序列遥
粤糟哉云郧栽员 基因 糟阅晕粤序列渊已提交袁郧藻灶遭葬灶噪 登陆
号院运悦源远远园圆怨冤全长 员 远猿猿 遭责袁其中 缘忆 原 哉栽砸和带 孕燥造赠
粤尾巴的 猿忆 原 哉栽砸 序列分别是 愿远 遭责 和 圆圆圆 遭责袁开放
阅读框 员 猿缘园 遭责袁编码包含 源缘园 个氨基酸残基的多肽
链袁其信号肽序列长度为 圆员 个氨基酸残基曰该多肽与
美洲葡萄渊灾蚤贼蚤泽 造葬遭则怎泽糟葬冤的 哉阅孕 原葡萄糖院类黄酮 猿 原
韵 原葡萄糖基转移酶渊粤月砸圆源员猿缘郾 员冤的序列一致性为
源源豫 袁并且包含了糖基转移酶所拥有的 哉阅孕郧栽尧
悦韵郧员愿员怨尧酝郧栽等保守结构域曰氨基酸性质分析表明袁
该多肽链的平均分子量为 源愿郾 远 噪阅袁责陨值为 远郾 猿远遥
粤糟哉云郧栽圆 基因 糟阅晕粤渊已提交袁郧藻灶遭葬灶噪 登陆号院
运悦源远远园猿园冤全长 员 缘愿猿 遭责袁包含 员 个编码 源苑缘 个氨基酸
残基多肽链的开放阅读框渊员 源圆缘 遭责冤尧长 源苑 遭责 的 缘忆 原
哉栽砸以及长 员员员 遭责 且带 孕燥造赠 粤 尾巴的 猿忆 原 哉栽砸 序
列袁但是该基因编码的多肽链不含信号肽序列曰 月造葬泽贼
分析表明该多肽链与烟草渊晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 贼葬遭葬糟怎皂冤的 哉阅孕
原葡萄糖院葡萄糖基转移酶渊粤匀在园愿苑远员郾 员冤的序列一
致性为 缘远豫 袁且包含 哉阅孕郧栽尧悦韵郧员愿员怨尧酝郧栽 等保守
结构域曰氨基酸性质分析表明该多肽链的平均分子量
为 缘圆郾 猿 噪阅袁责陨值为 缘郾 苑远遥
将本研究获得的 圆 个基因推导的氨基酸序列与另
外 源 个 哉云郧栽 蛋白质序列渊美洲葡萄袁粤月砸圆源员猿缘曰海
怨苑远员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
注院云院哉云郧栽基因片段曰员猿 和 员缘院粤糟哉云郧栽员 的 猿忆 原端和 缘忆 原端片段曰圆猿 和 圆缘院粤糟哉云郧栽圆 的 猿忆 原端和 缘忆 原端片段遥
晕燥贼藻院 云院 栽澡藻 早藻灶藻 枣则葬早皂藻灶贼泽 燥枣 哉云郧栽袁员猿驭员缘院 栽澡藻 猿忆 原 枣则葬早皂藻灶贼 葬灶凿 缘忆 原 枣则葬早皂藻灶贼 燥枣 粤糟哉云郧栽员袁 圆猿驭圆缘院
栽澡藻 猿忆 原 枣则葬早皂藻灶贼 葬灶凿 缘忆 原 枣则葬早皂藻灶贼 燥枣 粤糟哉云郧栽圆袁 酝院 阅蕴圆园园园 阅晕粤 酝葬则噪藻则援
图 员摇 洋葱 哉云郧栽基因 孕悦砸扩增的电泳
云蚤早援 员摇 栽澡藻 孕悦砸 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽 燥枣 燥灶蚤燥灶 哉云郧栽
枣袁载孕赃园园愿愿园员怨远怨曰二穗短柄草袁载孕赃园园猿缘苑苑猿怨园曰烟草袁
粤匀在园愿苑远员冤进行多重序列比对渊图 源冤袁发现这些植物
哉云郧栽蛋白质的相似性低袁且序列的 悦 原端相似性要比
晕 原端序列高袁其中 源源 个氨基酸残基组成的一段序列
高度同源袁被称为 孕杂孕郧 区 渊 责造葬灶贼 泽藻糟燥灶凿葬则赠 责则燥凿怎糟贼
早造怎糟燥泽赠造贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻冤遥
圆郾 圆摇 哉云郧栽蛋白质的系统进化树构建
为了研究洋葱 哉云郧栽基因的编码产物与其它植物
哉云郧栽蛋白质之间的同源关系袁对一些植物 哉云郧栽蛋白
质进行了多重序列比对袁并使用 晕藻蚤早澡遭燥则鄄躁燥蚤灶蚤灶早 算
法尧重复取样 员 园园园 次袁构建了系统进化树渊图 缘冤遥 由
系统进化分析可以发现袁粤糟哉云郧栽员 和 粤糟哉云郧栽圆 分属
于 圆 大类不同的 哉郧栽 蛋白袁从 粤糟哉云郧栽员 所在的分支
可以看出袁这些植物 哉云郧栽蛋白质可以分为 圆 大类袁即
双子叶植物 哉云郧栽 蛋白和单子叶植物 哉云郧栽 蛋白袁并
且亲缘关系较近的趋于分在同一分支袁如拟南芥和芜
菁被分在同一分支下袁同为蔷薇科的巴旦木尧西洋梨和
苹果分在同一分支袁单子叶植物禾本科中玉米和大麦
同样分在同一分支下袁本研究获得的 粤糟哉云郧栽员 同海枣
的 哉云郧栽蛋白质分为同一支袁亲缘关系较近袁这与洋葱
所在分类地位是一致的遥 而 粤糟哉云郧栽圆 蛋白与二穗短
柄草分在同一支袁但是和 粤糟哉云郧栽员 蛋白所在支分离极
早袁这可能和这 圆 个蛋白质的结构和功能的不同有关遥
圆郾 猿摇 基于 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸的 哉云郧栽的表达分析
以同一时期渊鳞茎膨大 猿园 凿冤的白尧黄和红色洋葱
鳞茎作为实验材料袁分析了洋葱鳞茎花青素含量以及
哉云郧栽基因在不同颜色鳞茎中的表达情况袁结果表明袁
不论是 粤糟哉云郧栽员 还是 粤糟哉云郧栽圆 基因袁都在红皮洋葱
中大量表达袁而在黄皮和白皮洋葱中几乎不表达曰花青
素在红皮洋葱中含量最高渊园郾 园员苑猿豫 冤袁而在黄皮和白
皮洋葱中含量却低的多 渊分别仅为 园郾 园园圆圆豫 和
园郾 园园员苑豫 冤袁其含量变化与 圆 个基因的表达变化相一致
渊图 远冤遥
以鳞茎开始膨大 员园尧圆园尧猿园尧源园 凿 的红皮洋葱鳞茎
作为材料袁分析了鳞茎花青素含量以及 哉云郧栽 基因在
洋葱鳞茎膨大过程中的表达情况遥 结果表明袁圆 个基
因在鳞茎刚开始膨大时大量表达袁而随鳞茎的不断膨
大袁基因表达量都在下降袁但是 粤糟哉云郧栽员 基因在膨大
的过程中持续下降袁而 粤糟哉云郧栽圆 基因则在膨大 猿园 凿时
表达量最低袁并在之后缓慢上升曰而花青素含量在刚开
始膨大时便已达到较高水平袁并缓慢上升到膨大 猿园 凿
时开始下降 渊 源 个时期其含量分别为 园郾 园员猿苑豫 尧
园郾 园员远员豫 尧园郾 园员苑猿豫 尧园郾 园员远苑豫 冤袁其基因表达水平基本
与花青素含量的增加量相一致袁但是到鳞茎膨大 源园 凿
时袁花青素含量降低袁这可能是因为花青素代谢水平加
强甚至超过其合成水平所导致遥
猿摇 讨论
花青素是高等植物最普遍的着色物质袁其生物合
成途径的研究也已经比较清楚咱员源 原 员缘暂 遥 苯丙氨酸解氨
酶渊孕粤蕴冤尧查尔酮合成酶渊悦匀杂冤和类黄酮糖基转移酶
渊哉云郧栽冤与花青苷合成关系密切咱员远暂 袁其中 哉云郧栽 将糖
基连接到不稳定的花青素上袁是花青苷合成途径中的
最后 员 个酶遥 该酶在双子叶植物中被分析研究的较
多袁在苹果尧葡萄尧荔枝等植物中已经克隆到了控制该
园愿远员
摇 怨 期 洋葱 哉云郧栽基因的克隆和表达分析
注院阴影部分表示起始密码子或终止密码子袁下划线部分为信号肽序列遥 下同遥
晕燥贼藻院栽澡藻 蚤灶蚤贼蚤葬贼蚤燥灶 葬灶凿 贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 糟燥凿燥灶 葬则藻 泽澡葬责藻凿 葬灶凿 贼澡藻 泽蚤早灶葬造 责藻责贼蚤凿藻 蚤泽 皂葬则噪藻凿 怎灶凿藻则造蚤灶藻凿援 栽澡藻 泽葬皂藻 葬泽 枣燥造造燥憎蚤灶早援
图 圆摇 粤糟哉云郧栽员 基因全长 糟阅晕粤及其推导的氨基酸序列
云蚤早援 圆摇 栽澡藻 枣怎造造鄄造藻灶早贼澡 糟阅晕粤 燥枣 粤糟哉云郧栽员 葬灶凿 蚤贼泽 凿藻凿怎糟藻凿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻
酶合成的基因咱苑袁员苑暂 袁但是在单子叶植物中研究较少袁仅
在玉米尧水稻等禾本科植物中有所研究咱圆暂 遥 在洋葱
中袁没有发现有关 哉云郧栽 蛋白质合成相关基因的研究
报告遥
糖基转移酶类渊郧栽泽冤广泛存在于植物中袁可以催
化一些小分子化合物的糖基化反应袁改变其生物活性尧
水溶性尧稳定性等多种性质袁是植物次生代谢过程中的
重要部分遥 哉郧栽基因最早在拟南芥中发现袁现在发现
在拟南芥中存在 员员怨 个可能的 哉郧栽基因袁其中 员园愿 个
基因的功能已被鉴定咱员愿暂 遥 运澡燥 等咱员怨暂首次对 哉云郧栽 基
因的遗传调控和酶活性进行报道袁并由 云藻凿燥则燥枣枣 等咱圆园暂
采用转座子标签技术从玉米中分离出来遥 本研究通过
对不同植物的 哉云郧栽 基因序列的比对结果袁设计了 员
对 哉云郧栽基因简并引物袁扩增获得了 圆 条洋葱 哉云郧栽
基因片段袁并利用 砸粤悦耘 技术得到了这 圆 个基因的全
长 糟阅晕粤序列遥
粤糟哉云郧栽员 序列与美洲葡萄 哉云郧栽尧粤糟哉云郧栽圆 与烟
草 哉云郧栽序列同源袁但是它们的一致性却都不高渊源源豫
和 缘远豫 冤袁不同物种之间的 哉云郧栽 序列保守性低袁这正
是 哉云郧栽蛋白质的一个普遍性质袁如紫苏与其他物种
氨基酸的相似性仅为 猿怨豫 耀 缘源豫 咱圆员暂 遥 植物糖基转移
酶蛋白多数属于 郧栽鄄月折叠类型袁具有 悦 原端和 晕 原端
结构域袁其中 晕 原端结构域的序列保守性较弱袁是受体
结构域袁而 悦 原端的结构域相对比较保守袁尤其是其中
源源 个保守性很强的氨基酸序列袁与酶蛋白底物的识别
和催化活性有关袁被称为 悦 原末端保守区尧孕杂孕郧 盒或
者特征基序渊泽蚤早灶葬贼怎则藻 皂燥贼蚤枣冤 咱圆圆暂 遥 通过对葡萄尧蒺藜苜
蓿等的 哉郧栽晶体结构分析发现袁在 哉郧栽泽 催化的糖基
化过程中袁哉阅孕 原糖基供体被埋藏在 孕杂孕郧鄄遭燥曾 形成的
狭长口袋状通道中曰将 孕杂孕郧鄄遭燥曾 中 源源 个氨基酸以阿
拉伯数字进行编号袁可以发现 哉阅孕 原糖基供体的尿嘧
啶环可与 孕杂孕郧鄄遭燥曾中的 悦圆 互作或同时与 宰员尧粤圆 互
员愿远员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
图 猿摇 粤糟哉云郧栽圆 基因全长 糟阅晕粤及其推导的氨基酸序列
云蚤早援 猿摇 栽澡藻 枣怎造造鄄造藻灶早贼澡 糟阅晕粤 燥枣 粤糟哉云郧栽圆 葬灶凿 蚤贼泽 凿藻凿怎糟藻凿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻
作袁其核糖环与 匝源 和 耘圆苑 形成氢键袁琢 原磷酸基团与
晕圆猿尧杂圆源 和 匀员怨 形成氢键袁茁 原磷酸基团与 匀员怨 形成
氢键袁而其葡萄糖环则与 孕杂孕郧鄄遭燥曾 中的 宰圆圆尧阅源猿 或
耘源猿尧匝源源 互相作用袁从而定位 哉阅孕 原 葡萄糖中各基
团袁使糖基化反应能顺利进行咱圆猿 原 圆缘暂 遥 另外有文章指
出在糖基供体的选择中 孕杂孕郧 基序中第 圆圆尧圆猿 和 源源
位氨基酸有着重要的作用袁宰圆圆 使 哉阅孕 原葡萄糖正确
定位袁而 砸圆圆 则使 哉阅孕 原葡萄糖醛酸正确定位曰杂圆猿 在
哉阅孕 原葡萄糖醛酸转移酶中保守性很强曰而第 源源 位的
匝源源 和 匀源源 分别指导对葡萄糖基转移酶和半乳糖基
转移酶的糖基选择咱圆远 原 圆愿暂 遥 本研究得到的 圆 个基因编
码的多肽链中袁参与糖基供体相互作用的氨基酸残基
与上述晶体基本一致袁但 粤糟哉云郧栽员 基因 孕杂孕郧 第 圆 位
氨基酸为缬氨酸渊灾葬造蚤灶藻袁灾葬造袁灾冤袁通过大量糖基转移
酶序列的观察发现袁大多数酶 孕杂孕郧 框第 圆 位氨基酸
残基为丙氨酸渊粤造葬灶蚤灶藻袁粤造葬袁粤冤袁但亦有缬氨酸尧丝氨
酸渊杂藻则蚤灶藻袁杂藻则袁杂冤尧苏氨酸渊栽澡则藻燥灶蚤灶藻袁栽澡则袁栽冤的存在袁
因此推测这 圆 个基因均可以催化葡萄糖的糖基化反
应遥
目前袁郧栽泽 被划分为至少 怨圆 个家族袁哉郧栽泽 属于
郧栽泽家族中第 员 家族的成员咱圆怨暂 袁主要以 哉阅孕 原 葡萄
糖尧哉阅孕 原半乳糖尧哉阅孕 原葡萄糖醛酸等为糖基配体袁
将糖基转移到各种激素尧次级代谢物等不同的受体上遥
可能正是由于 郧栽泽的糖基配体及受体结构的广泛性袁
导致了酶结构的多样性及序列的低一致性遥 系统进化
分析发现袁本试验克隆得到的 圆 个 哉云郧栽 基因被划分
在 圆 个不同的类群分支袁且 圆 个分支的分离极早袁说明
这 圆 个基因的结构和功能很可能存在着一定的差别曰
但是这 圆 个基因的表达情况却很相似袁都是在红皮洋
葱中大量表达袁而在黄皮和白皮洋葱中微量表达袁都是
在鳞茎膨大初期表达量大袁且随着鳞茎的膨大表达量
降低袁与洋葱花青素含量初期大量积累尧之后缓慢积
累尧最后稍有下降的变化趋势基本一致袁说明这 圆 个基
因均很可能与洋葱花青素的积累有关遥 为了更加明确
的认识这 圆 个基因和花青素合成的关系袁需通过过量
表达研究以及 砸晕粤蚤 实验等袁对二者进行进一步的研
究遥
圆愿远员
摇 怨 期 洋葱 哉云郧栽基因的克隆和表达分析
注院下划线部分为 孕杂孕郧基序袁其中箭头指向与 哉阅孕 原糖基供体相互作用的氨基酸残基遥
晕燥贼藻院栽澡藻 孕杂孕郧 皂燥贼蚤枣 蚤泽 皂葬则噪藻凿 怎灶凿藻则造蚤灶藻凿袁 葬灶凿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 则藻泽蚤凿怎藻泽 蚤灶贼藻则葬糟贼藻凿 憎蚤贼澡 哉阅孕鄄泽怎早藻则 蚤泽 责燥蚤灶贼藻凿援
图 源摇 洋葱及其他植物 哉云郧栽蛋白的多重序列比对
云蚤早援 源摇 酝怎造贼蚤责造藻 葬造蚤早灶皂藻灶贼 燥枣 哉云郧栽 蚤灶 燥灶蚤燥灶 葬灶凿 燥贼澡藻则 责造葬灶贼泽
图 缘摇 部分 哉云郧栽蛋白质的系统进化关系
云蚤早援 缘摇 栽澡藻 责澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 则藻造葬贼蚤燥灶泽澡蚤责 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 哉云郧栽泽
猿愿远员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
注院内参基因院茁 原 葬糟贼蚤灶曰粤袁取材时间院鳞茎膨大 猿园 凿曰
月袁 取材材料院红皮洋葱鳞茎遥
晕燥贼藻院砸藻枣藻则藻灶糟藻 早藻灶藻院 茁 原 葬糟贼蚤灶援 粤袁 杂葬皂责造蚤灶早 贼蚤皂藻院
猿园 凿 葬枣贼藻则 贼澡藻 遭怎造遭 泽憎藻造造蚤灶早援 月袁 酝葬贼藻则蚤葬造泽院 砸藻凿 燥灶蚤燥灶 遭怎造遭援
图 远摇 洋葱 哉云郧栽基因的 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸分析
云蚤早援 远摇 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 哉云郧栽 蚤灶 燥灶蚤燥灶泽
源摇 结论
通过简并 孕悦砸 技术和 砸粤悦耘 技术克隆了 圆 条洋
葱 哉云郧栽 基因的全长 糟阅晕粤 序列袁 分别命名为
粤糟哉云郧栽员 和 粤糟哉云郧栽圆袁其中 粤糟哉云郧栽员 糟阅晕粤 长 员 远猿猿
遭责袁编码多肽链包含 源缘园 个氨基酸残基袁与美洲葡萄的
哉阅孕 原葡萄糖院类黄酮 猿 原 韵 原葡萄糖基转移酶的序列
一致性为 源源豫 袁粤糟哉云郧栽圆 糟阅晕粤全长 员 缘愿猿 遭责袁编码多
肽链包含 源苑缘 个氨基酸残基袁与烟草 哉阅孕 原葡萄糖院葡
萄糖基转移酶序列一致性为 缘远豫 曰系统进化分析表明
它们分别与海枣及二穗短柄草的亲缘关系较近袁但是
二者的亲缘关系却较远曰这 圆 个基因均在红皮洋葱中
大量表达袁在黄皮和白皮洋葱中几乎不表达曰在鳞茎膨
大初期表达量最大袁并在之后表达量缓慢降低袁但
粤糟哉云郧栽圆 在鳞茎膨大后期缓慢上升曰洋葱花青素含量
初期大量积累尧之后缓慢积累尧最后稍有下降袁与 圆 个
基因的表达情况基本保持一致遥 初步表明这 圆 个
哉云郧栽基因与洋葱花青素合成有关系遥
参考文献院
咱 员 暂摇 云蚤藻造凿 栽 杂袁 蕴藻藻 阅 宰袁 匀燥造遭则燥燥噪 晕 酝援 宰澡赠 造藻葬增藻泽 贼怎则灶 则藻凿 蚤灶
葬怎贼怎皂灶援 贼澡藻 则燥造藻 燥枣 葬灶贼澡燥糟赠葬灶蚤灶泽 蚤灶 泽藻灶藻泽糟蚤灶早 造藻葬增藻泽 燥枣 则藻凿鄄燥泽蚤藻则
凿燥早憎燥燥凿咱允暂 援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 圆园园员袁 员圆苑渊圆冤院 缘远远 原 缘苑源
咱 圆 暂 摇 冯守千援 红梨着色机理的研究咱阅暂援 泰安院 山东农业大学袁
圆园员员院 苑 原 愿
咱 猿 暂 摇 白海娜袁 王振宇援 花色素研究进展咱 允暂 援 中国林副特产袁 圆园员员袁
员员源渊缘冤院 源远 原 源怨
咱 源 暂 摇 邵雅芳袁徐非非袁唐富福袁包劲松援 水稻花青素合成相关基因的
时空表达研究咱允暂 援 核农学报袁 圆园员猿袁 圆苑渊员冤院 怨 原 员源
咱 缘 暂摇 宫硖袁 薛静袁 张晓东援 植物花青素合成途径中的调控基因研究
进展咱允暂 援 生物技术进展袁 圆园员员袁 员渊远冤院 猿愿员 原 猿怨园
咱 远 暂 摇 悦葬泽贼藻造造葬则蚤灶 杂 阅袁 酝葬贼贼澡藻憎泽 酝 粤袁 郧葬泽责藻则燥 郧 阅袁 郧葬皂遭藻贼贼葬 郧 粤援
宰葬贼藻则 凿藻枣蚤糟蚤贼泽 葬糟糟藻造藻则葬贼藻 则蚤责藻灶蚤灶早 葬灶凿 蚤灶凿怎糟藻 糟澡葬灶早藻泽 蚤灶 早藻灶藻
藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 则藻早怎造葬贼蚤灶早 枣造葬增燥灶燥蚤凿 遭蚤燥泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 蚤灶 早则葬责藻 遭藻则则蚤藻泽 咱 允暂 援
孕造葬灶贼葬袁 圆园园苑袁 圆圆苑渊员冤院 员园员 原 员员圆
咱 苑 暂 摇 运蚤皂 杂 匀袁 蕴藻藻 允 砸袁 匀燥灶早 杂 栽袁 再燥燥 再 运袁 粤灶 郧袁 运蚤皂 杂 砸援
酝燥造藻糟怎造葬则 糟造燥灶蚤灶早 葬灶凿 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 葬灶贼澡燥糟赠葬灶蚤灶 遭蚤燥泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 早藻灶藻泽
责则藻枣藻则藻灶贼蚤葬造造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 蚤灶 葬责责造藻 泽噪蚤灶咱允暂 援 孕造葬灶贼 杂糟蚤藻灶糟藻袁 圆园园猿袁 员远缘
渊圆冤院 源园猿 原 源员猿
咱 愿 暂 摇 运燥遭葬赠葬泽澡蚤 杂袁 陨泽澡蚤皂葬则怎 酝袁 阅蚤灶早 悦 运袁 再葬噪怎泽澡蚤躁蚤 匀袁 郧燥贼燥 晕援
悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 哉阅孕鄄早造怎糟燥泽藻院 枣造葬增燥灶燥蚤凿 猿 原 韵早造怎糟燥泽赠造贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻
渊哉云郧栽冤 早藻灶藻 泽藻择怎藻灶糟藻泽 遭藻贼憎藻藻灶 憎澡蚤贼藻 早则葬责藻泽 渊灾蚤贼蚤泽 增蚤灶蚤枣藻则葬冤 葬灶凿
贼澡藻蚤则 泽责燥则贼泽 憎蚤贼澡 则藻凿 泽噪蚤灶咱 允暂 援 孕造葬灶贼 杂糟蚤藻灶糟藻袁 圆园园员袁 员远园渊猿冤院 缘源猿
原 缘缘园
咱 怨 暂摇 李丽琼袁 廖明安袁 阳世莹援 不同海拔和树冠层次对金冠苹果着
色及相关酶活性的影响咱 允暂 援 核农学报袁 圆园员源袁 圆愿渊猿冤院 缘员圆 原
缘员苑
咱员园暂摇 月燥泽泽 孕 运袁 阅葬增蚤藻泽 悦袁 砸燥遭蚤灶泽燥灶 杂 孕援 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 葬灶贼澡燥糟赠葬灶蚤灶
遭蚤燥泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 责葬贼澡憎葬赠 早藻灶藻泽 蚤灶 则藻凿 葬灶凿 憎澡蚤贼藻 早则葬责藻泽 咱 允 暂 援 孕造葬灶贼
酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠袁 员怨怨远袁 猿圆渊猿冤院 缘远缘 原 缘远怨
咱员员暂摇 晕葬噪葬贼泽怎噪葬 栽袁 晕蚤泽澡蚤澡葬则葬 酝袁 酝蚤泽澡蚤遭葬 运袁 再葬皂葬皂怎则葬 杂援 栽憎燥 凿蚤枣枣藻则藻灶贼
皂怎贼葬贼蚤燥灶泽 葬则藻 蚤灶增燥造增藻凿 蚤灶 贼澡藻 枣燥则皂葬贼蚤燥灶 燥枣 憎澡蚤贼藻鄄枣造燥憎藻则藻凿 早藻灶贼蚤葬灶
责造葬灶贼泽咱允暂 援 孕造葬灶贼 杂糟蚤藻灶糟藻袁 圆园园缘袁 员远怨渊缘冤院 怨源怨 原 怨缘愿
咱员圆暂摇 蕴蚤增葬噪 运 允袁 杂糟澡皂蚤贼贼早藻灶 栽 阅援 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 则藻造葬贼蚤增藻 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 凿葬贼葬
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酝藻贼澡燥凿泽袁 圆园园员袁 圆缘渊源冤院 源园圆 原 源园愿
咱员猿暂摇 杨兆艳援 责匀示差法测定桑椹红色素中花青素含量的研究咱 允暂 援
食品科技袁 圆园园苑袁 猿圆渊源冤院 圆园员 原 圆园猿
咱员源暂摇 刘仕芸袁 黄艳岚袁 张树珍援 植物花青素生物合成中的调控基因
咱允暂 援 植物生理学通讯袁 圆园园远袁 源圆渊源冤院 苑源苑 原 苑缘源
咱员缘暂摇 杂贼则葬糟噪藻 砸袁 陨泽澡蚤澡葬则葬 匀袁 匀怎藻责 郧袁 月葬则泽糟澡 粤袁 酝藻澡则贼藻灶泽 云袁 晕蚤藻澡葬怎泽
运袁 宰藻蚤泽泽澡葬葬则 月援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造 则藻早怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 糟造燥泽藻造赠 则藻造葬贼藻凿 砸圆砸猿 原
酝再月 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 枣葬糟贼燥则泽 糟燥灶贼则燥造泽 枣造葬增燥灶燥造 葬糟糟怎皂怎造葬贼蚤燥灶 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼
责葬则贼泽 燥枣 贼澡藻 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬 泽藻藻凿造蚤灶早 咱 允暂 援 栽澡藻 孕造葬灶贼 允燥怎则灶葬造袁
圆园园苑袁 缘园渊源冤院 远远园 原 远苑苑
咱员远暂摇 月则 觟凿藻灶枣藻造凿贼 砸袁 酝燥澡则 匀援 栽蚤皂藻 糟燥怎则泽藻泽 枣燥则 责澡赠贼燥糟澡则燥皂藻鄄蚤灶凿怎糟藻凿
藻灶扎赠皂藻 造藻增藻造泽 蚤灶 责澡藻灶赠造责则燥责葬灶燥蚤凿 皂藻贼葬遭燥造蚤泽皂 渊 责澡藻灶赠造葬造葬灶蚤灶藻
葬皂皂燥灶蚤葬鄄造赠葬泽藻袁 灶葬则蚤灶早藻灶蚤灶鄄糟澡葬造糟燥灶藻 泽赠灶贼澡葬泽藻冤 糟燥皂责葬则藻凿 憎蚤贼澡 贼蚤皂藻
糟燥怎则泽藻泽 枣燥则 责澡赠贼燥糟澡则燥皂藻鄄皂藻凿蚤葬贼藻凿 藻灶凿鄄责则燥凿怎糟贼 葬糟糟怎皂怎造葬贼蚤燥灶
渊葬灶贼澡燥糟赠葬灶蚤灶袁 择怎藻则糟藻贼蚤灶冤咱允暂 援 孕造葬灶贼葬袁 员怨愿愿袁 员苑远渊猿冤院 猿愿猿 原 猿怨园
咱员苑暂摇 匀燥灶凿葬 悦袁 运燥贼燥凿葬 晕袁 宰葬凿葬 酝袁 运燥灶凿燥 杂袁 运燥遭葬赠葬泽澡蚤 杂袁 杂燥藻躁蚤皂葬 允袁
在澡葬灶早 在袁 栽泽怎凿葬 栽袁 酝燥则蚤早怎糟澡蚤 栽援 粤灶贼澡燥糟赠葬灶蚤灶 遭蚤燥泽赠灶贼澡藻贼蚤糟 早藻灶藻泽 葬则藻
糟燥燥则凿蚤灶葬贼藻造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 凿怎则蚤灶早 则藻凿 糟燥造燥则葬贼蚤燥灶 蚤灶 葬责责造藻 泽噪蚤灶咱允暂 援 孕造葬灶贼
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源愿远员
摇 怨 期 洋葱 哉云郧栽基因的克隆和表达分析
咱员愿暂 摇 匀燥怎 月 运袁 蕴蚤皂 耘 运袁 匀蚤早早蚤灶泽 郧 杂袁 月燥憎造藻泽 阅 允援 耘灶扎赠皂藻 糟葬贼葬造赠泽蚤泽
葬灶凿 则藻早怎造葬贼蚤燥灶院 晕鄄早造怎糟燥泽赠造葬贼蚤燥灶 燥枣 糟赠贼燥噪蚤灶蚤灶泽 遭赠 早造赠糟燥泽赠造贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻泽
燥枣 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬 咱 允暂 援 栽澡藻 允燥怎则灶葬造 燥枣 月蚤燥造燥早蚤糟葬造 悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁
圆园园源袁 圆苑怨渊源远冤院源苑愿圆圆 原 源苑愿猿圆
咱员怨暂 摇 运澡燥 运 云 云袁 运葬皂泽贼藻藻早 允袁 灾葬灶 月则藻凿藻则燥凿藻 允援 陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶袁 责则燥责藻则贼蚤藻泽
葬灶凿 早藻灶藻贼蚤糟 糟燥灶贼则燥造 燥枣 哉阅孕鄄早造怎糟燥泽藻 院 糟赠葬灶蚤凿蚤灶 猿 原 园 原
早造怎糟燥泽赠造贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻 蚤灶 孕藻贼怎灶蚤葬 澡赠遭则蚤凿葬 咱 允 暂 援 在藻蚤贼泽糟澡则蚤枣贼 枣俟则
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咱圆园暂 摇 云藻凿燥则燥枣枣 晕 灾袁 云怎则贼藻噪 阅 月袁 晕藻造泽燥灶 韵 耘援 悦造燥灶蚤灶早 燥枣 贼澡藻 遭则燥灶扎藻 造燥糟怎泽
蚤灶 皂葬蚤扎藻 遭赠 葬 泽蚤皂责造藻 葬灶凿 早藻灶藻则葬造蚤扎葬遭造藻 责则燥糟藻凿怎则藻 怎泽蚤灶早 贼澡藻
贼则葬灶泽责燥泽葬遭造藻 糟燥灶贼则燥造造蚤灶早 藻造藻皂藻灶贼 粤糟贼蚤增葬贼燥则 渊粤糟冤咱允暂 援 孕则燥糟藻藻凿蚤灶早泽 燥枣
贼澡藻 晕葬贼蚤燥灶葬造 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 员怨愿源袁 愿员渊员圆冤院 猿愿圆缘 原 猿愿圆怨
咱圆员暂 摇 郧燥灶早 在 在袁 再葬皂葬扎葬噪蚤 酝袁 杂怎早蚤赠葬皂葬 酝袁 栽葬灶葬噪葬 再袁 杂葬蚤贼燥 运援 悦造燥灶蚤灶早
葬灶凿 皂燥造藻糟怎造葬则 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 泽贼则怎糟贼怎则葬造 早藻灶藻泽 蚤灶增燥造增藻凿 蚤灶 葬灶贼澡燥糟赠葬灶蚤灶
遭蚤燥泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 葬灶凿 藻曾责则藻泽泽藻凿 蚤灶 葬 枣燥则皂葬鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟 皂葬灶灶藻则 蚤灶 孕藻则蚤造造葬
枣则怎贼藻泽糟藻灶泽 咱允暂 援 孕造葬灶贼 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠袁 员怨怨苑袁 猿缘渊远冤院 怨员缘 原 怨圆苑
咱圆圆暂 摇 蕴蚤 再袁 月葬造凿葬怎枣 杂袁 蕴蚤皂 耘 运袁 月燥憎造藻泽 阅 允援 孕澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼澡藻
哉阅孕鄄早造赠糟燥泽赠造贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻 皂怎造贼蚤早藻灶藻 枣葬皂蚤造赠 燥枣 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬
咱允暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 月蚤燥造燥早蚤糟葬造 悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁 圆园园员袁 圆苑远渊远冤院 源猿猿愿 原 源猿源猿
咱圆猿暂 摇 杂澡葬燥 匀袁 匀藻 载袁 粤糟澡灶蚤灶藻 蕴袁 月造燥怎灶贼 允 宰袁 阅蚤曾燥灶 砸 粤袁 宰葬灶早 载援
悦则赠泽贼葬造 泽贼则怎糟贼怎则藻泽 燥枣 葬 皂怎造贼蚤枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造 贼则蚤贼藻则责藻灶藻 辕 枣造葬增燥灶燥蚤凿
早造赠糟燥泽赠造贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻 枣则燥皂 酝藻凿蚤糟葬早燥 贼则怎灶糟葬贼怎造葬咱允暂 援 孕造葬灶贼 悦藻造造袁 圆园园缘袁
员苑渊员员冤院 猿员源员 原 猿员缘源
咱圆源暂 摇 蕴蚤 蕴袁 酝燥凿燥造燥 蕴 灾袁 耘泽糟葬皂蚤造造葬鄄栽则藻增蚤灶燥 蕴 蕴袁 粤糟澡蚤灶蚤灶藻 蕴袁 阅蚤曾燥灶 砸 粤袁
宰葬灶早 载 匝援 悦则赠泽贼葬造 泽贼则怎糟贼怎则藻 燥枣 酝藻凿蚤糟葬早燥 贼则怎灶糟葬贼怎造葬 哉郧栽愿缘匀圆 原
蚤灶泽蚤早澡贼泽 蚤灶贼燥 贼澡藻 泽贼则怎糟贼怎则葬造 遭葬泽蚤泽 燥枣 葬 皂怎造贼蚤枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造 渊 蚤泽燥冤 枣造葬增燥灶燥蚤凿
早造赠糟燥泽赠造贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻咱 允暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠袁 圆园园苑袁 猿苑园
渊缘冤院 怨缘员 原 怨远猿
咱圆缘暂摇 酝燥凿燥造燥 蕴 灾袁 蕴蚤 蕴袁 孕葬灶 匀袁 月造燥怎灶贼 允 宰袁 阅蚤曾燥灶 砸 粤袁 宰葬灶早 载 匝援
悦则赠泽贼葬造 泽贼则怎糟贼怎则藻泽 燥枣 早造赠糟燥泽赠造贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻 哉郧栽苑愿郧员 则藻增藻葬造 贼澡藻
皂燥造藻糟怎造葬则 遭葬泽蚤泽 枣燥则 早造赠糟燥泽赠造葬贼蚤燥灶 葬灶凿 凿藻早造赠糟燥泽赠造葬贼蚤燥灶 燥枣 渊 蚤泽燥 冤
枣造葬增燥灶燥蚤凿泽咱允暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠袁 圆园园怨袁 猿怨圆渊缘冤院 员圆怨圆
原 员猿园圆
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葬灶凿 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 早造赠糟燥泽赠造贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻泽 蚤灶增燥造增藻凿 蚤灶 贼澡藻
遭蚤燥泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 燥枣 泽燥赠葬泽葬责燥灶蚤灶 陨 蚤灶 郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾 咱 允暂 援 云耘月杂 蕴藻贼贼藻则泽袁
圆园员园袁 缘愿源渊员员冤院 圆圆缘愿 原 圆圆远源
咱圆苑暂摇 晕燥早怎糟澡蚤 粤袁 匀燥则蚤噪葬憎葬 酝袁 云怎噪怎蚤 再袁 云怎噪怎糟澡蚤鄄酝蚤扎怎贼葬灶蚤 酝袁 陨怎糟澡蚤鄄
韵噪葬凿葬 粤袁 陨泽澡蚤早怎则燥 酝袁 运蚤泽燥 再袁 晕葬噪葬赠葬皂葬 栽袁 韵灶燥 耘援 蕴燥糟葬造
凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 燥枣 泽怎早葬则 凿燥灶燥则 泽责藻糟蚤枣蚤糟蚤贼赠 燥枣 枣造葬增燥灶燥蚤凿
早造赠糟燥泽赠造贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻 蚤灶 蕴葬皂蚤葬造藻泽咱允暂 援 栽澡藻 孕造葬灶贼 悦藻造造袁 圆园园怨袁 圆员渊缘冤院
员缘缘远 原 员缘苑圆
咱圆愿暂摇 张传丽袁 陈鹏袁 仲月明袁 周长远袁 沈丹红袁 蒋菲援 银杏类黄酮糖
基转移酶基因全长序列克隆及表达分析咱 允暂 援 园艺学报袁 圆园员圆袁
猿怨渊员园冤院 员怨园猿 原 员怨员圆
咱圆怨暂摇 匀葬灶泽藻灶 耘 匀袁 韵泽皂葬灶蚤 杂 粤袁 运则蚤泽贼藻灶泽藻灶 悦袁 酝覬造造藻则 月 蕴袁 匀葬灶泽藻灶 允援
杂怎遭泽贼则葬贼藻 泽责藻糟蚤枣蚤糟蚤贼蚤藻泽 燥枣 枣葬皂蚤造赠 员 哉郧栽泽 早葬蚤灶藻凿 遭赠 凿燥皂葬蚤灶 泽憎葬责责蚤灶早
咱允暂 援 孕澡赠贼燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠袁 圆园园怨袁 苑园渊源冤院 源苑猿 原 源愿圆
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允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员缘袁圆怨渊怨冤院员远苑苑 耀 员远愿远
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