全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员缘袁圆怨渊员园冤院员怨苑怨 耀 员怨愿源允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员源鄄园怨鄄员缘摇 接受日期院圆园员缘鄄园源鄄圆苑
基金项目院北京市教委计划面上项目渊运酝圆园员猿员圆源源愿园园源冤
作者简介院句荣辉袁女袁副教授袁主要从事食品质量与安全研究遥 耘鄄皂葬蚤造院 躁怎则燥灶早澡怎蚤员员怨岳 员圆远援 糟燥皂
通讯作者院罗红霞袁女袁教授袁主要从事食品加工与质量控制研究遥 耘鄄皂葬蚤造院澡燥灶早曾蚤葬躁怎灶岳 员远猿援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员缘冤员园鄄员怨苑怨鄄园远
丙烯酰胺特异性多克隆抗体的制备及鉴定
句荣辉员 摇 温摇 凯圆 摇 段丽丽员 摇 罗红霞员
渊员北京农业职业学院袁 北京摇 员园圆源源圆曰 圆 中国农业大学袁 北京摇 员园园园怨源冤
摘摇 要院为探索油炸食品中丙烯酰胺快速检测方法袁利用迈克尔加成反应合成丙烯酰胺半抗原袁并利用质
谱与核磁法进行结构鉴定遥 半抗原经重氮化法处理后分别偶联载体蛋白 月杂粤 和 韵灾粤袁并通过 酝粤蕴阅陨鄄
栽韵云鄄酝杂进行鉴定遥 结果表明袁与丙烯酰胺标准品和 圆 种载体蛋白相比袁偶联物的分子量明显增加袁粤酝鄄
月杂粤偶联物中半抗原对载体蛋白的偶联比约为 愿郾 苑颐 员袁粤酝鄄韵灾粤 偶联物中半抗原对载体蛋白的偶联比
约为 圆园颐 员袁说明偶联成功遥 通过免疫制备多克隆抗体袁间接 耘蕴陨杂粤 法进行抗血清的效价和半抑制率检
测袁通过交叉反应测定其特异性遥 结果表明院免疫原为 粤酝鄄韵灾粤袁包被原为 粤酝鄄月杂粤 测定的抗血清效价
最高为 员颐 员园园 园园园 倍袁其半抑制率渊 陨悦缘园冤为 苑源郾 圆 灶早窑皂蕴 原员袁该抗体与丙烯酰胺近似物的交叉反应率均 约员郾 源愿豫 遥 可见袁该试验免疫制备的丙烯酰胺多克隆抗体获得了较高的效价及较强的特异性遥 研究结果
为丙烯酰胺快速检测方法的建立奠定了良好的基础遥
关键词院丙烯酰胺曰合成抗原曰耘蕴陨杂粤曰多克隆抗体
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员缘郾 员园援 员怨苑怨
摇 摇 丙烯酰胺渊葬糟则赠造葬皂蚤凿藻袁 粤酝冤俗称野丙毒冶袁大量动
物试验表明袁丙烯酰胺可致动物多脏器肿瘤袁被国际癌
症研究中心列为人类可疑致癌物咱员 原 猿暂 遥 圆园园圆 年 源 月袁
瑞典国家食品管理局官方网站上公布袁在某些油炸或
焙烤的淀粉类食品中检测出较高含量丙烯酰胺袁而且
含量超过饮水中允许最大限量的 缘园园 倍遥 目前丙烯酰
胺的检测方法主要有高效液相色谱法渊匀孕蕴悦冤尧气相
色谱 原质谱分析法渊郧悦鄄酝杂冤尧液相色谱 原质谱分析法
渊蕴悦鄄酝杂冤尧液相色谱 原串联质谱分析法渊蕴悦鄄酝杂鄄酝杂冤
等遥 这些方法灵敏度虽然高袁却存在着样品前处理繁
琐尧检测耗时长尧操作复杂袁且成本高等缺点袁难以满足
快速检测的需要咱源 原 员员暂 遥
近年来袁具有特异性强尧简单快速尧灵敏度高等优
点的酶联免疫吸附测定法渊耘蕴陨杂粤冤 受到广泛重视袁在
食品安全快速检测中显示了其独特的优势遥 目前有学
者开展了利用免疫法检测油炸食品中丙烯酰胺的研
究袁研究主要集中在多克隆抗体的制备方面咱员圆 原 员缘暂 遥
由于丙烯酰胺是小分子物质袁其本身不具备免疫
原性袁因此本文通过迈克尔加成反应合成丙烯酰胺半
抗原袁半抗原经重氮化法处理后分别偶联载体蛋白袁获
得稳定的人工抗原后袁经动物免疫制备效价高尧特异性
强的多克隆抗体遥 该抗体的获得有效地改善了现有的
丙烯酰胺抗原的合成方法不能引起很好的免疫应答袁
抗体的效价不高尧特异性不好等问题袁为丙烯酰胺快速
检测方法的建立奠定了良好的基础遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 试验材料
员郾 员郾 员摇 材料与试剂 摇 活性剂渊员 原 咱猿 原 阅蚤皂藻贼澡赠造葬皂蚤灶燥
责则燥责赠造暂 原 猿 原 藻贼澡赠造糟葬则遭燥凿蚤蚤皂蚤凿藻 澡赠凿则燥糟澡造燥则蚤凿藻袁 耘阅悦袁晕鄄
匀赠凿则燥曾赠泽怎糟糟蚤灶蚤皂蚤凿藻袁 晕匀杂冤袁牛血清白蛋白渊葬造遭怎皂蚤灶 枣则燥皂
遭燥增蚤灶藻 泽藻则怎皂袁月杂粤冤袁鸡卵白蛋白渊燥增葬造遭怎皂蚤灶袁韵灾粤冤袁阳
离子牛血清白蛋白渊 糟葬贼蚤燥灶蚤扎藻凿 遭燥增蚤灶藻 泽藻则怎皂 葬造遭怎皂蚤灶袁
糟月杂粤冤袁弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂袁羊抗兔二抗袁
均购自美国 杂蚤早皂葬 公司曰怨远 孔酶标板渊德国 郧则藻蚤灶藻则 公
司冤曰丙烯酰胺标准品渊德国 阅则援 耘澡则藻灶泽贼燥则枣藻则公司冤曰怨缘豫
间巯基苯甲酸渊北京百灵威科技有限公司冤遥
怨苑怨员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
员郾 员郾 圆摇 仪器与设备摇 酝怎造贼蚤泽噪葬灶 热电 酝运猿 酶标仪渊美
国 栽澡藻则皂燥 公司冤曰孕月 原 员园粤 责匀 计渊德国 杂葬则贼燥则蚤怎泽 公
司冤曰哉灾 原 圆缘缘园 紫外可见分光光度计渊日本岛津公
司冤遥
员郾 员郾 猿摇 试验动物 摇 圆 月龄体重 员噪早 左右雄性新西兰
大白兔 远 只袁由中国人民解放军军事医学科学院实验
动物中心提供遥
员郾 圆摇 试验方法
员郾 圆郾 员摇 半抗原的合成及鉴定摇 半抗原的合成路线如
下院
将丙烯酰胺与间巯基苯甲酸反应合成丙烯酰胺半抗
原遥 具体步骤为院 员园 皂蕴 的烧瓶中加入 怨圆郾 源 皂早
晕葬匀悦韵猿袁水 源 皂蕴袁完全溶解后加入硼砂 猿愿郾 员源 皂早袁间
巯基苯甲酸 员缘源郾 员怨 皂早袁丙烯酰胺 愿源郾 员 皂早袁源园益反应
圆 澡袁员酝盐酸调 责匀值至 缘 耀 远袁析出白色固体袁过滤袁水
洗滤饼袁干燥得 圆园园 皂早 丙烯酰胺半抗原咱员远 原 员怨暂 遥 对产
物用质谱和核磁共振图谱进行鉴定遥 确定摩尔比后袁
进行倍数放大试验袁收集多次试验产物袁即半抗原遥
半抗原 粤酝的结构为院
员郾 圆郾 圆摇 免疫原的合成及鉴定摇 称取丙烯酰胺半抗原
远郾 远 皂早 溶于 圆 皂蕴 二甲基甲酰胺渊凿蚤皂藻贼澡赠造 枣燥则皂葬皂蚤凿藻袁
阅酝云冤袁加入 员园郾 圆皂早 晕匀杂渊先加冤和 员员郾 源 皂早 耘阅悦渊后
加冤袁室温搅拌圆澡曰缘园 皂早 月杂粤袁远远 皂早碳酸氢钠溶于远 皂蕴
水袁冷水浴中将活化药物逐滴加入 月杂粤袁室温搅拌 圆源 澡袁
将反应产物装入 员 个蒸馏水冲洗干净透析袋渊员缘糟皂冤袁
员蕴 责匀 值 苑郾 圆 的磷酸盐缓冲溶液渊 责澡燥泽责澡葬贼藻 遭怎枣枣藻则藻凿
泽葬造蚤灶藻袁 孕月杂冤 源益搅拌渊员园园 则窑皂蚤灶 原员冤透析猿凿袁每天换液猿
次渊早中晚各 员 次冤袁共计换液 怨 次袁将透析产物 源 缘园园
则窑皂蚤灶 原员离心 远 皂蚤灶袁员皂蕴 辕管分装袁将抗原编号袁 原圆园益保
存备用袁并通过 酝粤蕴阅陨鄄栽韵云鄄酝杂方法进行鉴定和偶联比
计算遥 同理制备 粤酝鄄韵灾粤遥
员郾 圆郾 猿摇 多克隆抗体的制备摇 选择雄性新西兰大白兔
圆 月龄 员 噪早左右袁饲养于中国农业大学实验动物房中袁
连续观察 圆 耀 猿凿袁确定身体状况正常后进行免疫遥 用
无菌 责匀值 苑郾 园 的 孕月杂 液将合成的免疫原渊粤酝鄄月杂粤尧
粤酝鄄韵灾粤冤溶解袁然后按免疫原与弗氏佐剂 员颐 猿 的比例
充分乳化制成油乳剂疫苗遥 首次免疫用弗氏完全佐
剂袁每个免疫原注射 圆 只兔子袁免疫剂量为 缘园园 怎早 辕只遥
员源 凿 后二免袁采用弗氏不完全佐剂袁免疫剂量 圆园园
怎早 辕只曰以后免疫同二免遥 前 圆 次间隔 圆 周免疫 员 次袁
第 猿 次后每隔 员 个月免疫 员 次袁从第 源 次开始袁每次加
强免疫后 员园凿进行耳静脉采血袁测定抗体效价袁当抗体
效价达到最高时采用股动脉采血法取全血遥 用
杂藻责澡葬则燥泽藻 源月鄄孕则燥贼藻蚤灶粤 纯化抗血清袁所得抗体 孕月杂透析
后备用咱圆园 原 圆猿暂 遥
员郾 圆郾 源摇 间接非竞争 耘蕴陨杂粤 法测定抗血清效价 摇 以
粤酝鄄月杂粤 作为包被原袁将抗血清倍比稀释袁采用间接非
竞争 耘蕴陨杂粤 法对抗血清进行检测袁反应后于 源缘园 灶皂
波长下测定 韵阅 值袁每孔测 源 次袁取平均值咱圆源 原 圆远暂 遥
多克隆抗体对半抗原的抑制率通过间接竞争
耘蕴陨杂粤 进行测定遥 按照最佳抗原抗体工作浓度和优化
条件进行袁用 孕月杂 配制成浓度分别为 园尧员园尧员园园尧缘园园尧
员 园园园 灶早窑皂蕴 原员 的标准溶液袁建立竞争抑制曲线袁并计算
陨悦缘园遥员郾 圆郾 缘摇 抗血清特异性检测摇 用丙烯酰胺衍生物尧丙烯
酰胺渊葬糟则赠造葬皂蚤凿藻冤尧甲基丙烯酰胺渊皂藻贼澡葬糟则赠造葬皂蚤凿藻冤尧甲
基丙烯酸甲酯渊皂藻贼澡赠造 葬糟则赠造葬贼藻冤尧丙烯酸渊葬糟则赠造蚤糟 葬糟蚤凿冤
等进行抗血清特异性检测袁用交叉反应率表示遥
交叉反应率 越 粤酝鄄韵灾粤 的 陨悦缘园值 辕其他近似物的陨悦缘园值 伊 员园园豫
图 员摇 半抗原鉴定质谱图
云蚤早援 员摇 匀葬责贼藻灶 皂葬泽泽 泽责藻糟贼则葬
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 半抗原合成鉴定
利用迈克尔加成反应袁丙烯酰胺与间巯基苯甲酸
在硼砂的催化下反应得到加成产物袁皂葬泽泽 图谱如图 员
所示遥 通过 皂葬泽泽图谱分析鉴定袁半抗原分子量 酝宰 越
圆圆缘郾 圆远袁质谱结果为 酝鄄匀 越 圆圆猿郾 愿袁质谱数据与预期产
物分子量相符遥
为进一步确定所合成半抗原的结构袁对其进行核
磁共振氢谱分析遥 核磁共振图谱如图 圆 所示袁
园愿怨员
摇 员园 期 丙烯酰胺特异性多克隆抗体的制备及鉴定
图 圆摇 半抗原鉴定核磁图谱
云蚤早援 圆摇 匀葬责贼藻灶 晕酝砸 泽责藻糟贼则葬
员匀 晕酝砸渊源园园 酝匀扎袁 悦阅猿韵阅冤院 啄 越 圆郾 缘园愿 耀 圆郾 缘缘苑 渊 贼袁
圆匀冤袁猿郾 员怨愿 耀 猿郾 圆源远渊 贼袁圆匀冤袁 苑郾 猿愿员 耀 苑郾 源猿猿渊皂袁员匀冤袁
苑郾 缘缘远 耀 苑郾 远园圆 渊 皂袁 员匀冤袁 苑郾 愿员缘 耀 苑郾 愿缘园 渊 皂袁 员匀冤袁
苑郾 怨苑圆 耀 苑郾 怨愿猿渊皂袁员匀冤遥 由于用氘代甲醇作溶剂袁所
以活波氢未出峰袁综合质谱与核磁结果袁半抗原结构正
确遥
圆郾 圆摇 抗原合成鉴定
利用酝粤蕴阅陨鄄栽韵云鄄酝杂方法对 粤酝鄄月杂粤和 粤酝鄄韵灾粤
偶联物进行鉴定袁结果如图 猿 所示遥 月杂粤 的质谱结果
显示其主峰为 皂 辕 扎 越 远远 远怨苑郾 苑袁由于 月杂粤 分子只带 员
个正电荷袁因此其分子量计算为 远远 远怨苑郾 苑袁与其实际大
小 远远 源园园 相差不大曰而 月杂粤质谱中的另 员 个次要峰的
皂 辕 扎约为 猿猿 园园园袁分析其为带 圆 个正电荷的 月杂粤分子遥
粤酝鄄月杂粤偶联物的主峰为 皂 辕 扎 越 远愿 远远源郾 愿袁相比 月杂粤
增长了 员 怨远苑袁结合半抗原的分子量渊圆圆缘冤可知 粤酝鄄
月杂粤偶联物中半抗原对载体蛋白的偶联比约为愿郾 苑颐 员遥
韵灾粤在 酝粤蕴阅陨鄄栽韵云鄄酝杂 检测中的行为与 月杂粤 明显不
同袁在未偶联情况下袁其主峰为 皂 辕 扎 越 源缘 员缘员郾 缘袁与其
实际分子量相符袁同时其双电荷分子峰为 皂 辕 扎 越 圆圆
源员圆郾 远曰而其偶联物则以双电荷分子为主要形式袁形成
皂 辕 扎 越 圆苑 远猿远 的主峰袁其单电荷分子峰的 皂 辕 扎 越
缘缘 苑缘缘郾 猿袁因此袁根据双电荷分子峰计算得到 粤酝鄄韵灾粤
偶联物中半抗原对载体蛋白的偶联比为 圆园颐 员遥
圆郾 猿摇 抗血清效价的测定
间接 耘蕴陨杂粤和竞争 耘蕴陨杂粤检测结果见表 员遥 使用
免疫原 粤酝鄄韵灾粤制备的抗血清袁包被原为 粤酝鄄月杂粤 测
定的抗血清效价最高袁最后 员 次采血效价达到 员园园 园园园
倍袁其半抑制率渊陨悦缘园冤为 苑源郾 圆灶早窑皂蕴 原员渊图 源冤遥
图 猿摇 粤酝鄄月杂粤和 粤酝鄄韵灾粤的酝粤蕴阅陨鄄
栽韵云鄄酝杂鉴定图谱
云蚤早援 猿摇 栽澡藻 酝粤蕴阅陨鄄栽韵云鄄酝杂 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶
燥枣 粤酝鄄韵灾粤 葬灶凿 粤酝鄄月杂粤
圆郾 源摇 抗血清特异性测定
交叉反应结果见表 圆遥 本试验所制备的抗体与丙
烯酰胺衍生物的交叉反应率为 员园园豫 袁与丙烯酰胺本
员愿怨员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
身及其他相似物的交叉反应率均 约 员郾 源愿豫 袁说明本抗
体具有较高的特异性遥
表 员摇 不同次采血抗血清效价及半抑制率对比
栽葬遭造藻 员摇 栽澡藻 糟燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 贼澡藻 贼蚤贼藻则 葬灶凿 陨悦缘园 燥枣
凿蚤枣枣藻则藻灶贼 遭造燥燥凿 泽葬皂责造藻泽
采血时间
月造燥燥凿 糟燥造造藻糟贼蚤燥灶 贼蚤皂藻泽
抗血清效价
粤灶贼蚤泽藻则怎皂 贼蚤贼藻则
半抑制率
陨悦缘园 辕 渊灶早窑皂蕴 原员 冤
第 猿 次采血 缘 园园园 猿远园援 苑
员园园 园园园 原
圆园园 园园园 原
第 源 次采血 缘 园园园 圆猿愿援 苑
员园园 园园园 圆远源援 猿
圆园园 园园园 员猿缘援 圆
第 缘 次采血 缘 园园园 原
员园园 园园园 苑源援 圆
圆园园 园园园 原
摇 摇 注院野 原 冶表示无遥
晕燥贼藻院 野 原 冶皂藻葬灶泽 灶燥援
表 圆摇 抗血清特异性检测
栽葬遭造藻 圆摇 栽澡藻 泽责藻糟蚤枣蚤糟蚤贼赠 燥枣 葬灶贼蚤泽藻则怎皂
物质名称
酝葬贼藻则蚤葬造 灶葬皂藻
结构
杂贼则怎糟贼怎则藻
半抑制浓度
陨悦缘园 辕 渊灶早窑皂蕴 原员 冤
交叉反应率
悦则燥泽泽 则藻葬糟贼蚤增蚤贼赠 则葬贼蚤燥 辕 豫
丙烯酰胺衍生物 苑源郾 圆 员园园
丙烯酰胺 跃 缘园园园 约 员郾 源愿
甲基丙烯酰胺 跃 缘园园园 约 员郾 源愿
甲基丙烯酸甲酯 跃 缘园园园 约 员郾 源愿
丙烯酸 跃 缘园园园 约 员郾 源愿
猿摇 讨论
丙烯酰胺多克隆抗体的制备技术在文献中已有报
道袁主要集中在利用戊二醛法合成丙烯酰胺免疫原免
疫新西兰大白兔袁其获得的抗体效价为 愿 员园园袁特异性
不高曰其主要原因为丙烯酰胺属于小分子物质袁相对分
子量为 苑员袁化学结构非常简单袁不具备免疫原性袁将其
图 源摇 抗血清的竞争抑制曲线
云蚤早援 源摇 悦燥皂责藻贼蚤贼蚤增藻 蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶 糟怎则增藻 燥枣 葬灶贼蚤泽藻则怎灶
直接与载体蛋白连接合成免疫原免疫新西兰大白兔袁
其结果不理想袁所以在制备人工抗原前首先要对其半
抗原进行设计咱圆苑暂 遥 因此袁有文献报道将对巯基苯甲酸
作为衍生物与丙烯酰胺反应得到半抗原袁再和载体蛋
白 月杂粤结合得到免疫原免疫新西兰大白兔袁其获得的
抗体效价为 员颐 愿园 园园园袁抗血清对半抗原渊员怎早窑皂蕴 原员冤的
抑制率为 愿园郾 苑豫 袁其抗体效价提高了袁但该试验中抑
制率达 缘园豫的丙烯酰胺的浓度较高咱圆愿 原 圆怨暂 遥 由于制备
直接针对丙烯酰胺的特异性抗体难度大袁本试验利用
丙烯酰胺的双键易于发生迈克尔加成的特点袁将其与
间巯基苯甲酸衍生袁制备获得特征结构显著的半抗原袁
将其与载体蛋白偶联并免疫动物袁获得了可以特异性
识别半抗原的高特异性抗体袁抗体效价为 员颐 员园园 园园园袁
其半抑制率渊陨悦缘园冤可达 苑源郾 圆 灶早窑皂蕴 原员袁为进一步研制
丙烯酰胺快速检测试剂盒奠定了基础遥
圆愿怨员
摇 员园 期 丙烯酰胺特异性多克隆抗体的制备及鉴定
源摇 结论
本试验在前人工作的基础上采用间巯基苯甲酸作
为衍生物与丙烯酰胺进行反应得到半抗原袁选用 月杂粤
和 韵灾粤 作为免疫抗原的载体蛋白袁免疫原免疫新西兰
大白兔袁制备针对丙烯酰胺衍生物的特异性抗体袁结果
表明院免疫原为 粤酝鄄韵灾粤 制备的抗血清袁抗血清效价
最高为 员 颐 员园园 园园园袁其半抑制率 渊 陨悦缘园 冤 可达 苑源郾 圆
灶早窑皂蕴 原员遥该试验免疫制备的多克隆抗体获得了较高
的效价及较强的特异性袁为丙烯酰胺快速检测方法的
建立奠定了良好的基础遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 朱雨辰袁王菲袁宋柬袁赵梦瑶袁陈芳援 食品中丙烯酰胺的研究进展
咱允暂 援食品安全质量检测学报袁圆园员猿袁源渊圆冤院猿员猿 原 猿员怨
咱 圆 暂 摇 董红运袁于素芳援丙烯酰胺的致癌性研究进展咱允暂 援环境与健康杂
志袁圆园员圆袁圆怨渊怨冤院愿缘愿 原 愿远员
咱 猿 暂摇 李军袁邓洁红袁谭兴和袁彭涛援丙烯酰胺毒性及油炸食品丙烯酰胺
抑制方法研究进展咱允暂 援粮食与饲料工业袁圆园员园袁猿猿渊怨冤院猿员 原 猿猿
咱 源 暂 摇 砸藻灶扎燥 月袁 酝葬则蚤灶葬 酝袁 酝燥灶蚤糟葬 粤袁 郧蚤葬灶糟葬则造燥 灾援 砸葬责蚤凿 皂蚤曾藻凿 皂燥凿藻
泽燥造蚤凿 责澡葬泽藻 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿 枣燥则 贼澡藻 凿藻贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 燥枣 葬糟则赠造葬皂蚤凿藻 蚤灶
则燥葬泽贼藻凿 糟燥枣枣藻藻 遭赠 匀孕蕴悦 原 酝杂 辕 酝杂咱 允暂 援 云燥燥凿 悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁圆园员圆袁员猿缘
渊源冤院 圆远愿苑 原 圆远怨猿
咱 缘 暂 摇 宰葬灶早 匀 再袁 蕴藻藻 粤 宰 酝袁 杂澡怎葬灶早 杂 酝袁 悦澡燥蚤 酝 酝 云援 杂孕耘 辕 匀孕蕴悦 辕
哉灾 泽贼怎凿蚤藻泽 燥灶 葬糟则赠造葬皂蚤凿藻 蚤灶 凿藻藻责鄄枣则蚤藻凿 枣造燥怎则鄄遭葬泽藻凿 蚤灶凿蚤早藻灶燥怎泽
悦澡蚤灶藻泽藻咱允暂 援 酝蚤糟则燥糟澡藻皂蚤糟葬造 允燥怎则灶葬造袁圆园园愿袁愿怨渊圆冤院 怨园 原 怨苑
咱 远 暂 摇 宰葬灶早 匀袁 云藻灶早 云袁 郧怎燥 再袁 杂澡葬燥 杂袁 酝葬则贼蚤灶 酝 云援 匀孕蕴悦鄄哉灾
择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 葬糟则赠造葬皂蚤凿藻 蚤灶 遭葬噪藻凿 葬灶凿 凿藻藻责鄄枣则蚤藻凿 悦澡蚤灶藻泽藻
枣燥燥凿泽咱允暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 云燥燥凿 悦燥皂责燥泽蚤贼蚤燥灶 葬灶凿 粤灶葬造赠泽蚤泽袁圆园员猿袁猿员渊员冤院苑
原 员员
咱 苑 暂 摇 杂怎灶 杂 再袁 云葬灶早 再袁 载蚤葬 再 酝援 粤 枣葬糟蚤造藻 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 葬糟则赠造葬皂蚤凿藻 蚤灶
泽贼葬则糟澡赠 枣燥燥凿 遭赠 怎泽蚤灶早 葬 泽燥造蚤凿 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶鄄郧悦 泽贼则葬贼藻早赠 咱 允 暂 援 云燥燥凿
悦燥灶贼则燥造袁圆园员圆袁圆远渊圆冤院 圆圆园 原 圆圆圆
咱 愿 暂摇 张前龙袁曹云援采用高效液相色谱法测定薯片及饼干中丙烯酰胺
的研究咱允暂 援上海预防医学袁圆园员圆袁圆源渊员冤院猿远 原 猿怨
咱 怨 暂 摇 沈伟健袁沈崇钰袁赵增运袁陈惠兰袁徐锦忠援 气相色谱 原质谱法检
测食品中的丙烯酰胺咱允暂 援色谱袁圆园园远袁圆源渊远冤院远圆缘 原 远圆愿
咱员园暂摇 章宇袁焦晶晶袁张英袁黄百芬袁任一平援 液相色谱 原串联质谱法测
定焙烤和油炸食品中丙烯酰胺的含量咱允暂 援中国食品学报袁圆园园苑袁
苑渊员冤院员猿员 原 员猿苑
咱员员暂摇 蔡文袁谭兴和袁张喻袁王锋袁张春艳袁邓洁红援固相萃取 原高效液相
色谱法测定复合薯片中丙烯酰胺咱 允暂 援 激光生物学报袁圆园员源袁圆猿
渊圆冤院员苑愿 原 员愿圆
咱员圆暂摇 程雷袁郑炎夏袁徐虹袁孙宝国援固相萃取 原高效液相色谱 原串联质
谱法测定食品中的丙烯酰胺咱允暂 援食品科学袁圆园员圆袁猿猿渊圆冤院圆猿员 原
圆猿源
咱员猿暂摇 蕴蚤皂 匀 匀袁 杂澡蚤灶 匀 杂援 粤 灶藻憎 凿藻则蚤增葬贼蚤扎葬贼蚤燥灶 葬责责则燥葬糟澡 憎蚤贼澡 凿鄄糟赠泽贼藻蚤灶藻
枣燥则 贼澡藻 泽藻灶泽蚤贼蚤增藻 葬灶凿 泽蚤皂责造藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 葬糟则赠造葬皂蚤凿藻 蚤灶 枣燥燥凿泽 遭赠 造蚤择怎蚤凿
糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠 原 贼葬灶凿藻皂 皂葬泽泽 泽责藻糟贼则燥皂藻贼则赠 咱 允 暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣
悦澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠 粤援 圆园员源袁员猿远员渊怨冤院员员苑 原 员圆源
咱员源暂摇 允燥葬灶灶葬 酝袁 耘造扎遭蚤藻贼葬 郧袁 粤灶凿则扎藻躁 运援 砸孕鄄匀孕蕴悦鄄阅粤阅 泽贼怎凿蚤藻泽 燥灶
葬糟则赠造葬皂蚤凿藻 蚤灶 糟藻则藻葬造鄄遭葬泽藻凿 遭葬遭赠 枣燥燥凿泽 咱 允 暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 云燥燥凿
悦燥皂责燥泽蚤贼蚤燥灶 葬灶凿 粤灶葬造赠泽蚤泽援 圆园员猿袁猿圆渊员冤院 远愿 原 苑猿
咱员缘暂摇 费永乐袁王丽然袁李书国援 食品中丙烯酰胺检测方法研究进展
咱允暂 援粮油食品科技袁圆园员源袁圆猿渊员冤院苑园 原 苑猿
咱员远暂摇 郝亚楠袁费永乐袁张文玲援 紫外分光光度法快速测定油炸食品中
的丙烯酰胺的含量咱允暂 援 粮油加工袁圆园员猿袁猿愿渊员冤院苑猿 原 苑缘
咱员苑暂摇 张红星袁高美琴袁张馨如袁刘慧援丙烯酰胺人工抗原的合成及其多
克隆抗体的制备咱允暂 援中国农学通报袁圆园园怨袁圆缘渊员远冤院愿猿 原 愿缘
咱员愿暂摇 付云洁袁李琦袁陈江源袁王岚袁李睿袁周帼萍袁刘志国援 耘蕴陨杂粤 法测
定热加工食品中的丙烯酰胺咱允暂 援中国酿造袁圆园员员袁渊缘冤院苑苑 原 苑怨
咱员怨暂摇 张文玲袁王丽然袁费永乐袁李书国援 微分脉冲伏安法快速测定油
炸食品中丙烯酰胺咱允暂 援食品科学袁圆园员猿袁猿源渊圆圆冤院员缘源 原 员缘怨
咱圆园暂摇 王宵雪袁刘冰袁吕燕彦袁徐小婧袁方国臻袁王硕援丙烯酰胺多克隆抗
体的制备咱允暂 援现代食品科技袁圆园员圆袁圆愿渊源冤院源园缘 原 源园愿
咱圆员暂摇 王志伟袁潘家荣袁李淑荣袁王志东袁高美须袁李秉超袁睢珂袁王磊援食
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