全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员员袁圆缘渊远冤院员员源愿 耀 员员缘远允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员员鄄园源鄄员怨摇 接受日期院圆园员员鄄园愿鄄员愿
基金项目院国家转基因生物新品种培育重大专项渊圆园园怨在载园愿园园缘鄄园员猿月冤曰 甘肃省农科院农业科技创新专项渊圆园员员郧粤粤杂园远鄄员员冤曰 甘肃省农科院农业
科技创新专项渊圆园园怨郧粤粤杂员远冤曰 甘肃省自然科学基金项目渊园愿园猿砸允在粤园源员冤 援
作者简介院欧巧明渊员怨苑苑鄄冤袁 男袁 甘肃靖远人袁 助研袁 硕士袁 从事植物生物技术及遗传改良研究遥 耘鄄皂葬蚤造院 燥怎择蚤葬燥皂蚤灶早岳 员远猿郾 糟燥皂
通讯作者院罗俊杰渊员怨远圆鄄冤袁 男袁 研究员袁 博士袁 耘鄄皂葬蚤造院 澡灶泽造躁躁蚤藻岳 员远猿郾 糟燥皂曰
陈玉梁渊员怨苑猿鄄冤袁 男袁 助研袁 博士袁 耘鄄皂葬蚤造院 枣藻灶扎蚤赠怎扎澡燥灶早岳 员远猿郾 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员员冤园远鄄员员源愿鄄园怨
基于悬浮细胞培养的半夏多倍体诱导研究院域援单细胞水平 悦韵蕴韵诱导及多倍体植株再生
欧巧明员 摇 岳春玲圆 摇 厚毅清员 摇 崔文娟员 摇 郑秀芳猿 摇 罗俊杰员 摇 陈玉梁员
渊员郾 甘肃省农业科学院生物技术研究所袁甘肃 兰州摇 苑猿园园苑园曰圆郾 兰州大学第一医院药剂科袁甘肃 兰州摇 苑猿园园园园曰
猿郾 河西学院农业与生物技术学院袁甘肃 张掖摇 苑猿源园园园冤
摘摇 要院在建立了高效的半夏悬浮细胞培养和植株再生体系的基础上袁本研究以悬浮细胞作为靶标材料袁
以秋水仙素渊悦韵蕴韵冤为多倍体诱导剂袁对 悦韵蕴韵诱导多倍体的适宜浓度等关键因素进行研究袁并在获得
多倍性细胞后袁经诱导分化和再生形成纯合的多倍体植株遥 结果显示袁园郾 园缘 耀 园郾 员园皂早 辕 皂造的 悦韵蕴韵处理
圆源澡袁可获得较好的多倍体细胞诱导效果袁多倍性细胞比率约为 苑源郾 圆园豫 袁并最终获得 员员 株纯和的半夏
多倍体幼苗袁根尖细胞染色体为 员园源 条袁是对照 缘源 条的 圆 倍袁目测诱变率可达 员源郾 园苑豫 耀 源远郾 园缘豫 袁多倍
体诱导率为 猿郾 愿缘豫 耀圆怨郾 苑远豫 袁嵌合体率为 员圆郾 愿愿豫 耀 员苑郾 远缘豫 遥 结果证明通过半夏等植物单细胞水平
多倍体诱导获得纯合的多倍体植株是一条可行且高效的多倍体诱导途径遥
关键词院半夏曰 悬浮细胞曰 单细胞水平曰 秋水仙素曰 多倍体曰 胚胎发生曰 植株再生
孕韵蕴再孕蕴韵陨阅 陨晕阅哉悦耘阅 韵云 孕蚤灶藻造造蚤葬 贼藻则灶葬贼葬 月粤杂耘阅 韵晕 杂哉杂孕耘晕阅耘阅
悦耘蕴蕴 悦哉蕴栽哉砸耘院 域援 陨晕阅哉悦栽陨韵晕 韵云 孕韵蕴再孕蕴韵陨阅 悦耘蕴蕴 月粤杂耘阅 韵晕 杂陨晕郧蕴耘鄄悦耘蕴蕴耘阅
蕴耘灾耘蕴 灾陨粤 悦韵蕴韵 粤晕阅 砸耘郧耘晕耘砸粤栽陨韵晕 韵云 孕韵蕴再孕蕴韵陨阅 孕蕴粤晕栽杂
韵哉 匝蚤葬燥鄄皂蚤灶早员 摇 再哉耘 悦澡怎灶鄄造蚤灶早圆 摇 匀韵哉 再蚤鄄择蚤灶早员 摇 悦哉陨 宰藻灶鄄躁怎葬灶员 摇 在匀耘晕郧 载蚤怎鄄枣葬灶早猿
蕴哉韵 允怎灶鄄躁蚤藻员 摇 悦匀耘晕 再怎鄄造蚤葬灶早员
渊员郾 月蚤燥鄄栽藻糟澡灶燥造燥早赠 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻袁 郧葬灶泽怎 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 蕴葬灶扎澡燥怎袁 郧葬灶泽怎摇 苑猿园园苑园曰
圆郾 栽澡藻 云蚤则泽贼 粤枣枣蚤造蚤葬贼藻凿 匀燥泽责蚤贼葬造 燥枣 蕴葬灶扎澡燥怎 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 蕴葬灶扎澡燥怎袁 郧葬灶泽怎摇 苑猿园园园曰
猿郾 阅藻责葬则贼皂藻灶贼 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 葬灶凿 月蚤燥鄄栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁 匀藻曾蚤 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 在澡葬灶早赠藻袁 郧葬灶泽怎摇 苑猿源园园园冤
粤遭泽贼则葬糟贼院月葬泽藻凿 燥灶 皂葬贼怎则藻 葬灶凿 藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼 泽蚤灶早造藻鄄糟藻造造藻凿 泽怎泽责藻灶泽蚤燥灶 糟怎造贼蚤增葬贼蚤燥灶 葬灶凿 责造葬灶贼 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 泽赠泽贼藻皂袁 泽怎泽责藻灶凿藻凿
糟藻造造泽 憎藻则藻 怎泽藻凿 葬泽 贼葬则早藻贼 皂葬贼藻则蚤葬造袁 噪藻赠 枣葬糟贼燥则泽 燥枣 责燥造赠责造燥蚤凿 蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶 增蚤葬 悦韵蕴韵袁 憎藻则藻 泽贼怎凿蚤藻凿 蚤灶 贼澡蚤泽 责葬责藻则援 匀燥皂燥扎赠早燥怎泽
责燥造赠责造燥蚤凿 责造葬灶贼泽 憎藻则藻 燥遭贼葬蚤灶藻凿 增蚤葬 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 葬灶凿 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 糟怎造贼怎则藻 葬枣贼藻则 责燥造赠责造燥蚤凿 糟藻造造 憎葬泽 燥遭贼葬蚤灶藻凿援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽
泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 遭藻贼贼藻则 蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠 燥枣 责燥造赠责造燥蚤凿 糟藻造造 憎葬泽 燥遭贼葬蚤灶藻凿 葬枣贼藻则 泽怎泽责藻灶凿藻凿 糟藻造造泽 憎葬泽 贼则藻葬贼藻凿 憎蚤贼澡 园郾 园缘 耀
园郾 员园皂早 辕 皂造 悦韵蕴韵援 砸葬贼蚤燥 燥枣 责燥造赠责造燥蚤凿 糟藻造造 憎葬泽 葬遭燥怎贼 苑源郾 圆园豫 援 耘造藻增藻灶 澡燥皂燥扎赠早燥怎泽 责燥造赠责造燥蚤凿 责造葬灶贼泽 燥枣 孕蚤灶藻造造蚤葬 贼藻则灶葬贼葬
憎葬泽 燥遭贼葬蚤灶藻凿 枣蚤灶葬造造赠 葬灶凿 蚤贼泽 糟藻造造 糟澡则燥皂燥泽燥皂藻 灶怎皂遭藻则 燥枣 则燥燥贼 贼蚤责 憎葬泽 员园源 憎澡蚤糟澡 憎葬泽 贼憎燥 贼蚤皂藻泽 燥枣 糟燥灶贼则燥造援 灾蚤泽怎葬造
皂怎贼葬早藻灶蚤糟 则葬贼藻 憎葬泽 员源郾 园苑豫 耀 源远郾 园缘豫 葬灶凿 蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶 则葬贼藻 燥枣 责燥造赠责造燥蚤凿 责造葬灶贼泽 憎葬泽 猿郾 愿缘豫 耀 圆怨郾 苑远豫 袁 葬灶凿 则葬贼藻 燥枣
糟澡蚤皂藻则葬 憎葬泽 员圆郾 愿愿豫 耀 员苑郾 远缘豫 援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 责则燥增藻凿 贼澡葬贼 蚤贼 憎葬泽 葬 增蚤葬遭造藻 葬灶凿 藻枣枣藻糟贼蚤增藻 责燥造赠责造燥蚤凿 蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶 葬责责则燥葬糟澡
憎澡蚤糟澡 泽怎泽责藻灶凿藻凿 糟藻造造 憎葬泽 蚤灶凿怎糟藻凿 蚤灶贼燥 责燥造赠责造燥蚤凿赠 糟藻造造 增蚤葬 悦韵蕴韵 葬灶凿 贼澡藻灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 葬灶凿 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 蚤灶贼燥
澡燥皂燥扎赠早燥怎泽 责燥造赠责造燥蚤凿泽援
愿源员员
摇 远 期 基于悬浮细胞培养的半夏多倍体诱导研究院域援单细胞水平 悦韵蕴韵诱导及多倍体植株再生
运藻赠 憎燥则凿泽院 孕蚤灶藻造造蚤葬 贼藻则灶葬贼葬 月则蚤藻贼援 曰 泽怎泽责藻灶凿藻凿 糟藻造造泽曰 泽蚤灶早造藻鄄糟藻造造藻凿 造藻增藻造曰 悦韵蕴韵曰 责燥造赠责造燥蚤凿曰 藻皂遭则赠燥早藻灶赠曰 责造葬灶贼
则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶
摇 摇 半夏渊孕蚤灶藻造造蚤葬 贼藻则灶葬贼葬 月则蚤藻贼援 冤干燥块茎是我国常见
的传统中药袁含有多种重要的药理学成分咱员袁圆暂 遥 目前袁
半夏野生资源数量逐渐减少袁而人工栽培半夏品种仍
难以保证其高繁殖系数和药材的高产优质咱猿暂 袁其商品
量仅能满足市场需求量的四分之一袁致使其成为重点
紧缺中药材咱源暂 遥
药用植物多倍体通常表现出产量尧抗逆性尧药用成
分含量提高等特征咱缘 耀 苑暂 遥 采用细胞培养和多倍体诱导
技术袁人工诱导和选育药用半夏纯合多倍体是有望缓
解上述问题的有效途径之一遥 目前袁半夏组织或细胞
离体培养已成为成熟技术袁利用植物分生组织诱导多
倍体的研究也已有较多报道咱愿 耀 员员暂 遥 然而这种基于整
体分生组织的多倍体诱导方法极易产生嵌合体袁且后
期筛选难度大以及可能发生回复突变咱员员暂 袁仍然是其多
倍体诱导的主要难点遥 笔者也曾在针对甘肃西河半
夏尧兰州百合等植物茎尖分生组织的秋水仙素
渊悦韵蕴韵冤诱导多倍体的前期研究中袁面临同样的问题
渊论文未发表冤遥 上述问题的原因是植物茎尖分生组
织是产生后续器官的源袁由多细胞组成袁具有野层冶结
构袁由于秋水仙素仅能作用和诱导外层细胞袁致使其形
成分生组织嵌合体咱员圆暂 遥 而未加倍的细胞在后期生长
分裂中因具有进化性优势袁致使多倍体细胞被包围尧湮
没甚至消失遥 倘若以悬浮单细胞作为靶标材料袁用适
宜的 悦韵蕴韵诱导加倍袁获得多倍性细胞后袁经诱导分化
和再生袁形成纯合的多倍体植株袁将是一条可行且高效
的多倍体诱导途径遥 虽然郭巧萍已采用此途径开展了
半夏多倍体诱导研究咱源暂 袁但半夏遗传背景复杂袁特别
是甘肃西河半夏具有其地域特色袁故相关研究缺乏足
够的借鉴性遥
本研究在建立高效的半夏悬浮细胞培养和植株再
生体系的基础上袁拟以其悬浮细胞为靶标材料袁通过对
适宜 悦韵蕴韵浓度尧处理时间等关键因素的筛选袁优化其
诱导加倍效果袁进而获得多倍体细胞袁并经诱导增殖尧
分化和植株再生袁进一步形成纯合多倍体植株袁以期为
利用半夏及相关植物进行悬浮细胞途径的多倍体诱导
等提供科学参考袁这对解决半夏药材紧缺及野生种质
资源保护尧缓和现有供需矛盾具有重要意义遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 供试材料
甘肃省西河半夏渊孕蚤灶藻造造蚤葬 贼藻则灶葬贼藻 月则藻蚤贼援 冤优良悬浮
细胞系遥
员郾 圆摇 试验方法
员郾 圆郾 员摇 悬浮单细胞的多倍体诱导摇 选取悬浮细胞系
种子袁采用液体培养基 月渊员 辕 圆酝杂 垣 园郾 缘皂早 辕 蕴 远 原 月粤 垣
员郾 园皂早 辕 蕴 圆袁源 原 阅冤袁蔗糖 猿豫 袁责匀 远郾 园袁添加终浓度为 园
渊对照组冤尧园郾 园缘尧园郾 员尧园郾 缘尧员郾 园皂早 辕 皂造 的 悦韵蕴韵 溶液袁
圆猿益 依 圆益袁转速 愿园则 辕 皂蚤灶袁黑暗下诱导处理 员圆 耀 源愿澡曰
此后于 员园园园则 辕 皂蚤灶 离心 缘皂蚤灶袁弃上清袁无菌水清洗 员
次袁再用相应培养液清洗 猿 次袁并调整细胞密度为 员郾 园
伊 员园源 个 辕 皂造袁低速振荡培养遥 培养过程中袁适时观测
细胞状况尧细胞密度尧活细胞率尧近圆形细胞率尧细胞分
裂率等指标袁并作显微拍摄遥
员郾 圆郾 圆摇 悬浮细胞的染色体倍性检测摇 参考张雪等咱员猿暂
报道的常规细胞染色体压片与 郧蚤藻皂泽葬染色方法渊略加
改进冤袁制备单细胞染色体临时压片袁在光学显微镜
渊源园 伊 员园 倍冤下观察染色体数目袁并作显微拍摄遥
员郾 圆郾 猿摇 多倍体细胞的增值和分化 摇 悬浮细胞系经 圆
耀 猿 次继代后袁圆园 耀 猿园则 辕 皂蚤灶 低速震荡培养袁待细胞分
裂增值为肉眼可见的细胞团时袁继代于液体培养基 悦
渊员 辕 圆酝杂 垣 园郾 缘皂早 辕 蕴 晕粤粤 垣 员郾 园皂早 辕 蕴 远 原 月粤冤后袁继续
低速或停止震荡袁温度 圆猿益 依圆益袁黑暗或光照 员圆澡 辕 凿袁
诱导细胞团增值袁直至愈伤组织团增大至 圆郾 园 耀
猿郾 园皂皂曰培养中适时观测细胞状态袁并作显微拍摄遥
员郾 圆郾 源摇 半夏多倍体愈伤组织分化与植株再生摇 上述
愈伤转接至分化培养基 阅 渊酝杂 垣 园郾 缘皂早 辕 蕴 晕粤粤 垣
员郾 园皂早 辕 蕴 远 原 月粤冤袁以诱导丛生芽袁温度 圆猿益 依 圆益袁光
照 员圆澡 辕 凿渊光强 员园园园 耀 圆园园园造曾冤袁约 猿园凿 后对其进行切
割分离袁并转接至生根培养基 云渊酝杂 垣 员郾 园皂早 辕 蕴 晕粤粤
垣园郾 缘皂早 辕 蕴 远 原 月粤冤袁相同条件下诱导生根袁直至获得
完整小植株遥 培养中适时观测愈伤分化率尧丛生芽诱
导率尧幼芽成苗率尧生根率等袁并适时观测多倍体再生
苗形态变异指标袁计算诱变率及嵌合体率遥 待幼苗长
至 猿郾 园 耀 缘郾 园糟皂 时袁适时根据其健康状况进行清水炼
苗袁缘 耀 远凿 后移栽至温室新鲜蛭石粉中袁常规光照尧保
湿袁并观测统计幼苗移栽成活率遥
员郾 圆郾 缘摇 半夏多倍体植株的倍性鉴定
员郾 圆郾 缘郾 员摇 形态学指标的测定摇 以正常半夏植株为对
照袁随机选取 缘 耀 员园 株半夏对照植株和变异植株袁分别
在同步移栽后 苑凿时调查其生物学特征和叶面积尧叶片
厚度尧叶柄长和粗度尧根长和粗度等形态学指标遥
员郾 圆郾 缘郾 圆摇 叶片气孔及保卫细胞叶绿体数的观测摇 按
怨源员员
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
常规叶片气孔观测方法袁选取相同培养状态下对照及
变异幼苗叶片 员园 耀 圆园 片袁撕取叶片下表皮制片袁在光
学显微镜渊员园 伊 源园 倍冤下观察叶片气孔尧保卫细胞及其
内部叶绿体袁并用测微尺测量气孔大小及密度尧保卫细
胞长度和宽度袁粗略计数保卫细胞内的叶绿体数袁并做
显微拍摄遥
员郾 圆郾 缘郾 猿摇 根尖细胞染色体计数摇 采用张雪等报道的
染色体压片与 郧蚤藻皂泽葬 染色方法咱员猿暂 袁剪取 员郾 园 耀 圆郾 园皂皂
的幼嫩根尖进行材料处理袁其余方法详见 员郾 圆郾 圆曰处理
后袁用解剖刀截取约 园郾 圆皂皂 长的根尖袁进行 郧蚤藻皂泽葬 染
色尧观察袁并做显微拍摄遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 不同 悦韵蕴韵浓度和处理时间对悬浮细胞生长状
态的影响
半夏悬浮细胞在添加不同浓度 悦韵蕴韵 的培养基 月
上培养 员圆 耀 源愿澡 后观测结果显示袁悦韵蕴韵 浓度及处理
时间对细胞状态尧细胞密度尧活细胞率尧近圆形细胞率
等有明显影响渊见表 员袁图 员尧圆冤遥
图 员摇 园 耀 员郾 园皂早 辕 皂造 悦韵蕴韵处理 圆源澡后 园凿及 园郾 员皂早 辕 皂造 悦韵蕴韵处理 圆源澡后 员园凿时的悬浮细胞状态
云蚤早援 员摇 栽澡藻 泽贼葬贼怎泽 燥枣 泽怎泽责藻灶凿藻凿 糟藻造造泽 燥灶 贼澡藻 园贼澡 凿葬赠 葬枣贼藻则 贼则藻葬贼藻凿 憎蚤贼澡 园 耀 员郾 园皂早 辕 皂造 悦韵蕴韵
葬灶凿 燥灶 贼澡藻 员园贼澡 凿葬赠 葬枣贼藻则 贼则藻葬贼藻凿 憎蚤贼澡 园郾 员皂早 辕 皂造 悦韵蕴韵 枣燥则 圆源澡
员 原 员尧员 原 圆尧员 原 猿尧员 原 源尧员 原 缘 分别示 园尧园郾 园缘尧园郾 员尧园郾 缘尧员郾 园皂早 辕 皂造 的 悦韵蕴韵 处理 圆源澡 后 园凿 时的细胞曰员 原 远尧员 原 苑尧员 原 愿尧员 原 怨尧员 原 员园 示
园郾 员皂早 辕 皂造的 悦韵蕴韵处理 圆源澡后恢复生长 员园凿时的细胞状态袁其中 员 原 苑 箭头示细胞絮状物缠绕成团袁员 原 愿尧员 原 员园 箭头示无核空壳死细
胞袁员 原 怨 箭头示质浓核大的胚性细胞袁可能属多倍性细胞遥 员 原 员尧员 原 圆 标尺为 远园园滋皂袁员 原 猿袁员 原 源 标尺为 猿园园滋皂袁员 原 缘 标尺为 员园园滋皂袁
员 原 远 标尺为 圆园园滋皂袁员 原 苑尧员 原 愿尧员 原 员园 标尺为 源园滋皂袁员 原 怨 标尺为 圆园滋皂遥
员 原 员袁 员 原 圆袁 员 原 猿袁 员 原 源 葬灶凿 员 原 缘院 贼澡藻 泽贼葬贼怎泽 燥枣 泽怎泽责藻灶凿藻凿 糟藻造造泽 贼则藻葬贼藻凿 圆源澡 憎蚤贼澡 园袁 园郾 园缘袁 园郾 员袁 园郾 缘袁 员郾 园皂早 辕 皂造 悦韵蕴韵曰 员 原 远袁 员 原 苑袁 员 原
愿袁 员 原 怨袁 员 原 员园院 贼澡藻 泽贼葬贼怎泽 燥枣 泽怎泽责藻灶凿藻凿 糟藻造造泽 燥灶 贼澡藻 员园贼澡 凿葬赠 葬枣贼藻则 贼则藻葬贼藻凿 圆源澡 憎蚤贼澡 园郾 员皂早 辕 皂造 悦韵蕴韵曰 员 原 苑院 贼澡藻 葬则则燥憎 泽澡燥憎藻凿 贼澡藻 糟葬噪蚤灶早 糟藻造造泽
枣燥则 憎蚤灶凿藻凿 遭赠 枣造燥糟曰 员 原 愿袁 员 原 员园院 葬则则燥憎泽 泽澡燥憎藻凿 泽澡藻造造 燥枣 泽藻藻凿造藻泽泽 凿藻葬凿 糟藻造造曰 员 原 怨院 贼澡藻 葬则则燥憎 泽澡燥憎藻凿 藻皂遭则赠燥早藻灶蚤糟 糟藻造造 憎蚤贼澡 贼澡蚤糟噪 糟赠贼燥责造葬泽皂 葬灶凿
造葬则早藻 灶怎糟造藻怎泽袁 蚤贼 责则燥遭葬遭造赠 遭藻造燥灶早泽 贼燥 责燥造赠责造燥蚤凿 糟藻造造援 员 原 员尧员 原 圆院 月葬则 越 远园园滋皂袁员 原 猿尧员 原 源院 月葬则 越 猿园园滋皂袁员 原 缘院 月葬则 越 圆园园滋皂袁员 原 远院 月葬则 越
圆园园滋皂袁员 原 苑尧员 原 愿尧员 原 员园院 月葬则 越 源园滋皂袁员 原 怨院 月葬则 越 圆园滋皂援
摇 摇 如图 员尧圆 所示袁在相同处理时间内袁随着 悦韵蕴韵浓
度的升高袁悬浮细胞系细胞密度尧活细胞率及近圆形细
胞率均呈急剧下降趋势遥 在 园郾 园缘皂早 辕 皂造 处理 员圆澡 时
分别较对照下降 怨愿郾 员怨豫 尧 员缘郾 猿源豫 尧 员园郾 园怨豫 袁而在
员郾 园皂早 辕 皂造 处理 员圆澡 时分别较对照下降 怨怨郾 怨愿豫 尧
苑愿郾 圆怨豫 尧源远郾 员愿豫 曰相同处理浓度随着处理时间的延
长袁悬浮细胞系的上述 猿 项指标也均呈急剧下降趋势袁
在 园郾 员皂早 辕 皂造 处理 员圆澡 时分别较对照下降 怨怨郾 怨愿豫 尧
苑愿郾 圆怨豫 尧源远郾 员愿豫 袁而在 员郾 园皂早 辕 皂造 处理 源愿澡 时分别较
对照下降 怨怨郾 怨怨豫 尧愿怨郾 员圆豫 尧愿怨郾 缘远豫 遥 而且随着处理
浓度和处理时间的增加袁细胞破碎增多袁内容物释放严
重袁均一性和分散度均降低袁细胞结团明显增加袁细胞
液浑浊度加重袁絮状物大量分散其中遥 特别是在
员郾 园皂早 辕 皂造的 悦韵蕴韵 处理 源愿澡 时袁细胞死亡率极高袁活
细胞率甚至降至 员园 耀 员园园 个 辕 皂造袁且受絮状物缠绕包
围袁活性下降严重遥
圆郾 圆摇 悦韵蕴韵处理后悬浮细胞的恢复生长及其生长状态
园郾 园缘 耀 园郾 缘皂早 辕 皂造 悦韵蕴韵 处理 员圆 耀 圆源澡 的悬浮细
胞袁去除 悦韵蕴韵后恢复生长 员园凿时袁可见细胞状态逐渐
恢复袁细胞密度尧活细胞率及近圆形细胞率逐渐上升袁
细胞分裂逐渐增多袁细胞系均一性和分散度得到明显
改善袁细胞内容物释放和结团状况逐渐得以缓解渊见
图 圆尧猿冤遥
园缘员员
摇 远 期 基于悬浮细胞培养的半夏多倍体诱导研究院域援单细胞水平 悦韵蕴韵诱导及多倍体植株再生
表 员摇 不同时间和不同浓度 悦韵蕴韵处理后 园凿和 员园凿时的细胞生长状态
栽葬遭造藻 员摇 悦藻造造 泽贼葬贼怎泽 燥灶 贼澡藻 园贼澡 葬灶凿 员园贼澡 凿葬赠 葬枣贼藻则 贼则藻葬贼藻凿 憎蚤贼澡 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 悦韵蕴韵 枣燥则 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼则藻葬贼藻凿 贼蚤皂藻
处理浓度
糟燥灶糟藻灶鄄
贼则葬贼蚤燥灶
渊皂燥造 辕 皂造冤
处理后
时间
贼蚤皂藻
葬枣贼藻则
贼则藻葬贼藻凿
渊凿冤
培养时间 糟怎造贼怎则葬造 贼蚤皂藻渊澡冤
员圆 圆源 源愿
细胞破
碎程度
糟藻造造泽
遭则燥噪藻灶
凿藻早则藻藻
细胞系
均一性
和分散度
糟藻造造
怎灶蚤枣燥则皂蚤贼赠
葬灶凿
凿蚤泽责藻则泽蚤燥灶
悬浮液
状态
泽贼葬贼怎泽 燥枣
泽怎泽责藻灶鄄
泽蚤燥灶
培养
有效性
贼则葬蚤灶蚤灶早
藻枣枣藻糟贼蚤增鄄
藻灶藻泽泽
细胞破
碎程度
糟藻造造泽
遭则燥噪藻灶
凿藻早则藻藻
细胞系
均一性
和分散度
糟藻造造
怎灶蚤枣燥则皂蚤贼赠
葬灶凿
凿蚤泽责藻则泽蚤燥灶
悬浮液
状态
泽贼葬贼怎泽 燥枣
泽怎泽责藻灶鄄
泽蚤燥灶
培养
有效性
贼则葬蚤灶蚤灶早
藻枣枣藻糟贼蚤增鄄
藻灶藻泽泽
细胞破
碎程度
糟藻造造泽
遭则燥噪藻灶
凿藻早则藻藻
细胞系
均一性
和分散度
糟藻造造
怎灶蚤枣燥则皂蚤贼赠
葬灶凿
凿蚤泽责藻则泽蚤燥灶
悬浮液
状态
泽贼葬贼怎泽 燥枣
泽怎泽责藻灶鄄
泽蚤燥灶
培养
有效性
贼则葬蚤灶蚤灶早
藻枣枣藻糟贼蚤增鄄
藻灶藻泽泽
园 园 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 姨 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 姨 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 姨
员园 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣
园援 园缘 园 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 姨 垣 垣 垣 垣 垣 垣 姨 垣 垣 垣 垣 姨
员园 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣
园援 员 园 垣 垣 垣 垣 垣 姨 原 垣 垣 姨 原 原 原 原 伊
员园 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 垣 原 原 原
园援 缘 园 原 垣 垣 姨 原 原 原鄢 原 伊 原 原 原 原 原 原 原 伊
员园 垣 垣 垣 原 原 原 原 原 原 原 原 原 原
员援 园 园 原 原 原 原 原 伊 原 原 原 原 原 原 原 伊 原 原 原 原 原 原 原 伊
员园 原 原 原 原 原 原 原 原 原 原 原 原 原 原 原 原 原 原 原
注院表 员 中所用培养基均为 月培养基袁表中数据和信息为至少两组平行试验结果的统计遥 培养有效性院野姨冶表示有效袁野 伊 冶表示无效曰细胞破碎程
度院野 垣 垣 冶表示极少袁野 垣 冶表示较少袁野 原 冶表示较多袁野 原 原 冶表示很多袁野 原 原 原 冶表示很严重曰细胞系均一性尧分散度院野 垣 垣 垣 冶表示好袁个别细胞结
团袁野 垣 垣 冶表示较好袁个别细胞结团袁野 垣 冶表示较好袁少量细胞结团袁野 原 冶表示较差袁细胞结团较多袁野 原 原 冶表示很差袁细胞结团严重曰悬浮液状态院
野 垣 垣 垣 冶表示色泽浅黄袁极少絮状物袁野 垣 垣 冶表示色泽浅黄袁少量絮状物袁野 垣 冶表示色泽浅黄袁较多絮状物袁野 原 冶表示色泽清亮袁较多絮状物袁野 原 原 冶
表示色泽透亮袁大量絮状物遥
晕燥贼藻院 月 皂藻凿蚤怎皂 憎藻则藻 怎泽藻凿 蚤灶 栽葬遭造藻 员郾 阅葬贼葬 葬灶凿 蚤灶枣燥则皂葬贼蚤燥灶 蚤灶 贼澡藻 贼葬遭造藻 员 憎藻则藻 则藻泽怎造贼泽 燥枣 贼憎燥 责葬则葬造造藻造 贼藻泽贼 葬贼 造藻葬泽贼援 耘枣枣藻糟贼蚤增藻灶藻泽泽 燥枣 泽怎泽责藻灶凿藻凿 糟怎造贼怎则藻院 野姨冶院
藻枣枣藻糟贼蚤增藻袁 野 伊 冶院 蚤灶增葬造蚤凿曰 阅藻早则藻藻 燥枣 糟藻造造 糟则怎泽澡蚤灶早院 野 垣 垣 冶院 枣藻憎 燥则 灶燥袁 野 垣 冶院 造藻泽泽袁 野 原 冶 院 皂燥则藻袁 野 原 原 冶院 葬 早则藻葬贼 皂葬灶赠袁 野 原 原 原 冶院 增藻则赠 泽藻则蚤燥怎泽曰
匀燥皂燥早藻灶藻蚤贼赠 葬灶凿 凿蚤泽责藻则泽蚤贼赠 燥枣 糟藻造造 造蚤灶藻泽院野 垣 垣 垣 冶院 憎藻造造 葬灶凿 泽藻增藻则葬造 糟葬噪蚤灶早 糟藻造造泽袁 野 垣 垣 冶院 葬遭燥增藻葬增藻则葬早藻 葬灶凿 泽藻增藻则葬造 糟葬噪蚤灶早 糟藻造造泽袁 野 垣 冶院 葬遭燥增藻葬增藻则葬早藻 葬灶凿 葬
枣藻憎 糟葬噪蚤灶早 糟藻造造泽袁 野 原 冶院 遭藻造燥憎葬增藻则葬早藻 葬灶凿 灶燥则藻 糟葬噪蚤灶早 糟藻造造泽袁 野 原 原 冶院 凿葬凿 葬灶凿 泽藻增藻则葬造 糟葬噪蚤灶早 糟藻造造泽曰 杂贼葬贼怎泽 燥枣 糟藻造造 泽怎泽责藻灶泽蚤燥灶院 野 垣 垣 垣 冶院 责葬造藻 赠藻造造燥憎 葬灶凿 贼燥燥
造蚤贼贼造藻袁 野 垣 垣 冶院 责葬造藻 赠藻造造燥憎 葬灶凿 葬 造蚤贼贼造藻 枣造燥糟袁 野 垣 冶院 责葬造藻 赠藻造造燥憎 葬灶凿 皂燥则藻 枣造燥糟袁 野 原 冶院 糟造藻葬则 葬灶凿 遭则蚤早澡贼 葬灶凿 皂燥则藻 枣造燥糟袁 野 原 原 冶院 糟造藻葬则 葬灶凿 遭则蚤早澡贼 葬灶凿 葬 早则藻葬贼
择怎葬灶贼蚤贼赠 枣造燥糟援
恢复生长 员园凿时袁相同处理时间内随着 悦韵蕴韵 浓
度的升高及相同处理浓度随着处理时间的延长袁悬浮
系上述 猿 项指标均呈现急剧下降趋势渊见图 圆袁猿冤袁细
胞状态虽略有恢复袁但细胞形态多样袁细胞系均一性和
分散度仍然较低渊见表 员冤遥 其中细胞密度较恢复生长
园凿时增加幅度较大袁介于 苑苑郾 愿猿豫 耀 员园园郾 苑猿豫之间曰而
活细胞率及近圆形细胞率增加幅度较小袁介于 愿郾 怨怨豫
耀员源郾 缘员豫之间曰活细胞率在 园郾 缘 耀 员郾 园皂早 辕 皂造 的 悦韵蕴韵
处理 源愿澡后恢复生长 员园凿时较 园凿时仍在降低袁分别降
低 缘郾 园圆豫 尧愿郾 怨怨豫 曰近圆形细胞率在 园郾 缘 耀 员郾 园皂早 辕 皂造
的 悦韵蕴韵处理 员圆 耀 源愿澡 后恢复生长 员园凿 时较 园凿 时也
仍在降低袁园郾 缘皂早 辕 皂造 的 悦韵蕴韵 处理 员圆澡 后恢复生长
员园凿时较 园凿 时降低 猿郾 猿源豫 袁园郾 缘 耀 员郾 园皂早 辕 皂造 的 悦韵蕴韵
处理 圆源 耀 源愿澡后恢复生长 员园凿 时较 园凿 时降低 员郾 园源豫
耀怨郾 园源豫 遥
另外袁悬浮细胞在 园郾 园缘 耀 园郾 员皂早 辕 皂造的 悦韵蕴韵处理
员圆 耀 源愿澡后袁恢复生长 员园凿时仍需要 圆 耀 猿 次的继代恢
复生长才能达到处理前的状态遥 而在 园郾 缘 耀 员郾 园皂早 辕 皂造
的 悦韵蕴韵处理 圆源 耀 源愿澡 的范围内袁虽然细胞密度仍然
有所增加袁但单细胞状态难以恢复渊见图 员冤袁活细胞率
及近圆形细胞率没有增加袁甚至在降低袁细胞分裂很
少袁细胞系均一性和分散度也未得到改善袁细胞内容物
释放和结团状况仍很严重袁最终成为无效培养系遥 上
述结果说明处理后细胞仍在不断分裂袁但由于 悦韵蕴韵
伤害的持续和遗留袁仍在导致细胞死亡和裂解遥 选取
可有效恢复生长的 园 耀 园郾 员园皂早 辕 皂造的 悦韵蕴韵 处理 员圆澡尧
园 耀 园郾 园缘皂早 辕 皂造的 悦韵蕴韵处理 圆源澡及 园 耀 园郾 园员皂早 辕 皂造 的
悦韵蕴韵处理 源愿澡的悬浮细胞系进行单细胞增殖与分化
培养遥 后续试验均采用 园郾 员园皂早 辕 皂造 的 悦韵蕴韵 处理
圆源澡遥
圆郾 猿摇 多倍体细胞的染色体倍性检测
经细胞染色体倍性鉴定显示袁变异细胞较对照体
积增大袁显微镜观察临时压片发现袁半夏悬浮细胞染色
体数为 缘圆 条袁而获得的诱导变异的悬浮细胞染色体数
为 员园源 条渊见图 源冤遥 但也存在原倍性细胞袁仍为原倍
性和多倍性细胞的混合体袁多倍性细胞率约为
苑源郾 圆园豫 曰观察中未发现更多染色体数的多倍体细胞遥
圆郾 源摇 多倍体细胞的增值和分化
继代恢复后的悬浮细胞系袁在降低震荡转速渊圆园
员缘员员
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
图 圆摇 不同时间和不同浓度 悦韵蕴韵处理后 园凿时悬浮
细胞系细胞密度尧活细胞率尧近圆形细胞率的比较
云蚤早援 圆摇 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 糟藻造造 凿藻灶泽蚤贼赠袁 增蚤葬遭造藻
糟藻造造 则葬贼藻 葬灶凿 泽怎遭糟蚤则糟怎造葬则 糟藻造造 则葬贼藻 燥枣 园凿 糟藻造造 造蚤灶藻泽
贼则藻葬贼藻凿 憎蚤贼澡 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 悦韵蕴韵
枣燥则 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼蚤皂藻
细胞密度低于 员郾 园 伊 员园猿 袁活细胞率和近圆形细胞率低于 圆园豫认为
是无效培养遥 数据经 阅怎灶糟葬灶爷 泽 新复极差测验渊孕 约 园郾 园缘 和 孕 约
园郾 园员冤袁图中每列标注的小写字母不同表示在 孕 越 园郾 园缘 水平上差异
显著曰大写字母不同表示在 孕 越 园郾 园员 水平上差异极显著遥 下图同遥
陨贼 憎葬泽 则藻早葬则凿藻凿 葬泽 增燥蚤凿 糟怎造贼怎则藻 憎澡藻灶 糟藻造造 凿藻灶泽蚤贼赠 憎葬泽 造燥憎藻则 贼澡葬灶 员郾 园 伊
员园猿 葬灶凿 增蚤葬遭造藻 糟藻造造泽 则葬贼藻 葬灶凿 泽怎遭糟蚤则糟怎造葬则 糟藻造造 则葬贼藻 憎藻则藻 造藻泽泽 贼澡葬灶 圆园豫 援
阅葬贼葬 憎葬泽 葬灶葬造赠扎藻凿 遭葬泽藻凿 燥灶 葬 阅怎灶糟葬灶爷 泽 贼藻泽贼 渊 孕 约 园郾 园缘 葬灶凿 孕 约
园郾 园员冤袁 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 造蚤贼贼造藻 造藻贼贼藻则泽 则藻责则藻泽藻灶贼 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 园郾 园缘
造藻增藻造袁 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟葬责蚤贼葬造 造藻贼贼藻则泽 则藻责则藻泽藻灶贼 增藻则赠 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼
园郾 园员 造藻增藻造援 栽澡藻 泽葬皂藻 葬泽 枣燥造造燥憎蚤灶早 枣蚤早怎则藻援
耀 猿园则 辕 皂蚤灶冤继续培养 源 耀 远凿 后袁可见对照和处理悬浮
细胞系中细胞分裂逐渐增多袁部分细胞分裂尧增值成 猿
耀 缘 个细胞的细胞团袁呈近圆形或不规则形状渊见图
图 猿摇 不同时间和不同浓度 悦韵蕴韵处理后恢复生长 员园凿
时悬浮细胞系细胞密度尧活细胞率尧
近圆形细胞率的比较
云蚤早援 猿摇 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 糟藻造造 凿藻灶泽蚤贼赠袁 增蚤葬遭造藻 糟藻造造
则葬贼藻 葬灶凿 泽怎遭糟蚤则糟怎造葬则 糟藻造造 则葬贼藻 燥枣 员园贼澡 凿葬赠 糟藻造造 造蚤灶藻泽
贼则藻葬贼藻凿 憎蚤贼澡 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 悦韵蕴韵
枣燥则 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼蚤皂藻
员冤曰至对数生长期后期袁在对照组和处理组中均可观
察到较多的标志着多细胞胚胎发生的多细胞复合体和
标志着单细胞胚胎发生的原胚细胞袁在细胞生长状态
及细胞分裂等方面也无明显差异遥 由于单细胞胚胎发
生的全程跟踪观察较难袁未观察到细胞原胚后期体胚
形成过程遥
上述悬浮细胞系在 员源 耀 员远凿后转接至液体培养基
悦袁继续低速震荡培养或停止震荡袁可见悬浮细胞团继
续增殖袁并形成肉眼可见的细胞团曰员园凿 后细胞团块大
量粘在培养瓶壁袁培养液逐渐浑浊尧粘稠曰处理组细胞
系中单细胞尧两细胞尧多细胞聚合体百分率分别较对照
圆缘员员
摇 远 期 基于悬浮细胞培养的半夏多倍体诱导研究院域援单细胞水平 悦韵蕴韵诱导及多倍体植株再生
略低袁这可能与 悦韵蕴韵的毒害残留有关曰解剖镜观察显
示袁细胞团呈亮白色袁其表面出现明显的致密颗粒状突
起袁这是悬浮细胞团发生分化袁器官原基开始出现的特
征遥 员远 耀 员愿凿时袁愈伤组织团即可增大至直径约为 园郾 缘
耀 猿郾 园皂皂袁呈亮白色或淡黄色袁此时可转接进入丛生芽
诱导阶段遥
图 源摇 半夏对照组和处理组的细胞染色体数目比较
云蚤早援 源摇 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 糟澡则燥皂燥泽燥皂藻泽 燥枣 糟燥灶贼则燥造 葬灶凿 增葬则蚤葬灶贼
泽怎泽责藻灶凿藻凿 糟藻造造泽 燥枣 孕援 贼藻则灶葬贼葬
源 原 员尧源 原 圆院半夏对照悬浮细胞染色体袁染色体数目约为 缘圆 条渊源园园 伊 冤曰源 原 猿院半夏变异悬浮细胞染色体袁染色体
数目约为 员园源 条渊源园园 伊 冤曰源 原 源院染色体数目约为 缘圆 条和 员园源 条的细胞混合体渊源园园 伊 冤遥
源 原 员袁 源 原 圆院 贼澡藻 糟澡则燥皂燥泽燥皂藻泽 燥枣 糟燥灶贼则燥造 泽怎泽责藻灶凿藻凿 糟藻造造泽袁 贼澡藻 灶怎皂遭藻则 燥枣 糟澡则燥皂燥泽燥皂藻泽 蚤泽 缘圆 渊源园园 伊 冤曰 源 原 猿院 贼澡藻
糟澡则燥皂燥泽燥皂藻泽 燥枣 增葬则蚤葬灶贼 泽怎泽责藻灶凿藻凿 糟藻造造泽袁 贼澡藻 灶怎皂遭藻则 燥枣 糟澡燥皂燥泽燥皂藻泽 蚤泽 员园源渊源园园 伊 冤曰 源 原 源院 糟藻造造 皂蚤曾贼怎则藻 憎蚤贼澡 缘圆 葬灶凿 员园源
糟澡则燥皂燥泽燥皂藻泽渊源园园 伊 冤 援
表 圆摇 对照及处理组半夏悬浮细胞增殖与分化尧丛生芽诱导及生根培养的比较
栽葬遭造藻 圆摇 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶 葬灶凿 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 燥枣 泽怎泽责藻灶凿藻凿 糟藻造造袁 糟造怎泽贼藻则藻凿 遭怎凿泽
蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶 葬灶凿 则燥燥贼蚤灶早 糟怎造贼怎则藻 燥枣 孕蚤灶藻造造蚤葬 贼藻则灶葬贼藻
材料
皂葬贼藻则蚤葬造
悬浮细胞增殖培养
责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶 糟怎造贼怎则藻 燥枣 泽怎泽责藻灶凿藻凿 糟藻造造
丛生芽诱导培养
蚤灶凿怎糟蚤灶早 糟造怎泽贼藻则藻凿 遭怎凿泽
生根培养
则燥燥贼蚤灶早 糟怎造贼怎则藻
单细胞
百分率
责藻则糟藻灶贼葬早藻 燥枣
泽蚤灶早造藻鄄糟藻造造藻凿
渊豫 冤
两细胞聚合体
百分率
责藻则糟藻灶贼葬早藻 燥枣
贼憎燥鄄糟藻造造藻凿
责燥造赠皂藻则渊豫 冤
多细胞聚合体
百分率
责藻则糟藻灶贼葬早藻
燥枣 皂葬灶赠鄄糟藻造造藻凿
责燥造赠皂藻则渊豫 冤
愈伤分化率
凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶
则葬贼藻 燥枣
糟葬造造怎泽渊豫 冤
丛生芽诱导率
蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶 则葬贼藻
燥枣 糟造怎泽贼藻则藻凿
遭怎凿泽渊豫 冤
幼芽
成苗率
泽藻藻凿造蚤灶早 则葬贼藻
燥枣 责造怎皂怎造藻渊豫 冤
幼苗生根率
则燥燥贼蚤灶早 则葬贼藻
渊豫 冤
移栽成活率
贼则葬灶泽责造葬灶贼蚤灶早
泽怎则增蚤增葬造
则葬贼藻渊豫 冤
对照组 糟燥灶贼则燥造 苑源郾 园苑 员苑郾 远猿 愿郾 园源 怨源郾 源远 猿猿苑郾 源圆 怨园郾 苑缘 怨愿郾 圆远 怨苑郾 怨员
处理组 贼则藻葬贼皂藻灶贼 远缘郾 缘远 员圆郾 苑愿 远郾 怨缘 怨员郾 园愿 猿园怨郾 源苑 苑愿郾 缘缘 怨缘郾 源园 怨愿郾 愿猿
注院表中悬浮细胞培养采用培养基 悦袁丛生芽诱导采用培养基 阅袁生根培养采用培养基 云遥
晕燥贼藻院 阅 皂藻凿蚤怎皂 憎葬泽 怎泽藻凿 贼燥 蚤灶凿怎糟藻 糟造怎泽贼藻则藻凿 遭怎凿泽袁 云 皂藻凿蚤怎皂 憎葬泽 怎泽藻凿 蚤灶 则燥燥贼蚤灶早 糟怎造贼怎则藻袁 皂藻凿蚤怎皂 悦 憎葬泽 怎泽藻凿 蚤灶 泽怎泽责藻灶凿藻凿 糟藻造造 糟怎造贼怎则藻援
圆郾 缘摇 悬浮愈伤组织分化与植株再生
选取上述 圆郾 园皂皂 左右对照与处理悬浮愈伤组织
团袁转移至丛生芽诱导培养基 阅 后袁愈伤表面很快形
成绿芽点袁并层层叠起渊见表 圆尧图 缘冤袁显示出极强分
化能力曰绿芽点不断分化发育成密集丛生芽曰对照和处
理愈伤分化率分别为平均 怨源郾 源远豫 尧怨员郾 园愿豫 袁丛生芽
诱导率分别为 猿猿苑郾 源圆豫 尧猿园怨郾 源苑豫 遥 对丛生芽适时切
割转接后袁延长培养可形成健壮幼苗袁成苗率分别为
怨园郾 苑缘豫 尧苑愿郾 缘缘豫 遥 上述幼苗中少部分可直接生根袁未
直接生根幼苗转接至 粤员尧云 生根培养基后袁均可快速
诱导生根袁进一步形成完整小植株袁其幼苗生根率分别
为 怨愿郾 圆远豫 尧怨缘郾 源园豫 曰再经清水炼苗后移栽至温室营
养钵袁即可迅速生长袁且发育良好袁其移栽成活率分别
为 怨苑郾 怨员豫 尧怨愿郾 愿猿豫 曰移栽苗在 猿园凿 后其地上部分逐
渐枯黄袁但根部生长良好袁并出现块茎遥
圆郾 远摇 半夏多倍体植株的倍性鉴定
圆郾 远郾 员摇 形态学比较摇 摇 半夏变异植株形态特征和对
照植株有明显的差异渊见表 猿尧图 缘冤遥 与对照植株相
比袁半夏变异植株叶柄尧根系粗壮袁叶片增厚袁叶面积增
大袁叶色加深遥 其中株高为对照的 圆缘苑郾 员源豫 袁叶柄直
径为对照的 圆园愿郾 源苑豫 袁叶片厚度为对照的 员源苑郾 猿苑豫 袁
叶面积为对照的 圆愿远郾 员圆豫 遥 但叶片数和根系分枝数
减少袁生长期延长遥 另外袁相同培养时间内袁变异植株
离体块茎更大袁直径和重量分别为对照的 员园怨郾 愿源豫和
员缘源郾 缘缘豫 遥
圆郾 远郾 圆摇 叶片气孔观测及保卫细胞内叶绿体数量的比
较摇 半夏叶片表皮气孔观测显示袁与对照的叶面特征
相比袁多倍体植株叶片气孔器长尧宽均显著大于对照袁
多倍体气孔器密度变小渊见表 源尧图 远冤遥 多倍体保卫
细胞叶绿体数也显著多于对照遥 半夏变异植株叶片气
孔大小尧气孔保卫细胞长度尧宽度分别是对照的
员愿怨郾 愿怨豫 尧员猿远郾 愿愿豫 尧员圆源郾 怨源豫 袁均大于其对照遥 但对
猿缘员员
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
照植株叶片气孔密度 猿苑 依 源郾 园 个 辕 皂皂圆袁变异植株气孔
密度 圆员 依 圆郾 远缘 个 辕 皂皂圆袁仅为对照的 缘远郾 苑远豫 袁明显小
于对照植株遥 另外袁半夏变异植株叶片气孔保卫细胞
的叶绿体数目明显多于其对照袁为对照植株的
员圆猿郾 苑圆豫 遥
图 缘摇 半夏对照和处理组源于悬浮细胞的愈伤分化尧丛生芽形成尧再生幼苗尧移栽及小球茎的产生
云蚤早援 缘摇 悦葬造造怎泽 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 枣则燥皂 泽怎泽责藻灶凿藻凿 糟藻造造袁 蚤灶凿怎糟蚤灶早 糟造怎泽贼藻则藻凿 遭怎凿泽袁 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 泽藻藻凿造蚤灶早泽袁
贼则葬灶泽责造葬灶贼蚤灶早 泽藻藻凿造蚤灶早泽袁 泽皂葬造造 贼怎遭藻则泽 燥枣 糟燥灶贼则燥造 葬灶凿 贼则藻葬贼皂藻灶贼 早则燥怎责
缘 原 员院源于悬浮细胞的愈伤组织曰缘 原 圆院愈伤组织分化成绿芽点曰缘 原 猿院丛生芽曰缘 原 源尧缘 原 缘院变异幼芽曰缘 原 远院再生变异幼苗曰缘 原 苑院
变异幼苗根部曰缘 原 愿尧缘 原 怨尧缘 原 员园院移栽的对照和多倍体幼苗曰缘 原 员员院对照和多倍体幼苗产生的小球茎遥
缘 原 员院 葬造造怎泽 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 枣则燥皂 泽怎泽责藻灶凿藻凿 糟藻造造曰 缘 原 圆院 早则藻藻灶 遭怎凿 责燥蚤灶贼泽 枣则燥皂 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 糟葬造造怎泽曰 缘 原 猿院 蚤灶凿怎糟蚤灶早 糟造怎泽贼藻则藻凿 遭怎凿泽曰 缘 原
源袁 缘 原 缘院 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 遭怎凿泽曰 缘 原 远院 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 则藻早则燥憎贼澡 泽藻藻凿造蚤灶早泽曰 缘 原 苑院 则燥燥贼 燥枣 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 泽藻藻凿造蚤灶早泽曰 缘 原 愿袁 缘 原 怨袁 缘 原 员园院 贼则葬灶泽责造葬灶贼蚤灶早
泽藻藻凿造蚤灶早泽 燥枣 糟燥灶贼则燥造 葬灶凿 贼则藻葬贼皂藻灶贼 早则燥怎责曰 缘 原 员员院 泽皂葬造造 贼怎遭藻则泽 枣则燥皂 泽藻藻凿造蚤灶早泽 燥枣 糟燥灶贼则燥造 葬灶凿 贼则藻葬贼皂藻灶贼 早则燥怎责援
表 猿摇 半夏对照和处理组植株外部形态特征的比较
栽葬遭造藻 猿摇 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 藻曾贼藻则灶葬造 皂燥则责澡燥造燥早蚤糟葬造 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 燥枣 糟燥灶贼则燥造 葬灶凿 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼 燥枣 孕蚤灶藻造造蚤葬 贼藻则灶葬贼藻
材料
皂葬贼藻则蚤葬造
株高
澡藻蚤早澡贼
渊糟皂冤
叶柄直径
责藻贼蚤燥造藻泽 凿蚤葬皂藻贼藻则
渊皂皂冤
叶片厚度
造藻葬枣 贼澡蚤糟噪灶藻泽泽
渊滋皂冤
叶面积
造藻葬枣 葬则藻葬
渊皂皂圆冤
离体块茎 蚤灶 增蚤贼则燥 贼怎遭藻则
直径 凿蚤葬皂藻贼藻则
渊皂皂冤
重量 憎藻蚤早澡贼
渊早冤
对照组 糟燥灶贼则燥造 源郾 圆园 依 园郾 苑缘粤葬 园郾 缘怨 依 园郾 园员粤葬 园郾 员怨 依 园郾 园员粤葬 员远园郾 源圆 依 缘园郾 圆缘粤葬 远郾 源园 依 圆郾 怨缘粤葬 园郾 员员 依 园郾 园苑粤葬
处理组 贼则藻葬贼皂藻灶贼 员园郾 愿园 依 员郾 远员月遭 员郾 圆猿 依 园郾 员园月遭 园郾 圆愿 依 园郾 园远粤遭 源缘怨郾 园园 依 员源源郾 苑园月遭 苑郾 园猿 依 猿郾 远怨粤葬 园郾 员苑 依 园郾 园苑粤葬
注院数据经 阅怎灶糟葬灶爷泽新复极差测验渊孕 约 园郾 园缘 和 孕 约 园郾 园员冤袁图中每列标注的小写字母不同表示在 孕 越 园郾 园缘 水平上差异显著曰大写字母不同表示在 孕
越 园郾 园员 水平上差异极显著遥
晕燥贼藻院 阅葬贼葬 憎葬泽 葬灶葬造赠扎藻凿 遭葬泽藻凿 燥灶 葬 阅怎灶糟葬灶爷 泽 贼藻泽贼 渊孕 约 园郾 园缘 葬灶凿 孕 约 园郾 园员冤袁 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 造蚤贼贼造藻 造藻贼贼藻则泽 则藻责则藻泽藻灶贼 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 园郾 园缘 造藻增藻造袁 凿蚤枣枣藻则藻灶贼
糟葬责蚤贼葬造 造藻贼贼藻则泽 则藻责则藻泽藻灶贼 增藻则赠 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 园郾 园员 造藻增藻造援 栽澡藻 泽葬皂藻 葬泽 枣燥造造燥憎蚤灶早 贼葬遭造藻援
表 源摇 半夏对照植株和变异植株叶片气孔尧保卫细胞的比较
栽葬遭造藻 源摇 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 造藻葬枣 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 燥枣 糟燥灶贼则燥造 责造葬灶贼 葬灶凿 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼 燥枣 孕蚤灶藻造造蚤葬 贼藻则灶葬贼藻
材料
皂葬贼藻则蚤葬造
气孔大小
泽贼燥皂葬 泽蚤扎藻
渊滋皂圆 冤
气孔密度
泽贼燥皂葬 凿藻灶泽蚤贼赠
渊个 辕 皂皂圆冤
保卫细胞大小 早怎葬则凿 糟藻造造 泽蚤扎藻
长度
糟藻造造 造藻灶早贼澡 渊滋皂冤
宽度
糟藻造造 凿蚤葬皂藻贼藻则渊滋皂冤
保卫细胞叶绿体数目
糟澡造燥则燥责造葬泽贼 灶怎皂遭藻则
渊个冤
对照株 源苑郾 员远 依 源郾 缘愿愿粤葬 猿苑 依 源郾 园园园粤葬 苑郾 愿怨 依 园郾 圆员猿粤葬 源郾 园缘 依 园郾 员员圆粤葬 猿猿郾 园园 依 缘郾 员怨远粤葬
变异株 愿怨郾 缘缘 依 员源郾 缘猿缘月遭 圆员 依 圆郾 远缘员月遭 员园郾 愿园 依 园郾 愿苑猿月遭 缘郾 园远 依 园郾 源员缘粤遭 源园郾 愿猿 依 猿郾 远园员粤遭
注院为了减少取样误差袁提高准确性袁对同一部位保卫细胞进行长度比较遥
晕燥贼藻院 栽澡藻 造藻灶早贼澡 燥枣 贼澡藻 早怎葬则凿 糟藻造造泽 葬贼 贼澡藻 泽葬皂藻 责燥泽蚤贼蚤燥灶 憎葬泽 糟燥皂责葬则藻凿 贼燥 则藻凿怎糟藻 贼澡藻 泽葬皂责造蚤灶早 藻则则燥则 葬灶凿 蚤皂责则燥增藻 葬糟糟怎则葬糟赠援
圆郾 远郾 猿摇 根尖细胞染色体压片观察摇 根尖细胞染色体
倍性鉴定显示袁对照根尖染色体数为 缘圆 条袁而变异植
株根尖染色体数为 员园源 条渊见图 远冤袁是对照的 圆 倍曰但
仍发现个别变异植株根尖存在嵌合体遥 这与前期悬浮
细胞倍性鉴定尧植株目测变异和气孔观察存在嵌合体
的结果一致遥
圆郾 苑摇 多倍体植株的诱变效果
本研究结果显示袁所获半夏变异植株在目测诱变
率尧经鉴定的多倍体诱变率及嵌合体率方面有一定差
异渊见表 缘冤遥
悬浮细胞系经 园郾 园缘皂早 辕 皂造 悦韵蕴韵处理 员圆 耀 源愿澡 和
园郾 员园皂早 辕 皂造的 悦韵蕴韵处理 员圆 耀 圆源澡明显具有较好的诱
源缘员员
摇 远 期 基于悬浮细胞培养的半夏多倍体诱导研究院域援单细胞水平 悦韵蕴韵诱导及多倍体植株再生
图 远摇 半夏对照及变异植株气孔及根尖染色体的比较
云蚤早援 远摇 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 泽贼燥皂葬泽 葬灶凿 糟澡则燥皂燥泽燥皂藻泽 燥枣
糟燥灶贼则燥造 葬灶凿 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼 燥枣 孕蚤灶藻造造蚤葬 贼藻则灶葬贼藻
远 原 员院半夏对照植株袁标尺为 源滋皂曰远 原 圆尧远 原 猿院变异植株袁标尺为
源滋皂曰远 原 源院半夏对照植株根尖细胞染色体袁染色体数目 缘圆 条渊远园园
伊 冤曰远 原 缘院半夏变异植株根尖细胞染色体袁染色体数目 员园源 条渊远园园
伊 冤遥
远 原 员院 糟燥灶贼则燥造 责造葬灶贼 燥枣 孕蚤灶藻造造蚤葬 贼藻则灶葬贼藻袁 月葬则 越 源滋皂曰 远 原 圆尧远 原 猿院 增葬则蚤葬贼蚤燥灶
责造葬灶贼 燥枣 孕蚤灶藻造造蚤葬 贼藻则灶葬贼藻袁 月葬则 越 源滋皂曰 远 原 源院 贼澡藻 糟澡则燥皂燥泽燥皂藻泽 燥枣 糟燥灶贼则燥造
责造葬灶贼袁 贼澡藻 灶怎皂遭藻则 燥枣 糟澡则燥皂燥泽燥皂藻泽 蚤泽 缘圆 渊 远园园 伊 冤曰 远 原 缘院 贼澡藻
糟澡则燥皂燥泽燥皂藻泽 燥枣 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼袁 贼澡藻 灶怎皂遭藻则 燥枣 糟澡则燥皂燥泽燥皂藻泽 蚤泽 员园源渊远园园
伊 冤援
导效果曰而 园郾 员园皂早 辕 皂造 的 悦韵蕴韵 处理 员圆 耀 圆源澡 和 园郾 缘
耀 员郾 园皂早 辕 皂造的 悦韵蕴韵处理 员圆 耀 源愿澡 最终成为无效培
养遥 园郾 园缘 耀 园郾 员园皂早 辕 皂造的 悦韵蕴韵处理不同时间下的诱
变效果存在较明显的差异遥 园郾 园缘皂早 辕 皂造 悦韵蕴韵 短时间
渊员圆澡冤处理的目测诱变率尧多倍体诱变率均较低渊多倍
体诱变率仅为 猿郾 愿缘豫 冤袁但其嵌合体率也相对较低曰长
时间渊源愿澡冤处理的目测诱变率尧多倍体诱变率均较高
渊分别为 猿园郾 苑源豫 尧圆猿郾 园缘豫 冤袁但其嵌合体率也相对较
高渊员苑郾 远缘豫 冤遥 园郾 员园皂早 辕 皂造 的 悦韵蕴韵 短时间渊员圆澡冤处
理的目测诱变率尧多倍体诱变率均较低渊多倍体诱变
率仅为 苑郾 远缘豫 冤袁但其嵌合体率也相对较低曰圆源澡 处理
的目测诱变率尧多倍体诱变率均较高 渊分别为
猿员郾 源愿豫 尧 圆怨郾 苑远豫 冤袁 但 其 嵌 合 体 率 也 相 对 较 高
渊员远郾 怨圆豫 冤遥 而对比 园郾 园缘皂早 辕 皂造 和 园郾 员园皂早 辕 皂造 的
悦韵蕴韵 相同时间处理下的诱变效果袁处理 员圆澡 时袁
园郾 员园皂早 辕 皂造的 悦韵蕴韵处理下目测诱变率和多倍体诱变
率相对较高袁但其嵌合体率也较高曰处理 圆源澡 时袁
园郾 员园皂早 辕 皂造的 悦韵蕴韵处理下目测诱变率相对较低袁但
其多倍体诱变率和嵌合体率较高袁分别为 圆怨郾 苑远豫和
员远郾 怨圆豫 遥
半夏悬浮细胞 悦韵蕴韵诱导多倍体的适宜处理方案
是 园郾 园缘 耀 园郾 员园皂早 辕 皂造 的 悦韵蕴韵 处理 圆源澡袁多倍体诱变
率最高可达 圆怨郾 苑远豫 遥
表 缘摇 不同处理浓度和处理时间下的目测诱变率尧
多倍体诱导率及嵌合体率的比较
栽葬遭造藻 缘摇 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 增蚤泽怎葬造 皂怎贼葬早藻灶蚤糟 则葬贼藻袁 蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶
则葬贼藻 燥枣 责燥造赠责造燥蚤凿赠 葬灶凿 则葬贼藻 燥枣 糟澡蚤皂藻则葬泽 怎灶凿藻则 凿蚤枣枣藻则藻灶贼
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 燥枣 悦韵蕴韵 葬灶凿 责则燥糟藻泽泽蚤灶早 贼蚤皂藻
处理浓度
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶
渊皂早 辕 皂造冤
处理时间
贼蚤皂藻
渊澡冤
目测诱变率
增蚤泽怎葬造 皂怎贼葬早藻灶蚤糟
则葬贼藻渊豫 冤
多倍体诱导率
蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶
则葬贼藻 燥枣
责燥造赠责造燥蚤凿赠渊豫 冤
嵌合体率
则葬贼藻 燥枣
糟澡蚤皂藻则葬泽 渊豫 冤
园 园 耀 源愿 园 园 园
员圆 员源郾 园苑 猿郾 愿缘 员猿郾 远源
园郾 园缘 圆源 源远郾 园缘 员苑郾 怨猿 员圆郾 愿愿
源愿 猿园郾 苑源 圆猿郾 园缘 员苑郾 远缘
园郾 员园 员圆 圆愿郾 缘远 苑郾 远缘 员源郾 愿圆
圆源 猿员郾 源愿 圆怨郾 苑远 员远郾 怨圆
注院目测诱变率渊豫 冤 越 渊目测变异再生苗数 辕再生苗数冤 伊 员园园豫 遥
晕燥贼藻院 灾蚤泽怎葬造 皂怎贼葬早藻灶蚤糟 则葬贼藻 渊豫 冤 越 渊 晕怎皂遭藻则 燥枣 增蚤泽怎葬造 增葬则蚤葬贼蚤燥灶
则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 泽藻藻凿造蚤灶早泽 辕 晕怎皂遭藻则 燥枣 皂怎贼葬早藻灶蚤糟 泽藻藻凿造蚤灶早泽冤 伊 员园园豫 援
猿摇 讨论
猿郾 员摇 悬浮单细胞多倍体诱导及倍性鉴定
悦韵蕴韵在细胞染色体加倍的同时也会对细胞产生
伤害袁其加倍效果取决于其处理浓度尧时间及加倍与毒
害作用的平衡遥 本研究发现袁悦韵蕴韵 处理以高浓度尧短
时间处理效果较好曰而保持较低细胞伤害尧较高加倍效
果及较好的恢复生长之间的平衡对后期细胞的恢复生
长至关重要遥
猿郾 圆摇 半夏多倍性细胞再生培养及胚胎发生途径
起始密度对半夏单细胞再生培养效率有显著影
响袁在适宜密度范围内单细胞易于分裂增殖遥 这与悬
浮细胞生长分化有一个最低临界生长密度有关袁而细
胞本身具有某种与分裂相关的物质浓度最低临界
点咱员源暂 遥 另外袁本研究发现袁半夏多倍性细胞胚胎发生
大多仍然为多细胞起源袁但也存在单细胞起源的胚胎
发生遥 这与前期观察到的半夏原倍性细胞胚胎发生现
象相同遥 这与郭巧萍报道咱源暂的半夏悬浮细胞仅存在
单细胞起源的胚胎发生途径的结果不同遥
猿郾 猿摇 半夏多倍体植株的倍性鉴定
半夏遗传背景极其复杂袁同地区半夏染色体数目
不同遥 目 前袁 研 究 者 对 其 染 色 体 基 数 仍 有 争
议咱员员袁员圆袁员缘袁员远暂 袁其染色体基数在属内尧种内尧种间呈多样
性变化袁给其倍性鉴定带来了相当的难度遥
形态学鉴定是多倍体植株最直观的间接鉴定方
法咱员苑袁员愿暂 袁作为初筛手段可减少后期鉴定工作量遥 叶片
气孔观察是多倍体细胞学鉴定的有效辅助手段咱员苑暂 袁气
孔大小和密度尧保卫细胞大小及其叶绿体数与倍性成
缘缘员员
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员员袁圆缘渊远冤院员员源愿 耀 员员缘远
正相关咱员怨袁圆园暂 袁是多倍体植株鉴定的重要标准遥 本研究
发现叶片气孔密度与染色体倍性呈负相关袁这与张雪
等咱员猿暂及国内外其他学者的研究结果一致咱员缘暂 曰然而个
别半夏变异植株在同叶片同部位的气孔大小也有明显
差别袁可能是这些植株存在嵌合现象袁这说明气孔倍性
鉴定有其局限性遥 细胞染色体检测是倍性鉴定的最关
键指标袁本研究所获多倍性细胞及植株的染色体倍性
鉴定显示袁虽然两者均获得了较高的加倍比例袁但也存
在少量原倍性细胞和嵌合体植株袁但其嵌合体比率较
常规茎尖等分生组织诱导途径要低得多遥
猿郾 源摇 多倍体诱导的嵌合体问题
在植物多倍体诱导中的嵌合体问题一直无法完全
避免咱员员暂 遥 由于嵌合体组织内的多倍体细胞含量有限袁
随着细胞分裂生长袁表现为多倍体的细胞会逐渐被原
倍体细胞包围尧湮没袁最终消失袁致使初筛的多倍体
渊实为嵌合体冤又回复到原倍性状态遥 这通常是由于
处理前细胞分裂同步化程度不够袁且细胞系仍不可避
免的存在少量多细胞团袁而 悦韵蕴韵 只对处于有丝分裂
前期和中期的细胞起加倍作用袁且其渗透力有限袁这些
因素致使 悦韵蕴韵诱导悬浮细胞加倍过程中仅有部分细
胞染色体被加倍袁并致使嵌合体细胞团产生遥 这也与
悦韵蕴韵处理后的悬浮细胞系仍存在原倍性细胞的结论
相符合遥 可见袁悬浮细胞状态及分裂同步化程度对其多
倍体诱导效果至关重要袁必须使尽可能多的细胞同时处
在分裂前期和中期袁同时筛选适合的 悦韵蕴韵处理浓度和
时间袁才有可能降低嵌合体出现比率遥 对于所获半夏多
倍体遗传稳定性和嵌合现象将在后续研究中报道遥
源摇 结论
以半夏悬浮细胞系为靶标材料袁经 园郾 员园皂早 辕 皂造
悦韵蕴韵处理 圆源澡 可获得较好的多倍体细胞诱导效果袁
多倍性细胞诱导率约为 苑源郾 圆园豫 袁并经低速震荡再生
培养袁可获得直径为 圆郾 园糟皂 以上的愈伤组织团袁经分
化培养袁愈伤分化率可达 怨员郾 园愿豫 袁丛生芽诱导率可达
猿园怨郾 源苑豫 袁幼芽成苗率可达 苑愿郾 缘缘豫 袁再经生根培养袁
生根率可达 怨缘郾 源园豫 袁移栽成活率可达 怨愿郾 愿猿豫 袁幼苗
在移栽前即可形成小球茎袁多倍性鉴定显示袁所获 员员
株纯和多倍体植株的根尖细胞染色体 员园源 条袁是对照
缘源 条的 圆 倍袁多倍体诱导率为 猿郾 愿缘豫 耀 圆怨郾 苑远豫 袁嵌合
体率为 员圆郾 愿愿豫 耀 员苑郾 远缘豫 遥 本研究证明通过半夏等
植物单细胞水平多倍体诱导获得纯合的多倍体植株是
一条可行且高效的多倍体诱导途径袁较离体茎尖分生
组织等常规诱导方法袁虽然试验程序增加袁但提高了诱
导效率袁降低了嵌合体比率袁其优势非常明显遥
参考文献院
咱 员 暂摇 郭余龙袁 贾永芳袁 杨星勇袁 李名扬袁裴摇 炎援 半夏的组织培养及
其成分比较咱允暂 援 农业生物技术学报袁 圆园园猿袁 员员渊猿冤院 圆缘怨 原 圆远圆
咱 圆 暂摇 朱宝成袁 吴爱民袁 成亚利袁 李庆系袁梁玉玲援 药用作物掌叶半夏
组织培养及药物成份分析咱允暂 援 作物学报袁 员怨怨缘袁 圆员渊源冤院 源苑缘 原
源苑愿
咱 猿 暂摇 江年琼援 半夏 天南星咱酝暂援 北京院 中国中医药出版社袁 圆园园员
咱 源 暂摇 郭巧萍援 桃叶型半夏多倍体诱导研究咱阅暂援 杭州院 浙江理工大
学硕士学位论文袁 圆园园怨
咱 缘 暂 摇 孙敬三袁 朱至清援 植物细胞工程实验技术咱酝暂援 北京院化学工业
出版社袁 圆园园远
咱 远 暂摇 允怎造蚤藻灶 月藻葬怎造蚤藻怎袁 酝葬则贼蚤灶藻 允藻葬灶袁 云则葬灶觭燥蚤泽 月藻造扎蚤造藻援 栽澡藻 葬造造燥贼藻贼则葬责造燥蚤凿
粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬鄄粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 造赠则葬贼葬 泽怎遭泽责援 责藻贼则葬藻葬 葬泽 葬灶
葬造贼藻则灶葬贼蚤增藻 皂燥凿藻造 泽赠泽贼藻皂 枣燥则 贼澡藻 泽贼怎凿赠 燥枣 责燥造赠责造燥蚤凿赠 蚤灶 责造葬灶贼泽咱 允暂 援
酝燥造藻糟怎造葬则 郧藻灶藻贼蚤糟泽 葬灶凿 郧藻灶燥皂蚤糟泽袁 圆园园怨袁 圆愿员渊源冤院 源圆员 原 源猿缘
咱 苑 暂摇 尹翠翠袁 张摇 燕袁 张景华袁 陈瑶瑶袁王广东援 秋水仙素诱导杂交
兰四倍体及倍性鉴定咱允暂 援 核农学报袁 圆园员园袁 圆源渊猿冤院 缘员愿 原 缘圆员
咱 愿 暂摇 莫官站袁张启翔袁潘会堂袁孙摇 明援 秋水仙素诱导甘菊多倍体研
究咱允暂 援 核农学报袁 圆园员园袁 圆源渊猿冤院 缘圆苑 原 缘猿员
咱 怨 暂摇 乔永刚袁 马璐琳袁 赵晓明袁吴玉香袁宋摇 芸援 秋水仙素诱导党参
四倍体咱允暂 援 核农学报袁 圆园园怨袁 圆猿渊源冤院 缘远远 原 缘苑员
咱员园暂摇 张摇 莹袁 王摇 雁袁 李振坚援 秋水仙素诱导石斛多倍体的初步研
究咱允暂 援 核农学报袁 圆园园怨袁 圆猿渊猿冤院 源员猿 原 源员苑
咱员员暂摇 张俊芳袁 刘庆华袁 王奎玲袁 刘庆超袁孙摇 阳援 秋水仙素诱导青岛
百合四倍体研究咱允暂 援 核农学报袁 圆园园怨袁 圆猿渊猿冤院 源缘源 原 源缘苑
咱员圆暂摇 朱雪云袁 陈利萍援 植物嵌合体的研究与应用咱 允暂 援 核农学报袁
圆园员园袁 圆源渊远冤院 员员愿缘 原 员员怨员
咱员猿暂摇 张摇 雪援 三叶半夏花药培养与多倍体诱导研究咱阅暂援 杭州院 浙
江理工大学硕士学位论文袁 圆园园愿
咱员源暂摇 丁摇 兰袁 欧巧明援 药用植物半夏细胞悬浮培养和植株再生体系
建立研究咱允暂 援 北方园艺袁 圆园园苑袁 园怨院 员愿苑 耀 员怨园
咱员缘暂摇 再蚤 栽 杂袁 蕴蚤 匀袁 蕴蚤 阅 在援 悦澡则燥皂燥泽燥皂藻 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 蚤灶 贼澡藻 早藻灶怎泽 孕蚤灶藻造造蚤葬
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咱员远暂摇 郧则葬赠怎皂 酝 匀援 耘增燥造怎贼蚤燥灶 葬灶凿 责澡赠造燥早藻灶赠 燥枣 贼澡藻 粤则葬糟藻葬藻 咱 允暂 援 粤灶灶
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咱员苑暂摇 郧怎 载 云袁 再葬灶早 粤 云袁 酝藻灶早 匀袁 藻贼 葬造援 陨灶 增蚤贼则燥 蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶 燥枣 贼藻贼则葬责造燥蚤凿
责造葬灶贼泽 枣则燥皂 凿蚤责造燥蚤凿 在蚤扎赠责澡怎泽 躁怎躁怎遭葬 酝蚤造造援 糟增援 在澡葬灶澡怎葬咱 允暂 援 孕造葬灶贼
悦藻造造 砸藻责燥则贼泽袁 圆园园缘袁 圆源渊员员冤院 远苑员 原 远苑远
咱员愿暂摇 酝怎澡葬皂皂葬凿 允 允袁 杂怎灶早 宰 运袁 阅葬藻 匀 运援 悦燥皂责葬则葬贼蚤增藻 泽贼怎凿赠 燥灶
增藻早藻贼葬贼蚤增藻袁 则藻责则燥凿怎糟贼蚤增藻 葬灶凿 择怎葬造蚤贼葬贼蚤增藻 贼则葬蚤贼泽 燥枣 泽藻增藻灶 凿蚤责造燥蚤凿 葬灶凿
贼藻贼则葬责造燥蚤凿憎葬贼藻则皂藻造燥灶 造蚤灶藻泽造咱允暂 援 耘怎责澡赠贼蚤糟葬援 圆园园缘袁 员源缘渊猿冤院 圆缘怨 原
圆远愿
咱员怨暂摇 蕴燥泽泽造 粤袁 郧燥贼扎 酝袁 月则葬怎灶 粤袁 藻贼 葬造郾 酝燥造藻糟怎造葬则 皂葬则噪藻则泽 枣燥则 糟赠贼燥责造葬泽皂
蚤灶 责燥贼葬贼燥院 皂葬造藻 泽贼藻则蚤造蚤贼赠 葬灶凿 糟燥灶贼则蚤遭怎贼蚤燥灶 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责造葬泽贼蚤凿 原
皂蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬 糟燥灶枣蚤早怎则葬贼蚤燥灶泽 贼燥 泽贼葬则糟澡 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶 咱 允暂 援 耘怎责澡赠贼蚤糟葬袁
圆园园园袁 源苑渊源冤院 圆怨猿 原 圆怨苑
咱圆园暂摇 粤则赠葬增葬灶凿 粤袁 耘澡凿葬蚤藻 月袁 栽则葬灶 月袁 藻贼 葬造郾 杂贼燥皂葬贼葬造 枣则藻择怎藻灶糟赠 葬灶凿 泽蚤扎藻
凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼藻 责造燥蚤凿赠 造藻增藻造泽 蚤灶 粤藻早蚤造燥责泽 灶藻早造藻糟贼葬 咱 允 暂 援 郧藻灶藻贼蚤糟
砸藻泽燥怎则糟藻泽 葬灶凿 悦则燥责 耘增燥造怎贼蚤燥灶袁 圆园园猿袁 缘园袁渊圆冤院 员苑缘 原 员愿圆援
渊责任编辑摇 王媛媛冤
远缘员员